(固體）MW為 2000甲氧基聚（乙二醇）甲基丙締酸醋（在木炭上純化并稀釋成20% (w/v))和3.5 g MW為 350的甲氧基聚（乙二醇）甲基丙締酸醋、1.25 mL甲基丙締酸、8 g甲基丙締酸下醋和20 ml 異丙醇。將回流冷凝器打開，讓氮?dú)夤呐莸絾误w混合物中并打開加熱將單體混合物溫?zé)帷?br>[0153] 在單獨(dú)的小瓶中，將200 mg過硫酸鐘溶解于5 mL水并用氮?dú)饷摎狻?br>[0154] -旦圓底燒瓶中的混合物達(dá)到70°C的溫度，往在圓底燒瓶中的單體混合物中加入 過硫酸鐘水溶液并開始聚合。
[0155]讓聚合進(jìn)行約1小時(shí)到所需的粘度水平并隨后冷卻到室溫。將聚合溶液相對(duì)于水 進(jìn)行滲析過夜，截留分子量為12-14 KDa。 巧156] 實(shí)施例18:合成抗凝劑聚合物(具有低肝素比率) 在裝有冷凝器、溫度計(jì)和通氮?dú)馊肟诘幕疭teur滴管配件的圓底燒瓶中，將1.5 g肝素 聚（乙二醇）甲基丙締酸醋共混并溶解于37 mL水中。往燒瓶中加入14.5 g (固體）MW為 2000的甲氧基聚（乙二醇）甲基丙締酸醋(在木炭上純化并稀釋成20% (w/v))和3.5 g MW為 350的甲氧基聚（乙二醇）甲基丙締酸醋、1.25 mL甲基丙締酸、8 g甲基丙締酸下醋和18 ml 異丙醇。將回流冷凝器打開，讓氮?dú)夤呐莸絾误w混合物中并打開加熱將單體混合物溫?zé)帷?br>[0157] 在單獨(dú)的小瓶中，將200 mg過硫酸鐘溶解于5 mL水并用氮?dú)饷摎狻?br>[0158] -旦圓底燒瓶中的混合物達(dá)到70°C的溫度，往在圓底燒瓶中的單體混合物中加入 過硫酸鐘水溶液并開始聚合。
[0159] 讓聚合進(jìn)行約1小時(shí)到所需的粘度水平并隨后冷卻到室溫。將聚合溶液相對(duì)于水 進(jìn)行滲析過夜，截留分子量為12-14 KDa。 巧160] 實(shí)施例19:合成抗凝劑聚合物 來自實(shí)施例17和18的聚合物，其中在合成期間甲基丙締酸被甲基丙締酸4-苯甲酯基苯 醋（150 mg)代替，或者其中共同使用了甲基丙締酸和甲基丙締酸4-苯甲酯基苯醋兩者。 [0161] 實(shí)施例20:合成抗凝劑聚合物 來自實(shí)施例17、18和19的聚合物，其中肝素聚（乙二醇）甲基丙締酸醋可被苯甲控錠-肝 素甲基丙締酸醋絡(luò)合物或苯甲控錠-肝素聚（乙二醇）甲基丙締酸醋絡(luò)合物代替。 巧16引實(shí)施例21:使用組合聚合物涂布，熱固化 如下制備制劑(％體積）：
將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，然后在70°C下固化1小時(shí)。 巧16引 實(shí)施例22:使用組合聚合物涂布，UV固化 如下制備制劑(%體積）：
將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘。首先使用UV光將膜固化(360 秒），隨后在70°C下固化1小時(shí)W提供堅(jiān)固穩(wěn)定的涂層。 巧164] 實(shí)施例23:使用絡(luò)合的組合聚合物涂布
將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，隨后在70°C下固化I小時(shí) 隨后讓涂好的裝置在憐酸鹽緩沖鹽水溶液中放置5分鐘W使該鹽脫絡(luò)合，隨后在水中 徹底漂洗W除去任何殘留的鹽。 巧1巧]實(shí)施例24:使用分別為90%和10%(w/v最終濃度）的抗微生物聚合物和抗凝劑聚合 物的共混物涂布 在化Icon管中，將2.75血異丙醇和6.42 mL四氨巧喃共混。將4.2 mL來自實(shí)施例11的 抗微生物聚合物和0.63 mL來自實(shí)施例12的抗凝劑聚合物共混。加入100化10% (w/v)的 聚氮雜環(huán)丙烷交聯(lián)劑，將溶液充分混合并讓其靜置。
[0166]將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，隨后在70°C下固化1小 時(shí)。 巧167] 實(shí)施例25:使用分別為75和25% (w/v最終濃度）的抗微生物聚合物和抗凝劑聚合 物的共混物的涂層 在化Icon管中，將2.68血異丙醇和6.26 mL四氨巧喃共混。將3.5 mL來自實(shí)施例15的 抗微生物聚合物和1.56 mL來自實(shí)施例12的抗凝劑聚合物共混。加入100化10% (w/v)的 聚氮雜環(huán)丙烷交聯(lián)劑，將溶液充分混合并讓其靜置。
