專利名稱：人參皂苷Rh1的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及人參皂苷Rhl的制備方法。
背景技術(shù)：
從天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新藥或生理活性先導(dǎo)化合物是當(dāng)今藥物研究與開發(fā)的重要方向。五加 科人參屬藥用植物中存在的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜類配糖體具有多方面的生理作用， 一直是關(guān)注 的熱點(diǎn)之一。人參皂苷按其苷元的化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為原人參二醇型和原人參三醇型兩類，二醇 型以RW為代表，三醇型以Rgl為代表。人參皂苷Rhl屬于原人參三醇型皂苷，具有啟動(dòng)和 增強(qiáng)免疫應(yīng)答，促進(jìn)肝細(xì)胞增殖、促進(jìn)DNA合成、殺傷腫瘤細(xì)胞、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘 導(dǎo)癌細(xì)胞分化，以及抗皮膚老化等生理作用，可用于調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，治療和預(yù)防肝炎、 肝硬化、癌癥等，是開發(fā)新藥、功能保健食品、特殊用途化妝品等健康相關(guān)產(chǎn)品的原料。人 參皂苷Rhl僅以十分微量天然存在于植物中，難以直接從植物原料中提取分離。人參皂苷Rhl 與Rgl化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，Rgl的C-20位糖基降解即為Rhl。 Rhl亦為Rgl在體內(nèi)代謝的中間產(chǎn) 物之一。顯然，Rhl可通過Rgl的化學(xué)降解或生物轉(zhuǎn)化獲得。本發(fā)明運(yùn)用此原理制備人參皂 苷Rhl。
人參皂苷Rgl為三七和人參根中的主要皂苷成分之一，Rgl的C-20位糖基不穩(wěn)定，在弱 酸中易選擇性降解得到次級(jí)皂苷。
人參皂苷Rgl 人參皂苷Rhl
目前，已有應(yīng)用該原理從人參或三七根的總皂苷制備總次苷及其制劑的報(bào)道。例如申 請(qǐng)?zhí)枮?00510083855.6的中國(guó)專利公開了一種人參總次苷藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。人參總次苷藥物組合物的主要成分是20-(S)-Rg3， 20-(R)-Rg3， 20-(S)-Rg2， 20-(R)-Rg2， 20- (S) -Rhl和20- (R) -Rhl。人參總次苷藥物組合物制備方法是人參屬植物提取物在80-100 'C條件下，酸水解3-8小時(shí)，濃縮所得的提取物，通過大孔吸附樹脂柱層析分離純化，經(jīng)過 水洗脫、堿水洗脫、濃度在35%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)。該申請(qǐng)不僅反應(yīng)溫度較高，除雜 質(zhì)過程中引入堿，增加了后續(xù)的處理程序，而且成本高，制備得到總次苷，沒有進(jìn)一步分離 純化人參皂苷Rhl。迄今，尚無有關(guān)制備高純度Rhl的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種人參皂苷Rhl的制備方法，該方法設(shè)計(jì)科 學(xué)合理，生產(chǎn)周期短，易于工業(yè)化生產(chǎn)，收率高，制得的人參皂苷Rhl純度高。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過以下步驟進(jìn)行
A、 酸水解將純度大于80%的三醇組人參皂苷，加7 9倍量的水溶解，加入冰醋酸， 使冰醋酸濃度達(dá)15-25%，優(yōu)選冰醋酸濃度達(dá)18-22%。將上述混合液置于水浴鍋中，50-70°C 加熱水解5-7小時(shí)，優(yōu)選58-65'C加熱水解6小時(shí)。
B、 脫酸水解液冷卻至室溫，以大孔吸附樹脂柱層析脫酸，用水洗脫，洗脫液流速為 8-12ml/min，至流出液為中性。用濃度為85%以上的乙醇沖洗，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)。
C、 富集脫酸后的水解液，減壓濃縮，干燥，用68 72%的甲醇溶解，優(yōu)選70%的甲醇； 以2倍量硅膠拌樣，揮去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析分離。以氯仿甲醇:水=8:2:0.2為 流動(dòng)相，展開，洗脫。薄層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rhl部位。
