專利名稱：葛根提取工藝、葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種葛根提取工藝、葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
葛根，為豆科植物野葛，是中國(guó)南方一些省區(qū)的一種常食蔬菜，其味甘涼可口，常作煲湯之用。其主要成分是淀粉，此外還含有約12%的黃酮類化合物，包括大豆(黃豆)甙、大豆甙元、葛根素等10余種，并含有胡蘿卜甙、氨基酸、香豆素類等，可作為藥物應(yīng)用。目前，運(yùn)用于葛根素的提取方法主要有溶劑提取法、微波輔助萃取法、超聲提取和超聲水解法等，其主要缺點(diǎn)在于，提取效率低下，操作較為繁瑣，葛根總黃酮提取率、葛根素提取率和浸膏得率普遍較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題，提出一種提取率高、測(cè)定方法可靠的葛根提取工藝、葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下葛根提取工藝，其特征在于，包括如下步驟①、乙醇提取向葛根中加入60%乙醇，加熱回流，于70°C條件下提取2次，得乙醇提取液；第一次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為12 1，提取時(shí)間為1.5h;第二次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為10 1，提取時(shí)間為Ih;②、樹(shù)脂吸附將乙醇提取液在DlOl型大孔吸附樹(shù)脂中進(jìn)行吸附，DlOl型大孔吸附樹(shù)脂與乙醇提取液的重量比為7 :1，吸附完成后用70%乙醇作為洗脫劑洗脫，70%乙醇與乙醇提取液的重量比為12 :1，再回收乙醇洗脫液；③、將乙醇洗脫液減壓濃縮，回收乙醇至濃縮液無(wú)醇味，濃縮液比重為I. 2 ；④、將濃縮液采用正丁醇萃取4次，濃縮液與4次正丁醇添加量的重量比為2 6 6:3:3，合并正丁醇萃取液；⑤、將萃取液再次濃縮，得浸膏，浸膏的比重為I. I I. 2 ;⑥、將浸膏烘干，得葛根素提取物。本發(fā)明將不同的提取方法進(jìn)行比較后，篩選出較適合的提取方法為乙醇提取，然后采用正交試驗(yàn)法考察乙醇提取葛根的各影響因素，以多指標(biāo)綜合評(píng)分法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，優(yōu)選工藝條件，得到葛根提取的最佳條件為，從而為開(kāi)發(fā)利用葛根資源提供依據(jù)。本發(fā)明還公開(kāi)了葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法，包括如下步驟①、葛根素含量的HPLC測(cè)定色譜條件色譜柱為Hyper silODS C18柱,20mmX 4. 6mm, 5Lm,大連依利特科學(xué)儀器有限公司，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，柱溫為室溫，流動(dòng)相為體積比為25 75的甲醇和水，流速為I. OmL/min，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；精密稱取葛根素對(duì)照品8. 42mg置IOmL容量瓶中，以甲醇溶解定容；以此為母液，依次配成O. 0210,0. 0421,0. 0842,0. 168,0. 337mg/mL5 個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液；分別吸取上述對(duì)照品溶液各5 μ L，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定；以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算得回歸方程為Y=I. 6+20870. TL, r = O. 99996 ； 葛根素在O. 0210 O. 337mg/mL時(shí)峰面積積分值與濃度線性關(guān)系良好；②、葛根總黃酮含量的UV測(cè)定精密稱取葛根素對(duì)照品8. 23mg置IOmL量瓶中，以甲醇溶解定容；以此為母液，依次配成2. 06,4. 12,6. 18,8. 24、10. 3mg/mL5個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液；分別測(cè)定250nm處的吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算得回歸方程為Υ=69· 597Χ+0. 01463，r=0. 9998 ；總黃酮以葛根素計(jì)在O. 0021 O. 0103mg/mL線性關(guān)系良好；③、浸膏得率的測(cè)定取浸膏50mL，置已干燥至恒重的IOOmL蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置烘箱內(nèi)105°C干燥3h，取出置干燥器內(nèi)冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量。