[0168]將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，隨后在70°C下固化1小 時(shí)。 巧169] 實(shí)施例26:使用抗微生物聚合物涂布 在化Icon管中，將3 mL異丙醇與7 mL四氨巧喃共混。加入4 mL來自實(shí)施例15的抗微生 物聚合物并加入100 yL 10% (w/v)的聚氮雜環(huán)丙烷交聯(lián)劑，將溶液充分混合并讓其靜置。
[0170] 將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，隨后在70°C下固化1小 時(shí)。
[0171] 實(shí)施例27:使用抗凝劑聚合物涂布 在化Icon管中，將3 mL異丙醇與7 mL四氨巧喃共混。加入4 mL來自實(shí)施例17的抗凝劑 聚合物并加入100 yL 10% (w/v)的聚氮雜環(huán)丙烷交聯(lián)劑，將溶液充分混合并讓其靜置。
[0172] 將裝置在涂料制劑中浸涂，讓膜在室溫下干燥約20分鐘，隨后在70°C下固化1小 時(shí)。
[017引實(shí)施例28:測試方法一抗微生物繁殖/微生物粘附 將測試片暴露于特定介質(zhì)(使得蛋白質(zhì)粘附等)如血漿、血液或尿液等歷時(shí)預(yù)定的時(shí)間 點(diǎn)，隨后洗涂測試片，隨后進(jìn)行測試方案。該測試方案有效地用活微生物培養(yǎng)該裝置、洗涂 該裝置W除去溶液存在的細(xì)菌"、讓活性組分足夠時(shí)間去"殺死"，隨后轉(zhuǎn)移到生長介質(zhì)， 在生長介質(zhì)中裝置上存活的微生物將在溶液中繁殖成子代細(xì)胞，從而增加生長介質(zhì)的濁 度，而該濁度隨后可通過光學(xué)密度來測定。
[0174] 方案 第訪 將各相關(guān)細(xì)菌(Oxoid, UK)的菌落從瓊脂斜面(Oxoid, UK)上的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到膜蛋白 腺大豆肉湯(TSB) (Oxoid，UK)并在37°C下培養(yǎng)過夜。將第二份無細(xì)菌的對(duì)照體積也在37 °〇下培養(yǎng)。
[on引第2天 檢查細(xì)菌培養(yǎng)物和培養(yǎng)對(duì)照物的濁度，運(yùn)在培養(yǎng)物中是可W觀察到的，但是對(duì)照物是 清澈的。在無菌容器中制備一定體積的IO % (v/v) TSB在等滲鹽水中的溶液并置于37°C 下。
[0176]在此之后，在環(huán)境溫度下將涂布和未涂布的制品（按照需要切成適當(dāng)?shù)臏y定尺寸） 放置于新鮮的去離子無菌水(Baxter, UK)中保持30分鐘W使涂層水合。在制品為管子例如 導(dǎo)管的情況下，使用一次性注射器(Midmeds，UK)使腔室充滿，在整個(gè)水合過程中使一次性 注射器保持與制品連接。測試表面的所有操作用無菌綴子進(jìn)行。
[0^7]在水合階段期間，各培養(yǎng)物的群體密度(C即/ml)使用類似于Mc化rland濁度標(biāo)準(zhǔn) 的方法來評(píng)定，在600皿下讀取。一旦讀取了吸光度，在10 % (v/v) TSB中制備適當(dāng)體積的5 X IO5 CFU/ml細(xì)菌懸浮液。隨后將該挑戰(zhàn)懸浮液轉(zhuǎn)移到適合尺寸/體積的無菌玻璃/塑料器 皿W容納該測試制品。
[0178] 隨后用去離子無菌水漂洗測試制品并置于挑戰(zhàn)懸浮液中。再次，在制品為管子的 情況下，小屯、操作W確保腔室暴露。隨后將測試制品在37°C下培養(yǎng)60分鐘。和緩地手動(dòng)攬拌 30分鐘W去除形成在裝置表面的任何氣泡。
[0179] 在該挑戰(zhàn)培養(yǎng)之后，將制品從懸浮液中取出并用等滲鹽水徹底漂洗。在輔助制品 如注射器或針頭連接于測試物件的情況下，廢棄運(yùn)些輔助制品，并且在需要時(shí)用新的無菌 物件替代。在測試物件為管子例如導(dǎo)管的情況下，使用20 ml的一次性注射器(去除了活塞） 作為漏斗來漂洗腔室。
[0180] 隨后在環(huán)境溫度下將測試制品置于等滲鹽水中浸泡30分鐘，隨后第二次漂洗，然 后第二次浸泡60分鐘，在此期間，制備一定體積的50 % (v/v) TSB在等滲鹽水中的溶液，量 出放入培養(yǎng)皿(針對(duì)正測試的物件視需要為6-24孔）（Griener Bio-化e，UK)并使其為環(huán) 境溫度。多個(gè)含有50 % TSB的孔保留為無裝置的對(duì)照物。在第二次浸泡后，對(duì)測試物品進(jìn)行 最后漂洗。在存在輔助制品的情況下，輔助制品被再次丟棄。在該漂洗之后，將測試物件要 么整個(gè)轉(zhuǎn)移到50 % TSB溶液，要么視情況分解成多個(gè)部分(使用無菌剌須刀片和無菌錐片） 并將運(yùn)些部分轉(zhuǎn)移到50 % TSB溶液。當(dāng)物件被分解成多個(gè)部分時(shí)，丟棄最上面和最下面的 部分。在測試制品為管子的情況下，視情況使用20-200 吸量管化ppendo計(jì)，UK)和無菌 管尖(Griener Bio-One, UK) W從浸沒在50% TSB中的腔室部分沖走氣泡。
