逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物、其制備方法及應(yīng)用的制作方法

專利名稱：：逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類雜環(huán)化合物，尤其涉及具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物；本發(fā)明還涉及該雜環(huán)化合物的制備方法以及該雜環(huán)化合物作為腫瘤多藥耐藥抑制劑的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：腫瘤的臨床治療雖然面臨多種問題，例如化療藥物的選擇性低、耐受性差和毒副作用強，需要不斷發(fā)現(xiàn)選擇性高而耐受性好和毒副作用小的優(yōu)秀抗腫瘤藥物，但是腫瘤臨床治療面對的最大挑戰(zhàn)是腫瘤細(xì)胞耐藥，包括多重耐藥和交叉耐藥。腫瘤細(xì)胞獲得的耐藥性使得越來越多的優(yōu)秀抗腫瘤藥物迅速喪失臨床療效。在腫瘤細(xì)胞表面廣泛存在一類膜蛋白，這類膜蛋白的主要作用就是把已經(jīng)進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤藥物轉(zhuǎn)運到腫瘤細(xì)胞外。抗腫瘤藥物從癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運到癌細(xì)胞外的現(xiàn)象乂稱為抗腫瘤藥物外滲。造成抗腫瘤藥物外滲的膜蛋白乂稱外滲泵。當(dāng)抗腫瘤藥物外滲泵的活性升高時，癌細(xì)胞內(nèi)抗腫瘤藥物的濃度迅速下降，癌細(xì)胞出現(xiàn)耐藥。這類被稱為外滲泵的膜蛋白主要有P-糖蛋白和多重耐藥蛋白(Sikic，B丄Oncology,1999，13，183)。在針對腫瘤耐藥展開的研究中，抗腫瘤藥物外滲泵抑制劑的設(shè)計被公認(rèn)為是最有臨床意義的研究領(lǐng)域之一。2001年，按照P-糖蛋白調(diào)節(jié)劑真菌來源的天然產(chǎn)物GF120918設(shè)計的FumitremorginC類似物對外滲泵有非常有限的逆轉(zhuǎn)性抑制作用(LoevezijnA.etal，Bioorg.Med.Chem.Lett，2001，11，29)。在研究芳構(gòu)化/5-咔啉-3-羧酸的抗腫瘤活性時，發(fā)明人揭示游離羧酸的活件比芐酯的活性弱許多(MingZhao,LanrongBi,WeiWang,ChaoWang,MiddleBaudy-Floc，h，JingfangJu，ShiqiPeng，Synthesisandcytotoxicactivitiesof/3-carbolineaminoacidesterconjugates,Bioorg.&Med.Chem.2006，14，6998-7010)。針對咪唑啉的研究表明,咪唑啉核可以構(gòu)成各種重要的藥效團(Ozola，V.;Thorand，M.;Diekmann，M.;Qurishi，R.;Schumacher,B.;Jacobsonb，A.K.;andChristaE.Mullera,E.C.2-Phenylimidazo〖2，l-i]purin-5-ones:Structure-ActivityRelationshipsandCharacterizationofPotentandSelectiveInverseAgonistsatHumanA3AdenosineRec印tors，Bioorg.&Med.Chem.2003,11,347-356;Merriman，G.H.;Ma，L.;Shum,P.;McGarry,D.;Volz，F(xiàn).;Sabol，J.S.;Gross,A.;Zhao,Z.;Rampe，D.;Wang,L.;Wirtz-Brugger,F.;Harris,B.A.;Macdonald,D.SynthesisandSARofnovel4,5-diarylimidazolinesaspotentP2X7receptorantagonists,Bioorg.&Med.Chem.Letters,2005，15，435-438;RobinD.Clark,R.D.;Jahangir,A.;Severance,D.;Salazar,R.;Chang,T.;Chang,D.;Jett,M.F.;Smithc，S.;Bley,K.DiscoveryandSARdevelopmentof2-(phenylami加)imidazolinesaspostacyclinreceptorantagonists,Bioorg.&Med.Chem.Letters,2004，14，1053-1056)。在發(fā)明人看來，利用FumitremorginC的咔啉核、咪唑啉的咪唑啉核和芳構(gòu)化/3-咔啉-3-羧酸芐酯的芐酯包含的活性信息可以把它們?nèi)诤铣蔀?,2-二甲基-2-[1-取代乙羰氧,]4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚，使之具有逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞對抗腫瘤藥物的耐藥性的功能。針對腫瘤細(xì)胞多重耐藥和交叉耐藥使越來越多的優(yōu)秀抗腫瘤藥物迅速喪失臨床療效這樣一個事實，以及P-糖蛋白和多重耐藥蛋白把抗腫瘤藥物從癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運到癌細(xì)胞外是腫瘤耐藥的基本機制,本發(fā)明把FurwtremOTginC的咔啉核、咪唑啉的咪唑啉核和芳構(gòu)化/5-咔啉-3-羧酸芐酯的芐酯融合成為2,2-二甲基-2-[1-取代乙羰氧芐]-4-氧代-四氫咪唑并[r，2':l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚，使之具有逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞對抗腫瘤藥物的耐藥性的功能。2,2-二屮基-2-n-収代乙羰'羊t節(jié)M-W代-叫'氛咪唑并[r，2':l,51吡啶并f3,4-bl吲哚
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一種能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物。本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的-一種逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物，為通式(I)所示的結(jié)構(gòu)H通式()其中，R！選自CH2CH(CH3)2、CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH3、H、CH2C6H5、CH2C6H4-OH-p、H引哚-5-基-CH2、CH2C02Bzl、CH2CH2C02Bzl、CH2OBzl、CH2CH2CH2CH2NHCBz、CH2CONH2或CH2CH2CONH2本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性雜環(huán)化合物的方法。本發(fā)明目的之二是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種制備上述逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性雜環(huán)化合物的方法，包括(1)按現(xiàn)有技術(shù)方法制備咔啉羧酸；(2)將咔啉羧酸的仲胺基用保護(hù)基保護(hù)后與L-氨基酸芐酯偶聯(lián)生成N位保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯；(3)將N位保護(hù)基保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯脫去保護(hù)基后在三乙胺催化下在甲醇中與丙酮縮合，即得。