專利名稱：附睪蛋白酶抑制蛋白b細(xì)胞表位及包含此表位的抗原肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位及包 含此表位的抗原肽。
背景技術(shù)：
計(jì)劃生育是我國的基本國策，為有效地控制人口過度增長，開發(fā)高效、安 全、可逆的避孕方法一直是計(jì)劃生育研究的重要課題。目前，男性避孕還局限 于傳統(tǒng)的使用避孕套或輸精管結(jié)扎手術(shù)，前者失敗率較高，后者具有不可逆性， 且可能產(chǎn)生意料不到的嚴(yán)重免疫學(xué)后果，如持續(xù)高水平的抗精子抗體滴度和/或 睪丸形態(tài)學(xué)的改變等，二者均不能令人滿意。多年來，國內(nèi)外科學(xué)家一直致力 于男性避孕疫苗的研制，主要是以生殖相關(guān)激素和精子特異性蛋白為靶抗原， 如精子膜抗原PH-20、受精抗原FA-1、頂體抗原SP-IO、受精素P等，已研制出 的多價(jià)疫苗可明顯抑制動物的精卵結(jié)合與融合，但避孕率仍停留在50%左右。
附睪是精子獲能和成熟的場所，附睪蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor, E卯in )作為一種附睪特異表達(dá)的分泌蛋白，在保持精子活性以及 精卵結(jié)合過程中均發(fā)揮重要作用。最新研究表明，用重組Eppin免疫的雄性獼猴 出現(xiàn)可逆性的不育(避孕率7/9,可逆率5/7),精液分析發(fā)現(xiàn)精子的前向運(yùn)動能 力減弱，而精子的數(shù)量及體內(nèi)雄激素水平不受影響，亦未見自身免疫性疾病的 發(fā)生，表明Eppin可作為潛在的有效的男性避孕疫苗。生育研究結(jié)果提示，抗 E卯in抗體可能結(jié)合于精子表面，潛在地破壞了精子在男性生殖道內(nèi)和射精后精 子最初儲存在女性陰道內(nèi)的生存微環(huán)境，影響了精子的獲能，干擾了精子受孕 前的一些基本步驟，造成免疫性不育。
蛋白質(zhì)抗原通過表位體現(xiàn)其免疫特異性。就某一蛋白質(zhì)抗原而言，它不僅
含有B細(xì)胞表位、T輔助細(xì)胞(Th)表位、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)表位、自然 殺傷細(xì)胞(NK)表位、主要組織相容性復(fù)合物(MHC)限制位等與免疫識別密切 相關(guān)的結(jié)構(gòu)，同時(shí)還含有毒性表位、抑制性表位、交叉反應(yīng)性表位等不良表位， 這些不良表位可引起免疫偏移、免疫顛覆等不利的免疫反應(yīng)而導(dǎo)致免疫耐受。 因此，為了提高蛋白質(zhì)抗原的保護(hù)性，須在表位水平上做出選擇，摒除后者， 保留或改善前者以得到更理想的疫苗分子。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供Eppin的B細(xì)胞表位，具有SEQ ID No. 1所示氨基酸序列。
本發(fā)明的目的之二在于提供包含所述E卯in的B細(xì)胞表位的抗原肽，由T 輔助細(xì)胞表位與E卯in的B細(xì)胞表位串聯(lián)而成；所述T細(xì)胞表位具有SEQ ID No. 2 所示氨基酸序列。
進(jìn)一步，T輔助細(xì)胞表位通過柔性接頭與E卯in的B細(xì)胞表位串聯(lián)； 進(jìn)一步，所述柔性接頭選自由GGG、 GGS或KK組成的短肽。 本發(fā)明的目的之三在于提供包含免疫學(xué)有效量的所述包含Eppin的B細(xì)胞表 位的抗原肽的組合物。
進(jìn)一步，還包含藥學(xué)上可接受的載體；
進(jìn)一步，所述免疫學(xué)有效量為每劑每千克體重2-5毫克。
本發(fā)明的目的之四在于提供能夠與所述Eppin的B細(xì)胞表位特異性結(jié)合的抗
體
本發(fā)明的目的之五在于提供能夠與所述包含Eppin的B細(xì)胞表位的抗原肽特 異性結(jié)合的抗體。
本發(fā)明的目的之六在于提供所述包含Eppin的B細(xì)胞表位的抗原肽在制備男 性避孕疫苗中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明公開了Eppin的優(yōu)勢B細(xì)胞表位，具有SEQ ID No.l所示氨基酸序列，其成分單一、結(jié)構(gòu)簡單、擺脫了天然蛋白抗原中不良表
