專利名稱：作為pkc抑制劑的吲哚基馬來(lái)酰亞胺衍生物的制作方法
作為PKC抑制劑的吲哚基馬來(lái)酰亞胺衍生物本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2005年1月19日、發(fā)明名稱為“作為PKC抑制劑的吲哚基馬來(lái) 酰亞胺衍生物”的中國(guó)專利申請(qǐng)200580002684. 8 (PCT/EP2005/000502)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及新穎的蛋白激酶C(PKC)抑制劑，它們有相對(duì)于其他蛋白激酶而言的 選擇性；涉及新穎的PKC抑制劑，它們就PKC的同工型α和β以及任選地θ相對(duì)于一種 或多種其他現(xiàn)有PKC同工型而言是選擇性的；還涉及這類PKC抑制劑抑制移植排斥或自身 免疫病的用途。蛋白激酶C(PKC)由密切相關(guān)的酶家族組成，它們充當(dāng)絲氨酸/蘇氨酸激酶。目前 存在至少十種已知的PKC同工酶，它們?cè)诮M織分布、酶選擇性、對(duì)Ca2+的需求和調(diào)節(jié)作用上 有所不同。PKC在細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)發(fā)送、基因表達(dá)和細(xì)胞分化與生長(zhǎng)的控制中扮演重要角 色。已知有多種PKC抑制劑。有些也已知證明PKC相對(duì)于其他蛋白激酶而言是選擇性的。 不過(guò)關(guān)于同工酶選擇性知之甚少。由于不同PKC同工酶在生理中的重要角色，需要開(kāi)發(fā)選 擇性PKC抑制劑，特別是相對(duì)于其他蛋白激酶和/或某些特定PKC同工酶而言高度選擇性 的PKC抑制劑。令人驚奇地，現(xiàn)在已經(jīng)鑒定選擇性PKC抑制劑化合物，下文稱之為本發(fā)明化合物。 此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些選擇性PKC抑制劑顯示令人感興趣的治療性質(zhì)，特別是在移植，和治療 或預(yù)防自身免疫病中顯示令人感興趣的治療性質(zhì)。一方面，本發(fā)明提供這樣一種化合物，它是蛋白激酶C的蛋白質(zhì)_選擇性抑制劑， 例如就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶而言選擇性的抑制劑，例如相對(duì)于一種或多 種酪氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種非受體或受體酪氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種 PKA、PKB、Abl.Met, Src、Ins-R, Flt_3、JAK-2、KDR 和 / 或 Ret 蛋白而言選擇性的抑制劑。 本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑可以任選地有相對(duì)于一種或多種絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相 對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶而言的選擇性。優(yōu)選地，本發(fā)明化 合物顯示就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶，例 如相對(duì)于Flt-3、JAK-2、KDR和/或Ret蛋白或者相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨 酸/蘇氨酸激酶而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，提供了這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC相對(duì)于不屬 于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相對(duì)于不是CDK-I蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸激酶 而言是選擇性的?？梢杂?jì)算PKC的選擇性抑制劑相對(duì)于其他蛋白激酶的選擇性，其為在下述測(cè)定法 中所測(cè)量的PKC的IC5tl相對(duì)于另一種激酶的IC5tl之比。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，提供了這樣一種PKC抑制劑，在同種異體混合淋 巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法中所測(cè)定的IC5tl值與在BM測(cè)定法中所測(cè)定的IC5tl值之比高于5、 10、20或30，優(yōu)選地高于20或30。MLR和BM測(cè)定法可以按照已知方法進(jìn)行，例如小鼠或者人MLR和BM測(cè)定法，優(yōu)選 如下文所公開(kāi)的。另一方面，本發(fā)明提供蛋白激酶C(PKC)的選擇性抑制劑，也就是同工酶-選擇性PKC抑制劑，其中該化合物具備就PKC的同工型α和β相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型 而言的選擇性。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物是就α和β PKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言 選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε、η和θ的PKC同工型，優(yōu)選地相對(duì)于δ和 ε PKC同工型，更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε和IiPKC同工型，進(jìn)而更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε、η和 θ PKC同工型而言選擇性的。