咔啉羧酸的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，作為一種優(yōu)選的方案，可參考以下方法制備L-色氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成咔啉羧酸。步驟(2)中，所述的保護(hù)基優(yōu)選為Boc;所述的L-氨基酸芐酯優(yōu)選為L-異亮氨酸芐酯、L-綴氨酸芐酯、L-亮氨酸芐酯、L-丙氨酸芐酯、L-甘氨酸芐酯、L-苯丙氨酸芐酯、L-酪氨酸芐酯、L-色氨酸芐酯、L-天冬氨酸二芐酯、L-谷氨酸二芐酯、L-絲氨酸(芐醚)芐酯、L-e-芐氧羰基-賴氨酸芐酯、L-天冬酰胺芐酯或L-谷氨酰胺芐酯。步驟(3)中，所述的脫去保護(hù)基反應(yīng)優(yōu)選在以下條件下進(jìn)行將N位用保護(hù)基保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯用4N的氯化氫乙酸乙酯脫去保護(hù)基。體外試驗表明，本發(fā)明化合物可有效降低腫瘤細(xì)胞對于抗腫瘤藥物的耐藥倍數(shù)，臨床中可作為逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的藥物。圖l.本發(fā)明化合物(2，2-二甲基-2-[1-取代乙羰氧節(jié)]-4-氧代-四氫咪唑并[1，,2，:1，5]吡啶并[3，4-b]吲哚)的合成路線。i)稀硫酸、甲醛；ii)(Boc)20、DMF;iii)DCC、HOBt、NMM;iv)4NHCl/EtOAc、甲醇、丙酮、三乙胺.1R=CH(CH3)CH2CH3;2R=CH(CH3)2;3R=CH2CH(CH3)2;4R=CH3;5R=H;6R=CH2C6H5;7R=CH2C6H4-OH-p;8R=Indole-5-yl-CH2;9R=CH2C02Bzl;10R=CH2CH2C02Bzl;11R=CH2Obzl;12R=CH2CH2CH2CH2NHCBz;13RfCHzCONHy14R=CH2CH2CONH2。為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。具體實施方式實施例1l-(l，-芐氧羰基-2，-甲基)丁基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r，2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物l)的制備1)S-咔啉羧酸的制備將400ml水置于500ml的圓底燒瓶中，緩慢加入0.2ml濃硫酸。往得到的稀硫酸水溶液中加入5.0g(24.5mmol)L-色氨酸并超聲振蕩至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入10ml濃度為35%的甲醛溶液。反應(yīng)混合物室溫攪拌6小時，薄層層析監(jiān)測到L-色氨酸消失，終止反應(yīng)。往反應(yīng)溶液中緩慢滴加濃氨水，調(diào)反應(yīng)混合物至pH6，靜置半小時。減壓濾出的生成的沉淀用水洗，將濾出的無色固體平鋪于培養(yǎng)皿，置于柜子中空氣干燥后得S-咔啉羧酸，為無色固體5.05g(95.4%)。Mp280-282。C;EI/MS:217[M+H]+;IR(KBr):3450,3200，3000，2950,2850，1700，1601,1452,1070，900cm1;^NMR(BHSC-500,DMSO-d6):S=10,99(s,1H)，9.89(s,1H),7.30(t，J=7.5Hz，1H)，7.22(t，風(fēng)0Hz，1H)，7.01(d，J二8.0Hz，IH)，6.81(d，J=7.5Hz,IH)，4.01(t，J=4.8Hz，IH)，3.75(dd，J=10.5Hz,J=5.0Hz,IH)，3.64(dd，J=10.5Hz,J=2.4Hz，IH)，2.91(d，J=10.5Hz，2H),2.86(s,1H).兀素分析C12H12N202理論值C66.65，H,5.59，N12.96.實測值C66.45,H5.72,N12.79。2)N-Boc-S-咔啉羧酸的制備將4.0g(18.5mmol)S-咔啉羧酸懸浮于40mlDMF中。冰浴攪拌下往該懸浮液中加入5.2g(23.9mmol)Boc20。加二乙胺將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)至10，反應(yīng)混合物室溫攪拌48小時，薄層層析監(jiān)測至S-咔啉羧酸消失，終止反應(yīng)。將反應(yīng)液倒入表面皿，在風(fēng)扇下吹約24小時至千。將吹干的油狀物用200ml乙酸乙酯溶解，然后置于250ml分液漏斗中，用KHS04(5%)水溶液洗滌(20mlx3)。分出合并的乙酸乙酯層，在250ml三角瓶中加入無水硫酸鈉干燥0.5h，常壓過濾。濾液減壓濃縮至干，析出白色固體。得到的白色固體中加入氯仿，減壓過濾，得到N-Boc-S-咔啉羧酸，為無色固體4.50g(76.9%)。Mp165-170°C;TOF/MS:317[M+H]+339[M+Na]+，355[M+K];IR(KBr):3452，3205，3001，2952，2848，1705，1645，1600，1450，1072，901cm-1;'HNMR(BHSC-500,DMSO-c^):S=10.873(s，1H)，9.862(s，1H)，7.325(t，J-7.6Hz,IH)，7.214(t，J=7.9Hz，IH)，7.006(d，J=7.9Hz，IH)，6.844(t，J=7.6Hz，IH)，4.841(t,J=5.0Hz，IH)，4.202(dd，J-10.2Hz，J=4.8Hz，IH)，3.980(dd，J=10.2Hz,J=3.2Hz，lH),2.933(d,/=10.2Hz，2H),1.462(s，9H).元素分析C17H2。N204理論值C64.54,H，6.37，N8.86.實測值C64.41,H6.25,N8.74。3)N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的制備冰浴冷卻下往置于150ml燒瓶中的由1.70g(6.61mmol)鹽酸L-異亮氨酸芐酯、2.00g(6.33mmol)N-Boc-S-咔啉羧酸和0.90g(6.67mmol)N-羥基苯并三唑(HOBt)與70mlTHF構(gòu)成的溶液中滴入1.70g(8.33mmol:)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)和5mlTHF構(gòu)成的溶液。往得到的溶液通過滴入N甲基嗎啉(NMM)與THF的溶液調(diào)pH值到8。反應(yīng)混合物0°C攪拌2小時后抽濾，濾液減壓濃縮至干。得到的殘余物用150ml乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mlx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlx3)、5%硫酸氫鉀水溶液洗(30mlx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlx3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mlx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlx3)。合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉千燥、過濾、濾液減壓濃縮至千，得到3.15g(96%)目標(biāo)化合物，為無色問體。ESr-MS(m/e)520[M+H〗+;4)^(1'-芐氧羰基-2，-甲基)丁基-2,2-.甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1'，2':1，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(l)的制備將2.0g(3.85mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯置于100ml茄形瓶中并用8ml乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中緩慢滴入16ml4NHCl/EtOAc。