位的影響，引發(fā)的免疫反應(yīng)針對性強(qiáng)；本發(fā)明還公開了包含此優(yōu)勢B細(xì)胞表位的 抗原肽，由麻滲病毒融合蛋白的T輔助細(xì)胞表位與此優(yōu)勢B細(xì)胞表位串聯(lián)而成； 此抗原肽中的T輔助細(xì)胞表位能刺激機(jī)體產(chǎn)生CD4十T細(xì)胞，從而輔助B細(xì)胞活化， 使其分泌高滴度的特異地靶向所述優(yōu)勢B細(xì)胞表位的抗體，誘導(dǎo)高效、安全、可 逆的抗生育作用，可用于制備男性避孕疫苗，為男性避孕的臨床主動免疫治療 提供新的手段，具有重要的理論價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景，能夠產(chǎn)生重大的社會 效益和經(jīng)濟(jì)效益。


為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā) 明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中
圖1為本發(fā)明抗原肽的HPLC鑒定圖； 圖2為本發(fā)明抗原肽的MS鑒定圖3為本發(fā)明抗原肽免疫雄鼠血清中特異性抗體生成情況； 圖4為本發(fā)明抗原肽免疫雄鼠血清與人精子蛋白提取液的ELISA反應(yīng)結(jié)果； 圖5為本發(fā)明抗原肽首次免疫雄鼠后第5周雌雄小鼠合籠實(shí)驗(yàn)中雌鼠的產(chǎn) 仔情況；
圖6為本發(fā)明抗原肽首次免疫雄鼠后第26周雌雄小鼠合籠實(shí)驗(yàn)中雌鼠的產(chǎn) 仔情況。
具體實(shí)施例方式
發(fā)明人采用生物信息學(xué)方法，以單參數(shù)(親水性、可及性、柔韌性及抗原 性)預(yù)測為基礎(chǔ)，結(jié)合二級結(jié)構(gòu)預(yù)測，從385個(gè)候選表位中篩選出多個(gè)Eppin的 優(yōu)勢B細(xì)胞表位，并以其中一個(gè)優(yōu)勢B細(xì)胞表位(SEQ ID No. 1)為基礎(chǔ)，引入一 個(gè)T輔助細(xì)胞表位，構(gòu)建了抗原肽。
B細(xì)胞表位成份單一，結(jié)構(gòu)簡單，擺脫了抗原蛋白中不良表位的影響，引發(fā)
的免疫反應(yīng)針對性強(qiáng)，但當(dāng)B細(xì)胞表位是自身抗原時(shí)，其存在免疫原性低的缺陷。 以往多是用B細(xì)胞表位交聯(lián)外來載體蛋白(以提供和B細(xì)胞表位連接的新T輔助細(xì) 胞表位)的方法來刺激T輔助細(xì)胞，以提高其免疫原性。但是， 一些問題伴隨著 載體蛋白的使用而產(chǎn)生，即(1) B細(xì)胞表位與載體蛋白的化學(xué)偶聯(lián)可能會造 成目的決定簇的改變并且隨機(jī)的反應(yīng)會導(dǎo)致制品在大小和組成方面不均一；(2) 載體蛋白也許會導(dǎo)致不想要的免疫反應(yīng)；(3 ) B細(xì)胞表位-載體蛋白綴合物可能 會激發(fā)不相關(guān)的免疫反應(yīng)，錯(cuò)誤地針對載體蛋白而非B細(xì)胞表位。為了避免這些 問題，T輔助細(xì)胞表位被用于替換載體蛋白來引發(fā)T輔助細(xì)胞反應(yīng)。T輔助細(xì)胞表 位可以與B細(xì)胞表位串聯(lián)形成抗原肽。在本發(fā)明中，T輔助細(xì)胞表位選擇麻滲病 毒融合蛋白第288-302位氨基酸序列(SEQ ID No. 2 ),此T輔助細(xì)胞表位能刺激 機(jī)體產(chǎn)生CD4 + T細(xì)胞，從而輔助B細(xì)胞活化，使其分泌特異于Eppin的B細(xì)胞表位 的抗體。
