專利名稱：一種眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物及其生產(chǎn)方法。
眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病，包括蠶蝕性角膜潰瘍、角膜移植排斥、結(jié)膜及角膜緣過敏性炎癥等。目前治療這類疾病的首選藥物是糖皮質(zhì)類固醇類，但這類藥物局部長(zhǎng)期應(yīng)用有較大的副作用，如皮膚萎縮、抑制角膜上皮和傷口的愈合、皮質(zhì)類固醇性青光眼和并發(fā)性白內(nèi)障等。
在尋找糖皮質(zhì)類固醇的替代藥物方面，人們?cè)鴳?yīng)用環(huán)胞霉素A(CyclosporinA，CsA)，雖然它可以有效治療眼表的免疫相關(guān)性眼病，但是最近研究發(fā)現(xiàn)CsA的局部穿透力差，對(duì)眼部深層的免疫抑制主要靠全身的藥理作用，另外，CsA的油劑滴眼液對(duì)眼部有明顯的刺激作用。
他克莫司(tacrolimus或FK506)是一種強(qiáng)效免疫抑制劑，已廣泛用來預(yù)防移植排斥，并被常規(guī)用于腎、肝和心臟移植。全身應(yīng)用他克莫司有類似環(huán)胞霉素A(cyclosporin A，CsA)的副作用，且成本高。
他克莫司是從一種放線菌的代謝產(chǎn)物中提取的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，分子式是C44H69NO12·H2O，結(jié)構(gòu)式為 分子量是822D，室溫下呈白色粉末狀，易溶于甲醇、乙醇和氯仿等有機(jī)溶劑，不溶于水。
他克莫司(FK506)是一種疏水性的大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑的家族成員之一，這個(gè)家族包括環(huán)胞霉素A(Cyclosporin A，CsA)、雷伯霉素(rapamycin或sirolimus)和ascomycin。體外應(yīng)用顯示其免疫抑制作用是環(huán)胞霉素的10-100倍。臨床上，它已被成功地全身應(yīng)用來治療移植排斥和自身免疫性疾病。
但迄今為止，仍沒有其在眼前段及眼表免疫相關(guān)疾病治療中的報(bào)道。
本發(fā)明的目的就是為了克服目前眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物的局部副作用大或主要依靠藥物全身的藥理作用的缺點(diǎn)，提供一種局部治療效果好、毒副作用小、藥物主要在局部起作用的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療的藥物制劑及其生產(chǎn)方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。
采用他克莫司藥物，采用藥劑學(xué)上所說的任何一種眼局部用藥的劑型，包括滴眼液(眼藥水)、油性軟膏(眼藥膏)、霜?jiǎng)┑?。?dāng)然，他克莫司的結(jié)晶水可以去除。
其中滴眼液的配方為他克莫司 0.02～0.2克氯化鈉 0～1.5克表面活性劑 適量抑菌劑 適量增粘劑適量(至粘度為40～50厘泊)加水至 100毫升。
其中抑菌劑可以是藥劑學(xué)上除硝酸苯汞以外的常用的任何抑菌劑，其采用的量按藥劑學(xué)上常規(guī)劑量，如(1)硫柳汞0.02～0.04％(即每百毫升含有克數(shù)，下同)；(2)季銨鹽類，包括潔爾滅、新潔爾滅，杜米芬、消毒凈、洗必泰等，有效濃度為0.002～0.01％；(3)醇類，常用三氯叔丁醇0.3～0.6％；(4)尼泊金類，濃度0.03～0.06％；(5)酸類，如山梨酸濃度為0.01～0.08％。
增粘劑可以采用藥劑學(xué)上常用的增粘劑，如羥丙基甲基纖維素，甲基纖維素、透明質(zhì)酸鈉、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯酮等，可采用不同聚合度，最終使滴眼液的粘度為40～50厘泊。增加粘度，能降低滴眼液刺激性，延長(zhǎng)藥物在眼內(nèi)的停留時(shí)間。
表面活性劑可采用藥劑學(xué)上眼科常用的表面活性劑，如聚乙烯氫化蓖麻油(HCO60)，用量為0.8～8克。
其生產(chǎn)方法為將增粘劑用注射用水使其分散放冷，另用水溶解表面活性劑，氯化鈉及抑菌劑，攪勻過濾，合并二液，攪勻過濾，加注射用水至全量，再用此溶液溶解他克莫司全量，過濾，分裝，即得。