D、 純化上述富集得到的Rhl部位，以中壓柱層析分離純化，柱層析材料為反相鍵合硅 膠，用濃度為50-65%的甲醇等度洗脫，優(yōu)選55-60%的甲醇，薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rhl部 位，減壓濃縮，干燥，用高效液相色譜法檢測(cè)人參皂苷Rhl的純度，大于90%。
有益效果
上述制備人參皂苷Rhl的方法具有以下有益效果
采用本工藝制備人參皂苷Rhl，水解溫度較低，水解條件溫和，反應(yīng)周期短，所用試劑 單一，用量少，水解副產(chǎn)物相對(duì)較少，簡(jiǎn)化后續(xù)分離程序，有效節(jié)約成本及能源，易于工業(yè) 化生產(chǎn)，保證人參皂苷Rhl的收率，并提高純度。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明 實(shí)施例l
A、酸水解將純度大于80%的三醇組人參皂苷，加 倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰 醋酸濃度達(dá)15%，將上述混合液置于水浴鍋中，50。C水解7小時(shí)。B、 脫酸:水解液冷卻至室溫，以DM130大孔吸附樹脂柱層析脫酸。用水洗脫，流速8ml/min， 至流出液為中性，用濃度為85%的乙醇洗脫，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)。
C、 富集脫酸后的水解液濃縮，干燥，用68%的甲醇溶解，加入2倍量的硅膠拌樣，揮 去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析分離，以氯仿甲醇:水-8:2:0.2為流動(dòng)棍展開，洗脫。薄 層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rhl部位。
D、 純化上述富集得到的Rhl用中壓柱層析進(jìn)行分離純化，層析材料為反相鍵合硅膠，用 濃度為50%的甲醇等度洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rhl部位，減壓濃縮，千燥，用高效 液相色譜法檢測(cè)人參皂苷Rhl的純度，大于90%。
實(shí)施例2
A、 酸水解將純度大于80%的三醇組人參皂苷，加7倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰 醋酸濃度達(dá)25%，將上述混合液置于水浴鍋中，70'C水解5小時(shí)。
B、 脫酸水解液冷卻至室溫，以D101大孔吸附樹脂柱層析脫酸，水洗脫，流速10ml/min， 至流出液為中性，用濃度為88%的乙醇洗脫，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)。
C、 富集脫酸后的水解液濃縮，干燥，用70%的甲醇溶解，加入2倍量的硅膠拌樣，揮 去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析分離，以氯仿甲醇:水-8:2:0.2為流動(dòng)相，展開，洗脫，T 薄層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rhl部位。
D、 純化上述富集得到的Rhl用中壓柱層析進(jìn)行分離純化，層析材料為反相鍵合硅膠，用 濃度為55%的甲醇等度洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rhl部位，減壓濃縮，干燥，用高效 液相色譜法檢測(cè)人參皂苷Rhl的純度，大于90%。
實(shí)施例3
A、 酸水解將純度大于80%的三醇組人參皂苷，加9倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰 醋酸濃度達(dá)18%，將上述混合液置于水浴鍋中，58。C水解6小時(shí)。
B、 脫酸水解液冷卻至室溫，以DM130大孔樹脂柱層析脫酸，用水洗脫，流速llml/min， 至流出液為中性，用濃度為90%的乙醇沖洗，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)。
C、 富集脫酸后的水解液濃縮，干燥，用71%的甲醇溶解，加入2倍量的硅膠拌樣，揮 去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析分離，以氯仿甲醇:水-8:2:0.2為流動(dòng)相,展開，洗脫，薄 層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rhl部位。