本發(fā)明選擇的測(cè)定方法，具有檢測(cè)效率高，測(cè)定方法可靠等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式一、提取實(shí)施例葛根提取工藝，包括如下步驟①、乙醇提取向葛根中加入60%乙醇(體積百分比，下同)，加熱回流，于70°C條件下提取2次，得乙醇提取液；第一次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為12 1，提取時(shí)間為1.5h;第二次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為10 1，提取時(shí)間為Ih;②、樹(shù)脂吸附將乙醇提取液在DlOl型大孔吸附樹(shù)脂中進(jìn)行吸附，DlOl型大孔吸附樹(shù)脂與乙醇提取液的重量比為7:1，吸附完成后用70%乙醇(體積百分比，下同)作為洗脫劑洗脫，70%乙醇與乙醇提取液的重量比為12 :1，再回收乙醇洗脫液；③、將乙醇洗脫液減壓濃縮，回收乙醇至濃縮液無(wú)醇味，濃縮液比重為I. 2 ；④、將濃縮液采用正丁醇萃取4次，濃縮液與4次正丁醇添加量的重量比為2 6 6:3:3，合并正丁醇萃取液；⑤、將萃取液再次濃縮，得浸膏，浸膏的比重為I. I I. 2 ;⑥、將浸膏烘干，得葛根素提取物。
二、葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法實(shí)施例①、葛根素含量的HPLC測(cè)定色譜條件色譜柱為Hyper sil ODS C18柱,20mmX 4. 6mm, 5Lm,大連依利特科學(xué)儀器有限公司，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，柱溫為室溫，流動(dòng)相為體積比為25 75的甲醇和水，流速為1. OmL/min，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；精密稱取葛根素對(duì)照品8. 42mg置IOmL容量瓶中，以甲醇溶解定容；以此為母液，依次配成O. 0210,0. 0421,0. 0842,0. 168,0. 337mg/mL5 個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液；分別吸取上述對(duì)照品溶液各5 μ L，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定；以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算得回歸方程為Y=1. 6+20870. TL, r = 0. 99996 ；葛根素在O. 0210 O. 337mg/mL時(shí)峰面積積分值與濃度線性關(guān)系良好；②、葛根總黃酮含量的UV測(cè)定精密稱取葛根素對(duì)照品8. 23mg置IOmL量瓶中，以甲醇溶解定容；以此為母液，依次配成2. 06,4. 12,6. 18,8. 24、10. 3mg/mL5個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液；分別測(cè)定250nm處的吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算得回歸方程為Y = 69. 597X+0. 01463，r = O. 9998 ；總黃酮以葛根素計(jì)在O. 0021 O. 0103mg/mL線性關(guān)系良好；③、浸膏得率的測(cè)定取浸膏50mL，置已干燥至恒重的IOOmL蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置烘箱內(nèi)105°C干燥3h，取出置干燥器內(nèi)冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量。三、提取工藝條件的選擇1、乙醇提取工藝條件的選擇在整個(gè)提取過(guò)程中，提取所用乙醇的濃度和量以及提取時(shí)間對(duì)葛根有效成分的影響較大，故采用正交試驗(yàn)進(jìn)一步優(yōu)選醇提的最佳條件。按L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表I。稱取葛根各20g，按L9 (34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表的條件進(jìn)行試驗(yàn)。提取液濾過(guò)后合并，分別測(cè)葛根素、葛根總黃酮、浸膏得率，并進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)分。評(píng)分時(shí)以各指標(biāo)的最大值為參照將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化，再給出不同的權(quán)重。葛根素和總黃酮的權(quán)重系數(shù)設(shè)為O. 4。在有效成分明顯的前提下，浸膏得率越高則純度越低，因此設(shè)負(fù)權(quán)重系數(shù)為-O. 2。以綜合值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)表2。其中，綜合評(píng)分Y = O. 4X1 X 100/130. 2+0. 4X2 X 100/51. 03-0. 2X3 X 100/0. 2604。表I正交試驗(yàn)因素水平