本發(fā)明的滴眼液的配方本發(fā)明的眼藥膏的配方為他克莫司0.02～0.2克無水羊毛脂8～15克液狀石蠟2～10克黃凡士林75～95克聚乙烯氫化蓖麻油0.8～8克采用藥劑學(xué)上常用的眼膏劑的生產(chǎn)方法制成眼膏劑。
本發(fā)明的霜?jiǎng)┎捎盟偷乃巹┹o料，采用藥劑學(xué)上常用的霜?jiǎng)┑纳a(chǎn)方法，注意無菌操作。
本發(fā)明的他克莫司藥物，制備成滴眼液、眼膏劑、霜?jiǎng)┑人巹W(xué)上任何一種眼局部用藥的劑型，通過兔動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，顯示均具有較好的眼部穿透性，在房水、角膜、結(jié)膜中均可以達(dá)到有效的治療濃度。通過大鼠動(dòng)物模型，表明眼表面應(yīng)用皮質(zhì)類固醇、他克莫司和環(huán)胞霉素A均具有顯著治療角膜同種異體移植免疫排斥的作用，他克莫司對(duì)角膜移植的治療作用可以通過局部的免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮出來。且他克莫司的應(yīng)用，局部副作用小，成本低。顯示他克莫司眼表給藥可以用來治療眼表或眼前段細(xì)胞免疫相關(guān)性疾病。通過臨床應(yīng)用，進(jìn)一步驗(yàn)證了他克莫司的應(yīng)用，對(duì)該類疾病具有較好的治療效果。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1 0.05％他克莫司滴眼液。
配方羥丙基甲基纖維素0.3克氯化鈉0.75克硫柳汞0.002克他克莫司(FK506)0.05克聚乙烯氫化蓖麻油1克注射用水加至100毫升其生產(chǎn)方法同前。
實(shí)施例2 0.1％他克莫司滴眼液。
配方透明質(zhì)酸鈉 0.3克氯化鈉 1.5克新潔爾滅 0.01克他克莫司(FK506)0.1克聚乙烯氫化蓖麻油 4克注射用水加至 100毫升其生產(chǎn)方法同前。
實(shí)施例3 0.2％他克莫司滴眼液(FK506)配方聚乙烯吡咯酮 0.2克尼泊金乙酯 0.05克他克莫司(FK506) 0.2克聚乙烯氫化蓖麻油8克注射用水加至 100毫升其生產(chǎn)方法同前。
實(shí)施例4 0.02％他克莫司眼藥膏配方他克莫司 0.02克無水羊毛脂 8克液伏石蠟 2克黃凡士林 75克聚烯氫化蓖麻油 2克制成眼藥膏。
生產(chǎn)方法為取他克莫司，加入適量經(jīng)滅菌、冷卻的液狀石蠟，研磨成細(xì)糊狀后，過6號(hào)篩，再逐漸加入無菌、濾過的羊毛脂、黃凡士林混合物、混勻，即得。所用制備器具及包裝容器均須滅菌。
實(shí)施例5 0.2％他克莫司眼藥膏配方他克莫司 0.2克無水羊毛脂 15克液狀石蠟 10克黃凡士林 85克聚乙烯氫化蓖麻油 0.8克制成眼藥膏。
其生產(chǎn)方法同實(shí)施例4。
一、取本發(fā)明的他克莫司滴眼液作眼部的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。
動(dòng)物體重2.8～3.2kg的健康新西蘭白兔共62只，實(shí)驗(yàn)前檢查眼部無任何疾病。16只兔用于觀察4種不同濃度的滴眼液眼部毒副作用及血液吸收情況。0.05％和0.1％他克莫司滴眼液(實(shí)施例1和實(shí)施例2)分別用15只兔，每組30眼，一次用藥一眼，間隔3天后用藥另一眼。另外16只兔用于觀察4種不同濃度他克莫司滴眼液房水、結(jié)膜、角膜和虹膜中的藥物含量，每只兔一眼他克莫司，另一眼滴0.1％羥甲基纖維素，每種濃度的滴眼液用4只兔。
樣本的采集用微量加樣器點(diǎn)滴20μl他克莫司滴眼液于角膜表面，間隔5分鐘后追加一次。肌肉注射氯胺酮及氯丙嗪麻醉后，制備樣本。
房水樣本的制備分別在最后一次滴眼后0.5小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、2.5小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)，用生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，然后用1ml一次性注射器從角膜緣進(jìn)行前房穿刺制備房水樣本，樣本放在-18C冰箱保存。