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物就α、β和θ PKC相對(duì)于一種或多 種其他PKC同工型而言是選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε和η的PKC同工 型，優(yōu)選地相對(duì)于S和ε PKC同工型，更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε和nPKC同工型是選擇性的。本發(fā)明化合物優(yōu)選地顯示就PKCa和β以及任選地θ相對(duì)于一種或多種其他 PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε、η和θ的PKC同工型，優(yōu)選地相對(duì)于PKC 同工型δ，更優(yōu)選地相對(duì)于PKC同工型ε和η，進(jìn)而更優(yōu)選地相對(duì)于PKC同工型δ、ε和 n而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。就PKC的α、β或θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性可 以這樣測(cè)量比較化合物就α、β或θ PKC而言的IC5tl與該化合物就其他PKC同工型、例 如δ、ε、η而言的IC5Q。優(yōu)選地，選擇性可以這樣測(cè)定，計(jì)算化合物就δ、ε或nPKC同 工型而言的IC5tl與該化合物就α、β或θ PKC而言的IC5tl之比。IC50值例如可以按照下述PKC測(cè)定法獲得。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物在下文提到的測(cè)定法中顯示出就α和β以 及任選地θ PKC而言1 μ M或以下、優(yōu)選IOnM或以下的IC5tl值。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物顯示相對(duì)于PKC的α和β以及任選地θ同工型而言的選 擇性，以及相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸 激酶，或者相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多 種 PKA、PKB、Abl、Met、Src, Ins_R、Flt_3、JAK-2、KDR 和 Ret 蛋白，例如相對(duì)于一種或多種 Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白而言的選擇性。本發(fā)明化合物的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式可用于治療和/或預(yù)防由T淋 巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，例如由α和β以及任選地θ PKC介導(dǎo)的疾病或障 礙，例如器官、組織或細(xì)胞同種異體移植或異種移植的急性或慢性排斥、移植物抗宿主病、 自身免疫病、炎性疾病、感染性疾病、癌癥或心血管疾病，例如心力衰竭。術(shù)語(yǔ)“移植物”以 及“細(xì)胞、組織或器官”包括例如皮膚、眼睛或眼睛的部分(例如角膜、視網(wǎng)膜、晶狀體)、骨 髓、肌肉、心、肺、心肺、肝、腎、胰腺(例如胰島細(xì)胞、β-細(xì)胞)、甲狀旁腺、腸(例如結(jié)腸、小 腸、十二指腸)、神經(jīng)元組織、骨和脈管系統(tǒng)(例如動(dòng)脈、靜脈)。本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑因此可用于治療和/或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、由血管損 傷(例如血管成形術(shù))引起的血管閉塞、再狹窄、肥胖、X綜合征、葡萄糖耐量減低、多囊性卵 巢綜合征、高血壓、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、CNS疾病(例如阿爾茨海默氏病或肌萎縮性 側(cè)索硬化)、癌癥、感染性疾病(例如AIDS、膿毒性休克或成人呼吸窘迫綜合征)、局部缺血 /再灌注損傷(例如心肌梗塞、中風(fēng)、腸缺血、腎衰竭或出血性休克)或者創(chuàng)傷性休克(例如 創(chuàng)傷性腦損傷)。本發(fā)明的同工酶選擇性PKC抑制劑也可用于治療和/或預(yù)防T-細(xì)胞介導(dǎo) 的急性或慢性炎性疾病或障礙或者自身免疫病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅
8斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、I或II型糖尿病和與之有關(guān)的障礙、呼 吸疾病(例如哮喘或炎性肺損傷)、炎性肝損傷、炎性小球損傷、免疫學(xué)_介導(dǎo)障礙或疾病 的皮膚表現(xiàn)、炎性與過(guò)度增殖性皮膚疾病(例如牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、 刺激物接觸性皮炎與進(jìn)一步的濕疹性皮炎、皮脂溢性皮炎)、炎性眼睛疾病(例如Sjoegren 綜合征、角膜結(jié)膜炎或眼色素層炎)、炎性腸疾病、克羅恩氏病或潰瘍性結(jié)腸炎。本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式表現(xiàn)寶貴的藥 理性質(zhì)，例如如下體外和體內(nèi)試驗(yàn)所示。