專利名稱：賴氨酸酮洛芬及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種氨基酸酮洛芬，尤其涉及賴氨酸酮洛芬及其制備方法。
本發(fā)明還涉及包含賴氨酸酮洛芬的藥物組合物。
背景技術：
酮洛芬及其手性對映體是一類2-芳基丙酸類非甾體抗炎藥，其主要作用機制為可逆性抑制環(huán)氧酶和脂氧酶，從而抑制前列腺素和白三烯的生物合成，發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎作用亦有中樞止痛作用。臨床主要用于治療各種關節(jié)炎、術后疼痛及慢性癌痛等，其療效優(yōu)于布洛芬。
酮洛芬為有機酸類藥物，難溶于水，體內(nèi)半衰期僅1.6～1.9h，胃腸給藥后主要分布于胃、小腸和腎內(nèi)，所以對胃腸道的刺激作用較大，臨床上主要的副作用為胃痛、胃灼熱感、惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、食欲不振、軟弱等，少量患者發(fā)生胃腸道出血。為了增加溶解度、減少不良反應和提高生物利用度，近10年來，國內(nèi)外學者對酮洛芬的新劑型及其制備工藝進行了深入研究，從而擴大酮洛芬臨床應用范圍。
中國專利申請02113592.4公開了具有鎮(zhèn)痛抗炎的精氨酸酮洛芬及其制備方法，用精氨酸與酮洛芬成鹽，并以結構式(I)表示的鹽或相應的異構體。在該專利申請中，僅是將精氨酸酮洛芬與10％阿拉伯膠進行藥效學比較，證明其具有鎮(zhèn)痛、消炎作用，但尚不能得知精氨酸酮洛芬是否保持了酮洛芬的藥效強度，也不能得知其是否具有較好的穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述技術問題，本發(fā)明的一個目的在于提供一種具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎功效的賴氨酸酮洛芬，其用賴氨酸與酮洛芬成鹽，保持并提高了酮洛芬的藥效強度，減小了臨床上酮洛芬的副作用，并增加制劑的穩(wěn)定性。
本發(fā)明的另一個目的在于提供所述賴氨酸酮洛芬的制備方法。
本發(fā)明的還一個目的在于提供包含所述賴氨酸酮洛芬的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種賴氨酸酮洛芬，其是用賴氨酸和酮洛芬成鹽得到，具有以下結構 所述賴氨酸酮洛芬是用賴氨酸和酮洛芬或相應異構體成鹽，解決了酮洛芬在水中溶解性，降低了其副作用，提高其安全性，增加了制劑的穩(wěn)定性，且保持并提高了酮洛芬的藥效強度，具有良好的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎功效。
本發(fā)明中賴氨酸和酮洛芬的摩爾比為1∶1。
所述賴氨酸可為L-賴氨酸、D-賴氨酸或D、L-賴氨酸。
所述酮洛芬包括酮洛芬及其相應的異構體，可為右旋酮洛芬、左旋酮洛芬或消旋酮洛芬。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種賴氨酸酮洛芬的制備方法，其是由賴氨酸和酮洛芬成鹽。
所述制備方法可為在反應容器中先加入賴氨酸和蒸餾水，溶解后再加入酮洛芬，同時攪拌至溶液澄清，冷凍干燥，得到白色塊狀物或粉末，即為賴氨酸酮洛芬。
本發(fā)明中賴氨酸和酮洛芬的摩爾比為1∶1。
所述賴氨酸可為L-賴氨酸、D-賴氨酸或D、L-賴氨酸。
所述酮洛芬可為右旋酮洛芬、左旋酮洛芬或消旋酮洛芬。