權(quán)利要求
1.葛根提取工藝，其特征在于，包括如下步驟 ①、乙醇提取 向葛根中加入60%乙醇，加熱回流，于70°C條件下提取2次，得乙醇提取液； 第一次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為12:1，提取時(shí)間為I. 5 h ; 第二次提取時(shí)葛根與60%乙醇的重量比為10:1，提取時(shí)間為I h ； ②、樹(shù)脂吸附 將乙醇提取液在DlOl型大孔吸附樹(shù)脂中進(jìn)行吸附，DlOl型大孔吸附樹(shù)脂與乙醇提取液的重量比為7 :1，吸附完成后用70%乙醇作為洗脫劑洗脫，70%乙醇與乙醇提取液的重量比為12 :1，再回收乙醇洗脫液； ③、將乙醇洗脫液減壓濃縮，回收乙醇至濃縮液無(wú)醇味，濃縮液比重為I.2 ； ④、將濃縮液采用正丁醇萃取4次，濃縮液與4次正丁醇添加量的重量比為26 6 3 3，合并正丁醇萃取液； ⑤、將萃取液再次濃縮，得浸膏，浸膏的比重為I.I I. 2 ; ⑥、將浸膏烘干，得葛根素提取物。
2.葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟 ①、葛根素含量的HPLC測(cè)定 色譜條件色譜柱為Hyper sil ODS C18柱,20 mmX4. 6 mm, 5 Lm,大連依利特科學(xué)儀器有限公司，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，柱溫為室溫，流動(dòng)相為體積比為25 75的甲醇和水，流速為I.0 mL/min，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ； 精密稱取葛根素對(duì)照品8. 42 mg置10 mL容量瓶中，以甲醇溶解定容； 以此為母液，依次配成0. 0210、0. 0421、0. 0842、0. 168,0. 337 mg/mL 5個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液； 分別吸取上述對(duì)照品溶液各5 UL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定；以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 計(jì)算得回歸方程為Y=L 6+20870. 7X, r=0. 99996 ； 葛根素在0. 0210 0. 337 mg/mL時(shí)峰面積積分值與濃度線性關(guān)系良好； ②、葛根總黃酮含量的UV測(cè)定 精密稱取葛根素對(duì)照品8. 23 mg置10 mL量瓶中，以甲醇溶解定容； 以此為母液，依次配成2.06、4.12、6.18、8.24、10.3 mg/mL 5個(gè)濃度梯度的對(duì)照品溶液； 分別測(cè)定250 nm處的吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 計(jì)算得回歸方程為 Y=69. 597X+0. 01463，r=0. 9998 ； 總黃酮以葛根素計(jì)在0. 0021 0. 0103mg/mL線性關(guān)系良好； ③、浸膏得率的測(cè)定 取浸膏50 mL，置已干燥至恒重的100 mL蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置烘箱內(nèi)105 °C干燥,3 h，取出置干燥器內(nèi)冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種葛根提取工藝、葛根素及葛根總黃酮測(cè)定方法。提取工藝依次采取兩次乙醇提取、樹(shù)脂吸附、濃縮回收乙醇，正丁醇萃取、濃縮烘干等加工工序。本發(fā)明將不同的提取方法進(jìn)行比較后，篩選出較適合的提取方法為乙醇提取，然后采用正交試驗(yàn)法考察乙醇提取葛根的各影響因素,以多指標(biāo)綜合評(píng)分法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,優(yōu)選工藝條件，得到葛根提取的最佳條件為，從而為開(kāi)發(fā)利用葛根資源提供依據(jù)。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102973643SQ201210544150
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者朱峰, 朱方敏, 朱莉, 郭俊, 劉霞 申請(qǐng)人:安徽珠峰生物科技有限公司