組織樣本的制備最后一次滴眼后2.5小時(shí)用氣體栓塞方法處死動(dòng)物，然后用刀片刮除角膜上皮，生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，抽取房水，用棉簽吸干結(jié)膜囊的水分，用顯微剪取部分球結(jié)膜、角膜和虹膜，然后用生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分后放在1.5ml試管中，蓋上蓋子。盡快放在電子天平上稱重，然后轉(zhuǎn)移到8ml玻璃試管中，加二氯甲烷5ml，用顯微剪充分粉碎組織。用離心機(jī)離心10分鐘后，取底層二氯甲烷4.5ml于另一試管中，用氯氣吹干。封閉試管口，于4℃保存。對(duì)照眼用同樣的方法處理。
檢測(cè)方法房水的測(cè)定該方法是一種應(yīng)用他克莫司單克隆抗體的敏感的競(jìng)爭(zhēng)酶免疫測(cè)定技術(shù)。這種方法是在已經(jīng)包埋羊抗鼠IgG的微滴度板(DiaSorin Inc)中進(jìn)行。
根據(jù)兔房水成分配制人工兔房水，用人工房水把標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到一定濃度后，再用兔房水配制成5ng/ml、10ng/ml、20/ml、30ng/ml、40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)濃度。
房水濃度測(cè)定把對(duì)照分已知他克莫司濃度對(duì)照、陽性對(duì)照、人工房水對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)。陽性對(duì)照不加單克隆抗體。標(biāo)準(zhǔn)、對(duì)照和樣品(各20μl)從已準(zhǔn)備好的300μl蛋白酶、皂角苷和鈣的混合反應(yīng)物(DiaSorin Inc.)中提取，然后取100μl上清液加到微滴度板的孔中。接著加入抗—他克莫司單克隆抗體(DiaSorin Inc.)50μl，陽性對(duì)照不加抗—他克莫司單克隆抗體加50μl結(jié)合物的稀釋液。室溫孵化30分鐘后，加入50μl稀釋的他克莫司—辣根過氧化酶結(jié)合物(DiaSorin Inc.)并孵化60分鐘。用沖洗液(DiaSorin Inc.)沖洗每個(gè)空，然后加入色素原四羥甲基聯(lián)苯胺(DiaSorin Inc.)200μl并孵化15分鐘。加入2N硫酸100μl終止反應(yīng)。應(yīng)用讀數(shù)儀(Bio Tek E1312e)的雙波長(zhǎng)450/630nm閱讀吸收情況。顏色的變化與樣品中的他克莫司的量成反比。濃度通過標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出房水對(duì)數(shù)濃度＝(吸收度－截距)÷斜率。然后把房水對(duì)數(shù)濃度轉(zhuǎn)化為普通濃度(ng/ml)。每測(cè)定一次，都需要有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖-1是其中一個(gè)用標(biāo)準(zhǔn)濃度制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
組織中他克莫司含量的測(cè)定在從眼組織中提取他克莫司的試管中加入兔房水200μl，用渦旋機(jī)充分混合。對(duì)照眼同樣方法處理。以后操作步驟同房水。組織中的含量(ng/g)＝測(cè)定濃度(ng/ml)0.2/組織重量(g)。
結(jié)果一般觀察結(jié)果分別用0.05％，0.1％，0.2％，0.4％的他克莫司滴眼液(前三濃度為實(shí)施例1、2、3)點(diǎn)滴單眼，然后裂隙燈觀察眼部的體征并與對(duì)側(cè)比較，觀察時(shí)間6小時(shí)。3天后每組4只動(dòng)物用藥后2.5小時(shí)處死，取血進(jìn)行他克莫司測(cè)定，同時(shí)取角膜進(jìn)行掃描和透射電鏡觀察。
眼部體征0.4％的他克莫司滴眼液引起輕度球結(jié)膜充血，3-4小時(shí)完全消失，未見角膜水腫及前房反應(yīng)。其余滴眼液未見眼部副作用。
電鏡觀察角膜上皮和內(nèi)皮微絨毛、細(xì)胞器、細(xì)胞連接與正常對(duì)照未見異常；基質(zhì)層纖維間隙正常。
