專利名稱：腦心清片在制備防治神經(jīng)功能退化癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及腦心清片在制備防治神經(jīng)功能退化癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
“腦心清片”是由柿葉的乙酸乙酯提取物為活性成分制成的中成藥，主要用于治療腦動脈硬化癥、短暫腦缺血發(fā)作、腦血栓形成、腦血栓形成后遺癥、冠心病心絞痛等癥。
神經(jīng)功能退化癥是中老年人群常見病，其中的老年人癡呆癥是一種以智力、記憶力減退為特征的神經(jīng)退化性疾病，包括AD和VD，AD病最突出的障礙是認知記憶障礙，VD則是以腦缺血損傷為主因的神經(jīng)退化癥疾病。國內(nèi)每年用于神經(jīng)功能退化癥疾病的治療費用高達上十億元，全球更是高達數(shù)十億美元，給家庭和社會帶來沉重負擔(dān)。該病的防治不僅是一個重大的醫(yī)學(xué)問題，同時也是一個嚴峻的社會問題，所以我們有必要開發(fā)出防治神經(jīng)功能退化癥的新藥。
中醫(yī)理論認為神經(jīng)功能退化癥是在腎氣與五臟逐漸虛衰基礎(chǔ)上，由于氣滯、血瘀、痰濁所致，即腎精虧虛是本，陰陽偏虛為變，而瘀痰阻竅是發(fā)病的關(guān)鍵，且其發(fā)病與衰老進程密切相關(guān)。柿葉味苦、性寒，具有活血化瘀、清肺、清熱解毒、清血利尿、等功效。所以推測以柿葉提取物為原料的腦心清片可用于神經(jīng)功能退化癥的防治。
目前，神經(jīng)退化性疾病尚無好的治療方法和藥物，主要是針對不同的病因假說，提出了多種替代性藥物治療的方法。如加蘭他敏、石杉堿甲(哈伯因)、維生素E、神經(jīng)生長因子(NGF)、褪黑素治療AD，多巴胺治PD。但這些臨床用藥有的又因其毒副作用而限制了應(yīng)用，因此開發(fā)新的治療神經(jīng)退化癥的藥物很有必要。
腦心清片已臨床應(yīng)用多年，未見有用于防治神經(jīng)功能退化癥的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是進一步拓展“腦心清”片的應(yīng)用范圍，為防治神經(jīng)功能退化癥提供一種新產(chǎn)品。
本發(fā)明通過藥效實驗和臨床試驗證實“腦心清片”可用于制備防治神經(jīng)功能退化癥的藥物，尤其是用于制備防治老年癡呆藥物。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面用“腦心清”片在動物體內(nèi)試驗和人體臨床試驗結(jié)果，說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
動物體內(nèi)試驗一、腦心清片對AlCl3造成AD病模型大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能的影響1.實驗材料腦心清片(每片含干膏50mg)，用生理鹽水配成合適濃度的混懸液；試驗動物用健康雌性SD大鼠90只，體重340g～360g，大鼠隨機分為正常組(N組)、模型組(M組)、腦心清小劑量(NXQ1組)、腦心清中劑量(NXQ2組)、腦心清高劑量組(NXQ3組)、對照組(加蘭他敏30mg)，每組15只。
2.主要試劑和儀器AlCl3(Sigma公司)；加蘭他敏(Sigma公司)；MG2型Y電迷宮儀。
3.實驗方法3.1 AD模型的制作M組、NXQ1、2、3組、加蘭他敏組大鼠每天腹腔注射1ml濃度為9mg/ml的滅菌AlCl3T溶液，每連續(xù)注射3天，間隔1天，共計72天。N組大鼠腹腔注射1ml滅菌生理鹽水，注射周期和時間同上。
3.2給藥(和AD模型的制作同時進行)NXQ1、2、3組、加蘭他敏組大鼠每天灌胃15ml/kg/次，每天二次，每連續(xù)灌胃7天，間隔1天，共計72天。NXQ1組每次灌胃腦心清20mg/kg(相當(dāng)成人劑量的1/2倍)，NXQ2組灌胃40mg/kg(相當(dāng)成人劑量的1倍)，NXQ3組灌胃80mg/kg(相當(dāng)成人劑量的2倍)，加蘭他敏60mg/kg(相當(dāng)成人劑量的2倍)，N組和M組大鼠灌胃等量生理水，周期和時間同上。
3.3記憶行為測定造模和用藥結(jié)束后，在夜晚安靜和避光的條件下，用Y型電迷宮儀訓(xùn)練和測定大鼠的學(xué)習(xí)獲得和記憶保持能力，電壓90V，時間延遲是1s，連續(xù)訓(xùn)練和測定10次/只/天，同時記錄大鼠的逃避潛伏期和逃避正確率等，連續(xù)4天。受電刺激后，大鼠從通電臂燈源處直接逃至安全臂燈源處為正確逃避，所用時間為逃避潛伏期。如果電刺激后大鼠不逃避或逃避后在中途停止不動，則它們的逃避潛伏期按正常大鼠平均逃避潛伏期的2倍計算。
3.4數(shù)據(jù)處理數(shù)值均用均值±標(biāo)準差表示。用雙樣本異方差t檢驗比較組間逃避潛伏期的差異顯著性，用秩和檢驗比較組間逃避正確率的差異顯著性。
4.結(jié)果4.1腦心清對大鼠Y迷宮逃避正確率的影響在連續(xù)訓(xùn)練前3天的測試中，M組的逃避正確率最低，NXQ高劑量組的最高。至第4天，M組的逃避正確率沒有再明顯升高，而其他5組的繼續(xù)升高，M組的逃避正確率明顯低于N組(P＜0.05)，NXQ1、2、3和加蘭他敏組明顯高于M組(P＜0.05，或P＜0.001)(見表1)。
表1各組大鼠Y迷宮逃避正確率(x±s)

