用于治療和/或預防雌激素相關性疾病的化合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物化學領域，特別涉及用于治療和/或預防雌激素相關性疾病的化 合物。
【背景技術】
[0002] 植物中一類具有雌激素樣或抗雌激素作用的活性成分被稱為植物雌激素 (phytoestrogen，PE)。現(xiàn)有技術已知，在人體內(nèi)，植物雌激素具雙向調(diào)節(jié)作用，一方面，當機 體內(nèi)雌激素水平低于正常水平時，可發(fā)揮擬雌激素樣作用，這一作用可以防治女性更年期 綜合征、前列腺癌、骨質(zhì)疏松癥和心血管疾病等。另一方面，在體內(nèi)雌激素水平高于正常水 平（如乳腺增生、子宮肌瘤等病癥）時，可產(chǎn)生雌激素拮抗作用，有效減弱靶細胞對雌激素 的應答。因此也有人稱其為"選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑"。尋找具有雌激素活性而又沒有雌 激素副作用的植物雌激素，為臨床提供新的治療選擇，仍是本領域技術人員期待的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 淫羊藿別名仙靈脾，為小檗科（Berberdiaceae)淫羊藿屬（Epimedium)的多種植 物的干燥地上部分，是具補腎壯陽，祛風除濕功效的傳統(tǒng)中草藥。淫羊藿藥用歷史悠久，李 時珍在《本草綱目》中稱其有"益精氣，堅筋骨，補腰膝，強心力"之效用?，F(xiàn)代藥理實驗研 究表明，淫羊藿能增強心腦血管血流量、促進造血功能、提高免疫功能、調(diào)節(jié)骨代謝、還具有 抗衰老和抗腫瘤等功效。
[0004] 發(fā)明人從淫羊藿中分離得到一系列化合物，并令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，所分離得到的一 系列化合物具有雌激素樣或抗雌激素作用的活性，可以作為植物雌激素，用于治療雌激素 相關性疾病。并基于此，完成了本發(fā)明。
[0005] 本發(fā)明第一方面提供了通式（I)的化合物在制備用于治療和/或預防雌激素相 關性疾病的藥物中的用途；
[0006]

表-H。在本發(fā)明第一方面的一些優(yōu)選實施方式中，雌激素相關性疾病可以是指：由雌激素 水平低于正常水平而引起的疾病。
[0013] 其中，所述由雌激素水平低于正常水平而引起的疾病可以包括：女性更年期綜合 征、前列腺癌、骨質(zhì)疏松癥和心血管疾病。
[0014] 在本發(fā)明第一方面的另一些優(yōu)選實施方式中，雌激素相關性疾病可以是指：由雌 激素水平高于正常水平而引起的疾病。
[0015] 其中，由雌激素水平高于正常水平而引起的疾病可以包括：乳腺增生、子宮肌瘤。
[0016] 本發(fā)明第二方面提供了通式（I)的化合物，
[0017]
[0018] 其中，札、私各自代表-OCH3或Ri、私及分別與Ri、私相連的碳原子形成二氧戊環(huán)；
[0021] 需要說明的是，!^、!^、!^、!^所代表的基團的虛線表示該基團與通式^^勺連接 成鍵。
[0022] 本發(fā)明第三方面提供了能夠分離出通式（I)的化合物的淫羊藿提取物。通過該 淫羊藿提取物，可以得到通式（I)的化合物，進而可以通過通式（I)的化合物來治療雌 激素相關性疾病。
【具體實施方式】
[0023] 下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術方案進行描述，所描述的實施例僅僅是本 發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在 沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0024] 實施例1:制備淫羊藿提取物
[0025] 取20kg淫羊藿全草，用95% (v/v)乙醇熱回流提取，提取料液比1:1. 5,每次提取 時間2h，共提取3次。在50°C下減壓蒸餾，濃縮至無醇，體積約6L，估算浸膏質(zhì)量約4kg。將 3kg粗浸膏溶于IOL水中，用等體積乙酸乙酯萃取，共萃取3次，將乙酸乙酯層減壓蒸餾，濃 縮至干，得浸膏約lkg。水層50°C減壓蒸餾至濃浸膏，得浸膏質(zhì)量約2kg。
[0026] 實施例2 :制備化合物1-4
[0027] 針對乙酸乙酯層浸膏和水層浸膏分別采用硅膠柱層析、大孔樹脂主層析、 SephadexLH-20凝膠柱層析、ODS色譜柱層析和制備液相色譜等分離方法分離得到化合物 1-4,如表1所示。
[0028] 具體的：
[0029] 化合物1的分離如下：
[0030] 取乙酸乙酯萃取物（1kg)，以1.5kg硅膠拌樣，進行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷-丙酮（1: 〇 - 10:1 - 5:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)進行梯度洗脫，TLC檢識合并相同流分， 得到43個流分（Fr. 1~43)。Fr. 2 (100g)經(jīng)開放C18柱色譜，甲醇-水（10:90 - 100:0) 梯度洗脫，HPLC檢識合并相同流分，得到12個流分（Fr. 2-1~12)。Fr. 2-9(2. 2g)經(jīng)反相 高效液相色譜分離得到了化合物I(200mg)。
[0031] 化合物2的分離如下：