在本發(fā)明中，T輔助細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位串聯(lián)形成抗原肽，可以是T輔助 細(xì)胞表位的羧基(C-)端與B細(xì)胞表位的氨基(N-)端連接；也可以是T輔助 細(xì)胞表位的N-端與B細(xì)胞表位的C-端連接。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，連接順 序通常不會改變該氨基酸序列的抗原特異性。T輔助細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位之間 通過柔性接頭連接，柔性接頭通常選自由GGG、 GGS或KK組成的短肽。柔性接 頭在物理上將T輔助細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位分隔開來，使得B細(xì)胞表位與B細(xì) 胞受體、T輔助細(xì)胞表位與T細(xì)胞受體可以更好地實(shí)現(xiàn)結(jié)合，不受空間位阻的影 響；柔性接頭還可以打斷由T輔助細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位串聯(lián)形成的人為二級 結(jié)構(gòu)，并由此消除對T輔助細(xì)胞或B細(xì)胞反應(yīng)可能照成的干擾；此外，柔性接 頭還利于使抗原肽經(jīng)蛋白酶降解后形成兩個(gè)完整表位，即T輔助細(xì)胞表位和B 細(xì)胞表位。
本發(fā)明還涉及包含免疫學(xué)有效量的所述抗原肽的組合物。本發(fā)明抗原肽的 免疫學(xué)有效量通常為每劑每千克體重2-5毫克，這一劑量可以分成多次施用；但 正如免疫和治療領(lǐng)域所熟知的，給藥劑量可以根據(jù)患者的年齡、健康狀況和個(gè)
體反應(yīng)等進(jìn)一步調(diào)整；安全有效量的抗原肽可以和藥學(xué)上可接受的載體如弗氏 完全佐劑、弗氏不完全佐劑等制成疫苗等藥物形式；本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以 4艮容易地確定藥物劑型，包括速釋或/和緩釋制劑；所得藥物制劑可以通過任何 一種便利的途徑施用，包括皮下的、口服的、肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的，或其他腸胃 外的或腸道的途徑。
以下將參照附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
實(shí)施例一
本實(shí)施例抗原肽由T輔助細(xì)胞表位的C-端與E卯in的B細(xì)胞表位的N-端通 過柔性接頭-GGG-連接而成，其^&酸序列為LSEIKGVIV服LEGVGGGCQGNNNNFQSKA N。
本實(shí)施例抗原肽的合成在固相多肽合成儀(ABI 431A型)上完成。采用標(biāo) 準(zhǔn)藥曱氧羰基(Fmoc)方案，起始選用0. 0125mmo1的聚苯乙稀(polystyrene, PS)樹脂(美國ABI公司)，按照設(shè)計(jì)的氨基酸序列使肽鏈從C-端逐個(gè)向N-端 延伸；各種Fmoc氨基酸用量為0. l隱ol;每步縮合前用1-羥基苯并三唑(H0Bt) /N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(Dec)活化Fmoc氨基酸的羧基，縮合后用含有體積 百分濃度為20 %的六氬吡啶的N-甲基吡咯烷酮(NMP )溶液去除Fmoc保護(hù)基； 肽鏈合成后，將含樹脂的肽鏈加至處于水浴條件下的裂解液[由結(jié)晶苯盼0. 75g、 酒石酸乙二胺(EDT)O. 25mL、苯石?；鶗跬?Thionaisole)0. 5mL、去離子水0. 5mL、 三氟乙酸10mL組成]中，于室溫、攪拌條件下反應(yīng)4. 5小時(shí)，將肽鏈從樹脂上 裂解下來，同時(shí)去除多種保護(hù)基團(tuán)；將反應(yīng)后的混合液經(jīng)玻璃濾器過濾以濾掉 樹脂及保護(hù)基團(tuán)，并用三氟乙酸洗滌濾渣、反應(yīng)瓶和濾器，濾液于常溫下低壓 蒸發(fā)至1-2mL，加乙醚50mL使多肽沉淀后，再經(jīng)玻璃濾器過濾，收集沉淀，冷 凍干燥，即得抗原肽。所得抗原肽通過高效液相色語(HPLC)法和質(zhì)譜(MS) 法進(jìn)行鑒定，HPLC鑒定圖如圖1所示，所得抗原肽的純度為85%; MS鑒定圖如 圖2所示，證實(shí)所得抗原肽為目標(biāo)多肽。實(shí)施例二