[0181] 將測試物件和無裝置的對(duì)照物孔在環(huán)境溫度下培養(yǎng)過夜。
[0182] 第3天 目視檢查含有測試物件的培養(yǎng)板的測試物件孔或?qū)φ?無裝置巧L的生長信號(hào)。隨后用 膜將板密封并置于37°C，每小時(shí)目視評(píng)估生長信號(hào)。雖然隨物類不同和裝置不同會(huì)發(fā)生變 化，但是在室溫下培養(yǎng)過夜之后在37°C下在大于4小時(shí)之后通常表現(xiàn)出濁度。當(dāng)含有未涂布 制品的孔表現(xiàn)出細(xì)菌生長的強(qiáng)烈信號(hào)時(shí)，使用一次性化Steur吸量管將其內(nèi)容物完全再次 懸浮、隨后將300 從各孔轉(zhuǎn)移到96孔板(一式S份），隨后在600 nm下讀板。 陽18引實(shí)施例29:測試方法一裝置的血小板粘附 測試片可(或可不)暴露于特定介質(zhì)（W使得蛋白質(zhì)粘附等)例如血漿、血液或尿液等持 續(xù)預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，隨后洗涂測試片并進(jìn)行測試方案。
[0184]從健康的人志愿者(其否認(rèn)6個(gè)星期用過任何藥物)收集靜脈血。簡單地講，在靜脈 穿刺之后，收集2.5 ml血液并廢棄。隨后收集10 ml血液并使用巧樣酸憐酸右旋糖(CPD)防 止凝血。隨后將血液分成兩等分，5血的富血小板血漿(PRP)和5血貧血小板血漿(PPP )，運(yùn)通 過離屯、來制備。隨后使用血球計(jì)和光學(xué)顯微鏡利用相對(duì)照取得血小板的計(jì)數(shù)。
[01化]隨后使用PPP作為稀釋劑將PRP稀釋到1 X IO5血小板/ iiL。
[0186] 為了實(shí)驗(yàn)，將200化來自上述的1 X IO5血小板/化的PRP轉(zhuǎn)移到涂布的蓋玻片的 中間并在37°C下靜置(加蓋W防止蒸發(fā))0.5小時(shí)。在該時(shí)間點(diǎn)之后，在鹽水中漂洗玻片S 次，隨后在2.5%戊二酸二?。⊿igma Al化ich)在PBS (Sigma Al化ich)的溶液中固定過夜。 隨后通過光學(xué)顯微鏡在2000倍下檢查并對(duì)視野中血小板的量計(jì)數(shù)。
[0187] 使用反轉(zhuǎn)顯微鏡和相機(jī)(兩者均得自Motic Instr皿ents)取得證明性照片。 陽18引實(shí)施例30:測試方法一涂布表面的肝素活性 測試片可(或可不)暴露于特定介質(zhì)（W使得蛋白質(zhì)粘附等)例如血漿、血液或尿液等持 續(xù)預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，隨后洗涂測試片并進(jìn)行測試方案。
[0189] 使用市售可得的抗-I Ia肝素試劑盒（Hyphen Biomed，通過Quadratech Diagnostics的UK經(jīng)銷商)通過抗IIa抑制來測定裝置表面的肝素活性。
[0190] 簡而言之，使用肝素參照材料（Celsus laboratories)，在含有1%牛血清蛋白 TBSA" Sigma Aldrich)的生理鹽水(9g/L NaCl (Sigma Aldrich))中準(zhǔn)備肝素的校準(zhǔn)曲 線，如表1中所示。
隨后按照制造商的說明制備試劑并開始測試(按照制造商的說明）。
[0192] 在37°C下往一系列測試管中加入W下物質(zhì)： 100化校準(zhǔn)物或測試片（Icm2)和10化1 1%BSA在鹽水中的溶液(即OU/ml或OmU); 100化抗凝血酶(200]ig/ml); 500化測定反應(yīng)緩沖液； 200化凝血酶底物。