A.體外試驗(yàn)1. PKC抑制劑的特異件和詵擇件的體外測(cè)定按照下列方法，測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)不同PKC同工型的活性。在具有非結(jié)合性表 面的白色透明底384-孔微量滴定平板中進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)混合物(25 μ 1)含有1.5 μ M十三 肽接受底物(它模擬PKCa的偽底物序列，并有Ala—Ser置換)、10μΜ 33P-ATPUOmM Mg (NO3) 2、0. 2mM CaCl2、蛋白質(zhì)濃度從25至400ng/ml不等的PKC (依賴于所使用的同位型)、 最終脂質(zhì)濃度為0. 5mM的脂囊泡(含有30mol %磷脂酰絲氨酸、5mol % DAG和65mol %磷脂 酰膽堿)和20mM Tris-HCl緩沖液pH 7. 4+0. 1% BSA。在室溫下溫育60min。加入50 μ 1 終止混合物(IOOmM EDTA, 200 μ M ΑΤΡ,Ο. 1% Triton X-100，0. 375mg/孔鏈霉抗生物素蛋 白-包被的SPA珠粒的磷酸緩沖鹽水溶液w/o Ca, Mg)以終止反應(yīng)。在室溫下溫育IOmin 后，使懸液在300g下自旋lOmin。在Trilux計(jì)數(shù)器中測(cè)量所摻入的放射性達(dá)lmin。溫育 濃度在l-ΙΟΟΟμΜ之間的抑制劑系列稀釋液，在常規(guī)基礎(chǔ)上進(jìn)行IC5tl測(cè)量。利用XX fit 軟件，通過(guò)曲線擬合從曲線圖計(jì)算IC5tl值。2.蛋白激酶C α測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKC α，用在上述Α. 1節(jié)下所述測(cè)定 條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCa的IC5tl彡ΙμΜ，優(yōu)選 ^ 10ηΜ。3.蛋白激酶Cf 1測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKC β 1，用在上述Α. 1節(jié)下所述測(cè)定 條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCM的IC5tl彡ΙμΜ，優(yōu)選 ^ 10ηΜ。4.蛋白激酶C δ測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKC δ，用在上述Α. 1節(jié)下所述測(cè)定 條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKC δ的IC5tl < 1 μ Μ。5.蛋白激_ C ε測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKC ε，用在上述Α. 1節(jié)下所述測(cè)定 條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKC ε的IC5tl < 1 μ Μ。6.蛋白激酶C η測(cè)定法從PanVera獲得人重組PKC η，用在上述Α. 1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法 中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKC η的IC5tl彡ι μ Μ。7.蛋白激酶C θ測(cè)定法在上述測(cè)定條件下使用人重組PKC θ。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化
9合物抑制PKC θ的IC5tl < 1 μ Μ。8.⑶28共同刺激測(cè)定法如 Baumann G 等在 Transplant. Proc. 1992 ；24 43-8, the β -galactosidase reporter gene being replaced by the luciferase gene(de ffetj.，et al.，Mol. Cell Biol. 1987，7 (2)，725-737)中所述，利用被人白介素_2啟動(dòng)/報(bào)道基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的 Jurkat細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定。如下用固相-偶聯(lián)抗體或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++離子載體 離子霉素刺激細(xì)胞。就抗體-介導(dǎo)的刺激而言，在室溫下向Microlite TMl微量滴定平板 (Dynatech)每孔包被3 μ g/ml山羊抗-小鼠IgG Fc抗體(Jackson)的55 μ 1磷酸緩沖鹽水 (PBS)溶液達(dá)三小時(shí)。除去抗體后，用2%牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液(300 μ 1每孔) 在RT下溫育2小時(shí)，以封閉平板。用300 μ 1 PBS每孔洗滌三次后，加入lOng/ml抗-T細(xì) 胞受體抗體(WT31，Becton & Dickinson)和 300ng/ml 抗-CD28 抗體(15E8)的 50 μ 1 2% BSA/PBS溶液作為刺激性抗體，在4°C下溫育過(guò)夜。最后，將平板用300 μ 1 PBS每孔洗滌三 次。在單獨(dú)的平板中制備供試化合物在測(cè)定培養(yǎng)基(RPMI 1640/10%胎牛血清(FCS)，含有 50 μ Μ2-巰基乙醇，100單位/ml青霉素和100 μ g/ml鏈霉素)中的七份三倍系列稀釋液， 一式兩份，與所轉(zhuǎn)染的Jurkat細(xì)胞(克隆K22 290_H23)混合，在37°C下和5% CO2中溫育 30分鐘。