本實(shí)施例抗原肽由Eppin的B細(xì)胞表位的C-端與T輔助細(xì)胞表位的N-端通 過柔性接頭-GGS-連接而成，其M酸序列為CQGNNNNFQSKANGGSLSEIKGVIVHRLEGV。
本實(shí)施例抗原肽的合成在固相多肽合成儀(ABI 431A型)上完成。采用標(biāo) 準(zhǔn)Fmoc方案，合成方法與實(shí)施例一所述方法相同。
實(shí)施例三
本實(shí)施例抗原肽由T輔助細(xì)胞表位的C-端與Eppin的B細(xì)胞表位的N-端通 過柔性接頭-KK-連接而成，其M酸序列為LSEIKGVIVHRLEGVKKCQGNNNNFQSKAN。
本實(shí)施例抗原肽的合成在固相多肽合成儀(ABI 431A型)上完成。采用標(biāo) 準(zhǔn)Fmoc方案，合成方法與實(shí)施例一所述方法相同。
本發(fā)明抗原肽的鑒定
方法(1 )實(shí)驗(yàn)動物分組將40只體重為18-20 g的清潔級6-8周齡雄性Balb/c 小鼠(北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供)隨機(jī)分成4組實(shí)驗(yàn)組(本發(fā)明 抗原肽)、PBS對照組(以磷酸鹽緩沖液PBS替代抗原肽)、無關(guān)肽對照組(以 氨基酸序列為LSEIKGVIVHRLEGVGGG的多肽替代抗原肽)和空白對照組(以超純 水替代抗原肽)，每組10只；
(2) 免疫方案首次免疫，將純化的原核表達(dá)的重組Eppin蛋白與弗氏完 全佐劑等體積混合，充分乳化，制得免疫原，于小鼠腹股溝皮下組織部位注射， 每只50-80嗎；間隔1周，加強(qiáng)免疫，將本發(fā)明抗原肽與弗氏不完全佐劑等體積 混合，充分乳化，制得免疫原，于小鼠腹股溝皮下組織部位注射，每只50 fig; 再間隔2周，以同樣方法重復(fù)加強(qiáng)免疫l次；
(3) 免疫原性檢測一首次免疫前后，每間隔一定時(shí)間，行小鼠尾靜脈采 血，分離血清，置溫度-2(TC保存，待測；采用間接酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法
測定免疫雄鼠血清中特異性抗體的滴度將抗原肽用包浮皮稀釋液(即濃度為O. 05 mol/L、 pH值為9. 6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液)稀釋，制成濃度為IO )tig/mL的包 被液；將包被液加至96孔反應(yīng)板中，每孔IOO ^L，置溫度37。C包被4小時(shí)，棄去 包被液，以洗滌液(在IOOO mL PBS中力口入O. 5 mL Tween-20和0. 1 g硫柳汞， 調(diào)節(jié)pH值至7.4,即得)洗滌3次，再加入用PBS稀釋至體積百分濃度為5y。的小牛 血清(Hyclone公司)封閉液，每孔IOO pL，置溫度37。C封閉^分鐘，棄去封閉 液，以洗滌液洗滌3次，再加入按10倍連續(xù)稀釋的免疫后小鼠血清，每孔100^L, 置溫度37。C孵育1小時(shí)，以洗滌液洗滌3次，再加入辣才艮過氧化物酶(服P)標(biāo)記 的羊抗小鼠IgG (稀釋度為l : 5000, Nordic公司)，每孔IOO jiL，置溫度37。C 孵育40分鐘，以洗滌液洗滌3次，加入鄰苯二胺-過氧4匕氫(OPD-H202 )底物液， 每孔IOO ^L，置溫度37。C避光顯色40分鐘，終止反應(yīng)，測量492 nm波長處的光 密度(OD),以正常小鼠血清作陰性對照，結(jié)果以雙復(fù)孔OD值均值表示，待測 孔0D值大于或等于陰性對照2. l倍者判為陽性，以判為陽性的最高稀釋倍數(shù)為抗 體滴度。
(4)免疫原性檢測二首次免疫后第5周，小鼠尾靜脈采血，分離血清， 置溫度-2(TC保存，待測；取健康男性新鮮精液，用Pereoll單層法去除圓細(xì)胞 和精漿，再用PBS洗滌2次后，參照文獻(xiàn)方法(黃宇峰，許瑞吉.男性診斷學(xué).上 海第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，1999.)，用裂解液(含有濃度為O. 5mol/L的Tris-HCl、 濃度為O. 28 mol/L的2-巰基乙醇、濃度為5 mol/L的鹽酸胍)裂解精子，提取的 蛋白質(zhì)用三氯乙酸/丙酮法沉淀后冷凍干燥，再以裂解緩沖液(含有濃度為8 mol/L的尿素,質(zhì)量百分濃度為4。/。的CHAPS，濃度為40 nmol/L的Tris)溶解,即 得人精子蛋白提取液，測定總蛋白質(zhì)濃度，置溫度-2(TC保存，待用；采用間接 ELISA法檢測免疫后雄鼠血清與人精子蛋白提取液的反應(yīng)情況，具體步驟參照 "(3)免疫原性檢測一，，所述方法以人精子蛋白提取液為包^皮抗原，以免疫 后雄鼠血清為一抗，以HRP標(biāo)記的羊抗小鼠IgG為二抗；同時(shí)設(shè)陽性對照組I [以 抗Eppin多克隆抗體(Santa Cruz乂^司)為一抗]、陽性對照組II (以純化的重
