專利名稱：新受體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基本純的形式的新受體，該受體的可溶形式及其作為治療劑的應(yīng)用，篩選用于通過與受體相互作用而治療疾病的化合物的方法，以及通過實(shí)施這種篩選方法發(fā)現(xiàn)的新化合物；涉及重組受體及其在這種篩選方法中的應(yīng)用；涉及結(jié)合于該受體的單克隆和多克隆抗體的制備；涉及這種抗體作為治療劑的應(yīng)用以及確定結(jié)合于該受體的治療劑有效性的方法。
WO 92\22293(Smithkline Beechamplc)描述了一族化合物，它們通過行為模型顯示具有某些CNS活性，特別是在癲癇的治療和/或預(yù)防中。描述了上述專利申請(qǐng)的這種化合物的一個(gè)實(shí)例為反式-(+)-6-乙酰-4S-(4-氟苯并氨基-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇。(下文中稱為化合物A)。
WO\94\13656，WO\94\13657，WO\94\13292，WO\94\13297，PCT\EP\95\02076，PCT\EP\95\02249和PCT\EP\95\02246都描述了具有某些中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)活性的其它化合物，特別是PCT\EP\95\02076中描述了本申請(qǐng)實(shí)施例4中的“冷卻”化合物，即化合物B。
上述專利中描述的化合物不結(jié)合任何已知受體，并且現(xiàn)在已鑒定出一種這種化合物結(jié)合的新受體。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種獲自大鼠前腦組織的基本純的受體，其特征在于a)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物A以Kd 40nM與其結(jié)合，b)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物A以Bmax220pmol/g蛋白與其結(jié)合，c)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物B以Kd 2nM與其結(jié)合，d)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物B以Bmax220pmol/g蛋白與其結(jié)合，和與大鼠前腦組織享有至少85％同源性的來自其它來源的同源受體。
其它已知的抗驚厥化合物包括安定，苯妥英，戊巴比通，丙戊酸鈉，氨甲酰苯，Vigabotvin lamotrigine，乙琥胺和gabapeutin不與新受體結(jié)合。
另外，新受體可在人類和嚙齒動(dòng)物成神經(jīng)細(xì)胞瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)。它們可不經(jīng)制備直接使用或通過與大腦組織相同的方法制備。在人類成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系如SHSYSY或IMR 32中，化合物B可以Kd為2nM和Bmnax為150pmol/g蛋白結(jié)合于新受體。
新受體通過常規(guī)技術(shù)以基本純的形式分離。例如，含新受體(如上面所述的)的組織的等分試樣(如含1至10mg蛋白/ml)與放射標(biāo)記的(如125I)光親合標(biāo)記化合物(如實(shí)施例6的化合物C)混合。優(yōu)選光親合標(biāo)記化合物在混合物中的終濃度是0.1至1000pM。該混合物適宜在室溫下溫育1小時(shí)。然后將該混合物暴露于紫外線(如來自6W燈的366nm)30分鐘。隨后通過離心活組織以去除未結(jié)合的光親合標(biāo)記化合物。光親合標(biāo)記的受體可通過凝膠滲透色譜法(例如使用Superose 6)在非還原條件下從其它蛋白初步分離。然后按照Bensadoun和Weinstein(Bensadoun A，和Weinstein D(1976)分析生物化學(xué)70，241-250)的方法將含受體的級(jí)分通過三氯乙酸沉淀。此蛋白級(jí)分通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)一步分離，在還原條件下，6％(w/v)棒凝膠覆蓋以5％(w/v)積層凝膠，或垂直10％(w/v)，或4-20％(w/v)梯度，板凝膠可被使用，基于Laemmli(見Lacmmli英國(guó)(1970)自然，227，680-685)的方法。受體的進(jìn)一步提純可通過在固定pH梯度聚丙烯酰胺凝膠中對(duì)通過制備性SDS-PAGE制備的材料進(jìn)行等電點(diǎn)聚焦(IEF)而獲得。
受體的分子量當(dāng)通過凝膠電泳(SDS-PAGE)分析時(shí)是在130KD范圍內(nèi)。
本發(fā)明的第二方面提供了上述受體的可溶形式。
所述受體的可溶形式可按照常規(guī)技術(shù)制備。
所述受體的這種可溶形式據(jù)信具有治療學(xué)用途，因而本發(fā)明延伸至使用所述受體的可溶形式作為一種治療學(xué)制劑。
本發(fā)明還延伸至所述受體的可溶形式在藥物制造中的應(yīng)用，這種藥物用于治療和/或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
本發(fā)明還延伸至治療和/或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血的方法，該方法包含向需要此種治療的患者施用有效量或預(yù)防量的可溶性受體。
本發(fā)明還延伸至一種藥物組合物，該藥物組合物包含與藥物學(xué)上可接受的載體混合的可溶性受體。這種藥物組合物可用于治療和/或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