然后將含有1 X IO5個(gè)細(xì)胞的100 μ 1這種混合物轉(zhuǎn)移至抗體-包被的測(cè)定平板。 以平行方式溫育100 μ 1與40ng/mlPMA和2 μ M離子霉素。在37°C下和5% CO2中溫育5. 5 小時(shí)后，借助生物發(fā)光測(cè)量法測(cè)定螢光素酶的水平。將平板在500g下離心lOmin，輕輕彈 去上清液。加入溶解緩沖液，其中含有25mM Tris-磷酸鹽pH 7. 8、2mMDTT、2mM 1，2_ 二氨 基環(huán)己烷-N，N，N'，N-四乙酸、10% (ν/ν)甘油和 (v/v) Triton X-100 (20 μ 1 每孔)。 在恒定搖動(dòng)下，將平板在RT下溫育10分鐘。在自動(dòng)加入50 μ 1每孔螢光素酶反應(yīng)緩沖液 后，利用生物發(fā)光讀數(shù)器(Labsystem，Helsinki, Finland)評(píng)估螢光素酶活性，所述緩沖 液含有 20mMTricine、l. 07mM(MgCO3)4Mg (OH) 2χ5Η20、2. 67mM MgS04、0. lmMEDTA、33. 3mM DTT, 27(^] 輔酶六、47(^]\1螢光素(Chemie BrunschwigAG)、530 μ M ATP, pH 7.8。遲滯時(shí)間為 0. 5秒，總測(cè)量時(shí)間為1或2秒。低對(duì)照值是來(lái)自抗-T細(xì)胞受體-或PMA-刺激的細(xì)胞的光 學(xué)單位，高對(duì)照來(lái)自抗-T細(xì)胞受體/抗-CD28-或PMA/離子霉素-刺激的細(xì)胞，沒(méi)有任何 供試樣品。從所有數(shù)值中減去低對(duì)照。計(jì)算在供試化合物的存在下所獲得的抑制作用，其 為高對(duì)照的抑制百分比。從劑量-反應(yīng)曲線測(cè)定供試化合物導(dǎo)致50%抑制的濃度(IC5tl)。 在本測(cè)定法中，式I化合物抑制抗-T細(xì)胞受體/抗-CD28和PMA/離子霉素刺激的Jurkat 細(xì)胞的IC50彡1 μ M。9.骨髓增殖(BM)測(cè)定法在100 μ 1 RPMI培養(yǎng)基中溫育來(lái)自CBA小鼠的骨髓細(xì)胞(2. 5 X IO4個(gè)細(xì)胞每孔，平 底組織培養(yǎng)微量滴定平板)，所述培養(yǎng)基含有10% FCSU00U/ml青霉素、100 μ g/ml鏈霉素 (Gibco BRL,Basel, Switzerland)、50μΜ2_巰基乙醇(Fluka,Buchs, Switzerland)、WEHI_3 條件培養(yǎng)基(7. 5% ν/ν)與L929條件培養(yǎng)基(3% ν/ν)作為生長(zhǎng)因子源和經(jīng)過(guò)系列稀釋的 化合物。每種供試化合物進(jìn)行七個(gè)三倍稀釋步驟，一式兩份。溫育四天后，加入1 μ Ci 3H-胸 苷。另外五小時(shí)溫育期后收獲細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟測(cè)定所摻入的3H-胸苷。如下制備條件培 養(yǎng)基。使WEHI-3細(xì)胞(ATCC ΤΙΒ68)和L929細(xì)胞(ATCC CCL 1)在RPMI培養(yǎng)基中生長(zhǎng)直 至匯合，分別達(dá)四天和一周。收獲細(xì)胞，在同一培養(yǎng)瓶中將WEHI-3細(xì)胞重新懸浮在含有1 %FCS (Schreier and Tees 1981)的培養(yǎng)基C中，將L929細(xì)胞重新懸浮在RPMI培養(yǎng)基中，溫 育兩天(WEHI-3)或一周(L929)。收集上清液，通過(guò)0. 2 μ m過(guò)濾，以等分試樣貯存在_80°C 下。使用沒(méi)有供試化合物并且沒(méi)有WEHI-3與L929上清液的培養(yǎng)物作為低對(duì)照值。從所有 數(shù)值中減去低對(duì)照值。沒(méi)有任何樣品的高對(duì)照被視為100%增殖。計(jì)算樣品的抑制百分比， 測(cè)定50%抑制所需濃度(IC5tl值)。10.同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法按照標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行二路MLR(J. Immunol. Methods，1973，2，279 和 Meo Τ. et al.， Immunological Methods, New York, Academic Press，1979，227—39)。簡(jiǎn)而言之,在 RPMI 培養(yǎng)基中溫育來(lái)自CBA和BALB/c小鼠的脾細(xì)胞(平底組織培養(yǎng)微量滴定平板的每孔中 每種品系1.6XlO5個(gè)細(xì)胞，總計(jì)3. 2XlO5個(gè))，該培養(yǎng)基含有10% FCSU00U/ml青霉素、 100yg/ml 鏈霉素(Gibco BRL, Basel, Switzerland)、50 μ M 2-巰基乙醇(Fluka，Buchs, Switzerland)和經(jīng)過(guò)系列稀釋的化合物。每種供試化合物進(jìn)行七個(gè)三倍稀釋步驟，一式兩 份。溫育四天后，加入IyCi 3H-胸苷。另外五小時(shí)溫育期后收獲細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟測(cè)定 所摻入的3H-胸苷。MLR的背景值(低對(duì)照)是僅BALB/c細(xì)胞的增殖。從所有數(shù)值中減去 低對(duì)照。沒(méi)有任何樣品的高對(duì)照被視為100%增殖。計(jì)算樣品的抑制百分比，測(cè)定50%抑 制所需濃度(IC5tl值)。