反應(yīng)混合物0°C攪拌1.5小時后減壓濃縮至干。殘留物溶于60ml甲醇和20ml丙酮的混合溶劑中、用三乙胺調(diào)整pH值到9、避光反應(yīng)7-10天、薄層層析監(jiān)測至N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯消失，終止反應(yīng)。反應(yīng)混合物減壓濃縮至千、殘留物用200ml乙酸乙酯溶解、溶液置于250ml分液漏斗中并用30ml飽和氯化鈉水溶液洗(30mlx8)。洗后的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉千燥、0.5h后過濾。濾液減壓濃縮至干。殘留物用5ml甲醇溶解、靜置、濾出0.92g(52%)H標(biāo)化合物，為淡黃色固體。Mp192-193。C;ESI+-MS(m/e)460[M+H〗+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)5=10.714(s，1H)，7.410(m，5H),7.350(d，J=7.5Hz，1H),7.274(d,J=7.5Hz,1H),7.023(t,J=7.5Hz，IH)，6.957(t，J=7.5Hz，1H),5.183(s，2H)，4.356(t,IH)，3.970(d，J=16.5Hz,IH)，3.919(d,J=16.5Hz,IH)，3.567(dd，J=10Hz，J=5Hz,IH)，2.869(dd，J=4Hz，J=15Hz，IH)，2.629(t,1H),1.875(m，1H),L414(m，IH)，1.215(m,1H),1.073(s,3H),1.059(s，3H)，O細(xì)(d，J=6.6Hz，3H)，0.833(t，J=6.6Hz，3H).13C-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=l73.39，171.84，136.34，136.18，134.19，128.92,128.62，128.42,127.52，120.88，118.74，117.61，111.33，106.79，78.65，66.48，56.50，52.55，42.14，36.98，25.29，25.21，24.54，19.04,15.92，11.62;[a]D2()=-128.04°(c=0.25，丙酮)。實施例2N-(l，-芐氧羰基-2，-甲基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1',2':1,5]吡啶射3，4-b]柳朵(化合物2)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-纈氨酸芐酯的制備按照實施例l制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.00g(8.21mmol)鹽酸L-纈氨酸芐酯制得3.90g(94y。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI層S506[M+H]+.2)N-(l，-節(jié)氧羰基-2，-甲基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2，:l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(2)的制備按照實施例l制備N-(r-芐氧羰基-2，-甲基)丁基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r，2，:l，5]吡啶并[3，4-b]B引哚的操作，由2.00g(3.96mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-纈氨酸芐酯制得1.06g(60%)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp196-19S°C;ESI+-MS(m/e)446[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6,300MHz)6=10.725(s,IH)，7.425(m,5H)，7.353(d，J=7.5Hz,1H)，7.279(d，J-7.5Hz,1H)，7.032(t，J=7.5Hz,1H),6.%3(t,J-7.5Hz,IH)，5J88(s，2H),4.452(t，1H)，3.854(d，J=14Hz,1H),3.701(d，J=14Hz，1H),3.536(dd,J=4.5Hz，J=llHz,1H)，3.092(dd,1H，J=14.4，J-4.5),2.951(m，1H)，2.726(t,IH)，1.452(s,3H)，1.325(s,3H)，U21(m,J=6.6Hz，3H),0.963(m,J=6.6Hz，3H);I13C-NMR(DMSO-d6，300MHz):5=173.356,171.856，136.349,136.124,130.974，128.896,128.529,127.965,127.175,121.682,119.238,118.022，110.550，108.235，78.851，66.366，61.785,57.148,41.682,33.936，27.854，23.902,20.497，19.830，18.822;[a]D2°=-111.23°(c=0.25，丙酮)。實施例31-(1'-節(jié)氧羰基-3'-甲基)丁基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚(化合物3)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-亮氨酸芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由1.70g(6.61mmol)鹽酸L-亮氨酸芐酯制得3.23g(98W)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)520[M+H]+;2)l-(l，-芐氧羰基-3，-甲基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l,5]吡啶并[3，4-b]吲哚(3)的制備按照實施例1制備N-(l'-芐氧羰基-2'-甲基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2，:l,5]吡啶并[3,4-b]吲哚的操作，由2.00g(3.85mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-亮氨酸芐酯制得0.97g(55%)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp190-192°C;ESI+-MS(m/e)460[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=10.834(s,1H),7.445(d，J=7.2Hz，1H)，7.268(d，J=7.2Hz,IH)，7.064(t,J=7.2Hz，IH)，7.007(t，J=7,2Hz，IH)，5J86(s，2H),4.438(t，1H),4.023(d,J=14Hz，1H),3.859(d,J=14Hz，1H),3.560(dd,J=4.2Hz，J=10.5Hz，IH)，3.092(dd，J=4.2Hz，J=15Hz，IH)，2.734(t，IH)，2.226(m，2H),1.865(m,IH)，1.435(s,3H)，1.284(s,3H)，0.937(d，6H);13C-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=171.648，171.332，136.266,136.121，131.124，128.856,128.334,128.147,127.156,121.640，119.545,118.094,110.762,108.092,78.478,66.580,57.852，52.466，41.656，39.082,25.218,25.086，23.633，22.425，22.412，19,801;[a]D20=-103.78。