所述分段升溫真空冷凍干燥條件為20℃～-45℃，預凍2.5小時；-45℃～-40℃，升華3小時；-40℃～0℃，升華8小時；0℃～30℃，干燥8小時；30℃～35℃，干燥2.5小時；真空小于0.2Mbar，控制產(chǎn)品溫度最高不超過35℃，擱板溫度不超過40℃。
本發(fā)明通過解熱試驗、熱板法鎮(zhèn)痛試驗、扭體法鎮(zhèn)痛試驗、二甲苯致炎法抗炎作用、異常毒性試驗、安全性試驗、家兔股四頭肌刺激試驗、影響因素試驗等證明本發(fā)明利用賴氨酸和酮洛芬成鹽，解決了酮洛芬在水中的溶解性，降低或消除胃痛、胃灼熱感、惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、食欲不振、軟弱、胃腸道出血等副作用，提高了安全性；增加了制劑的穩(wěn)定性，同時保證并提高了酮洛芬的解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎的作用強度。
根據(jù)本發(fā)明的還一方面，本發(fā)明提供了一種用于鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎的藥物組合物，其包含賴氨酸酮洛芬以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。
由于賴氨酸酮洛芬與酮洛芬相比，改善了水溶性，因此所述藥物組合物可以為現(xiàn)有技術中適于不同給藥途徑的各種劑型，例如注射用制劑、口服制劑、粘膜給藥制劑、透皮給藥制劑等，具體地說，包括片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、可復制粉劑或液體制劑(如口服或無菌胃腸外溶液或懸浮液)等。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面通過對本發(fā)明較佳實施方式的描述，詳細說明但不限制本發(fā)明。
具體實施例方式
本發(fā)明所用試驗材料，如無特別說明，均為市售購買產(chǎn)品。
賴氨酸酮洛芬的制備實施例1在反應容器中先加入73.06克(0.4mol)L-賴氨酸和1000ml蒸餾水，溶解后再加入101.7g(0.4mol)消旋酮洛芬，同時攪拌至溶液澄清，冷凍干燥，得到171.2克白色塊狀物或粉末，即為賴氨酸酮洛芬，收率為98.0％，純度為99.2％。
冷凍干燥條件為20℃～-45℃，預凍2.5小時；-45℃～-40℃，升華3小時；-40℃～0℃，升華8小時；0℃～30℃，干燥8小時；30℃～35℃，干燥2.5小時；真空小于0.2Mbar，控制產(chǎn)品溫度最高不超過35℃，擱板溫度不超過40℃。
賴氨酸酮洛芬的藥效學試驗實施例2解熱試驗取體重1.6～2.0kg地家兔50只，雌雄各半，隨機分組，每組10只，灌胃(ig)。陰性對照組(生理鹽水1ml/kg)、陽性對照組(酮洛芬20mg/kg))、賴氨酸酮洛芬低劑量組(3.0mg/kg))、中劑量組(20mg/kg))、高劑量組(80mg/kg))。測量家兔正常體溫后，靜脈注射滅活大腸桿菌液(約1106/kg個細菌，比濁法計算)致熱。3～4hr后測量體溫作為發(fā)燒指標。待體溫升高1℃以上時，各組家兔按上述劑量分別ig給藥。給藥后于1、1.5、2、2.5h時測量體溫。以給藥后每個時間點體溫降低度數(shù)作為解熱指標。與升溫后給藥前的體溫比較。
結果見表1。結果表明，致熱升溫后，給藥前后自身對照*P＜0.05，**P＜0.01，賴氨酸酮洛芬的解熱效果相當于或強于酮洛芬。
表1賴氨酸酮洛芬對家兔體溫的影響(n＝10)