優(yōu)選地，根據(jù)MLR測(cè)定法的測(cè)定，本發(fā)明化合物顯示低于100 μ M、優(yōu) 選低于10 μ Μ、更優(yōu)選低于1 μ M的IC50值。B.體內(nèi)大鼠心臟移植術(shù)所使用的品系組合雄性Lewis (RT1單元型)和BN(RT1單元型)。將動(dòng)物用吸入 性異氟醚(isofluorane)麻醉。用肝素處理供體大鼠的腹部下腔靜脈，同時(shí)經(jīng)由主動(dòng)脈驅(qū) 血之后，打開(kāi)胸腔，迅速冷卻心臟。結(jié)扎主動(dòng)脈，在第一分支遠(yuǎn)端分開(kāi)，在第一分叉處分開(kāi)頭 臂主干。結(jié)扎左肺動(dòng)脈，分開(kāi)，右側(cè)分開(kāi)但是維持開(kāi)放。切除所有其他血管，結(jié)扎，分開(kāi)，取 出供體心臟置于冰鹽水中。受體作如下準(zhǔn)備，切開(kāi)和交叉夾緊腎下腹部主動(dòng)脈和腔靜脈。植入移植物，使用 10/0單絲縫合線，在供體頭臂主干與受體主動(dòng)脈之間和供體右肺動(dòng)脈與受體腔靜脈之間進(jìn) 行末端-邊側(cè)吻合術(shù)。除去夾子，在腹部后系住移植物，將腹部?jī)?nèi)容物用溫鹽水洗滌，縫合 動(dòng)物，在加熱燈下恢復(fù)。每日通過(guò)腹部壁觸診跳動(dòng)的供體心臟，監(jiān)測(cè)移植物的存活。當(dāng)心臟 跳動(dòng)停止時(shí)，認(rèn)為排斥是完全的。在用口服施用的式I化合物處理的動(dòng)物中獲得移植物存 活率的增力口，每日劑量為1至150mg/kg bid，優(yōu)選1至30mg/kg bid或10至100mg/kg bid。移植物抗宿主模型將來(lái)自Wistar/F大鼠的脾細(xì)胞(2X IO7)皮下注射到(ffistar/F χ Fischer344) F1雜交大鼠的右后足墊內(nèi)。左足墊未作處理。將動(dòng)物用供試化合物連續(xù)處理4天(0-3)。 在第7天除去胭淋巴結(jié)，測(cè)定兩個(gè)對(duì)應(yīng)淋巴結(jié)之間的重量差異。比較實(shí)驗(yàn)組淋巴結(jié)重量差 異與未用供試化合物處理動(dòng)物組的對(duì)應(yīng)淋巴結(jié)重量差異，結(jié)果表示為對(duì)淋巴結(jié)增大的抑制 率(以百分比給出)。選擇性PKC抑制劑化合物的代表性實(shí)例例如包括式I的吲哚基馬來(lái)酰亞胺衍生物
權(quán)利要求
游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物的用途，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥的藥物，其中所述化合物具有就PKCα、PKCβ和任選地PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性，該選擇性是如通過(guò)該化合物對(duì)于不是PKCα和PKCβ、并且任選地不是PKCθ的PKC的IC50與該化合物對(duì)于PKCα、PKCβ或PKCθ的IC50之比所測(cè)量的。
2.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有就 PKC相對(duì)于一種或多種不屬于CDK-家族的蛋白激酶而言的選擇性，和如根據(jù)權(quán)利要求1所 測(cè)量的就PKC a、PKC β和任選地PKC θ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍 的選擇性。
3.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有就 PKCa ,PKC β和任選地PKC θ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性， 并且如根據(jù)同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法所測(cè)定的所述化合物的IC5tl值與根據(jù) 骨髓增殖(BM)測(cè)定法所測(cè)定的所述化合物的IC5tl值之比高于5。
4.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有如根 據(jù)權(quán)利要求1所測(cè)量的就PKC a、PKC β和PKC θ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至 少10倍的選擇性。
5.式I化合物或其鹽，其中Ra是H ；C1^4烷基；或者被OH、NH2、NHC^4烷基或Ν( 二 烷基)2取代的C1^烷基； Rb、R。、Rd和民之一是鹵素、CV4烷氧基、Cy烷基、CF3或CN，其他三個(gè)取代基各自是H ； 或者Rb、Rc、Rd和Re都是H ；R是式(a)、(b)或(c)的原子團(tuán)
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中Ra是H或甲基；每一R2、R20和R2tla獨(dú)立地是H、Cl、 NO2, F、CF3或甲基；η是0或1 ；Rb、R。、Rd和Re之一是甲基或乙基，其他三個(gè)取代基是H ；或 者Rb、R。、Rd和Re都是H ；每一 R3和R4獨(dú)立地是H、甲基、乙基或異丙基；或者R3和R4與它 們所結(jié)合的氮原子一起形成任選被取代的雜環(huán)殘基；每一 RpRltl和Rltla獨(dú)立地是雜環(huán)殘基。