(c=0.25，丙酮)。實施例4l-(l，-芐氧羰基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3,4-b〗U引哚(化合物4)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-丙氨酸芐酯的制備按照實施例l制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由1.42g(6.61mmol)鹽酸L-亮氨酸芐酯制得2.81g(93。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI/MS478[M+H]+;2)l-(l，-卡氧羰基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l,5]吡啶并[3,4-b]吲哚(ld)的制備按照實施例l制備N-(l'-芐氧羰基-2，-甲基)丁基-2，2-:甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2，l,5]吡啶并[3，4-b]吲哚的操作，由2.00g(4.19mmol)N-Boc-S-昨啉酰-L-丙氨酸芐酯制得0.79g(45。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp198-200。C;ESI+-MS(m/e)418[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)5=10.722(s，1H),7'486(m，5H),7.329(d，J=7.5Hz,1H)，7.265(d,J=7.5Hz，1H)，7.014(t，J=7.5Hz,1H),6.959(t，J=7.5Hz，1H)，5.192(s,2H)，4.384(m,IH)，3.972(d,J=16.5Hz,IH)，3.756(d,J=16.5Hz,IH)，3.465(dd，J=4.3Hz，J=10.0Hz，IH)，3.063(dd，J=4.3Hz，J=15.0Hz，1H)，2.752(t,IH)，1.491(d,J=4.8Hz,3H),L435(s,3H),L264(s,3H).13C-NMR(DMSO-d6,300MHz)5=173.545,170.826，136.714，136.214，131.442,129.635，128.564，128.125，127.722,122.345，120.115，118.944,111.245，108.904，70.870，66.026,60.134,44.547,42.109，30.114，29.115,25.044,14.117;[oi]D20=-157.00。(c=0.25，甲醇)。實施例5l-(l，-芐氧羰基)甲基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物5)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-甘氨酸芐酯的制備按照實施例l制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，山1.33g(6.61mmol)鹽酸L-甘氨酸芐酯制得2.84g(97。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI/MS464[M+H]+2)l-(r-芐氧羰基)甲基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，,2，:l，5]吡啶射3,4-b]吲哚(5)的制備按照實施例1制備N-(r-節(jié)氧羰基-2'-甲基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1，,2，:l，5]吡啶并[3，4-b]n引哚的操作，由2.00g(4.32mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-甘氨酸芐酯制得0.87g(50。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp203-205°C;ESI-MS(m/e)404[M+H]+;iH-NMR(DMSO-d6，300MHz)5=10.725(s,1H),7.484(m,5H)，7.322(d，J=7.5Hz，1H)，7.265(d，J=7.5Hz，1H),7.012(t,J=7.5Hz,1H)，6.956(t，J=7.5Hz，1H)，5.183(s,2H),4.335(s，2H)，3.962(d，J=16.5Hz，IH)，3.756(d，J=16.5Hz，IH),3.523(dd，J=4.5Hz,J=10.0Hz，IH),3.092(dd,J=4.1Hz,J=15Hz,IH),2.744(t，IH),1.438(s，3H)，1.283(s,3H);i3C-NMR(DMSO-d6,300MHz)3=172.168,170.831,136.651,136.256,131.224，128.965,128.689,127.352，124.333，121.922，120.400，119.113，111.363，109.223,71.152，66.986，61.144，44.545,42.854,30.224,29.543，25.534;[a]D20=-81.98°(c=0.5,甲醇)。實施例6l-(l，-芐氧羰基-2'-苯基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2，:l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物6)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-苯丙氨酸芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由1.93g(6.61mmol)鹽酸L-苯丙氨酸芐酯制得3.33g(95W)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI/MS554[M+H]+;2)l-(l，-芐氧羰基-2，-苯基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，,2，:l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚(6)的制備按照實施例1制備N-(l，-芐氧羰基-2'-甲基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2，:l，5]吡啶并[3，4-b]B引哚的操作，由2.00g(3.62mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-苯丙氨酸芐酯制得0.80g(45。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp179-181°C;ESI-MS(m/e)494[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=10.912(s，1H)，7.4257.243(m，12H),7.023(t，J=7.5Hz,1H),6.956(t，J=7.5Hz，1H),5J38(s,2H),4.252(t，1H),3.944(d,J=14Hz，1H)，3.774(d,J=14Hz,1H)，3.552(dd，J=4.5Hz,J=10.5Hz，IH，)，3.514(d，J-4.5Hz，2H),2.924(dd，IH,J=3.9，J=14.7),2.500(t,IH),1.324(s,3H)，U28(s,3H);13C-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=171.124,170.445，138.247,136.002,135.654，132.526，132.544，129.587,128.123,126.525,119.458，118.502，112.263，105.565,77.665,66.784，56.856，56.326,41.658，33.235,24.987，23.348,22.888;[a]D20=-203.84。