這種藥物組合物和載體在本領(lǐng)域中是公知的，并可通過常規(guī)技術(shù)制備。
在本發(fā)明的第三方面提供了一種篩選具有與結(jié)合所述受體相關(guān)的治療活性的化合物的方法，它包含將待測(cè)化合物與含有新受體的物質(zhì)接觸并測(cè)定結(jié)合的程度。
含有新受體的物質(zhì)包含但不限于來自大鼠、人類、狨、狗、貓和小鼠的腦組織。這種腦組織適合在緩沖的水性介質(zhì)如5至50mM HEPES，pH 7.4 Tris/HCl緩沖液中被勻漿。被勻漿的組織可通過離心和重懸被洗滌。從這些組織制備的亞細(xì)胞級(jí)分可被使用。
被測(cè)化合物與含有新受體的物質(zhì)能接觸可通過將含新受體(如上所述)的組織的等分試樣(如含1至10mg蛋白/ml)與放射標(biāo)記的(如用3H或125I)待測(cè)化合物混合而進(jìn)行。優(yōu)選待測(cè)化合物在混合物中的終濃度為0.1至1000nM，更優(yōu)選1至50nM。
該混合物適合在環(huán)境溫度溫育1小時(shí)。未結(jié)合的被測(cè)化合物隨后通過濾過從結(jié)合的被測(cè)化合物分離。這可使用Whatman玻璃纖維濾膜優(yōu)選GF/B或GF/C型進(jìn)行。該濾膜適合用冰冷的緩沖介質(zhì)(優(yōu)選在組織制備中使用的類型)洗滌。
在濾器上捕獲的結(jié)合于組織的放射性量可通過向?yàn)V膜加入液體閃爍劑后在液體閃爍計(jì)數(shù)儀中計(jì)數(shù)(用于3H)或通過在γ計(jì)數(shù)儀中直接對(duì)濾器計(jì)數(shù)(用于125I)而測(cè)定。
另外，當(dāng)使用粘附于培養(yǎng)板的完整細(xì)胞時(shí)，未結(jié)合的被測(cè)化合物與結(jié)合的被測(cè)化合物的分離可通過用冰冷的緩沖介質(zhì)洗滌細(xì)胞，隨后在氫氧化鈉溶液中溶解細(xì)胞并在液體閃爍計(jì)數(shù)儀或γ計(jì)數(shù)儀中計(jì)數(shù)，如上所述。
被測(cè)化合物的放射標(biāo)記使用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。
另外，使用常規(guī)技術(shù)，可通過測(cè)定已知結(jié)合于受體如化合物(A)和(B)的其它前述專利或申請(qǐng)?zhí)峒盎虬幕衔锏姆派錁?biāo)記化合物的置換量來確定非放射標(biāo)記的測(cè)定化合物的結(jié)合親合力。
應(yīng)認(rèn)識(shí)到，結(jié)合于受體并可使用這種篩選方法置換的放射標(biāo)記化合物是新的并且構(gòu)成本發(fā)明和另一方面。
篩選方法中使用重組受體是有用的，這種重組受體可通過常規(guī)技術(shù)制備。
例如，分離新的人類受體編碼核酸的一種方法是使用本領(lǐng)域公認(rèn)的方法(參見“分子生物學(xué)流行方法”Ausubel.F.M等(編).Creene出版社和John Wiley Interscieuce，紐約，1989，1992)用自然的或人工設(shè)計(jì)的探針探查人類基因組或cDNA文庫(kù)。所獲得的分離核酸分子可用于獲得來自人類，哺乳類或其它動(dòng)物來源的基因組DNA，cDNA或RNA的互補(bǔ)拷貝；或用于篩查這些來源以尋找相關(guān)序列，包括上述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和控制元件以及來自相對(duì)于編碼序列的5′和/或3′區(qū)的其它穩(wěn)定，加工，翻譯和組織特異性決定區(qū)。
本發(fā)明的蛋白優(yōu)選通過重組基因工程技術(shù)制造。分離的核酸特別是DNA可通過可操作地連接DNA至基團(tuán)表達(dá)所需表達(dá)控制區(qū)(如，調(diào)節(jié)區(qū))而導(dǎo)入表達(dá)載體。該載體可通過本領(lǐng)域公知的方法(Ausubel等，上文)導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞如原核(例如細(xì)菌)，或真核(例如，酵母，昆蟲或哺乳類)細(xì)胞中。已經(jīng)制備或分離的所需蛋白的編碼序列，可克隆入適當(dāng)?shù)妮d體或復(fù)制子。許多克隆載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，適當(dāng)克隆載體的選取只是一個(gè)選擇的問題。用于克隆的重組DNA載體和它們可轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的實(shí)例包括噬菌體λ(大腸桿菌)，pBR322(大腸桿菌)，pACYC177(大腸桿菌)，pKT230(革蘭氏陰性細(xì)胞)，pGV1106(革蘭氏陰性細(xì)胞)，pLAFR1(革蘭氏陰性細(xì)菌)，pME290(非大腸桿菌的革蘭氏陰性細(xì)胞)，pHV14(大腸桿菌和枯草桿菌)，pBD9(桿菌)，pIJ61(鏈霉菌)，pUC6(鏈霉菌)，YIp5(酵母菌)，一種桿狀病毒昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)，YCp19(酵母菌)。見“DNA”克隆卷I和II，Glover等編。IRL出版社，牛津(1985)(1987)和；J.Maniatis等(“分子克隆”冷泉港實(shí)驗(yàn)室(1982))。
