過在足W使聚合產(chǎn)物水合并且吸收抗微生物有效量的eP化的條件和 時(shí)間下將聚合產(chǎn)物浸入包含eP化的水溶液中，使eP化連接到水凝膠上?；蛘撸蒞使聚 合產(chǎn)物水合形成水凝膠，接著在足W使水凝膠吸收抗微生物有效量的eP化的條件和時(shí)間 下將其浸入包含eP化的溶液中。可W將所得水凝膠包裝在不含eP化或含有額外e化L 的包裝溶液中。
[0026]如本文所用的"抗微生物有效量的e化L"為當(dāng)與10化即PA(即低接種量）一起 培育24小時(shí)后使用活體外生物活性分析進(jìn)行測(cè)試時(shí)與對(duì)照水凝膠相比造成綠脈桿菌（PA) 至少2對(duì)數(shù)的殺滅值的eP化量。如本文所用的"活體外生物活性分析"意味著實(shí)質(zhì)上如 下文實(shí)例5中所述的分析，并且"對(duì)照水凝膠"意味著不包含eP化，但在其它方面與在活體 外生物活性分析中測(cè)試的含eP化水凝膠實(shí)質(zhì)上相同的水凝膠。此外，除非另有指示，否則 本文中提及對(duì)生物體的"對(duì)數(shù)殺滅值"意味著在與l〇4C即生物體一起培育24小時(shí)后使用活 體外生物活性分析獲得的對(duì)數(shù)殺滅值。在一些實(shí)例中，含eP化水凝膠造成PA至少4對(duì)數(shù) 的殺滅值。在其它實(shí)例中，含eP化水凝膠當(dāng)與l〇7C即生物體（即高接種量）一起培育24 小時(shí)后在活體外生物活性分析中測(cè)試時(shí)造成PA至少4對(duì)數(shù)的殺滅值。在其它實(shí)例中，當(dāng)與 低接種量的PA或甚至高接種量的PA-起培育24小時(shí)后在活體外生物活性分析中測(cè)試時(shí) 在含eP化水凝膠上未檢測(cè)到活PA，而對(duì)照鏡片支持PA生長(zhǎng)。在所述實(shí)例中，據(jù)稱抗微生 物水凝膠造成PA完全殺滅。在多個(gè)實(shí)例中，抗微生物水凝膠造成使用低接種量或甚至高接 種量的粘質(zhì)沙雷氏菌（SM)和/或金黃色葡萄球菌（SA)至少1對(duì)數(shù)的殺滅值或2對(duì)數(shù)的殺 滅值。如本文所用的SA、SMW及PA是指實(shí)例5的表3中所列的該些細(xì)菌的菌株，或?qū)刮?生物劑的敏感度與表3中所列的菌株實(shí)質(zhì)上相同的等效菌株。
[0027] 水凝膠在經(jīng)受下文實(shí)例4中所述的活體外eP化釋放條件，在下文中稱作"活體外 釋放分析"之后可W保留抗微生物有效量的e化L。如本文所用的eP化釋放時(shí)間是根據(jù) 活體外釋放分析。因此，舉例來說，據(jù)稱在eP化釋放24小時(shí)后造成PA2對(duì)數(shù)的殺滅值的 水凝膠意味著如下水凝膠；當(dāng)對(duì)其進(jìn)行活體外eP化釋放分析24小時(shí)并且此后對(duì)活體外生 物活性進(jìn)行測(cè)試時(shí)造成PA2對(duì)數(shù)的殺滅值。在一些實(shí)例中，水凝膠在eP化釋放48小時(shí)、 72小時(shí)、96小時(shí)、120小時(shí)或甚至168小時(shí)后造成PA、SM和/或SA至少2對(duì)數(shù)的殺滅值。 盡管本文所述的抗微生物的眼用裝置適合于所有配戴模態(tài)，但在eP化釋放48小時(shí)后保留 抗微生物有效量的eP化的水凝膠可能尤其適合于長(zhǎng)戴。任選地，可W使用實(shí)質(zhì)上如下文 實(shí)例6中所述的生物膜分析來測(cè)量eP化釋放之后水凝膠的抗微生物有效性。在多個(gè)實(shí)例 中，抗微生物水凝膠包含至少約0. 05重量％、0. 1重量％、0. 2重量％、0. 5重量％或1. 0重 量％eP化并且至多約2. 0重量％、3. 0重量％或4. 0重量％e^L，其中eP化的重量％ 是基于水凝膠的總干重。對(duì)于水凝膠隱形眼鏡，抗微生物有效量的非共價(jià)連接的eP化通 常為至少約 5yg、10yg、25yg、50yg、100yg或 150ygePIX并且至多約 300yg、400yg、 500yg或600yg。盡管在該些范圍內(nèi)的eP化量通常將對(duì)隱形眼鏡誘發(fā)的細(xì)菌性角膜炎 中最常牽設(shè)的眼部病原菌極其有效，但高于600yg的量對(duì)眼部組織無毒并且無刺激，并且 可W用于需要較高量的eP化的實(shí)例中。