組Eppin蛋白免疫雄鼠血清為一抗)和陰性對照組(以PBS為一抗)；測量492認(rèn) 波長處的OD值，結(jié)果以雙復(fù)孔OD值均值表示，待測孔OD值大于或等于陰性對照 2. l倍者判為陽性。
(5)抗生育能力檢測首次免疫后第5周，按雌雄比例l : 2行雌雄小鼠合 籠實(shí)驗(yàn)，記錄雌鼠產(chǎn)仔情況；首次免疫后第26周，再次按雌雄比例l : 2行雌雄 小鼠合籠實(shí)驗(yàn)，記錄雌鼠產(chǎn)仔情況。
結(jié)果(1 )免疫雄性Balb/c小鼠血清中特異性抗體生成情況如圖3所示， 首次免疫后第l周，實(shí)驗(yàn)組雄鼠血清中即有特異性抗體產(chǎn)生，之后抗體滴度逐漸 升高，于首次免疫后第5周達(dá)到最高值(40萬)，抗體滴度可一直維持在此水平 至首次免疫后第20周，之后抗體滴度逐漸下降，于首次免疫后第26周降至5000 以下；PBS對照組、無關(guān)肽對照組和空白對照組小鼠血清中無特異性抗體產(chǎn)生。
(2 )免疫雄鼠血清與人精子蛋白提取液的ELISA反應(yīng)結(jié)果如圖4所示，實(shí) 驗(yàn)組反應(yīng)結(jié)果呈陽性，顯示采用本發(fā)明抗原肽免疫的雄性小鼠血清中含有特異 性抗體，可以與人精液中的抗原蛋白E卯in結(jié)合。
(3)在首次免疫后第5周進(jìn)行的雌雄小鼠合籠實(shí)驗(yàn)中，雌鼠產(chǎn)仔情況如圖5 所示，實(shí)驗(yàn)組免疫雄鼠的生殖力受到抑制，雌鼠產(chǎn)仔率與PBS對照組、無關(guān)肽對 照組和空白對照組比較，均有顯著性差異(P<0. 05);
首次免疫后第26周，測得實(shí)驗(yàn)組免疫雄鼠血清中的特異性抗體滴度低于 5000,此時(shí)雌雄小鼠合籠實(shí)驗(yàn)中雌鼠產(chǎn)仔情況如圖6所示，實(shí)驗(yàn)組免疫雄鼠的生 殖力得到恢復(fù)，雌鼠產(chǎn)仔率與PBS對照組、無關(guān)肽對照組和空白對照組比較，均 無顯著性差異(P〉Q. 05)。
結(jié)論本發(fā)明抗原肽可以誘導(dǎo)高滴度的特異地靶向Eppin優(yōu)勢B細(xì)胞表位的 抗體，并產(chǎn)生高效、安全、可逆的抗生育作用，可用于制備男性避孕疫苗。
最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管 通過參照本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通 技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏
離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍
<110〉中國人民解;^文軍第三軍醫(yī)大學(xué)
<120〉 附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位及包含此表位的抗原肽
<160> 2
<210> 1
<211〉 13
<212> PRT
<213〉 智人(H畫n )
<400> 1
Cys Gin Gly Asn Asn Asn Asn Phe Gin Ser Lys Ala Asn 1 5 10
<210> 2 <211> 15 <212〉 PRT
<213> 麻滲病毒(morbillivirus ) <400〉 2
Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg Leu Glu Gly Val 15 10 1權(quán)利要求