該基因可被置于啟動(dòng)子，核糖體結(jié)合位點(diǎn)(用于細(xì)菌表達(dá))和任選一種操縱基因(在本文中合稱為“控制”元件)的控制下，以便編碼所需蛋白的DNA序列被轉(zhuǎn)錄為經(jīng)含有這種表達(dá)構(gòu)建物的載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中的RNA。該編碼序列可含或可不含信號(hào)肽或前導(dǎo)序列。本發(fā)明的亞單位抗原可使用如大腸桿菌tac啟動(dòng)子或蛋白A基因(spa)啟動(dòng)子和信號(hào)序列而被表達(dá)。前導(dǎo)序列可在翻譯后加工中被細(xì)菌宿主去除。參見，如美國(guó)專利第4431739；4425437；4338397號(hào)。
除控制序列外，可能還希望增加調(diào)節(jié)序列以供調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白序列表達(dá)。調(diào)節(jié)序列為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，實(shí)例包括在化學(xué)或物理刺激(包括調(diào)節(jié)化合物的存在)下引起基因的表達(dá)開啟或關(guān)閉的物質(zhì)。調(diào)節(jié)元件的其它類型也可存在于載體中，例如，增強(qiáng)子序列。
構(gòu)建表達(dá)載體以使特定編碼序列位于帶有適當(dāng)調(diào)節(jié)序列的載體中，編碼序列相對(duì)于控制序列的位置和取向應(yīng)使編碼序列在控制序列的“控制”下轉(zhuǎn)錄(即，在控制序列處結(jié)合于DNA分子的RNA多聚酶轉(zhuǎn)錄該編碼序列)。為達(dá)到這一點(diǎn)，可能需要改變編碼所研究的特定抗原的序列。例如，在一些情況下，可能需要改變?cè)撔蛄幸员闼梢赃m當(dāng)取向連接于控制序列；即，保持閱讀框，控制序列和其它調(diào)節(jié)序列可在插入一種載體，如上述克隆載體，之前連接于編碼序列。另外，編碼序列可直接被克隆入已含有控制序列和適當(dāng)限制性位點(diǎn)的表達(dá)載體。
在一些情況下，可能希望增加引起多肽從宿主有機(jī)體分泌的序列，隨后再剪切分泌信號(hào)。也可能希望產(chǎn)生所研究受體的突變型或類似物。突變型或類似物可通過編碼蛋白的序列的一部分的缺失，通過在序列中插入一段序列，和/或通過取代一或多個(gè)核苷酸而制備。改變核苷酸序列的技術(shù)，如定點(diǎn)突變發(fā)生，為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。見，如，T.Maniatis等，上文；DNA克隆，卷I和II，上文；核酸雜交，上文。
許多原核表達(dá)載體在本領(lǐng)域中是公知的。見，美國(guó)專利第4578355；4440859；4436815；4431740；4431739；4428941；4425437；4418149；4411994；4366246；4342832號(hào)。亦見英國(guó)專利申請(qǐng)GB2121054；GB2008123；GB2007675；和歐洲專利申請(qǐng)103395。酵母表達(dá)載體在本領(lǐng)域中也是公知的。見，如，美國(guó)專利第4446235；4443539；4430428號(hào)，亦見歐洲專利申請(qǐng)103409；100561；964491。使用SV40晚啟動(dòng)子以驅(qū)動(dòng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)的pSV2neo(如J.Mol.Appl.Genet(分子應(yīng)用遺傳學(xué)雜志)1；327-341中所述)或使用CMV啟動(dòng)子以驅(qū)動(dòng)表達(dá)的pCDNA1neo，一種使用CMV啟動(dòng)子以驅(qū)動(dòng)表達(dá)的衍生自pCDNA1載體(分子細(xì)胞生物學(xué)74125-29)。這后兩種載體可被用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中瞬時(shí)或穩(wěn)定(使用G418抗性)表達(dá)。昆蟲表達(dá)系統(tǒng)，如，果蠅，也有用，參見，PCT申請(qǐng)美國(guó)89/05155和美國(guó)91/06838以及歐洲申請(qǐng)88/304093.3。
根據(jù)所選擇的表達(dá)系統(tǒng)和宿主，本發(fā)明的蛋白通過在所研究蛋白能被表達(dá)的條件下培養(yǎng)用上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞而產(chǎn)生。隨后將蛋白從宿主細(xì)胞分離并提純。如果表達(dá)系統(tǒng)將蛋白分泌入培養(yǎng)基，則可直接從培養(yǎng)基提純蛋白。如果蛋白不被分泌，則它可從細(xì)胞溶胞產(chǎn)物分離或從細(xì)胞膜級(jí)分回收。在這種情況下，如果蛋白位于細(xì)胞表面，則完整細(xì)胞或分離的膜可用作所希望基因產(chǎn)物的可分析來源。適當(dāng)培養(yǎng)條件和回收方法的選擇是本領(lǐng)域中公知的。
鑒定本發(fā)明的蛋白的另一種方法是通過構(gòu)建基因文庫(kù)，使用產(chǎn)生的克隆去轉(zhuǎn)化大腸桿菌并使用針對(duì)所希望受體的多克隆血清或單克隆抗體收集和篩選單個(gè)克隆。
本發(fā)明的蛋白也可通過化學(xué)合成如固相肽合成生產(chǎn)，使用已知氨基酸序列或衍生自所研究基因DNA序列的氨基酸序例。這些方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。肽類的化學(xué)合成不特別優(yōu)選。
本發(fā)明的蛋白或它們的片段包含至少一個(gè)表位可用于產(chǎn)生抗體，多克隆和單克隆抗體。如果期望得到多克隆抗體，則將一種被選擇的哺乳動(dòng)物(如小鼠，兔，山羊，馬等)用本發(fā)明的受體或其片段，或一種突變的受體免疫接種。經(jīng)免疫接種的動(dòng)物的血清被收集并按照已知方法處理。如果使用含多克隆抗體的血清，則多克隆抗體可通過免疫親合層析或其它已知方法提純。