全血他克莫司的測(cè)定應(yīng)用IMx系統(tǒng)Tacrolimus-II測(cè)定方法。各種滴眼液滴眼2.5小時(shí)后，血液中均未測(cè)到他克莫司。
房水濃度的測(cè)定結(jié)果動(dòng)態(tài)測(cè)定FK506在房水中的濃度分別應(yīng)用0.05％和0.1％的他克莫司滴眼液(實(shí)施例1、2)滴眼后，在0.5小時(shí)、1.0小時(shí)、2.0小時(shí)、2.5小時(shí)、3.0小時(shí)和4.0小時(shí)抽取房水，每只兔只能抽一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的房水。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每種濃度滴眼液測(cè)定樣本5個(gè)。結(jié)果顯示實(shí)施例1滴眼后，藥物在1小時(shí)房水濃度達(dá)到峰值(18.93±6.95ng/ml)，在4小時(shí)房水中測(cè)不到他克莫司。實(shí)施例2滴眼后的房水高峰值約l-2小時(shí)之間，在2小時(shí)時(shí)的房水濃度是28.33±1.36ng/ml，在4小時(shí)是3.95±0.55ng/ml。
另外我們分別觀察實(shí)施例1、2、3及4％的他克莫司滴眼后2.5小時(shí)房水中的他克莫司濃度，每種滴眼液4個(gè)樣本，結(jié)果見表-1。實(shí)施例1、2滴眼液滴眼后房水他克莫司濃度有顯著性差異，余各組之間無顯著性差異。
表-1不同濃度他克莫司滴眼液滴眼后2.5小時(shí)房水濃度
在我們的研究中0.1％(實(shí)施例2)、0.2％(實(shí)施例3)和0.4％的他克莫司各組之間房水濃度無差異，可能是隨藥物濃度的增加對(duì)眼部的刺激增加，淚液分泌和局部血流增加，導(dǎo)致血液吸收和淚道排出快。另外結(jié)膜血液供應(yīng)豐富，結(jié)膜內(nèi)的他克莫司吸收快，因此含量低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明的各實(shí)施例中他克莫司在眼房水能達(dá)到其治療濃度。
二、取本發(fā)明的藥物他克莫司與環(huán)孢霉素A和地塞米松進(jìn)行大鼠角膜的排斥的預(yù)防作用的試驗(yàn)。
目的通過觀察表面應(yīng)用不同濃度的他克莫司滴眼液對(duì)大鼠同種異體角膜移植排斥的預(yù)防和治療作用，并與單獨(dú)表面應(yīng)用CSA、地塞米松和聯(lián)合應(yīng)用地塞米松作比較，闡明不同免疫抑制劑和聯(lián)合用藥對(duì)大鼠同種異體角膜移植免疫排斥的治療作用，為臨床預(yù)防和治療移植排斥選擇最佳的治療方案。
方法Wister鼠為供體，SD鼠為受體，進(jìn)行同種異體角膜移植。然后把它們隨機(jī)分為單獨(dú)表面應(yīng)用載體的對(duì)照組和表面應(yīng)用0.05％他克莫司(實(shí)施例1)組、0.1％他克莫司(實(shí)施例2)組、0.05％他克莫司+0.1％地塞米松組、0.1％地塞米松組和2.5％環(huán)胞霉素組的治療組。在不同時(shí)間觀察不同組的臨床表現(xiàn)、活體共焦顯微鏡檢查表現(xiàn)、病理和免疫組織化學(xué)特點(diǎn)。第8周測(cè)定全血環(huán)胞霉素和他克莫司的濃度。
結(jié)果對(duì)照組所有的植片第2周出現(xiàn)明顯的混濁、新生血管的免疫排斥現(xiàn)象，持續(xù)3周的時(shí)間。與對(duì)照組相比各治療組的植片均未出現(xiàn)明顯的排斥現(xiàn)象與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異(p＜0.05)。各治療組之間，0.05％他克莫司+0.1％地塞米松組較其它治療組角膜植片透明度均好，除與0.1％地塞米松組無統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異外，與其它各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異(P＜0.05)。