(c=0.25,丙酮)。實施例71-(1，-芐氧羰基-2，-(4-羥基)苯基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物7)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-酪氨酸芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.03g(6.61mmol)鹽酸L-酪氨酸芐酯制得3.43g(92。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS570[M+H]+;2)l-(l，-節(jié)氧羰基-2，-(4-羥基)苯基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2':l,5]吡啶并[3，4-b]吲哚(7)的制備按照實施例1制備N-(1，-卡氧羰基-2，-甲基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r，2，:l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚的操作，由2.00g(3.51mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-酪氨酸芐酯制得0.84g(47。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp182-184°C、ESI-MS(m/e)510[M+H]+;iH-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=10.792(s,1H),7.405~7.017(m,9H),6.9346.600(m,4H),5.638(s，1H),5.201(s,2H),4.252(t，IH),3.900(d,J=14.5Hz,IH),,1H)，3.656(dd，J-3.8Hz,J=10.5Hz,IH),3.237(d，J=4.8Hz,2H),2.924(dd,IH,J=3.8,J=15),2.635(t,IH),1.423(s,3H)，1.245(s，3H);'3C-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=171.014，170.532，156.215，136.034，135.655，132.652,132.574，130.710，128.271，127.856,126.568，120.532,118.458，117.812，115.021,110.907，105.811,78.028,66.258，56.806，56.324，41.256，30.694,24.856,23.356，17.994;[a]D20=-208.33。(c=0.25，甲醇)。實施例8l-(r-芐氧羰基-2'』引哚基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2':l，5]吡啶并[3，4-b]噴哚(化合物8)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-色氨酸芐酯的制備按照實施例l制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.1Sg(6.61mmol)鹽酸L-色氨酸芐酯制得3.37g(90。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS593[M+H]+;2)1-(1，-芐氧羰基-2，-吲哚基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，,2，:l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(8)的制備按照實施例1制備N-(l'-節(jié)氧羰基-2'-甲基)丁基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2，l,5]吡啶并[3,4-b]卩引哚的操作，由2.00g(3.38mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-色氨酸芐酯制得0.94g(52。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp176-177°C、ESI-MS(m/e)533[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)5-10.796(s，1H)，10.635(s,1H)，7.5677.247(m，9H)，7.0227.010(m,4H)，6.782(s,1H),5.143(s，2H)，4.261(t，1H),3.954(d,J=14Hz，1H)，3.714(d,J=14Hz，1H)，3.514(d，J=4.5Hz,2H),3.199(dd，1H，J=3.9，J=10.5),2.91l(dd，1H，J=3.9，J=14.7),2.500(t，1H),1.500(s，3H)，1.232(s，3H);13C-NMR(DMSO-d6,300MHz)5=l70.865,170.651，136.034，135.985，135.562,132.532，132.383，129.863,128.965，128.324，127.595,126.663，124.385，120.896，120.525，118.449,118.012,117.484,111.426,110.865,110.554，105.797,77.9742，66.218，56.884，56.660,52.262，41.253,27.692，24.444，23.748，23.365;[a]D20=-211.33。(c=0.25,丙酮)。實施例91-(1'-節(jié)氧羰基-2'-卡氧羰基)乙基-2，2,:甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1'，2':1,5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物9)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-天冬氨酸二芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.31g(6.61mmol)鹽酸L-天冬氨酸二芐酯制得3.83g(99%)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS612[M+H〗+;2)l-(l，-芐氧羰基-2，-芐氧羰基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1，,2'丄5]吡啶并[3，4-b]吲哚(9)的制備按照實施例1制備N-(r-節(jié)氧羰基-2'-芐氧羰基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-Pl氫咪唑并[r，2':l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚的操作，由2.00g(3.63mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-天冬氨酸二芐酯制得U0g(55。