deA對對尿酸致小鼠足腫脹的影響：
[0066] 實施例1的Graveobioside A三個劑量組，分別為20、10、5mg/kg，用純水配制成1、 0.5、0.25mg/mL濃度的溶液;吲哚美辛腸溶片用純水配制成0.5mg/mL濃度的混懸液;秋水仙 堿片用純水配制成〇 . 〇5mg/mL濃度的混懸液；制備尿酸鈉：取194mL蒸餾水加6mL lmol/L NaOH，煮沸，加 Ig尿酸，用lmol/L Hcl調(diào)PH值至7.2，攪拌冷卻，4°C冰箱保存24h，去上清液， 用濾紙將沉淀物水分吸干，放入干燥箱，70°C烘2h，取出，刮下粉末，放入研缽內(nèi)研成細末， 裝瓶備用。臨用時用1 %吐溫-80配成20mg/mL的混懸液，注射時振搖均勾。
[0067] 實驗取20~22g雄性ICR小鼠60只，按體重隨機分為6組:對照組；陽性對照吲哚美 辛片10mg/kg、秋水仙堿片I .Omg/kg、
[0068] Graveobioside A200、100、50mg/kg組;每組10只。除吲噪美辛和秋水仙喊僅于實 驗當天灌胃給藥一次外，其余各組動物均每日按劑量灌胃給藥一次，連續(xù)3天，溶媒對照組 給予20mL/kg. bw的純水。末次給藥后30分鐘，于小鼠左足趾向踝關(guān)節(jié)方向皮下注射自制尿 酸鈉混懸液0.05mL/只（Img/只）。致炎后5h脫頸椎處死動物，用利剪于踝關(guān)節(jié)處取下雙足稱 重，以兩足重量之差作為腫脹度。
[0069] 低、中、高劑量GraveobiosideA組及吲哚美辛片、秋水仙堿對對尿酸致小鼠足腫脹 的影響結(jié)果見表5。由表5可見，陽性對照吲哚美辛片IOmg/kg、秋水仙堿片1.0 mg/kg、 GraveobiosideA三個劑量組均能明顯抑制尿酸所致小鼠的足腫脹，與對溶媒照組相比差異 均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0070] 表5對尿酸鈉致小鼠足腫脹的影響
[0073] 與對照組相比，**P〈0 · 01
[0074] 實施例5:
[0075] GraveobiosideA體外黃噪呤氧化酶抑制率實驗：
[0076] 稱取實施例1的Graveobioside A 1.65mg，用20yL DMSO溶解并用緩沖液稀釋至 1.0 mL，得到1.65mg/mL母液，接著采用逐級稀釋2倍的方法得到5個樣品濃度梯度。
[0077] 在空白對照組中加入IOOyL焦磷酸鈉緩沖液(pH=7.4);陰性對照組先加入60yL緩 沖液；酶組中加入20yL緩沖液和40yL酶溶液（2.5U/L);樣品測定組加入20yL樣品和40yL酶 溶液(2.5U/L);樣品陰性對照組加入20yL樣品溶液和40yL緩沖液；陽性對照組中加入20yL 別嘌醇溶液(50μΜ)和40yL酶溶液(2.5U/L)。加樣完成后，將其放入恒溫箱中在25°C孵育15 分鐘。孵育完成后，除了空白對照組，其余均加入40yL黃嘌呤溶液(400μΜ)，每組的終體積為 0.1 mL，并立即在在295nm波長進行動態(tài)法測定，讀取時間為30分鐘，5分鐘/次。
[0078] 黃嘌呤氧化酶抑制率計算公式：（Λ酶一Λ樣/Λ酶一Λ陰）X 100%，IC50的計算 軟件采用GraphPad Prism 5XraveobiosideA對黃噪呤氧化酶抑制率的IC50值曲線見表6。
[0079] 實驗結(jié)果表明Graveobioside A對黃嘌呤氧化酶具有顯著的抑制作用并呈劑量依 賴關(guān)系，在濃度為333.33yg/mL時對黃嘌呤氧化酶抑制率達54.73% ,GraveobiosideA是黃 嘌呤氧化酶的競爭性抑制劑。
[0080] 表6 GraveobiosideA對黃嘌呤氧化酶抑制率的IC50值曲線
[0082] 實施例6
[0083]按實施例1的方式先獲得Graveobioside A，按其與賦形劑重量比4:1的比例混合 均勻，制粒，壓片。治療高尿酸血癥和痛風(fēng)1~4片/次，3次/日。
[0084] 實施例7:
[0085]按實施例1的方式先獲得Graveobioside A，按其與賦形劑重量比8:1的比例混合 均勻，制粒，壓片。治療高尿酸血癥和痛風(fēng)3~4片/次，3次/日。
[0086] 實施例8:
[0087]按實施例1的方式先獲得Graveobioside A，按其與賦形劑重量比3:1的比例混合 均勻，制粒，制成膠囊劑。治療高尿酸血癥和痛風(fēng)3~4粒/次，3次/日。
[0088] 實施例9:
[0089]按實施例1的方式先獲得Graveobioside A，按其與賦形劑重量比6:1的比例混合 均勻，制粒，制成膠囊劑。治療高尿酸血癥和痛風(fēng)3~4粒/次，3次/日。
[0090] 實施例10:
[0091] 按實施例1的方式先獲得Graveobioside A，按常規(guī)口服液的制法制成口服液。治 療高尿酸血癥和痛風(fēng)20~30ml粒/次，3次/日。
【主權(quán)項】