針對(duì)本發(fā)明的蛋白及其片段的單克隆抗體也易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員生產(chǎn)。通過使用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體的常規(guī)方法是公知的?？赏ㄟ^細(xì)胞融合，以及其它技術(shù)如用致瘤的DNA直接轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞，或用EB病毒轉(zhuǎn)染產(chǎn)生永生的抗體產(chǎn)生細(xì)胞系。參見，M.Schreier等，雜交瘤技術(shù)“(1980)；Hammeiling等，”單克隆抗體和T-細(xì)胞雜交瘤“(1981)；kennetl等，”單克隆抗體“(1980)；也參見美國(guó)專利4341761；4399121；4427783；4444887；4452570；446917；4472500；4491632；和4493890號(hào)。針對(duì)所研究抗原產(chǎn)生的單克隆抗體清單，可被篩查多種特性，即，同種型，表位，親合性等。通過使用免疫親合技術(shù)，單克隆抗體在它們所針對(duì)的個(gè)別抗原的提純中有用。另外，編碼所研究單克隆抗體的基因可通過本領(lǐng)域公知的PCR技術(shù)從雜交技術(shù)，單克隆抗體在它們所針對(duì)的個(gè)別抗原的提純中有用。另外，編碼所研究單克隆抗體的基因可通過本領(lǐng)域已知的PCR技術(shù)從雜交瘤分離并在適當(dāng)載體中克隆和表達(dá)。本發(fā)明的這些抗體，不管是多克隆的還是單克隆的都有其它用途，因?yàn)椋鼈冞€可用作免疫測(cè)定，RIA，ELISA等中的試劑。
在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，包含受體的細(xì)胞膜級(jí)分或游離或固定于固體支持物上的分離的受體可用于測(cè)定被測(cè)的結(jié)合。當(dāng)重組體細(xì)胞用于表達(dá)受體時(shí)，優(yōu)選使用具有很小或無內(nèi)源性受體活性的細(xì)胞，以使結(jié)合(如果有結(jié)合的話)是由于被表達(dá)的所研究受體的存在。優(yōu)選細(xì)胞包括人胚腎細(xì)胞，猴腎(HEK-293細(xì)胞)，成纖維(COS)細(xì)胞，中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，果蠅或鼠L-細(xì)胞。還優(yōu)選采用具有受體反應(yīng)第二信使系統(tǒng)的宿主細(xì)胞。公知的第二信使系統(tǒng)包括但不限于響應(yīng)結(jié)合于細(xì)胞外受體結(jié)構(gòu)域，磷酸肌醇水解，腺苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶，離子通道活性的升高或降低。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，一種特殊設(shè)計(jì)的受體結(jié)合標(biāo)記可被構(gòu)建。例如可通過將本發(fā)明的受體與對(duì)受體結(jié)合敏感的蛋白區(qū)融合制造一種融合蛋白。在此稱為指示域的結(jié)構(gòu)域本身或與輔助分子一起能夠產(chǎn)生一種分析上可檢測(cè)信號(hào)，該信號(hào)指示受體配體結(jié)合。
另外，來自轉(zhuǎn)染的或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的細(xì)胞膜制備物可被使用。在這種情況下，分析上可測(cè)的配體的結(jié)合被測(cè)定。放射和非放射標(biāo)記配體的使用在本發(fā)明中得到考慮。上述技術(shù)在配體鑒定中有用，而且在藥物篩選和藥物開發(fā)方法中也有用。
第四方面提供了在上述篩選方法中鑒定的新化合物(下文中稱為通式(X)的化合物)和可藥用的鹽，水合物或溶劑化物。
可藥用的鹽，水合物和溶劑化物可按常規(guī)方法制備。
本發(fā)明還延伸至使用通式(X)的化合物或其可藥用的鹽，水合物或溶劑化物作為治療劑。
本發(fā)明還延伸至一種治療或防止疾病的方法，它包含向需要此種治療或防止的患者施用有效量和/或預(yù)防量的通式(X)的化合物或其可藥用的鹽，水合物或溶劑化物。
本發(fā)明還延伸至在藥物制造中通式(X)的化合物的用途。這種藥物用于治療或預(yù)防焦慮，躁狂，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因，尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
本發(fā)明也延伸至用于治療或防止下述疾病的藥物組合物。這些疾病包括焦慮，躁狂，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因，尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。該方面包含將通式(X)的化合物與可藥用的載體混合。
用所述篩選方法鑒定的這種新化合物可使用有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域公知技術(shù)制備。
本發(fā)明第五方面提供了一種結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體。
這種單克隆和多克隆抗體可通過常規(guī)技術(shù)識(shí)別和制備。