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp187-189T;ESI-MS(m/e)552[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=10.848(s，1H)，7.426~7.286(m,12H)，7.023(t，J=7.5Hz，1H),7,015(t，J=7.5Hz,1H),5.226(s，4H)，4.336(t，1H),3.898(d，J=14Hz，1H),3.758(d,J=14Hz，IH)，3.436(dd,風(fēng)2Hz，Hz，1H),3.257(dd,J-4.2Hz，J=15Hz,IH)，2.865(dd，J=4.5Hz，J=14.5，IH)，2.796(dd，J=4.2Hz，J=14.5,IH)，2.504(t，1H),1.445(s，3H)，1.362(s，3H);i3C-NMR(DMSO-d6，300MHz)5=171.056,170.986，169.859,136.451，135.923,134.784，132.424,129.256,128.455，128.102，121.632,120.608,118.463，113.515，110.914,71.056，66.635，66.289,56.556,50.084，41.262,34.409，24.595,23.515，23.298;[a]D20=-104.89°(c=0.25,丙酮)。實施例101-(1'-節(jié)氧羰基-3'-節(jié)氧羰基)丙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[1，，2':1，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(化合物IO)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-谷氨酸二芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.40g(6.61mmol)鹽酸L-谷氨酸二芐酯制得3.82g(96.5y。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS626[M+H]+;2)l-(l，-節(jié)氧羰基-3，-節(jié)氧羰基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l'，2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(10)的制備按照實施例1制備N-(l'-節(jié)氧羰基-2，-節(jié)氧羰基)丁基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪哇并[l',2，:l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚的操作，由2.64g(4.23mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-谷氨酸二芐酯制得1.08g(45。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp182-184°C;ESI-MS(m/e)566[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d("300MHz)S=10.824(s，1H),7.436~7.269(m,12H)，7.045(t,J二7.5Hz，1H),6.976(t，J=7.5Hz,1H),5J66(s,4H)，4.252(t,1H),3.944(d,J=14Hz，1H),3T74(d，J=14Hz,1H)，3.527(dd，風(fēng)5Hz，J=llHz,1H),2.877(dd,J-3.5Hz，H4.5Hz,IH)，2.445(t,IH)，2.613~2.413(m,3H),2.316(m,1H),l.375(s，3H)，1.314(s，3H).'3C-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=172.92,171.34，170.59，136.59，136.35，133.09,128.93,128.42,127.99，127.17，121.03，118.29,117.95,111.41，106.43,78.45,66.64，66.10，57.07,53.05,41.85，31.13,25.09,24.96，23.79,19.93;[a]D2"=-70.63o(c=0.25,丙酮)。實施例111-(1，-節(jié)氧羰基-2，-節(jié)氧基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪性并[1，，2，:1，5]吡啶并[3，4-b]剛哚(化合物ll)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-絲氨酸(芐醚)芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.13g(6.61mmol)鹽酸L-絲氨酸(芐醚)芐酯制得3.40g(92。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS584[M+H]+2)1-(r-芐氧羰基-2，-芐氧基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，,2，:l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(ll)的制備按照實施例1制備N-(l'-芐氧羰基-2'-芐氧基)丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，,2':l,5]吡啶并[3，4-b]吲哚的操作，由2.00g(3.82謹(jǐn)ol)N-Boc-S-咔啉酰-L-絲氨酸(芐醚)芐酯制得1.08g(54y。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mpl86-187。C、ESI-MS(m/e)524[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)S-10,528(s，1H)，7.4297.293(m,12H)，7.012(t，J-7.4Hz，1H)，6.978(t，J=7.4Hz，1H)，5.135(s，2H)，5.012(s,2H),4.176(t，J=5.4Hz，1H),楊4(d,J=13.5Hz，1H)，3.956(d，J=5.4Hz,2H),3.814(d，J=13.5Hz，1H)，3.440(dd,J=4.2Hz,J-10.2Hz，1H)，2.879(dd,J=4.2Hz,J=15Hz,IH)，2.453(t，IH)，l'379(s，3H),1.310(s，3H);13C-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=170.989,169.454，136.256,135.856,132.568，128.685，127.589，127.326，126.526，120.585,118.456，117.521，110.825，105.868，78.185，66.528，65.354,58.386，56.794，56.481，41.465，24.502,23.342，19.267;{a]D20=-128.61。(c=0.25，丙酮)。實施例12l-(l'-芐氧羰基-5'-芐氧羰氨基)戊基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l'，2':l，5]吡啶并[3,4-b]吲哚(化合物12)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-e-芐氧羰基-賴氨酸芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由2.69g(6.61mmol)對鹽酸L-e-芐氧羰基-賴氨酸芐酯制得3.97g(94。/。)目標(biāo)化^物，為無色固體。ESI-MS(m/e)669[M+H]+;2)l-(r-卡氧羰基-5'-節(jié)氧羰氨基)戊基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l'，2':l,5]吡啶并[3,4-b]吲哚(12)的制備按照實施例1制備l-(r-芐氧羰基-5'-節(jié)氧羰氨基)戊基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r,2':l，5]吡啶并[3,4-b]fi引哚的操作，由2.00g(3.00mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-e-芐氧羰基賴氨酸芐酯制得1.00g(55。