注與N組比較#P＜0.05；與M組比較*P＜0.05，**P＜0.0012下同。
4.2腦心清對大鼠Y迷宮逃避潛伏期的影響連續(xù)訓(xùn)練3天后，第4天測定各組大鼠的逃避潛伏期。M組的逃避潛伏期差異很大，比N組顯著性延長(P＜0.05)；NXQ1、2、3組和加蘭他敏組都比M組顯著性縮短(P＜0.05，或P＜0.01)，以NXQ中、高劑量組更為顯著。(見表2)表2各組大鼠Y迷宮逃避潛伏期(x±s)

注與N組比較#P＜0.05；與M組比較*P＜0.05，**P＜0.00124.3.腦心清片對大鼠Y迷宮逃避行為方式的影響M組表現(xiàn)為逃避啟動障礙，個別大鼠根本就不逃避，逃避中途停止或終點錯誤。給藥干預(yù)后，腦心清片中、高劑量和加蘭他敏組的逃避行為方式明顯改善(見表3)。
表3各組大鼠Y迷宮逃避行為方式的差異

結(jié)論AlCl3復(fù)制的大鼠AD模型是研究AD發(fā)病機制和防治藥物篩選的動物模型之一。給AlCl3造成阿爾茨海默病模型大鼠服用腦心清片后以Y迷宮測試，結(jié)果小鼠學(xué)習(xí)和記憶功能得以改善。表明腦心清片對老年性癡呆有治療作用。
二、腦心清片對前腦缺血損傷神經(jīng)元的保護作用1.實驗材料腦心清片(每片含干膏50mg)，用生理鹽水配成合適濃度的混懸液；試驗動物用健康雌性SD大鼠90只，體重180g～220g，大鼠隨機分為正常組(N組)、模型組(M組)、腦心清小劑量(NXQ1組)、腦心清中劑量(NXQ2組)，腦心清高劑量組(NXQ3)、對照組(天保寧)每組15只。給藥給藥12天(缺血再灌注前4天，后7天)。腹腔灌胃水，每日2次。
2.實驗方法缺血再灌注損傷模型制備參照《藥理實驗方法學(xué)》Pulsinelli大鼠四血管阻斷前腦缺血模型進行。
前腦缺血再灌注用電凝椎基底動脈阻斷椎動脈血流24小時后，用動脈夾夾閉兩側(cè)頸總動脈，阻斷血流15分鐘，造成前腦缺血。前腦缺血模型成功的大鼠立即出現(xiàn)翻正反射消失，瞳孔擴大等等。15分鐘后去除動脈夾，恢復(fù)血流供應(yīng)?；謴?fù)血流供應(yīng)后30～50分鐘內(nèi)大鼠重新站立起來，恢復(fù)自主活動，全腦缺血再灌注造型成功。將大鼠置回籠中飼養(yǎng)，按給藥方案給藥。每天觀察大鼠行為和存活情況。缺血再灌注7天后殺死動物，取大腦海馬固定切片觀察腦神經(jīng)細胞凋亡和形態(tài)變化；并計算存活的錐體細胞密度(個/mm)。實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)以x±s表示，用方差分析和t檢驗法分析各組數(shù)據(jù)差異的顯著性。
3、實驗結(jié)果1.大鼠腦海馬組織光學(xué)顯微鏡下組織形態(tài)低倍鏡下，正常大鼠腦海馬組織顯“C”形，分為CA1、CA2、CA3區(qū)，CA1區(qū)有3～4層錐體細胞，排列整齊；高倍鏡下，錐體細胞核大而園，有1～2個核仁，錐體細胞密度為185.5±17.1(見圖1、表4)2.缺血再灌注7天，可見明顯大鼠腦海馬組織細胞損傷。生理鹽水組大鼠腦海馬CA1區(qū)錐體細胞已大部分死亡，細胞碎片散亂分布(見圖2、表4)3.給予不同劑量的腦心清，對缺血再灌注所致大鼠腦海馬組織細胞損傷有一定劑量依賴性保護作用(見圖3-5、表4)。
相當(dāng)于人常用量的腦心清組對缺血再灌注所致大鼠腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯減輕，其活錐體細胞密度比對照組大鼠明顯增加。動物整體狀況改善，大鼠外觀活動正常，皮毛光滑，體重減輕不明顯。缺血再灌注后動物存活數(shù)比對照組明顯多。表明腦心清對急性缺血有保護作用。這為腦心清片治療腦卒中及中風(fēng)后遺癥提供了實驗依據(jù)。
4.陽性對照藥天保寧膠囊(100mg/kg，相當(dāng)于人常用量)大鼠腦海馬組織細胞形態(tài)基本正常，錐體細胞密度比生理鹽水組明顯增加(P＜0.05，見圖6、表4)，對缺血再灌注所致大鼠腦海馬組織細胞損傷也有明顯保護作用。
表4腦心清片對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用