本發(fā)明因此也提供了結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體作為治療劑的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體在藥物制造中的應(yīng)用。這種藥物用于治療和/或預(yù)防焦慮，躁狂，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因，尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
本發(fā)明還提供了一種方法，用于治療和/或預(yù)防焦慮，躁狂，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因，尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。該方法包含施用有效量和/或預(yù)防量的結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體。
本發(fā)明還延伸至用于治療和/或預(yù)防焦慮，躁狂，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因，尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)，用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血的藥物組合物，它包含將單克隆或多克隆抗體與一種可藥用的載體混合。
本發(fā)明的第六方面提供了一種結(jié)合于新受體的放射標(biāo)記化合物。這種放射標(biāo)記化合物可通過常規(guī)技術(shù)制備。這種化合物的具體實(shí)例在實(shí)施例中描述。本發(fā)明因此也提供了結(jié)合于新受體的放射標(biāo)記化合物作為診斷工具在檢測(cè)新受體中的改變或異常中的應(yīng)用。這些改變可能存在于本發(fā)明中提及的與受體結(jié)合相關(guān)的疾病中。這種放射標(biāo)記受體也可用作用于研究新受體性質(zhì)的研究工具。優(yōu)選的放射活性化合物包括實(shí)施例2至5中所給出的。
下列實(shí)施例闡明本發(fā)明。實(shí)施例1成年Wistar大鼠被處死并解剖取腦。解剖出全部前腦組織并在緩沖水性介質(zhì)中均漿。均漿組織通過離心和再懸溶于相同緩沖液洗滌。離心后再懸溶的組織或新鮮使用，或在使用前冰凍保存3個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。
濃度為1-10mg蛋白/ml的如上制備的組織的等分試樣與溶解于緩沖介質(zhì)(50mM HEPES，pH7.4)中的〔3H〕化合物A的等分試樣混合。〔3H〕化合物在混合物各的終濃度在20-50mM范圍內(nèi)。該混合物在室溫溫育約1小時(shí)。然后通過濾過將結(jié)合于組織的〔3H〕化合物A從未結(jié)合的〔3H〕化合物A分離。濾過是通過Whatman玻璃纖維濾膜(GF/B或GF/C)。該濾膜隨后用冰冷卻的緩沖介質(zhì)(50mM HEPES，pH 7.4)快速洗滌。在濾膜加入液體閃爍劑后在液體閃爍儀中計(jì)數(shù)而測(cè)定。
為確定〔3H〕-化合物A“特異”結(jié)合量(即，對(duì)新位點(diǎn)特異的結(jié)合)，按照上述進(jìn)行平行測(cè)定，但是在存在高濃度(1-10μM)未標(biāo)記化合物情況下將〔3H〕化合物A與組織共同溫育，該未標(biāo)記化合物也結(jié)合于新位點(diǎn)從而防止〔3H〕化合物A對(duì)此位點(diǎn)結(jié)合。可使用未標(biāo)記的化合物A本身，但也可使用結(jié)合于新位點(diǎn)的其它化合物。在此未標(biāo)記化合物存在下保留的〔3H〕-化合物A結(jié)合量定義為“非特異”結(jié)合。將此量從〔3H〕-化合物A結(jié)合總量(即，在無未標(biāo)記化合物存在下的量)中減去以獲得〔3H〕化合物A對(duì)新位點(diǎn)的“特異”結(jié)合。
組織中新受體的密度和其對(duì)〔3H〕化合物A親合性的估算通過將組織與一系列濃度的〔3H〕化合物A溫育而獲得。在〔3H〕化合物A的不同濃度的特異結(jié)合(如上所定義)水平隨后被用計(jì)算〔3H〕-化合物A對(duì)新位點(diǎn)的解離常數(shù)(KD)和組織中此位點(diǎn)的密度(Bmax)。
結(jié)果化合物A的計(jì)算值為對(duì)于大鼠前腦組織Kd為40nm和Bmax為220pmol/g蛋白。
使用上述類似方法，但化合物B的濃度約為1/10；則化合物B的計(jì)算值為對(duì)于大鼠前腦組織KD為2nM和Bmax為220pmol/g。實(shí)施例2〔羧基-14C〕化合物A的合成和〔羰基-14C〕化合物1.〔羧基-14C〕4-氟苯甲酸向攪拌的無水二甲基甲酰胺中的〔14C〕氰化鉀(100 mCi，60mCi/mmol-1)懸液中加入碘化銅(I)(158mg，0.83mmol)和4-氟-碘代苯(433mg，1.95mmol)。該混合物在氮?dú)庀禄亓骷訜?2小時(shí)。該溶液通過加入5N氫氧化鈉(2ml)堿化并用水(2ml)稀釋。該混合物用乙醚徹底提取，合并的提取物依次用飽和鹽水(2×30ml)，水(2×30ml)洗滌，在硫酸鎂上干燥，濾過并蒸發(fā)除醚。殘留物溶于乙醇(15ml)，加入氫氧化鉀(1.34g)水(8ml)溶液，產(chǎn)生的溶液回流加熱15小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物用水(20ml)稀釋，用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2并用乙酸乙酯徹底提取混合物。合并的提取物用水(1×50ml)洗滌，在硫酸鎂上干燥，濾過并蒸發(fā)至干，提供〔羧基-14C〕4-氟苯甲酸(196mg，1.38mmol，68.4mCi，68.4％)。2.