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp1%-198°C;ESI-MS(m/e)609[M+H]+;'H-NMR(CDCh，300MHz)3=8.863(s，IH),8.017(s，1H)，7.320(t,J=7.5Hz，1H),7.297(t，J=7.5Hz,1H),7.292(t,J=7.5Hz,IH),7.282(t，J-7.5Hz，IH)，7.280(d,J=7.3Hz,2H)，7.277(d,J=7.3Hz，2H)，7.274(t,J=7.3Hz，2H)，7.27l(t，J=7.3Hz,2H)，7.007(d,J=7.5Hz，IH)，6.966(d，J=7.5Hz，1H)，5J95(s，2H)，5.363(s，2H)，4.561(t,J=5.6Hz，IH)，4.055(t,J=4.6Hz，IH)，3.757(dd，J=4.2Hz，J=10.2Hz,IH)，3.490(dd,IH,風(fēng)2Hz，J=10.2Hz,IH),2.977(d，J=5.6Hz,2H),2.870(d,J=4.6Hz，2H)，1.879(m,J-5.6Hz，2H)，L568(m，J=5.6Hz,2H)，1.370(s,3H)，L312(s，3H)，1.336(m，J=5.6Hz，2H)，。13C-NMR(CDC13，300MHz)S=173.221，172.138,160.806，141.101，140.897，135.930，135.601，132.571，128.881，128.704，128.651，128.516，126.484，126.300,121.583,120.733，117.528，111.237,106.436，78.222，72.606，69.804,58.420，52.495，45.924，45.080，32.552,29.954,24.990,23.764，23.337,22.276;[<i]D20=-135.82。(c=0.25，丙酮)。實施例131-(r-芐氧羰基-2'-甲酰胺基)乙基-2,2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2':1，5]吡啶并[3，4-b]B引哚(化合物13)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-天冬酰胺芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由1.71g(6.61mmol)鹽酸L-天冬酰胺芐酯制得2.13g(76%)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS:521[M+H]+;2)l-(l，-節(jié)氧羰基-2，-甲酰胺基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r，2':l，5]吡啶并[3，4-b]U引l柴(13)的帝lJ備按照實施例1制備N-(l，-芐氧羰基-2'-甲酰胺基)乙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2，:l,5]吡啶并[3,4-b]吲哚的操作，由2.00g(3.84mmol)N-Boc-S-咔啉酰-L-天冬酰胺芐酯制得0.80g(45。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp186-188°C;ESI-MS(m/e)461[M+H]+;'H-NMR(DMSO-d6，300MHz)S=10.429(s,1H)，7.524(m，5H),7.427(d，J=7.4Hz,IH),7.348(d，J=7.4Hz，IH),7.010(t，J=7.4Hz,IH)，6.994(t，J=7.4Hz,IH)，6,217(s，2H),5.204(s,2H)，4.253(t,IH)，3.936(d,J=14Hz,IH)，3.784(d，J=14Hz,IH)，3.277(dd,J=4.5Hz,J=10Hz，IH)，2.973(d,J=4.5Hz,J=15Hz，IH),2.812(d，J=4.7Hz，2H),2.458(t,IH),1.452(s，3H),1.396(s,3H);13C-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=177.124,172.984,171.876，136.256,135.976,134.732，132.463，129.356,128.558,127.846，121.614，120.622，118.403,113.594，111.025，71.108,66.156,56.587，46.214，45.589，34.998,24.626，23.514，23.296;[a]D20=-63.38。(c=0.25,甲醇)。實施例141-(r-芐氧羰基-3'-甲酰胺基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑荊l',2，:U]吡啶荊3,4-b]吲哚(化合物14)的制備1)N-Boc-S-咔啉酰-L-谷氨酰胺芐酯的制備按照實施例1制備N-Boc-S-咔啉酰-L-異亮氨酸芐酯的操作，由l.SOg(6.61mmol)鹽酸L-谷氨酰胺芐酯制得2.87g(85。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e)535[M+H]+2)1-(l'-芐氧羰基-3'-甲酰胺基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[r，2':l，5]吡啶并[3，4-b]吲哚(14)的制備按照實施例1制備N-(r-芐氧羰基-2，-甲酰胺基)丙基-2，2-二甲基-4-氧代-四氫咪唑并[l，，2，:l，5]吡啶并[3,4-b]a引哚的操作，由2.00g(4.22mmo1)N-Boc-S-咔啉酰-L-谷氨酰胺芐酯制得0.90g(45。/。)目標(biāo)化合物，為無色固體。Mp196-198°C;ESI-MS(m/e)475[M+H]十；'H-NMR(DMS0-d6，300MHz)5==10.836(s，1H)，7.458~7.241(m,7H)，7.042(t，》7.5Hz，1H),6.985(t，J=7.5Hz,1H)，6.242(s,2H)，5.201(s，2H)，4.248(t,1H),3.965(d，J=14Hz，IH)，3.784(d，J=14Hz，1H),3.534(dd,J=4.5Hz,J=llHz，IH)，2.885(dd,J=4.5Hz，J=14.5Hz,IH)，2.472(t,1H),2.6252.416(m，3H)，2.323(m，IH)，1.387(s，3H),1.336(s，3H);13C-NMR(DMSO-d6,300MHz)S=l76.023,172.987，170.882，136.487,135.947,134.776，132.445,129.635，128.54,128.124,121.656，120.627，118.506,113.747，111.204,71.156，66.708,56.551，50.668,44.881，31.440，25.884,24.912,23.516，23.308;[ot]D20=-69.20。(c=0.25，甲醇)。試驗例1MES-SA與MES-SA/Dx5對阿霉素的敏感性評價1)材料對阿霉素敏感的子宮癌細(xì)胞株MES-SA及對阿霉素耐藥的子宮癌細(xì)胞株MES-SA/Dx5(Sigma);McCoy's5A培養(yǎng)液(90%)，胎牛血清(10%);37°C，體積分?jǐn)?shù)為0.05的C02飽和濕度的培養(yǎng)箱耐；全自動酶標(biāo)儀；阿霉素(Sigma).2)MES-SA與MES-SA/Dx5對阿霉素的敏感性評價將處于對數(shù)生長期的MES-SA細(xì)胞和MES-SA/Dx5細(xì)胞制成lx105mL—'懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100pd.