一種柿葉總黃酮的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種柿葉總黃酮的提取方法，柿子葉自然風干后粉碎并過60目篩，在一定量柿葉中添加一定濃度的乙醇水溶液，模擬胃腸道的PH值，在一定超聲波功率下超聲浸提，合并提取液，減壓低溫蒸干，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物。本發(fā)明的有益效果是提取工藝簡單，提取時間短，提取柿葉總黃酮得率高，生產(chǎn)成本低，模擬人體胃，大小腸的轉(zhuǎn)運吸收環(huán)境，有效成分吸收利用率高，可以大規(guī)模應(yīng)用于工業(yè)化提取。
【專利說明】
一種柿葉總黃酮的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于化合物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種柿葉總黃酮的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]柿葉為柿科柿屬植物柿D1spyroskaki的葉，長期作為天然藥物入藥。柿葉中富含黃酮類化合物，這些黃酮類化合物大多都以槲皮素、山奈素及其苷類形式存在，研究表明，該類物質(zhì)具有抗氧化、抗過敏、抗菌，活血止血、增強免疫，保護心腦血管等藥理作用，從柿葉中提取的總黃酮在釀造食醋方面有巨大市場價值。
[0003]采用不同的提取方法得到的柿葉黃酮種類和含量不同，目前已經(jīng)公開的提取方法有溶劑法提取，雙水相提取，超聲波或微波輔助提取，酶和半仿生法提取。常用的提取方法是溶劑提取法，溶劑提取存在工藝耗時長，使用溶劑多，溶劑及溶劑回收成本高，得率低雜質(zhì)多等問題。超聲波輔助提取法是利用超聲波能增大物質(zhì)分子運動頻率和速度，從而提高目標成分溶出速度和次數(shù)，縮短提取時間的提取方法。該方法加速了細胞內(nèi)有效成分的釋放、擴散和溶解，從而能顯著提高提取率。近幾年，新的中草藥提取新技術(shù)半仿生法是根據(jù)仿生學原理，模擬人體胃，大小腸的轉(zhuǎn)運吸收環(huán)境，采用選定PH值的酸性水和堿性水，連續(xù)提取得到含有效成分高的活性混合物。半仿生法提取是一種活性指導下的導向分離方法，具有能保留更多的有效成分，能縮短生產(chǎn)周期，能降低成本的優(yōu)勢，且提取液中葉綠素含量較低，有利于后期精制。超聲波輔助溶劑提取與半仿生技術(shù)結(jié)合可以解決目前柿葉總黃酮提取生產(chǎn)周期長，成本高，有效成分得率低的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了超聲波輔助與半仿生技術(shù)結(jié)合的一種柿葉黃酮提取新技術(shù)，目的在于解決目前柿葉總黃酮提取存在的工藝耗時長，使用溶劑多，成本高，得率低雜質(zhì)多等問題。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:柿葉自然風干后粉碎并過60目篩，在柿葉中添加乙醇水溶液，半仿生模擬胃腸條件PH值，超聲浸提三次，合并提取液，減壓低溫蒸干，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物。
[0006]進一步，所述三次超聲浸提的半仿生模擬胃腸條件PH值分別為2.0,7.5和8.3。
[0007]進一步，所述乙醇水溶液濃度為70%。
[0008]進一步，所述每克柿葉添加乙醇水溶液I OmL。
[0009]進一步，所述超聲浸提時間為45min。
[0010]進一步，所述超聲浸提所用超聲波功率為400W。
[0011 ]本發(fā)明的有益效果是提取工藝簡單，提取時間短，提取柿葉總黃酮得率高，生產(chǎn)成本低，模擬人體胃，大小腸的轉(zhuǎn)運吸收環(huán)境，有效成分吸收利用率高，可以大規(guī)模應(yīng)用于工業(yè)化提取。
【附圖說明】
[0012]圖1是PH設(shè)置對柿葉總黃酮得率的影響示意圖；
[0013]圖2是提取劑乙醇濃度對柿葉總黃酮得率的影響示意圖；
[0014]圖3是液固比對柿葉總黃酮得率的影響示意圖；
[0015]圖4是提取時間對柿葉總黃酮得率的影響不意圖；
[0016]圖5是超聲波功率對柿葉總黃酮得率的影響示意圖。
【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進行詳細說明。