〔羧基-14C〕化合物A將〔羧基-14C〕4-氟苯甲酸(196mg，68.3mCi，1.38mmol)，1-羥基-苯并三唑水化物(191.4mg，1.42mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(265mg，1.38mmol)溶于無水二氯甲烷(6ml)。向其中加入二氯甲烷(2.0ml)中的(3R，4S)-4-氨基-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-苯并[b]吡喃-3-醇(258mg，1.38mmol，含95w/w甲醇)和三乙胺(0.190ml)溶液。該混合物在環(huán)境溫度攪拌19.5小時(shí)并將溶劑在真空中蒸發(fā)。殘留物用乙酸乙酯提取(25ml)依次用稀鹽酸(2×25ml)，水(25ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(25ml)，水(25ml)洗滌，在硫酸鎂上干燥，濾過并蒸發(fā)至干。粗〔羧基-14C〕化合物A通過柱層析提純(硅膠40g，用乙酸乙酯/己烷1∶3v/v洗脫以去除非極性雜質(zhì)并用100％乙酸乙酯洗脫〔14C〕化合物A)產(chǎn)生〔14C〕化合物A(179.7mg，0.50mmol)。此物質(zhì)的一部分(130mg)通過半制備性HPLC(Spherisorb 5W硅膠22.5×250mm柱，用氯仿/甲醇95∶5v/v)以1010ml/min洗脫)以提供〔14C〕化合物A(107mg)。此批在水中平衡6小時(shí)，隨后在真空中徹底干燥。該產(chǎn)物放射化學(xué)純度為99.7％，光學(xué)純度＞99％，化學(xué)純度為95.5％(“如是”)，比活為59.6Ci.mmol-1。1H NMR譜與結(jié)構(gòu)一致，并且與WO 92/22293中制備的未標(biāo)記化合物相同。分析系統(tǒng)在下面描述。圖解式1〔14C〕化合物A的合成
〔14C〕化合物A*指碳-14放射標(biāo)記實(shí)施例3〔羧基-14C〕的合成，(3S，4S)-6-乙?；?3，4-二氫-2，2-二甲基-4-(3-氯-4-氟-苯基〔14C〕羰基氨基)-2H-苯并〔b〕吡喃-3-醇的合成3-氯-4-氟苯并〔14C〕腈將3-氯-4-氟碘代苯(472.8mg，184mmol)?！?4C〕氰化鉀(比活為60mCi.mmol-1時(shí)100mCi，1.67mmol，108.8mg)和碘化銅(I)(173.9mg，0.91mmol)懸溶于N-甲基吡咯烷酮(4.5ml)中。
該混合物隨后在氮?dú)庀录訜嶂?50℃，同時(shí)攪拌，總共19.25小時(shí)，并放置于室溫49小時(shí)。通過TLC(硅膠，用乙酸乙酯/正-己烷1∶5v/v洗脫)檢測(cè)顯示反應(yīng)進(jìn)行至約73％轉(zhuǎn)化。該反應(yīng)混合物隨后在水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)間分開。有機(jī)層依次用2％w/v氯化鐵溶液(100mL)，水(100mL)，2％w/v偏二硫化鈉溶液(100mL)，水(100mL)和鹽水(100mL)洗滌。然后將有機(jī)層在硫酸鎂上干燥，濾過以去除干燥劑，在減壓下蒸發(fā)干燥并將殘留物在硅膠(MerckArt.9385)上進(jìn)行柱層析，用1∶8乙酸乙酯/正己烷洗脫。收集相關(guān)級(jí)分并合并以提供合約72.7mCi(相當(dāng)于1.21mmol，188mg，72.7％收率)3-氯-4-氟苯并〔14C〕腈的溶液。
3-氯-4-氟苯并〔14C〕羧酸的合成3-氯-4-氟苯并〔14C〕腈(在60mCi.mmol-1的比活下36mCi；0.6mmol，94.5mg)的乙酸乙酯/正己烷1∶8v/v(85mL)溶液被還原后在減壓下干燥。殘留物被懸溶于濃鹽酸(8.0mL)并加熱至100℃，同時(shí)攪拌，在氮?dú)庀拢?小時(shí)。約每間隔1小時(shí)攪拌混合物以使升華的物質(zhì)洗滌入混合物中。該混合物冷卻并在室溫下過夜。該混合物隨后水(30mL)乙酸乙酯(40ml)間分層。水層用乙酸乙酯(40mL)再次提??；合并有機(jī)層提取入2M氫氧化鈉溶液(40mL)。將有機(jī)層再提取兩次入2M氫氧化鈉溶液(2×20ml)。合并的堿性水溶液通過加入濃鹽酸小心地酸化至pH1。將水溶液隨后提取兩次入乙酸乙酯(2×80mL)合并層，在硫酸鎂上干燥并濾過以去除干燥劑。用小量乙酸乙酯(總量50mL)洗滌沉淀數(shù)次并將洗滌物與濾過物合并。所有溶劑隨后在減壓下蒸發(fā)以提供固體(75mg，0.43mmol，71.7％收率)3-氯-4-氟苯并〔14C〕羧酸。
(3S，4S)-6-乙?；?3，4-二氫-2，2-二甲基-4-(3-氯-4-氟-苯基〔14C〕羰基氨基)-2H-苯并〔b〕吡喃-3-醇的合成3-氯-4-氟苯并〔14C〕羧酸(75mg，0.43mmol)被溶于DMF(2.5mL)。向此溶液加入羥基苯并三唑(82.6mg，0.61mmol，1.42eq)〔在真空下在室溫干燥24小時(shí)〕和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(113.8mg，0.59mmol，1.37eq)〔在真空下在室溫干燥24小時(shí)〕并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入(3S，4S)-6-乙酰-3，4-二氫-2，2-二甲基-4-氨基-2H-苯并〔b〕吡喃-3-醇(150mg，0.64mmol，1.49eq)的DMF(2.5mL)溶液并將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將混合物在水(50mL)和乙酸乙酯間分配；水層再次提取入乙酸乙酯(80mL)。合并有機(jī)層，用水(50mL)洗滌，在硫酸鎂上干燥并濾過以去除干燥劑。干燥劑在濾器上用乙酸乙酯洗滌(50mL)；合并濾過液和洗滌并在減壓下蒸發(fā)至干燥，殘留物在硅膠進(jìn)行柱層析，用乙酸乙酯/正-己烷1∶1v/v洗脫。