7.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求5或6的化合物，其選自3-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)_吡啶-4-基]-4-(1Η-吲哚_3_基)-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (2-氯-7- 二甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7-氨基甲基-2-氯-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、 3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1Η-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、 3- (2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (7-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (6-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (5-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7- 二甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (7-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7- 二甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、 3- (2-氯-7- 二甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (6-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7- 二甲氨基甲基-萘-1-基)-4- (5-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3-{2-氯-7-[(乙基-甲基-氨基)_甲基]-萘-1-基}-4-(1-甲基-IH-吲 哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3- (2-氯-7- 二乙氨基甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (2-氯-7-乙氨基甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH- B引哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3-[2_氯-7-(異丙基氨基-甲基)-萘-1-基]-4-(l-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡 咯-2，5-二酮、3-[2-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)萘-1-基]-4-(1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡 咯-2，5-二酮、3- (2-氯-7-吡咯烷-1-基甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2， 5_ 二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)_4-(1，7- 二甲基-IH- B引哚_3_基)-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4- (7-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(lH- B引哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、 3- (7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7-氨基甲基-萘-1-基)-4- (1-Η-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3-(7-氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-IH- B引哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7-氨基-萘-1-基)-4- (1-甲基-IH- B引哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7-氨基-萘-1-基)-4- (1H- B引哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7- 二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4- (7-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (7- 二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4- (1H- B引哚_3_基)-吡咯-2，5- 二酮、3- (1-甲基-IH-吲哚-3-基)-4- [5- (4-甲基-哌嗪基)-吡啶_3_基]-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4- [5- (4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶_3_基]-吡咯-2，5- 二酮、3-(7-甲基-IH-吲哚-3-基)-4-[5-(4_甲基-哌嗪-1-基)_2_三氟甲基-吡 