含有地塞米松的治療組與其它治療組相比，早期有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性減輕角膜植片水腫和角膜植片新生血管的作用(p＜0.05)，其它各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異。手術(shù)后第15天共焦顯微鏡檢查和病理檢查發(fā)現(xiàn)對(duì)照組角膜基質(zhì)有明顯的新生血管和單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)，單個(gè)核細(xì)胞明顯分布在新生血管周圍和血管內(nèi)。治療組主要表現(xiàn)為基質(zhì)水腫。手術(shù)后15天免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)各治療組均降低各種免疫細(xì)胞和免疫因子超過2/3以上(除B細(xì)胞)，其中以0.05％他克莫司+0.1％地塞米松組對(duì)細(xì)胞浸潤(rùn)的抑制作用最顯著。手術(shù)后8周，病理檢查發(fā)現(xiàn)各治療組均有不同程度角膜基質(zhì)纖維化。手術(shù)后第8周，環(huán)胞霉素的全血平均濃度是646.27ng/ml±296.51，沒應(yīng)用CSA滴眼液的對(duì)照組為0。0.1％他克莫司(實(shí)施例2)組全血平均濃度是5.53ng/ml±3.67，0.05％他克莫司(實(shí)施例1)組血液濃度均為0，未應(yīng)用他克莫司的對(duì)照組血液濃度值為0。
結(jié)論在我們的動(dòng)物模型中，表面應(yīng)用皮質(zhì)類固醇、他克莫司和CSA均有顯著治療角膜同種異體移植免疫排斥的作用，但是不能完全阻斷免疫排斥。皮質(zhì)類固醇對(duì)早期的炎癥有明顯的抑制作用，具有移植后早期植片水腫輕和較早地恢復(fù)植片的透明性的特點(diǎn)。他克莫司和CSA對(duì)早期的植片水腫治療作用較差。它們對(duì)角膜移植后新生血管均有抑制作用，抑制新生血管的強(qiáng)弱順序是皮質(zhì)類固醇最強(qiáng)，其次是他克莫司，再次是CSA。他克莫司對(duì)角膜移植排斥的治療作用可以通過局部的免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。皮質(zhì)類固醇的聯(lián)合應(yīng)用明顯加強(qiáng)他克莫司的局部抑制免疫排斥作用。在我們的動(dòng)物模型中，CSA的表面應(yīng)用的免疫抑制作用可能是通過藥物的全身吸收發(fā)揮作用，關(guān)于局部是否起免疫調(diào)節(jié)作用有待進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。早期表面應(yīng)用他克莫司聯(lián)合皮質(zhì)類固醇可視為預(yù)防人類高危險(xiǎn)角膜移植排斥反應(yīng)理想治療方案。后期為了防止皮質(zhì)類固醇的副作用，眼部炎癥穩(wěn)定后或拆除角膜縫線后可以單獨(dú)表面應(yīng)用他克莫司。
三、探討FK-506抑制高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的臨床可行性與有效性。
方法應(yīng)用前瞻性評(píng)估研究方法，將56例高危角膜移植手術(shù)者(56只眼)按隨機(jī)原則分投藥組及對(duì)照組各半，投藥組應(yīng)用0.5mg/ml的FK-506滴眼液(實(shí)施例1)，對(duì)照組應(yīng)用1％CsA滴眼液；平均隨訪期5個(gè)1/2個(gè)月，以術(shù)后視功能、植片透明維持時(shí)間、植片新生血管、水腫、混濁程度作為臨床主要評(píng)估指標(biāo)。
結(jié)果隨防期內(nèi)投藥組與對(duì)照組角膜移植片排斥發(fā)生率分別為60.8％及89.3％(u＝2.468，P＜0.05)，其差異具有顯著性。
結(jié)論局部應(yīng)用FK-506可有效抑制高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生。
材料與方法(一)病例選擇本研究選擇了高危角膜移植病例56例(56只眼)，男性32只眼，女性24只眼，平均年齡31歲(19～66歲)；其中全角膜移植27只眼，帶鞏膜環(huán)的全角膜移植14只眼，血管化角膜的角膜移植10只眼，多次移植10只眼。致盲的原因分別為角膜化膿性感染(30只眼)，嚴(yán)重化學(xué)傷(18只眼)及熱灼傷(8只眼)。將上述病例按隨機(jī)原則分成FK-506組及CsA組各28例(28只眼)。