[0018]本發(fā)明以柿葉總黃酮提取分離為目標，考察了提取液乙醇濃度、3次提取液的PH設(shè)置、液固比、提取時間和超聲波功率對柿葉總黃酮提取的影響，從而得出較佳的提取條件。本發(fā)明提取方法步驟如下:
[0019](I)三次提取液的PH設(shè)置確定
[0020]準確稱取5g柿葉，液固比10mL/g，加入一定濃度乙醇水溶液，模擬胃腸道的三個PH值，分別加入鹽酸，不同PH值氨-氯化銨緩沖溶液，在一定超聲波功率下超聲浸提一定時間，合并三次提取液，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物，以蘆丁為標準物質(zhì)，按標準曲線方程方法測出總黃酮的含量。測得總黃酮得率與三次提取液PH設(shè)置的關(guān)系。
[0021]柿葉總黃酮得率(Y)=(提取物中總黃酮的質(zhì)量/原料的質(zhì)量)*100。，
[0022](2)提取劑乙醇濃度的確定
[0023]準確稱取5g柿葉，液固比10mL/g，以(I)部分實驗優(yōu)化確定的模擬胃腸道的三個PH值為仿生條件，在一定超聲波功率下超聲浸提一定時間，合并三次提取液，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物，以蘆丁為標準物質(zhì)，按標準曲線方程方法測出總黃酮的含量。測得總黃酮得率與提取劑乙醇濃度的關(guān)系。
[0024](3)液固比的確定
[0025]準確稱取5g柿葉，以一定的液固比，以(I)部分實驗優(yōu)化確定的模擬胃腸道的三個PH值為仿生條件，以(2)部分實驗優(yōu)化確定濃度的乙醇水溶液為提取劑，在一定超聲波功率下超聲浸提一定時間，合并三次提取液，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物，以蘆丁為標準物質(zhì)，按標準曲線方程方法測出總黃酮的含量。測得總黃酮得率與液固比的關(guān)系。
[0026](4)提取時間的確定
[0027]準確稱取5g柿葉，以(3)部分確定的液固比，，以(I)部分實驗優(yōu)化確定的模擬胃腸道的三個PH值為仿生條件，以(2)部分實驗優(yōu)化確定濃度的乙醇水溶液為提取劑，在一定超聲波功率下超聲浸提一定時間，合并三次提取液，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物，以蘆丁為標準物質(zhì)，按標準曲線方程方法測出總黃酮的含量。測得總黃酮得率與提取時間的關(guān)系。
[0028](5)超聲波功率的確定
[0029]準確稱取5g柿葉，以(3)部分確定的液固比，，以(I)部分實驗優(yōu)化確定的模擬胃腸道的三個PH值為仿生條件，以(2)部分實驗優(yōu)化確定濃度的乙醇水溶液為提取劑，在一定超聲波功率下超聲浸提(4)部分實驗優(yōu)化確定的浸提時間，合并三次提取液，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物，以蘆丁為標準物質(zhì)，按標準曲線方程方法測出總黃酮的含量。測得總黃酮得率與超聲波功率的關(guān)系。
[0030]柿葉總黃酮提取驗證:
[0031 ] (I)三次提取液的PH設(shè)置確定
[0032]稱5g柿葉，液固比10mL/g，乙醇濃度80 %，超聲波功率400W，提取30min，模擬胃酸性環(huán)境的PH值取2.0-2.4，模擬小腸弱堿性環(huán)境的PH值取7.2-7.8，模擬大腸堿性環(huán)境的PH值取8.0-8.6，選取胃、小腸、大腸的運轉(zhuǎn)環(huán)境三因素，進行正交試驗設(shè)計，優(yōu)選三次提取液的PH設(shè)置，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，7號試樣的柿葉黃酮含量最高，達到0.599%，即酸性環(huán)境PH 2.0、弱堿性環(huán)境PH7.5、堿性環(huán)境PH 8.3。因此后續(xù)實驗中三次提取液的PH分別為2.0、7.5和8.3。
[0033](2)提取劑乙醇濃度的確定
[0034]稱5g柿葉，液固比10mL/g，以濃度分別為O % ,30% ,50% ,70%和95 %的乙醇水溶液為提取劑，依次加入PH 2.0鹽酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化銨緩沖溶液，超聲波功率400W，提取30min，結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，柿葉總黃酮的得率隨乙醇濃度升高先增大，當用70%乙醇提取時，有最高峰值，隨后柿葉總黃酮的得率隨乙醇濃度升高而減小。這可能是因為低濃度的乙醇易提取出高極性的黃酮苷，而高濃度的乙醇易提取出低極性的黃酮苷元，所以選擇70%乙醇作為柿葉總黃酮的提取溶劑。