啶-3-基]-吡咯_2，5-二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4-[5- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶_3_基]-吡 咯-2，5-二酮、3-(1-甲基-IH-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)_2_三氟甲基-吡 啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3- (7-甲基-IH-吲哚-3-基)-4- [5- (4-甲基-哌嗪基)-吡啶_3_基]-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4- [5- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶_3_基]-吡咯-2， 5_ 二酮、3- [2-氯-5- (4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-4- (7-甲基-IH-吲哚_3_基)-吡 咯-2，5-二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4- [5-甲基-2- (4-甲基-哌嗪基)-吡啶_4_基]-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4- [2- (4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶_4_基]-吡咯-2， 5_ 二酮、3- (1H-吲哚-3-基)-4- [2- (4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶_4_基]-吡 咯-2，5-二酮。
8.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求5至7任意一項(xiàng)的化合物，其用 作藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物，其用于治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC 介導(dǎo)的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾 病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥。
10.藥物組合物，其包含游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意 一項(xiàng)的化合物和與之結(jié)合的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
11.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物或者 根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物的用途，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo) 的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎 性疾病、心血管疾病或癌癥的藥物。
12.藥物組合，其包含游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一 項(xiàng)的化合物，和選自免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑、化學(xué)治療劑、抗增殖劑和抗糖尿病 劑的另一種治療劑。
13.生產(chǎn)根據(jù)權(quán)利要求5或6的化合物的方法，該方法包括將式II化合物
14.治療或預(yù)防需要這種治療的受試者中由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病、 特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管 疾病或癌癥的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的PKC抑制劑或其藥學(xué)上可接受 的鹽，所述PKC抑制劑具有如根據(jù)權(quán)利要求1所測(cè)量的就PKC α、PKC β和任選地PKC θ相 對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性。
15.治療或預(yù)防需要這種治療的受試者中由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病、 特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管 疾病或癌癥的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng) 的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及PKC抑制劑，它們能夠選擇性地抑制PKC的例如α、β和任選地θ同工型，和它們特別是在移植術(shù)中的用途。
文檔編號(hào)C07D403/14GK101933926SQ201010159460
公開(kāi)日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2005年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月19日
發(fā)明者J·瓦格納, J-P·埃弗努, M·范艾斯, P·馮馬特, W·舒勒 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司