[0193] 隨后混合并在37°C下培養(yǎng)2-3分鐘，隨后加入200化人凝血酶(在37°C下預(yù)培養(yǎng)）。 隨后混合并在37°C下再培養(yǎng)整整5分鐘。隨后使用巧樣酸（20g/L Sigma Al化ich)停止反 應(yīng)。將該酸混入，隨后在405nm下用分光光度計(jì)(Perkin Elmer)針對(duì)空白樣測定吸光度，空 白樣通過W相反的順序混合上述試劑來制備。隨后制備校準(zhǔn)曲線并使用線性回歸內(nèi)插得到 表面上的肝素水平(如果r 2〉0.98則可接受）。 巧194] 實(shí)施例31:組合聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo)管上)抗綠脈 桿菌（Pseudomonas aeruginosa)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)綠脈桿菌(Pseudomonas aeruginosa)的抗微生物活性。
[019引得到的濁度結(jié)果示于下表2和圖4。
[0196]表2
實(shí)施例32:組合聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo)管上)抗糞腸球菌 (Enterococcus faecal is)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)糞腸球菌化nte;rococcusfaecalis)的抗微生物活性。
[0197]得到的濁度結(jié)果示于下表3和圖5。
實(shí)施例33:在血漿培養(yǎng)之后組合聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo) 管上)抗大腸桿菌(Escherichia coli)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)大腸桿菌化scherichia COli)的抗微生物活性。在測試各部分之前，將各部分 在巧樣酸化的人血漿中培養(yǎng)過夜。
[0199] 得到的濁度結(jié)果示于下表4和圖6。
實(shí)施例34:在血漿培養(yǎng)之后組合聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo) 管上閑抗金黃色葡萄球菌(StaphyIococ州S aureus)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)金黃色葡萄球菌(5*3地如〇(3〇(3(3118 aureus)的抗微生物活性。在測試各部分之 前，將各部分在巧樣酸化的人血漿中培養(yǎng)過夜。
[0201]得到的濁度結(jié)果示于下表5和圖7。
實(shí)施例35:在血漿培養(yǎng)之后共混聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo) 管上閑金黃色葡萄球菌(StaphyIococ州S aureus)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)金黃色葡萄球菌(5*3地如〇(3〇(3(3118 aureus)的抗微生物活性。在測試各部分之 前，將各部分在巧樣酸化的人血漿中培養(yǎng)過夜。
[0203]得到的濁度結(jié)果示于下表6和圖8。
實(shí)施例36:共混聚合物和抗微生物聚合物(涂布在聚氨醋血液透析導(dǎo)管上)對(duì)抗綠脈桿 菌（Pseudomonas aeruginosa)的活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)導(dǎo)管進(jìn)行涂布，隨后按照實(shí)施 例28測定對(duì)綠脈桿菌(Pseudomonas aeruginosa)的抗微生物活性。
[020引得到的濁度結(jié)果示于下表7和圖9。
實(shí)施例37:未涂布、共混聚合物、抗微生物聚合物和組合聚合物的血小板粘附 按照在相關(guān)實(shí)施例（例如實(shí)施例21-27)中給出的方法對(duì)透明樣品進(jìn)行涂布。隨后按照 實(shí)施例29中的方法計(jì)算血小板粘附。
[0207]得到的結(jié)果示于表8和圖10-12中。圖11表示聚氨醋底材(400X)，圖12表示來自實(shí) 施例12的組合聚合物(高肝素含量)（也為400X照片）。
[0208] 表 8
實(shí)施例38:組合聚合物隨時(shí)間的肝素活性 按照在相關(guān)實(shí)施例（即實(shí)施例21-27)中所給出的方法涂布聚氨醋部分。
[0209] 隨后將測試片在37°C下在PBS中培養(yǎng)，并在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)使用在實(shí)施例30中的方 法測定測試片的肝素活性。
[0210] 得到的結(jié)果在下表9和圖13中。
[0引1] 表9
實(shí)施例39:合成聚六亞甲基脈甲基丙締酸醋(PHMG-MA) 1.98 g氨氧化鋼在220 mL水中的溶液中和30 g聚六亞