一種人工合成的麥胚肽及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，公開了一種人工合成的具有抗氧化應(yīng)激活性的麥胚肽，并公開了其制備方法和作為抗氧化劑的應(yīng)用。本發(fā)明所述麥胚肽利用Fmoc固相化學法合成，含有3個氨基酸殘基，序列為Arg-Val-Phe，結(jié)構(gòu)式如下。試驗表明其可通過維護細胞膜完整性、提高細胞活力、增強線粒體膜酶活等方式保護氧化損傷的神經(jīng)細胞，對H2O2誘導人神經(jīng)細胞的氧化應(yīng)激和凋亡具有顯著的保護作用。
【專利說明】一種人工合成的麥胚肽及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種人工合成的麥胚肽及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)統(tǒng)計，全世界60歲以上老年人口總數(shù)已達到6億，其中有60多個國家的老年人口達到或超過人口總數(shù)的10%，進入了老齡化社會行列。人口老齡化的迅速發(fā)展及引起的一系列問題，引起了世界各國政府的重視和關(guān)注。截至目前，我國60歲及以上老年人口達
1.85億，占總?cè)丝诘谋戎剡_13.7%，預(yù)計到“十二五”末，全國老年人口將增加4300多萬，達到2.21億。隨著年齡的增長，許多器官可能會出現(xiàn)功能障礙，這種功能障礙發(fā)展到一定程度便表現(xiàn)出癥狀，這便是“老年病”。我國兩大主要老年病阿爾茨海默病(AD)和帕金森病(PD)的患病人數(shù)已達1500萬以上，由于目前尚無有效的治療藥物，使得這些疾病嚴重降低了患者的生活質(zhì)量，也給整個社會和家庭帶來巨大壓力和負擔。而根據(jù)流行病學日前的研究發(fā)現(xiàn)，老年人群若長期補充一定劑量的抗氧化劑，可以有效降低心腦血管疾病和癌癥的發(fā)病率。因此，減少自由基、抗氧化治療在ro和AD患者治療中的作用日益受到藥物研究者和臨床醫(yī)學家的重視。
[0003]近年來，抗氧化肽類作為一種非酶類自由基清除劑的研究正在興起?，F(xiàn)已經(jīng)報道從食物蛋白源中酶解或提取的具有抗氧化活性的肽包括麥胚肽，大豆肽、牛乳清蛋白肽、玉米肽、小麥谷蛋白肽等。
[0004]麥胚是小麥加工的副產(chǎn)物，是具有生命活力的植物胚胎。麥胚蛋白經(jīng)過適當?shù)牡鞍酌杆饧凹兓?，生成的麥胚多肽不僅易于消化吸收，更具有清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化的作用，可將其作為食品和醫(yī)藥領(lǐng)域潛在的抗氧化劑來進行開發(fā)。目前研究已證實麥胚肽在體外具有較強的清除自由基的能力。然而，麥胚肽的提取、分離純化過程過于繁瑣、復雜，不能保證廣品品質(zhì)的穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種人工合成的麥胚肽及其制備方法，以及其作為抗氧化劑在制備預(yù)防與神經(jīng)細胞氧化應(yīng)激相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。
[0006]為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種人工合成的具有抗氧化應(yīng)激活性的麥胚肽，其氨基酸序列為Arg-Val-Phe，結(jié)構(gòu)式如下:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一種人工合成的具有抗氧化應(yīng)激活性的麥胚肽，其特征在于，其氨基酸序列為Arg-Val-Phe,結(jié)構(gòu)式如下。
2.如權(quán)利要求1所述的麥胚肽，其特征在于，其是以N-芴甲氧羰基保護的苯丙氨酸為原料，通過兩次縮合反應(yīng)，依次分別連接由N-芴甲氧羰基保護的纈氨酸和精氨酸，生成麥胚肽。
3.權(quán)利要求1所述的麥胚肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)樹脂溶脹； (2)脫除氨基保護； (3)二肽的合成； (4)三肽的合成； (5)麥胚肽樹脂切割； (6)析出麥胚肽。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述步驟(1)為將30mmol的Fmoc-L-苯丙氨酸-王樹脂置于反應(yīng)器中，用300mL 二氯甲烷浸泡，待樹脂膨脹，溶脹30min，抽濾除去二氯甲烷。
5.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)為加入體積比為2:8的六氫吡啶與N，N- 二甲基甲酰胺混合溶液浸泡步驟(1)所得樹脂，使用氮氣鼓動，反應(yīng)結(jié)束后用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂。
6.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)為將溶有ISmmolFmoc-L-纟顏氨酸的溶液150mL與溶有IOOmmolN, N' - 二異丙基碳酰亞胺和90mmoll_羥基苯駢三氮唑的溶液120mL在冰浴下混合，反應(yīng)0.5h ;然后與步驟(2)處理過的樹脂混合，再加 16.5mmoI的4- 二甲氨基吡唆，室溫下反應(yīng)5h ;過濾，用N，N- 二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇分別洗滌三次，每次3min ;將450mL無水吡啶、90mL乙酸酐溶于600mL N, N- 二甲基甲酰胺后倒入樹脂中，反應(yīng)2h ;反應(yīng)結(jié)束后用N，N- 二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇各1000mL輪流洗滌樹脂三次，每次3min，真空干燥。
7.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)為重復步驟(2)-(3)，將步驟(3)中的Fmoc-L-纟顏氨酸替換為Fmoc-L-精氨酸,連接Fmoc-L-精氨酸完成三肽合成，將樹脂用二氯甲烷和乙醚浸泡后抽干。
8.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)為將所得三肽-樹脂置于砂芯反應(yīng)器中，加入750mL切割試劑，反應(yīng)2h，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮濾液，在濃縮液中加入.600mL冰乙醚,析出沉淀,在5000r/m下離心IOmin,然后棄去上清液,真空干燥沉淀；其中，所述切割試劑為體積分數(shù)為2.5%水，2.5%三異丙基硅烷和95%三氟乙酸混合而成。
9.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)為濾去樹脂，向濾液中加入無水乙醚,用離心機離心后獲得固體,加入無水乙醚洗滌,再離心,重復數(shù)次后經(jīng)HPLC脫鹽、凍干即可獲得麥胚肽。
10.權(quán)利要求1所述的麥胚肽作為抗氧化劑在制備預(yù)防與神經(jīng)細胞氧化應(yīng)激相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07K5/09GK103626844SQ201310589424
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】程云輝 申請人:長沙理工大學