1、附睪蛋白酶抑制蛋白的B細(xì)胞表位，具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列。
2、 包含權(quán)利要求l所述的附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽，其特 征在于由T輔助細(xì)胞表位與附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位串聯(lián)而成；所述T 細(xì)胞表位具有SEQ ID No. 2所示氨基酸序列。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽， 其特征在于T輔助細(xì)胞表位通過柔性接頭與附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位串 聯(lián)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽，其 特征在于所述柔性接頭選自由GGG、 GGS或KK組成的短肽。
5、 包含免疫學(xué)有效量的權(quán)利要求2所述的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表 位的抗原肽的組合物。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于還包含藥學(xué)上可接受的載體。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于所述免疫學(xué)有效量為每劑 每千克體重2-5毫克。
8、 能夠與權(quán)利要求1所述的附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位特異性結(jié)合的抗體。
9、 能夠與權(quán)利要求2所述的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽特 異性結(jié)合的抗體。
10、 權(quán)利要求2所述的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽在制備 男性避孕疫苗中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位及包含此表位的抗原肽；本發(fā)明的附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位，具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列，其成分單一、結(jié)構(gòu)簡單、擺脫了天然蛋白抗原中不良表位的影響，引發(fā)的免疫反應(yīng)針對性強(qiáng)；本發(fā)明的包含附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗原肽，由T輔助細(xì)胞表位與附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位串聯(lián)而成，T細(xì)胞表位具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列；此抗原肽可以誘導(dǎo)高滴度的特異地靶向附睪蛋白酶抑制蛋白B細(xì)胞表位的抗體，并產(chǎn)生高效、安全、可逆的抗生育作用，可用于制備男性避孕疫苗，具有重要的理論價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景，能夠產(chǎn)生重大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號C07K16/38GK101362795SQ20081007028
公開日2009年2月11日 申請日期2008年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月11日
發(fā)明者畏 何, 吳玉章, 李晉濤, 梁志清, 萍 閻, 陳正瓊 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)