該96孔培養(yǎng)板置于體積分?jǐn)?shù)為0.05的032飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)37"C培養(yǎng)4h.然后該96孔培養(yǎng)板孔加入含有阿霉素的培養(yǎng)液，每孔25^1，阿霉素以2倍稀釋的方法由高到低設(shè)置9種濃度的測定液(起始濃度為10/xmol/L)，不含阿霉素僅含培養(yǎng)液的孔作對照。阿霉素的每個濃度或空白培養(yǎng)液均重復(fù)3個平行孔(『3)，另設(shè)3個只含同量培養(yǎng)液的無細(xì)胞空白孔。培養(yǎng)48h后用MTT法檢測MES-SA細(xì)胞株和MES-SA/Dx5細(xì)胞株對阿霉素的敏感性。按照公式"相對生存率-(D含藥-Z)空白)/(D對照-D空白)xlOO。/。"計算阿霉素在各種濃度下細(xì)胞的相對生存率，根據(jù)細(xì)胞相對生存率-阿霉素濃度繪制細(xì)胞生長曲線，并利用該生長曲線求得半數(shù)抑制率(ICso)。3)結(jié)果阿霉素對MES-SA細(xì)胞的IC5Q=3.47x10—Vnol/L阿霉素對MES-SA/Dx5細(xì)胞的DxIC5o=1.55xlO、mol/L耐藥倍數(shù)-^KVIC5。-4.47試驗例2本發(fā)明化合物(1-14)逆轉(zhuǎn)MES-SA/Dx5對阿霉素的耐藥性試驗制備濃度為1/miol/L本發(fā)明化合物(1-14)的培養(yǎng)液及制備2倍稀釋的7個濃度的阿霉素培養(yǎng)液(阿霉素起始濃度為IO/miol/L)。將處于對數(shù)生長期的MES-SA/Dx5細(xì)胞制成lxl0SmL"懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100/x1.該96孔培養(yǎng)板置于體積分?jǐn)?shù)為0.05的C02飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)37t:培養(yǎng)4h.然后向該96孔培養(yǎng)板每孔加入25Ml阿霉素培養(yǎng)液，培養(yǎng)4h.再往％孔培養(yǎng)板的孔中加入化合物1-14的培養(yǎng)液。各個孔均重復(fù)3次(n=3)。培養(yǎng)48h后用MTT法檢測MES-SA/Dx5細(xì)胞對阿霉素的敏感性。同時設(shè)不含化合物1-14僅含培養(yǎng)液的對照孔和只含同量培養(yǎng)液無細(xì)胞的空白孔。各個孔均重復(fù)3次(n=3)。按照公式"相對生存率-(D含藥-Z)空白)/(i)對照-"空白)xlOOy。"計算有l(wèi)/miol/L化合物1-14存在時，在不同濃度的阿霉素培養(yǎng)液中MES-SA/Dx5細(xì)胞的相對生存率,根據(jù)細(xì)胞相對生存率和阿霉素的濃度繪制細(xì)胞生長曲線，利用該生長曲線求得半數(shù)抑制率(DxiC50)。按照公式"耐藥倍數(shù)-DxIC5(/IC5Q"計算在lMmol/L化合物1-14存在時MES-SA/Dx5細(xì)胞對阿霉素的耐藥倍數(shù)。把化合物1-14存在時MES-SA/Dx5細(xì)胞對阿霉素的耐藥倍數(shù)和試驗例1求得的DxIC5()=4.47的商定義為逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。結(jié)果見表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>從表中的數(shù)據(jù)可以看到，在l^nol/L化合物1-14存在時MES-SA/Dx5細(xì)胞對阿霉素的耐藥倍數(shù)大都下降，尤其是在lMmol/L化合物1，6，8-10和12存在時MES-SA/Dx5細(xì)胞對阿霉素的耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)?？梢姡景l(fā)明的化合物為克服腫瘤耐藥提供了出路。權(quán)利要求1.逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物，為通式(I)所示的結(jié)構(gòu)id="icf0001"file="A2007100636760002C1.gif"wi="74"he="20"top="33"left="75"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R1選自CH2CH(CH3)2、CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH3、H、CH2C6H5、CH2C6H4-OH-p、吲哚-5-基-CH2、CH2CO2Bzl、CH2CH2CO2Bzl、CH2OBzl、CH2CH2CH2CH2NHCBz、CH2CONH2或CH2CH2CONH22、一種制備權(quán)利要求1雜環(huán)化合物的方法，包括(1)按現(xiàn)有技術(shù)方法制備咔啉羧酸；(2)將咔啉羧酸的仲胺基用保護(hù)基保護(hù)后與L-氨基酸芐酯偶聯(lián)生成N位保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯；(3)將N位保護(hù)基保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯脫去保護(hù)基后在三乙胺催化下在甲醇中與丙酮縮合，即得。3、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，步驟(1)中咔啉羧酸按照以下方法制備L-色氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成咔啉羧酸。4、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的保護(hù)基為Boc。5、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的L-氨基酸芐酯選自L-異亮氨酸節(jié)酯、L-纈氨酸芐酯、L-亮氨酸芐酯、L-丙氨酸芐酯、L-甘氨酸芐酯、L-苯丙氨酸芐酯、L-酪氨酸芐酯、L-色氨酸芐酯、L-天冬氨酸二芐酯、L-谷氨酸二芐酯、L-絲氨酸(芐醚)芐酯、L-e-芐氧羰基-賴氨酸芐酯、L-天冬酰胺芐酯或L-谷氨酰胺芐酯。6、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的脫去保護(hù)基反應(yīng)在以下條件下進(jìn)行:將N位用保護(hù)基保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯用4N的氯化氫乙酸乙酯脫去保護(hù)基。7、權(quán)利要求1的雜環(huán)化合物在制備腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的}目途。全文摘要本發(fā)明公開了能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的雜環(huán)化合物，還公開了該雜環(huán)化合物的制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明雜環(huán)化合物為通式(I)所示的結(jié)構(gòu)，其制備方法包括按現(xiàn)有技術(shù)方法制備咔啉羧酸；將咔啉羧酸的仲胺基用保護(hù)基保護(hù)后與L-氨基酸芐酯偶聯(lián)生成N位保護(hù)的咔啉酰-L-氨基酸芐酯；脫去保護(hù)基后在三乙胺催化下在甲醇中與丙酮縮合即得。體外試驗表明，本發(fā)明雜環(huán)化合物可有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對于抗腫瘤藥物的耐藥倍數(shù)，臨床中可作為腫瘤細(xì)胞耐藥抑制劑。文檔編號C07D471/14GK101239979SQ20071006367公開日2008年8月13日申請日期2007年2月7日優(yōu)先權(quán)日2007年2月7日發(fā)明者劉佳望,崔國輝,崔純瑩,彭師奇,明趙申請人:首都醫(yī)科大學(xué)