合并相關(guān)柱級(jí)分，在減壓下蒸發(fā)至干燥，如此獲得的泡沫狀殘留物從丙酮/正-己烷再結(jié)晶以提供一種白色固體產(chǎn)物，它在真空干燥以得到123.5mg，0.31mmol，72％收率的(3S，4S)-6-乙?；?3，4-二氫-2，2-二甲基-4-(3-氯-4-氟苯基〔14C〕羧基氨基)-2H-苯并〔b〕吡喃-3-醇。該產(chǎn)物具有98.7％的放射化學(xué)純度。99.4％的化學(xué)純度(“如是”)，99.9％的手性純度和59.4mCi.mmol-1的比活。1H NMR譜與結(jié)構(gòu)一致并且與按照前述專利中所描述制備的未標(biāo)記化合物相同。實(shí)施例4〔125I〕化合物B未標(biāo)記化合物B與二(三丁基錫)的鈀(II)催化偶聯(lián)產(chǎn)生三丁基錫烷衍生物。隨后在3％乙酸的醇溶液中在存在1.0-2.0μg氯胺-T作為氧化劑時(shí)，通過用5.0mCi碘-〔125I〕化鈉對(duì)100μg部分的丁基錫烷衍生物進(jìn)行放射性碘脫錫烷化而獲得且目標(biāo)碘-125標(biāo)記化合物，即化合物B-〔125I〕。此方法產(chǎn)生3.4-3.9mCi(68-78％放射化學(xué)收率)的〔125I〕化合物B，在HPLC(Baher硅膠柱，4.6mm ID×25cm，98∶2己烷/異丙醇，以1.0ml/分洗脫，在230nm處用紫外線監(jiān)測(cè))純化后放射化學(xué)純度至少為99％，比活(來自對(duì)質(zhì)量和放射活性濃度的測(cè)定)測(cè)定為1775-1800 Ci/mmol。
實(shí)施例5〔3H〕化合物A將化合物D(1.0-1.2mg，1.9-2.4μmol)溶于1.0ml 9∶1(v/v)DMF(Baker)/三乙胺(Aldrich)。向此溶液中加入1.0-1.2mg(100重量％)的10％披鈀碳(Aldrich)。此反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度中在3.6-4.9Ci氚氣環(huán)境下攪拌。
通過加入甲醇(3×2ml)繼以真空轉(zhuǎn)移去除揮發(fā)性成分。留下108-146mCi的粗產(chǎn)物。放射HPLC分析顯示此物質(zhì)含61-60％〔3H〕化合物A。此物質(zhì)以4至次注射通過反相HPLC提純(Beckman Octyl，4.6×250mm柱，乙腈/水/三氟乙酸(40∶60∶0.1)，在220-240nm處紫外線檢測(cè)，1ml/分流速)。對(duì)應(yīng)于產(chǎn)物的洗脫液被冷凍干燥隨后溶于乙醇以提供24-25mCi〔3H〕化合物A。分析得到21.5-29Ci/mmol的特異活性(通過化學(xué)電離作用-質(zhì)譜測(cè)定的同位素豐度，NH3試劑氣體)和至少99％的放射化學(xué)純度(Ultrasphere ODS 5μm，4.6×250mm柱，乙腈/水/三氟乙酸線性梯度從34∶66∶0.1至90∶10∶0.1大于10分鐘，速度為1.0ml/分，在230nm處紫外線檢測(cè)。并通過在線放射活性流式閃爍監(jiān)測(cè)儀檢測(cè)放射活性活性)。
化合物D3H化合物A實(shí)施例6化合物C
通過在標(biāo)準(zhǔn)條件下ipso取代導(dǎo)入放射標(biāo)記{Na[125I]I(不加載體)/氯胺-T}8-三丁基錫烷制備光親合標(biāo)記〔125I〕6-乙基-3，4-二氫-2，2-二甲基-8-〔125I〕碘-4S-〔3-{三氟甲基-3H-diazirin-3基}苯甲酰基〕-2H-苯并[b]吡喃-3R-醇，并將粗〔125I〕6-乙?；?3，4-二氫-2，2-二甲基-8-〔125I〕碘-4S-〔3-{三氟甲基-3H-diazirin-3基}-苯甲酰氨基〕-2H-苯并[b]吡喃-3R-醇，通過HPLC{Novapak C18用0.1％TFA水溶液/乙腈(1∶1v/v)}〔125I〕SB-224172提純，通過將6-乙?；?3，4-二氫-2，2-二甲基-8-碘-4S-氨基-2H-苯并[b]吡喃-3R-醇與六丁基錫和二溴鈀二(三苯膦)反應(yīng)并隨后與3-〔3-(三氟甲基)-3H-diazirin-3-基〕苯甲酸縮合而制備錫烷。流程圖
實(shí)施例7a)3-(1，1-Diazirino-2-三氟乙基)苯甲酸向二噁烷(10ml)和0.2MKOH(63ml)溶液中的按照M.Ceruso和G.D.Prestwich，Bioorg和Med Cgem Letts，1994，4-2179-2184制備的2.7g 3-(1，1，diazirino-2-三氟乙基)芐醇攪拌溶液中分批在2.5h內(nèi)加入KMNO4(2.45g)。該混合物隨后通過硅藻土墊濾過以去除過剩的MnO2并將濾過液用醚提取。水性層用1M H2SO4(25ml)酸化用醚提取。有機(jī)層用水，鹽水洗滌并在無水Na2SO4上干燥。濾過并在真空中蒸發(fā)以得到淺黃色固體的化合物(2.45g)。b)反式-6-乙酰-4S-(3-(1，1-diazirino-2-三氟乙基)-苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-8-碘-2H-1-苯并吡喃-3-醇(化合物C)向干燥DMF(2ml)中的上述diazirinyl苯甲酸(0.124g)溶液加入乙基二甲基氨基丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.095g)和1-羥基苯并三唑(0.067g)。此溶液在室溫?cái)嚢?0分鐘。將反式6-乙?；?4R-氨基-3，4-二氫-2，2-二甲基-8-ido-2H-1-苯并吡喃-3S-醇(0.015g，按照PCT/EP/95/02249)的描述1和實(shí)施例8制備)加入此溶液中并繼續(xù)攪拌3小時(shí)。將混合物倒入水中并用乙酸乙酯提取。有機(jī)層用稀鹽酸，水，飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌并在無水Na2SO4上干燥。濾過并在真空中蒸發(fā)以得到粗固體(0.37g)并將它從乙酸乙酯正己烷重結(jié)晶以產(chǎn)生作為晶體的實(shí)施例7的化合物。熔點(diǎn)109-100℃[α]D25+55.3°(MeOH，c＝1.1)