1. 如下結(jié)構(gòu)式所示的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)的藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物是每人每天服用劑量W20mg~800mg的Graveobioside A為活性成分并與賦形劑組成的藥物制劑，2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物制劑中Graveobioside A的含量占藥物制劑質(zhì)量的 0.1~99%，其余為藥物學(xué)和藥劑學(xué)上可接受的，對人和動物無毒的藥用輔料或載體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物制劑中Graveobioside A的含量占藥物制劑質(zhì)量的 0.5~90%，其余為藥物學(xué)和藥劑學(xué)上可接受的，對人和動物無毒的藥用輔料或載體。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用是Graveobioside A通過降低血清的黃嚷嶺氧化酶 活性，降低高尿酸血癥的血清尿酸水平，從而達到抗高尿酸血癥的作用。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用是Graveobioside A通過抑制對角叉菜膠所致足腫 脹，從而達到預(yù)防痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎足腫脹的作用。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用是Graveobioside A通過明顯抑制尿酸所致足腫脹， 從而達到預(yù)防痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎足腫脹的作用。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的Graveobioside A在制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)藥物或保健 食品中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用是Graveobioside A對黃嚷嶺氧化酶具有抑制作用 并呈劑量依賴關(guān)系，從而達到降尿酸的作用，Graveobioside A是黃嚷嶺氧化酶的競爭性抑 制劑。8. 抗高尿酸血癥的藥物組合物，含有Graveobioside A化合物及可藥用載體或賦形劑。9. 抗痛風(fēng)的藥物組合物，含有Graveobioside A化合物及可藥用載體或賦形劑。 10. Graveobioside A的制備方法，取芹菜干燥種子，W8~15倍量30~70%V/V乙醇滲 漉提取或加熱提取2~4次，每次0.5~2小時，提取液減壓濃縮至近無乙醇，于濃縮液中用1 ~3倍量乙酸乙醋萃取1~3次，分出乙酸乙醋并回收乙酸乙醋，水層過D-101大孔吸附樹脂， 先用水洗脫，再用50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，濃縮，濃縮液上硅膠柱色譜，用90: 10-0: 100的氯仿：甲醇梯度洗脫，分段收集洗脫液，用薄層色譜跟蹤檢查，合并 Graveobioside A的流份，濃縮，將濃縮液過S邱hadex LH-20凝膠色譜進行純化，用甲醇洗 脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得Graveobioside A。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種Graveobioside？A在制備抗高尿酸血癥和抗痛風(fēng)中的藥物或保健食品中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種治療高尿酸血癥和抗痛風(fēng)的藥物或保健食品，以Graveobioside？A為活性成分，配入適量醫(yī)藥上的載體或賦形劑制成的制劑。本發(fā)明的Graveobioside？A可顯著降低氧嗪酸鉀鹽致高尿酸血癥模型小鼠的血清尿酸，不同程度降低黃嘌呤氧化酶活性，對小鼠關(guān)節(jié)炎有明顯抑制作用。對高尿酸血癥或痛風(fēng)具有防治作用，可應(yīng)用于制備抗高尿酸血癥或抗痛風(fēng)的藥物或保健食品。
【IPC分類】A61P19/06, C07H17/07, A61K36/23, A61K31/7048, C07H1/08
【公開號】CN105560262
【申請?zhí)枴緾N201610003277
【發(fā)明人】陳紀軍, 楊通華, 黃曉燕, 馬云保, 張雪梅, 沈勇, 耿長安, 盧承杰
【申請人】中國科學(xué)院昆明植物研究所, 北京維億陽光日用品銷售有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月4日