D、 純化上述富集得到的Rhl用中壓柱層析純化，層析材料為反相鍵合硅膠，用濃度為 60%的甲醇等度洗脫；薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rhl部位，減壓濃縮，干燥，用高效液相色譜 法檢測(cè)人參皂苷Rhl的純度，大于90%。
實(shí)施例4A、 酸水解將純度大于80%的三醇組人參皂苷，加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰 醋酸濃度達(dá)22V將上述混合液置于水浴鍋中，65'C水解6小時(shí)。
B、 脫酸水解液取出后冷卻至室溫，以D101大孔吸附樹脂柱層析脫酸，用水洗脫，流 速12ml/min，至流出液為中性，用濃度為90%的乙醇洗脫，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)。
C、 富集脫酸后的水解液濃縮，干燥，用72%的甲醇溶解，加入2倍量的硅膠拌樣，揮 去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析分離，以氯仿甲醇:水-8:2:0.2為流動(dòng)相，展開，洗脫，薄 層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rhl部位。
D、 純化上述富集得到的Rhl用中壓柱層析進(jìn)行純化，層析材料為反相鍵合硅膠，用濃 度為65%的甲醇等度洗脫；薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rhl部位，減壓濃縮，干燥，用高效液 相色譜法檢測(cè)人參皂苷Rhl的純度，大于90%。
權(quán)利要求
1、一種人參皂苷Rh1的制備方法，其特征在于，具體通過以下生產(chǎn)步驟實(shí)現(xiàn)A、酸水解將純度大于80％的三醇組人參皂苷，加7～9倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸濃度達(dá)15-25％，將上述混合液置于水浴鍋中，50～70℃水解5-7小時(shí)；B、脫酸水解液冷卻至室溫，以大孔吸附樹脂柱層析脫酸，用水洗脫，流速8-12ml/min，至流出液為中性，用濃度為85％以上的乙醇洗脫，至薄層色譜檢測(cè)無紫色斑點(diǎn)；C、富集脫酸后的水解液濃縮，干燥，用68～72％的甲醇溶解，加入2倍量的硅膠拌樣，揮去甲醇，干法裝柱，硅膠柱層析，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2為流動(dòng)相，展開，洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，富集Rh1部位；D、純化上述富集得到的Rh1用中壓柱層析進(jìn)行純化，層析材料為反相鍵合硅膠，用濃度為50-65％的甲醇等度洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，合并Rh1部位，減壓濃縮，干燥，用高效液相色譜法檢測(cè)人參皂苷Rh1的純度，大于90％。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參皂苷Rhl的制備方法，其特征在于，步驟A中優(yōu)選加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸濃度達(dá)18-22%，將上述混合液置于水浴鍋中，58-65°C加熱水解6小時(shí)；步驟C中優(yōu)選用7(m的甲醇溶解；步驟D中優(yōu)選55-60%的甲醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人參皂苷Rh1的制備方法。雖然已有應(yīng)用酸水解法從人參皂苷制備總次苷及其制劑的方法，但酸水解后需經(jīng)過較復(fù)雜的程序脫酸，而且尚無專門制備高純度Rh1的報(bào)道。本發(fā)明提供了一種人參皂苷Rh1的制備方法。其特征在于將原人參三醇組人參皂苷，加入冰醋酸水解，以大孔吸附樹脂柱層析脫酸，得到富集人參皂苷Rh1的次苷部位，用反相中壓柱層析進(jìn)行純化，得純度大于90％的人參皂苷Rh1。該方法采用大孔吸附樹脂柱層析脫酸，保證總次苷的高轉(zhuǎn)移率，水解條件溫和，反應(yīng)周期短，有效節(jié)約成本及能源，易于工業(yè)化生產(chǎn)，從而保證Rh1的高收率，并提高純度。
文檔編號(hào)C07J17/00GK101671384SQ20091009505
公開日2010年3月17日 申請(qǐng)日期2009年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月12日
發(fā)明者丁艷芬, 李立妍, 楊崇仁 申請(qǐng)人:玉溪市維和生物技術(shù)有限責(zé)任公司