實施例3鎮(zhèn)痛試驗——熱板法取體重19～21g雌性小鼠50只，隨機分組，每組10只。分為10％阿拉伯膠組(空白組)，酮洛芬組(30mg/kg)，賴氨酸酮洛芬分為10mg/kg組、30mg/kg組、80mg/kg組，ig給藥。恒溫水浴熱板調(diào)至55±0.5℃，將小鼠放置在熱板上，每隔5min測1次，連續(xù)2次，求平均值。測試各小鼠正常的痛反應潛伏期，以小鼠舔后足、踢腿為痛反應指標。于ig給藥后0.5、1、1.5、2、2.5h時再測痛反應潛伏期。超過60s者以60s計算。
結果見表2。結果表明，賴氨酸酮洛芬組與空白組比較，三個劑量組的痛閾都有明顯差異，具有鎮(zhèn)痛效果。同劑量組賴氨酸酮洛芬與酮洛芬比較，賴氨酸酮洛芬鎮(zhèn)痛效果不低于酮洛芬。
表2賴氨酸酮洛芬對小鼠熱板法致痛的鎮(zhèn)痛作用(n＝10)

實施例4鎮(zhèn)痛試驗——扭體法取體重18～22g小鼠60只，雌雄各半，隨機分組，每組12只。分為10％阿拉伯膠組(空白組)，酮洛芬組(30mg/kg)，賴氨酸酮洛芬分為10mg/kg組、30mg/kg組、80mg/kg組，ig給藥。30min后，腹腔注射(ip)0.6％醋酸(0.2ml/只)致痛，以小鼠扭體(腹部內(nèi)陷、軀干與后肢伸張)臀部抬高為致痛反應指標。觀察記錄自給醋酸后15min內(nèi)的扭體次數(shù)。
結果見表3。結果表明，賴氨酸酮洛芬組與空白對照組比較，三個劑量組均減少小鼠扭體次數(shù)，P值小于0.01，具有鎮(zhèn)痛效果。同劑量組賴氨酸酮洛芬與酮洛芬比較，賴氨酸酮洛芬鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于酮洛芬。
表3賴氨酸對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(n＝12)

實施例5抗炎試驗——二甲苯致炎法取體重26～30g小鼠60只，雌雄各半，隨機分組，每組12只。分為生理鹽水(空白組)，酮洛芬組(30mg/kg)，賴氨酸酮洛芬分為10mg/kg組、30mg/kg組、80mg/kg組，ig給藥，1h后，用微量注射器將二甲苯0.05ml，滴于每只小鼠右耳內(nèi)側，左耳為空白對照。致炎2h后，將小鼠頸椎脫臼處死。沿耳廓剪下兩耳分放，在兩耳相同部位用9mm虹膜環(huán)鉆鉆取圓耳片。用1/10000天平稱重，以兩耳重量差值作為腫脹度指標。
結果見表4。結果表明，賴氨酸酮洛芬三個劑量組與生理鹽水組比較，P值均小于0.01具有顯著差異。有明顯的抗炎作用。同劑量組賴氨酸酮洛芬和酮洛芬的抗炎效果基本一致。
表4賴氨酸酮洛芬對二甲苯致炎的抗炎作用(n＝12)

賴氨酸酮洛芬的異常毒性試驗實施例6異常毒性試驗各選擇5只體重17～20g的健康小鼠，在試驗前及試驗的觀察期內(nèi)，均按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)。賴氨酸酮洛芬供試品溶液濃度分別為0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml，靜脈注射，每只小鼠分別給予供試品溶液0.5ml。全部小鼠在48小時內(nèi)未有死亡。
賴氨酸酮洛芬的安全性試驗實施例7致敏試驗賴氨酸酮洛芬供試品溶液(12mg/ml)腹腔注射給予豚鼠1.0mL/只，隔日一次，共三次，給藥后第14天及第21天分別股靜脈注射該品2.0mL/只，結果均未見豚鼠有過敏反應。給予1％蛋清的豚鼠在給予蛋清后第14天及第21天分別股靜脈注射蛋清后均出現(xiàn)過敏反應，且皆于15min內(nèi)死亡。
實施例8溶血試驗賴氨酸酮洛芬供試品溶液(12mg/ml)在體外試驗條件下，加樣0.25～4.0小時內(nèi)對家兔紅細胞無溶血作用和紅細胞凝集反應。放置24小時后也無溶血及紅細胞凝集現(xiàn)象。
實施例9血管刺激性試驗家兔耳靜脈注射給藥，取健康家兔10只，隨機分為兩組，每組5只。第一組賴氨酸酮洛芬供試品溶液(12mg/ml)劑量為5.0mL/kg；第二組，氯化鈉注射液5.0mL/kg。兩組每日注射一次，連續(xù)三日。結果家兔耳靜脈給藥部位肉眼觀察無明顯變化；病理切片顯微鏡檢顯示距注射部位1cm處血管、5cm處血管內(nèi)皮組織及周圍組織未見異常。
實施例10股四頭肌刺激性試驗取家兔2只，雌雄各一只，在每只家兔的兩腿股四頭肌處注射濃度為12mg/ml的賴氨酸酮洛芬，1ml/只。注射完48小時后放血處死家兔，解剖后取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應，按“注射劑刺激反應評分標準”換算相應的反應級。一般認為2只家兔4塊股四頭肌反應級之和小于10時，認為供試品的局部刺激試驗符合規(guī)定。
表5注射劑肌肉刺激試驗反應評分標準