[0028] 在一些實(shí)例中，水凝膠具有W下釋放型態(tài)；其中eP化釋放持續(xù)至少2小時(shí)，從而 產(chǎn)生持續(xù)抗微生物活性。如本文所用，提及所釋放的eP化的量是指如在活體外釋放分析 中所測(cè)試，從水凝膠中釋放持續(xù)既定持續(xù)時(shí)間的eP化的量。如果在活體外釋放分析的既 定持續(xù)時(shí)間結(jié)束與下一持續(xù)時(shí)間之間eP化的量顯著增加，那么據(jù)稱水凝膠展現(xiàn)eP化的 "緩釋"持續(xù)至少所述既定持續(xù)時(shí)間。舉例來說，如使用活體外釋放分析所測(cè)定，如果水凝膠 在0-2小時(shí)之間釋放30yge化L，并且在2-4小時(shí)之間釋放額外10yge化L，那么據(jù)稱水 凝膠持續(xù)緩釋eP化至少2小時(shí)。在一些實(shí)例中，水凝膠持續(xù)緩釋eP化至少4小時(shí)、6小 時(shí)、8小時(shí)或24小時(shí)。通常，eP化釋放的初始速率相對(duì)較高。該一有利之處在于在初始插 入眼用裝置后當(dāng)病原菌引入最有可能因操作而發(fā)生時(shí)，其提供eP化釋放的爆發(fā)化urst)。 可W平衡水凝膠的離子含量和包裝溶液中eP化的濃度W提供所需eP化釋放型態(tài)。在一 個(gè)實(shí)例中，水凝膠在2小時(shí)內(nèi)釋放至少lyg、5yg、10yg、20yg、30yg或40ygeP化并且 至多約60yg、80yg或lOOygePLL。在另一個(gè)實(shí)例中，水凝膠展現(xiàn)eP化的緩釋，從而經(jīng)2 小時(shí)釋放上述量的eP化并且在2小時(shí)與4小時(shí)之間釋放額外1yg、5yg、10yg或20yg 并且至多約30yg、40yg或60yge化L。在一些實(shí)例中，水凝膠具有W下釋放型態(tài)；其中 eP化釋放持續(xù)至少12小時(shí)，即，如使用活體外釋放分析所測(cè)定，水凝膠在12與24小時(shí)時(shí) 間點(diǎn)之間展現(xiàn)顯著eP化釋放。因此，包含水凝膠的隱形眼鏡當(dāng)配戴過夜時(shí)可W持續(xù)具有 抗微生物作用。我們已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，包裝在包含約200到約lOOOppmeP化的溶液中的離 子含量為約1. 6%到約2. 0%的水凝膠隱形眼鏡可W經(jīng)受活體外釋放持續(xù)7天并且保持為 抗微生物有效的。該在實(shí)例6中展示。
[0029] 水凝膠可任選地包含第二抗微生物劑W增強(qiáng)其抗微生物特性。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將 第二抗微生物劑并入水凝膠中可W產(chǎn)生協(xié)同抗微生物作用。舉例來說，包含約10yg聚季 錠鹽-1(9〇17〇11日*6口1111111-1，？9-1)并且不含其它抗微生物劑的離子娃酬水凝膠隱形眼鏡 對(duì)SA或SM無顯著活性，如與107個(gè)接種菌一起培育24小時(shí)后使用生物活性分析所測(cè)定 (描述于實(shí)例7中）。包含約200ygeP化并且不含其它抗微生物劑的相同類型的隱形眼 鏡造成SA約2對(duì)數(shù)的殺滅值和SM約1. 5對(duì)數(shù)的殺滅值。當(dāng)隱形眼鏡包含10ygPQ-1與 200ygeP化時(shí)，其可能造成SA約2. 5對(duì)數(shù)的殺滅值和SM4對(duì)數(shù)的殺滅值。據(jù)稱隱形眼鏡 包含協(xié)同增加其對(duì)SA和SM的抗微生物活性的量的PQ-1，該是因?yàn)閷?duì)該些生物體的抗微生 物活性顯著高于包含eP化并且不含PQ-1的鏡片與包含PQ-1并且不含eP化的鏡片的組 合活性。還可W使用實(shí)例6的活體外生物膜分析來測(cè)試由第二抗微生物劑提供的抗微生物 活性的協(xié)同增加?？蒞并入水凝膠中的其它第二抗微生物的實(shí)例包括其它抗微生物膚（例 如防御素（defensin))、聚六亞甲基雙脈（polyhexamethylenebiguanide，PHMB)、阿來西定 (alexidine)等。在一個(gè)特定實(shí)例中，水凝膠包含陰離子組分、eP化W及一定量的第二抗 微生物劑W協(xié)同增加對(duì)SA或SM的抗微生物活性，如活體外生物膜分析所測(cè)定。