注*p＞0.05，**＜0.05，***p＜0.01與對照組比較#p＞0.05，##＜0.05，###p＜0.01與生理鹽水組比較結(jié)論本發(fā)明的研究表明腦心清片除了原證實的藥效作用外，還能清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化、抗急性腦缺血，能抑制缺血再灌注引起的腦組織細胞凋亡，對缺血再灌注引起的腦組織損傷有明顯的保護作用，并能改善缺血再灌注引起的腦組織神經(jīng)功能。
防治神經(jīng)功能退化癥的臨床驗證一、對血管性癡呆的防治作用1資料與方法1.1病例情況全部病例均系神經(jīng)科住院病人，男性70例，女性20例；年齡58～76歲，平均64.9歲；病程最短1年，最長10年，平均3.9年。由主研腦血管疾病的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師作臨床檢查、神經(jīng)量表測試，并經(jīng)頭顱CT或MR證實者。
1.2診斷標(biāo)準采用DSM-IV中血管性癡呆的診斷標(biāo)準。
(1)發(fā)生多方面認知缺陷，表現(xiàn)為以下二者記憶缺陷；至少下列認知障礙之一失語、失用、失認、執(zhí)行管理功能的障礙。
(2)以上任何1項認知障礙引起了明顯的社會和職業(yè)功能缺陷，并可發(fā)現(xiàn)這些功能明顯不如以前。
(3)存在局限性神經(jīng)系統(tǒng)體征與癥狀；或有提示腦血管疾病的實驗室證據(jù)，并可認為是此障礙的原因(4)這些缺陷并非由于譫妄所致。
具體參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則；中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。
1.3排除標(biāo)準有嚴重神經(jīng)、血液、內(nèi)分泌等原發(fā)性疾病及海金斯基缺血指數(shù)量表(HIS)，總分18分，得分＜7分為老年性癡呆者。
1.4量表選擇1美國簡易智能量表，總分30分，若得分＜16分者為智能障礙；2日本長谷川癡呆量表，總分30分，若得分＜16分者為癡呆成立；3海金斯基缺血指數(shù)量表(HIS)，總分18分，若得分＞7分者為血管性癡呆，得分＜7分者為老年性癡呆。
1.5中醫(yī)主要癥狀參考中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則；中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。
結(jié)合臨床經(jīng)驗，將以下癥狀作為觀察指標(biāo)神情呆滯，語言不利，或寡言少語或語言倒錯，善忘，不寐，頭暈，頭痛，舌質(zhì)瘀點。
1.6療效標(biāo)準采用綜合評定法，以患者治療前后的智能狀態(tài)、中醫(yī)主要癥狀、體征等方面的改變作為綜評內(nèi)容，并以智能改變?yōu)橹攸c。痊愈者長谷川癡呆量表測試得分增加到正常值，顯效者得分增加5分以上，有效者得分增加不足5分，無效者得分不但無增加反而下降。
1.7用藥方法每天早中晚各服腦心清片4粒，2個月為1療程，均用藥3個療程，其間停用其它腦血管擴張藥物、腦細胞代謝藥物、神經(jīng)功能調(diào)節(jié)藥物。
2療效與結(jié)果2.1治療前后量表積分變化(見表5、6)表5治療前后簡易智能量表積分變化(x±s)