權(quán)利要求
1.一種獲自大鼠前腦組織的基本純的受體，其特征在于a)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物A以Kd 40nM與其結(jié)合，b)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物A以Bmax220pmol/g蛋白與其結(jié)合，c)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物B以Kd 2nM與其結(jié)合，d)對(duì)于大鼠前腦組織，化合物B以Bmax220pmol/g蛋白與其結(jié)合，以及與大鼠前腦組織有至少85％同源性的來自其它來源的同源受體。
2.按權(quán)利要求1所定義的受體的可溶形式。
3.按權(quán)利要求1所定義的受體，其分子量經(jīng)凝膠電泳(SDS-PAGE)分析在130K道爾頓左右。
4.按權(quán)利要求2所定義的受體可溶形式作為治療劑的應(yīng)用。
5.按權(quán)利要求2所定義的受體可溶形式在藥物制備中的應(yīng)用，這些藥物用于治療和/或預(yù)防焦慮、躁狂、抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
6.一種方法，用于治療和/或預(yù)防焦慮，躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血，該方法包含向需要的患者施用有效量或預(yù)防量的按權(quán)利要求2的定義的可溶性受體。
7.一種藥物組合物，用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血，它包含與藥學(xué)上可接受載體混合的按權(quán)利要求2所定義的可溶性受體。
8.一種方法，用于篩選具有與結(jié)合于按權(quán)利要求1所定義受體相關(guān)的治療活性的化合物；它包含使被測(cè)化合物與存在新受體的物質(zhì)相接觸并測(cè)定結(jié)合度。
9.一種放射標(biāo)記化合物，它結(jié)合于按權(quán)利要求1所定義的受體并可使用按權(quán)利要求8中所定義的篩選方法被取代。
10.一種新化合物及其可藥用的鹽，水合物或溶劑化物，它在按權(quán)利要求8所定義的篩選方法中被鑒定。
11.權(quán)利要求10的化合物或其可藥用的鹽，水合物或溶劑化物作為治療劑的應(yīng)用。
12.一種治療或預(yù)防疾病的方法，它包含向需要的患者施用有效和/或預(yù)防量的按權(quán)利要求10所定義的化合物或其可藥用的鹽，水合物或溶劑化物。
13.按權(quán)利要求10所定義的化合物在藥物制造中的應(yīng)用，這些藥物用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
14.一種藥物組合物，用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血，它包含將按權(quán)利要求10所定義的化合物與一種可藥用的載體混合。
15.一種單克隆或多克隆抗體，它結(jié)合于按權(quán)利要求1所定義的受體。
16.按照權(quán)利要求15所定義的結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體作為治療劑的應(yīng)用。
17.按權(quán)利要求15所定義的結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體在藥物制造中的應(yīng)用，這些藥物用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血。
18.一種方法，用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血，它包含施用有效量和/或預(yù)防量的按權(quán)利要求15所定義的結(jié)合于新受體的單克隆或多克隆抗體。
19.一種藥物組合物，用于治療或預(yù)防焦慮、躁狂，抑郁、與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克相關(guān)的疾病，與濫用物質(zhì)如可卡因、尼古丁，酒精和苯二氮類的撤藥相關(guān)的效應(yīng)。用抗痙厥藥物可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛和/或大腦缺血，它包含將按權(quán)利要求15所定義的單克隆或多克隆抗體與可藥用的載體混合。
20.一種放射活性標(biāo)記的化合物，它結(jié)合于按權(quán)利要求1定義新受體。
21.按權(quán)利要求20所定義的結(jié)合于新受體的放射標(biāo)記化合物作為診斷工具的應(yīng)用，用于檢測(cè)按權(quán)利要求1所定義的新受體的改變或異常。
全文摘要
一種獲自大鼠前腦組織的基本純的受體,其特征在于:a)對(duì)于大鼠前腦組織,化合物A以Kd40nM與其結(jié)合,b)對(duì)于大鼠前腦組織,化合物A以B
文檔編號(hào)C07D311/68GK1175262SQ95197647
公開日1998年3月4日 申請(qǐng)日期1995年12月11日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月17日
發(fā)明者H·J·赫登, J·C·杰曼, W·N·陳 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆有限公司