[0032] 取乙酸乙酯萃取物（1kg)，以1.5kg硅膠拌樣，進行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷-丙酮（1: 〇 - 10:1 - 5:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)進行梯度洗脫，TLC檢識合并相同流分， 得到43個流分（Fr. 1~43)。Fr. 2 (100g)經(jīng)開放C18柱色譜，甲醇-水（10:90 - 100:0) 梯度洗脫，HPLC檢識合并相同流分，得到12個流分（Fr. 2-1~12)。Fr. 2-9(2. 2g)經(jīng)反相 高效液相色譜分離得到了化合物2 (480mg)。
[0033] 化合物3的分離如下：
[0034] 取乙酸乙酯萃取物（1kg)，以1.5kg硅膠拌樣，進行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷-丙酮（1:0 - 10:1 - 5:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)進行梯度洗脫，TLC檢識合并相同流分， 得到43個流分（Fr. 1~43)。Fr. 43 (100g)經(jīng)開放C18柱色譜，甲醇-水（10:90 - 100:0) 梯度洗脫，HPLC檢識合并相同流分，得到15個流分（Fr. 43-1~15)。Fr. 43-4(1.Ig)經(jīng)反 相高效液相色譜分離得到了化合物3 (80mg)。
[0035] 化合物4的分離如下：
[0036] 取乙酸乙酯萃取物（1kg)，以1.5kg硅膠拌樣，進行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷-丙酮（1: 〇 - 10:1 - 5:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)進行梯度洗脫，TLC檢識合并相同流分， 得到43個流分（Fr. 1~43)。Fr. 8 (100g)經(jīng)開放C18柱色譜，甲醇-水（10:90 - 100:0) 梯度洗脫，HPLC檢識合并相同流分，得到8個流分（Fr. 8-1~8)。Fr. 8-8(14. 2g)經(jīng)反相 高效液相色譜分離得到了化合物4 (70mg)。
[0037] 表1化合物1-4

[0040] 實施例3 :化合物1-4結(jié)構(gòu)的確定
[0041] 通過1H、13C-NMR等NMR方法，確定化合物1-4結(jié)構(gòu)；
[0042] NMR儀器的型號為：BRUKERAVANCEIII500超導核磁共振波譜儀（TMS為內(nèi)標，瑞士 Bruker公司）；
[0043] 化合物1的表征如下：
[0044] 1H-NMR(500MHz，CDCl3) :S2. 73 (4H，brs，H-9, 10)，3. 78, 3. 89, 3. 91，3. 92, 3. 93(e ach3H，s，OMeX5)，6. 60 (1H，s，H-1)，6. 74 (1H，s，H-8)，8. 00 (1H，s，H-5)。
[0045] 13C-NMR(125MHz，CDCl3) :S29. 4 (C-9)，30. 6 (C-10)，55. 9 (CH30-2)，56. 0 (CH30-6, 7 ),60. 6(CH30-3), 61. 2(CH30-4), 107. 6(C-8),HO. 8 (C-I), 111.I(C-5), 120. 8(C-8a), 125.I (C-IOa)，130. 3 (C-4a)，134. 2 (C-3)，141. 5 (C-4b)，147. 2 (C-4)，147. 3 (C-6)，151. 5 (C-2)，I 51. 7(C-7) 〇
[0046] 化合物2的表征如下：
[0047] 1H-NMR(SOOMHz1MeOD):S2.64(4?brs，H-9, 10)，3.84(6?s，OMeX2)，3.91(3?s ，OMe)，5. 93 (2H，s，O-CH2-O) 6. 52 (1H，s，H-1)，6. 82 (1H，s，H-8)，7. 83 (1H，s，H-5)。
[0048] 13C-NMR(125MHz,MeOD) : 8 30. 5 (C-9), 31. 8 (C-IO), 56. 5 (CH3〇-4), 56. 9 (CH3〇-6), 6 0. 3(CH30-7), 102. 4 (O-CH2-O), 104. 6(C-8), 112. 6 (C-I), 113. 7 (C-5), 121. 9(C-8a), 127. 0( C-lOa)，132. 6 (C-4a)，134. 6 (C-3)，138. 6 (C-4b)，142. 7 (C-4)，148. 4 (C-6)，148. 7 (C-2)，14 9. 0(C-7)〇
[0049] 化合物3的表征如下：
[0050] iH-NMRGOOMHz，MeOD) :S2. 73 (4H，brs，H-9, 10)，3. 78, 3. 89, 3. 91，3. 92, 3. 93(ea ch3H，s，OMeX5)，6. 60 (1H，s，H-1)，6. 74 (1H，s，H-8)，8. 00 (1H，s，H-5)。
[0051] 13C-NMR(125MHz，MeOD) :S30. 3(C-9)，31. 4(C-10)，56. 5(CH30-7)，56. 8(CH30-6)，6 1. I(CH30-4)，62. 0 (CH30-3)，62. 6 (C-6,），71. 5 (C-4,），75.I(C-2,），78.I(C-3,），78. 4 (C-5' ),102. 8 (C-I' ),112.6 (C-8) ,113.1 (C-