表6治療前后長谷川癡呆量表積分變化(x±s)

2.2中醫(yī)主要癥狀變化(見表7)表7治療前后主要癥狀評分變化(x±s)


2.3療效分析(見表8)表8二種藥物對血管性癡呆療效統(tǒng)計

3結(jié)論腦心清片對血管性癡呆的智能改善作用從5、6、7表可以看到，60例病員經(jīng)服腦心清和天保寧3個療程后，二藥治療的量表得分均明顯增加(P＜0.01)，說明都有恢復(fù)記憶力、改善智能作用。從8表可以知道，腦心通對本病的總有效率為76.7％，盡管痊愈者為零、顯效僅5例，但有效率卻占一半多(60.0％)。腦心清和天保寧兩者療效無顯著性差異。
二、對老年性癡呆癥的防治作用1資料與方法1.1病例情況全部病例均系神經(jīng)科住院病人，男性19例，女性11例；年齡58～76歲，平均64.9歲；病程最短1年，最長10年，平均3年。由主研腦血管疾病的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師作臨床檢查、神經(jīng)量表測試，并經(jīng)頭顱CT或MR證實者。
1.2診斷標(biāo)準具體參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則；中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。
1.3排除標(biāo)準(同前)1.4量表選擇(同前)1.5中醫(yī)主要癥狀(同前)1.6療效標(biāo)準(同前)以上1.3～1.6參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則；中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。
1.7用藥方法(同前)2療效與結(jié)果2.1治療前后量表積分變化(見表9、10)表9治療前后簡易智能量表積分變化(x±s)

表10治療前后長谷川癡呆量表積分變化(x±s)

2.2中醫(yī)主要癥狀變化見表11表11治療前后主要癥狀變化(x±s)

2.3療效分析見表12表12二種藥物對老年性癡呆療效統(tǒng)計


從12表可以知道，腦心清對本病的總有效率為75.0％，顯效16.7％，比目前常用藥的70％的總有效率略高，而沒觀察到明顯副作用。
3結(jié)論腦心清片對老年性癡呆的智能減退有改善作用，從8、9表可以看到，36例病員經(jīng)服腦心清2個療程后，量表得分明顯增加(P＜0.01)，說明有恢復(fù)記憶力、改善智能作用，且語言不利、失眠、煩躁、易怒、舌質(zhì)瘀點等癥狀改善非常明顯，對痰濁阻竅，氣滯血瘀的老年性癡呆(AD癥)36例有效率達75％以上。療效與口服服用銀杏提取物制劑天保寧片相當(dāng)，但對失眠、煩躁、易怒等癥狀療效更顯著。


圖1是正常對照對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用細胞顯微圖。
圖2是生理鹽水對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的影響細胞顯微圖。
圖3是腦心清片低劑量對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用細胞顯微圖。
圖4是腦心清片中劑量對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用細胞顯微圖。
圖5是腦心清片高劑量對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用細胞顯微圖。
圖6是天保寧對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細胞損傷的保護作用細胞顯微圖。
權(quán)利要求
1.腦心清片在制備防治神經(jīng)功能退化癥藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說腦心清片在制備防治老年癡呆藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
腦心清片在制備防治神經(jīng)功能退化癥藥物中的應(yīng)用，屬醫(yī)藥領(lǐng)域。腦心清片是由柿葉的乙酸乙酯提取物為活性成分制得的片劑，每片含乙酸乙酯提取物50mg。通過藥效實驗和臨床試驗發(fā)現(xiàn)“腦心清片”除具原有治療作用外，還對神經(jīng)功能退化癥如老年性癡呆和血管性癡呆等疾病有良好的防治效果，療效達75％以上。
文檔編號A61P25/28GK1546111SQ20031011242
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月3日
發(fā)明者李楚源, 徐安龍, 貝偉劍, 陳矛, 王德勤, 羅杰, 陳薇 申請人:廣州白云山制藥股份有限公司廣州白云山中藥廠, 廣州白云山制藥股份有限公司廣州白云