[0030] 本文所述的抗微生物的眼用裝置對(duì)其打算接觸的眼部組織無刺激并且無毒。舉 例來說，接觸眼睛前段的隱形眼鏡對(duì)角膜上皮或結(jié)膜無刺激。根據(jù)ISO10993 (ANSI/AAMI/ ISO10993-5:對(duì)醫(yī)學(xué)裝置的生物學(xué)評(píng)估-章節(jié)5;活體外細(xì)胞毒性測(cè)試炬iological evaluationofmedicaldevices-Part5:Testsforinvitrocytotoxicity), 1999) 的活體外細(xì)胞毒性測(cè)試公認(rèn)為預(yù)測(cè)眼用裝置的活體內(nèi)生物兼容性。簡(jiǎn)單來說，在隱形眼 鏡的狀況下，從鏡片的包裝溶液中移出鏡片，并且在未沖洗或洗漆的情況下，通過與0. 8mL MEM-起與5 %小牛血清直接接觸而放置在L929細(xì)胞的匯合單層上。在37°C下于5 % C〇2中培育24小時(shí)后，依照USP準(zhǔn)則扣SP<87>生物學(xué)反應(yīng)性；美國(guó)藥典32/美國(guó)國(guó)家 藥品集27,美國(guó)藥典委員會(huì)，羅克維爾，馬里蘭州炬iologicalReactivity;化ited StatesPharmacopeia32/NationalFormulary27,UnitedStatesPharmacopeial Convention,Rockville,MD), 2009)，根據(jù)細(xì)胞病變?cè)u(píng)分法，由鏡片下方或周圍的細(xì)胞死亡 區(qū)域?qū)?xì)胞毒性進(jìn)行評(píng)分。如本文所用，如果使用該一分析將水凝膠的細(xì)胞病變等級(jí)評(píng)為 2或小于2,那么認(rèn)為所述水凝膠是"眼用可接受的"。理想的是，眼用裝置的細(xì)胞病變等級(jí) 將評(píng)為1或0,并且當(dāng)在使用1〇 4個(gè)接種菌和24小時(shí)培育的活體外生物活性分析中測(cè)試時(shí) 提供綠脈桿菌的至少4對(duì)數(shù)的殺滅值。
[0031] 我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將抗微生物有效量的eP化并入隱形眼鏡中可W在對(duì)鏡片的物理 特性（如光學(xué)清晰度、模數(shù)、可濕性等）無不利影響的情況下實(shí)現(xiàn)。舉例來說，本文所述的 隱形眼鏡是光學(xué)透明的，如根據(jù)ISO18369所測(cè)量，其在380nm到780nm之間的透光度為至 少 93%、95%或 97%。
[0032] 鑒于前述內(nèi)容，應(yīng)了解，常規(guī)的制造方法可W用于制造本文所述的抗微生物的眼 用裝置。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是一種制造未配戴的抗微生物的隱形眼鏡的方法，所述方 法包含：使單體混合物聚合得到鏡片形聚合產(chǎn)物中；任選地使聚合產(chǎn)物水合形成水凝膠； 將水凝膠或聚合產(chǎn)物浸入含有包裝溶液的包裝中；W及密封所述包裝，其中抗微生物有效 量的eP化非共價(jià)連接到水凝膠上。在一個(gè)實(shí)例中，eP化存在于其中浸有水凝膠的包裝 溶液中。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是一種制造經(jīng)包裝的抗微生物的水凝膠隱形眼鏡的方 法，其包括使鏡片形聚合產(chǎn)物或水凝膠隱形眼鏡與包含eP化的包裝溶液接觸的步驟。鏡 片形聚合產(chǎn)物與包裝溶液的接觸可W例如使得隱形眼鏡水合并且eP化連接到所得水凝 膠上。與鏡片形聚合產(chǎn)物或水凝膠隱形眼鏡接觸的包裝溶液可W例如包括約5化pm到約 10,OOOppm、尤其約10化pm到約