試驗結果表明，家兔股四頭肌注射濃度為12mg/ml的賴氨酸酮洛芬1ml后48小時，兩只家兔股四頭肌均未見明顯刺激反應，4塊股四頭肌反應級均為0，和也為0。表明注射濃度為12mg/ml的賴氨酸酮洛芬1ml局部刺激試驗符合規(guī)定。
賴氨酸酮洛芬的穩(wěn)定性試驗實施例11影響因素試驗分別取酮洛芬和賴氨酸酮洛芬適量置于開口容器中，攤成5mm＜厚度＜10mm進行影響因素試驗的高溫試驗、高濕度試驗、強光照試驗，分別檢測性狀、溶液顏色和澄清度、相關物質(zhì)和含量。高溫試驗的條件60℃；高濕度試驗條件25℃，相對濕度90±5％；強光照試驗條件4500Lx±500Lx。分別于5天和10天取樣檢測，結果見表6、7。結果表明，酮洛芬與賴氨酸成鹽后，提高了酮洛芬的穩(wěn)定性。
表6酮洛芬影響因素考察試驗結果

表7賴氨酸酮洛芬影響因素考察試驗結果

本發(fā)明經(jīng)過解熱試驗、熱板法鎮(zhèn)痛試驗、扭體法鎮(zhèn)痛試驗、二甲苯致炎法抗炎作用、異常毒性試驗、安全性試驗、家兔股四頭肌刺激試驗、影響因素試驗等證明本發(fā)明利用賴氨酸和酮洛芬成鹽，解決了酮洛芬在水中的溶解性，可降低或消除胃痛、胃灼熱感、惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、食欲不振、軟弱、胃腸道出血等副作用，提高了安全性。增加了制劑的穩(wěn)定性，同時保證了酮洛芬的解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎的作用強度。
以上對本發(fā)明較佳實施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領域技術人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權利要求的范圍。
權利要求
1.一種賴氨酸酮洛芬，是用賴氨酸和酮洛芬成鹽得到，具有以下結構
2.權利要求1所述的賴氨酸酮洛芬，其特征在于，所述賴氨酸和酮洛芬的摩爾比為1∶1。
3.權利要求1所述的賴氨酸酮洛芬，其特征在于，所述賴氨酸為L-賴氨酸、D-賴氨酸或D、L-賴氨酸。
4.權利要求1所述的賴氨酸酮洛芬，其特征在于，所述酮洛芬為右旋酮洛芬、左旋酮洛芬或消旋酮洛芬。
5.一種賴氨酸酮洛芬的制備方法，包括在反應容器中先加入賴氨酸和蒸餾水，溶解后再加入酮洛芬，同時攪拌至溶液澄清，冷凍干燥，制備得到賴氨酸酮洛芬。
6.權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述賴氨酸和酮洛芬的摩爾比為1∶1。
7.權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述賴氨酸為L-賴氨酸、D-賴氨酸或D、L-賴氨酸。
8.權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述酮洛芬為右旋酮洛芬、左旋酮洛芬或消旋酮洛芬。
9.權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述冷凍干燥條件為20℃～-45℃，預凍2.5小時；-45℃～-40℃，升華3小時；-40℃～0℃，升華8小時；0℃～30℃，干燥8小時；30℃～35℃，干燥2.5小時；真空小于0.2Mbar，控制產(chǎn)品溫度最高不超過35℃，擱板溫度不超過40℃。
10.一種用于鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎的藥物組合物，包含權利要求1所述的賴氨酸酮洛芬以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的賴氨酸酮洛芬及其制備方法，其是用賴氨酸和酮洛芬以1∶1的摩爾比成鹽得到，與酮洛芬相比，所述賴氨酸酮洛芬保持并提高了酮洛芬的藥效強度，解決了酮洛芬在水中溶解性，降低了其副作用，提高其安全性，增加了制劑的穩(wěn)定性。
文檔編號C07C227/00GK1939893SQ20051008653
公開日2007年4月4日 申請日期2005年9月28日 優(yōu)先權日2005年9月28日
發(fā)明者馬骉, 孔雙泉, 姜桂榮, 宋夢薇, 張寧 申請人:北京賽生藥業(yè)有限公司