[0035](3)液固比的確定
[0036]稱5g柿葉，70%乙醇水溶液為提取劑，依次加入PH 2.0鹽酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化銨緩沖溶液，超聲波功率400W，提取30min，按液固比6mL/g、8mL/g、10mL/g、12mL/g和15mL/g依次進行浸提，考察了提取液固比對柿葉總黃酮得率的影響，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，柿葉總黃酮的得率隨液固比增大而增大，因為溶液量大，有利于傳質(zhì)進行，但在液固比為10后變化較小，考慮液固比增大，一時增大成本，二是雜質(zhì)會隨之浸出出來過多，所以選擇液固比為10作為較佳的實驗條件。
[0037](4)提取時間的確定
[0038]稱5g柿葉，液固比10mL/g，以70 %乙醇水溶液為提取劑，依次加入PH 2.0鹽酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化銨緩沖溶液，超聲波功率400W，考察的提取時間分別為5、15、30、45、55、65min，測得提取時間對柿葉總黃酮得率的影響，結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，提取時間在5至45min內(nèi)，得率隨提取時間延長明顯增高，提取45min后，得率變化已經(jīng)很小了，這可能是超聲波輔助使有效成分溶出在較短的時間內(nèi)達到類平衡，所以選擇45min作為提取時間。
[0039](5)超聲波功率的確定
[0040]稱5g柿葉，液固比10mL/g，以70 %乙醇水溶液為提取劑，依次加入PH 2.0鹽酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化銨緩沖溶液，提取時間45min，考察的超聲波功率分別為200W、300W、400W、500W、600W，結(jié)果如圖5所示。由圖5可知，隨著超聲功率提高柿葉黃酮得率先變大后減小，在400W處有達到平衡，所以選擇400W作為超聲波功率。
[0041]本發(fā)明的優(yōu)點還在于:以柿葉總黃酮得率為指標，通過實驗研究，得到的超聲波輔助溶劑與半仿生法結(jié)合提取柿葉總黃酮的較佳工藝條件為:以70%乙醇(V/V)為提取溶劑，液固比10mL/g，模擬胃腸三次提取液的PH分別為2.0,7.5和8.3，超聲功率400W，提取45min，柿葉總黃酮得率約在0.6 %左右，為工業(yè)化提取柿葉總黃酮提供參考。
[0042]以上所述僅是對本發(fā)明的較佳實施方式而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施方式所做的任何簡單修改，等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于按照以下步驟進行:柿葉自然風干后粉碎并過60目篩，在柿葉中添加乙醇水溶液，半仿生模擬胃腸條件PH值，超聲浸提三次，合并提取液，減壓低溫蒸干，經(jīng)干燥得到柿葉總黃酮提取物。2.按照權(quán)利要求1所述一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于:所述三次超聲浸提的半仿生模擬胃腸條件PH值分別為2.0,7.5和8.3。3.按照權(quán)利要求1所述一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于:所述乙醇水溶液濃度為 70%。4.按照權(quán)利要求1所述一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于:所述每克柿葉添加乙醇水溶液1mL。5.按照權(quán)利要求1所述一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于:所述超聲浸提時間為45min06.按照權(quán)利要求1所述一種柿葉總黃酮的提取方法，其特征在于:所述超聲浸提所用超聲波功率為400W。
【文檔編號】A61K36/44GK105963336SQ201610310481
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月11日
【發(fā)明人】盧鑫, 張琳, 李曉樂, 張曉杰, 左國強, 陳潔忠, 王愛菊, 劉改云
【申請人】盧鑫