(二)藥物治療組他克莫司滴眼液采用實(shí)施例1。
對(duì)照藥CsA為瑞士Sandoz藥廠產(chǎn)品，使用蓖麻油稀釋1％的滴眼液。皮質(zhì)類固醇滴眼液應(yīng)用美國(guó)愛爾康公司生產(chǎn)的點(diǎn)必舒滴眼液。
(三)投藥方案將上述病例按隨機(jī)原則分投藥組及對(duì)照組各28只眼，投藥組應(yīng)用0.05％(克每百毫升)FK-506(實(shí)施例1)及點(diǎn)必舒滴眼液(每天四次，每次一滴)；對(duì)照組應(yīng)用1％cCsA及點(diǎn)必舒滴眼液(每天四次，每次一滴)。術(shù)后3天投藥，持續(xù)3-9個(gè)月，隨訪期為51/2個(gè)月。
(四)觀察指標(biāo)投藥后1-3個(gè)月，每周觀察2次；3個(gè)月后每周觀察1次。觀察項(xiàng)目為視力與移植片情況(包括植片新生血管、水腫、混濁3項(xiàng)指標(biāo))，各項(xiàng)指標(biāo)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下新生血管分0-3級(jí)；0級(jí)為無新生血管(0分)；1級(jí)為少量新生血管且主要集中于植片并開始進(jìn)入植片周邊部分(1分)；2級(jí)為少量新生血管且主要集中于植片中央(2分)；3級(jí)為大量新生血管布滿整個(gè)植片(3分)。植片水腫分0-3級(jí)0級(jí)為無水腫(0分)；I級(jí)為輕度水腫(1分)，II級(jí)為中度水腫(2分)；III級(jí)為嚴(yán)重水腫(3分)。植片混濁分0-3級(jí)0級(jí)為無混濁(0分)；I級(jí)為輕度混濁，虹膜紋理清晰(1分)；II級(jí)為中度混濁但仍可見虹膜(2分)；III級(jí)為嚴(yán)重混濁看不到虹膜與瞳孔(3分)。排斥反應(yīng)指數(shù)(rejection index，RI)為上述3項(xiàng)指標(biāo)之和，當(dāng)RI≥5分時(shí)視為排斥反應(yīng)。上皮排斥反應(yīng)、術(shù)中出現(xiàn)并發(fā)癥及術(shù)后由于植片內(nèi)皮功能衰竭、傷口裂開、繼發(fā)性青光眼、植片感染等原因產(chǎn)生的植片水腫、溶解不列入本研究。
(五)結(jié)果記錄統(tǒng)計(jì)與方法本研究病例全部由角膜病科教授在統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)下施術(shù)；供體角膜統(tǒng)一采用成人新鮮材料，術(shù)后由專人定期隨訪記錄，所有數(shù)字均輸入計(jì)算機(jī)并作t檢驗(yàn)、u檢驗(yàn)與方差分析。
結(jié)果(一)術(shù)后視力在隨訪期內(nèi)，F(xiàn)K-506組的最終視力(包括難矯視力)≥0.05者有11只眼(39.3％)；CsA組的最終視力≥0.5者有4只眼(14.3％)，u＝2.034，P＜0.05，兩眼間的差異具有顯著，F(xiàn)K-506組的結(jié)果優(yōu)于CsA組。
(二)角膜移植片排斥反應(yīng)的發(fā)生率。
FK-506組與CsA組術(shù)后移植片透明維持時(shí)間分別為70.4±18.32天和41.8±12.75天(t＝6.223，P＜0.01)；隨訪期內(nèi)，兩組移植片不同時(shí)期排斥反應(yīng)發(fā)生北詳見表2，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，兩組最終排斥發(fā)生率分別為60.8％(17/28)89.3％(25/28)，u＝2.468，p＜0.05。從術(shù)后3個(gè)月開始，F(xiàn)K-506組的排斥發(fā)生率比同期的CsA組明顯降低，其臨床免疫抑制效果明顯優(yōu)于CsA。
(三)其它參數(shù)在觀察期內(nèi)，F(xiàn)K-506組及CsA組角膜移植片的新生血管指數(shù)、水腫指數(shù)、混濁指數(shù)及RI值詳見表3。結(jié)果顯示，在隨訪期內(nèi)，F(xiàn)K-506組在上述4項(xiàng)指標(biāo)均明顯優(yōu)于CsA組，兩組間均具有顯著性差異。在上述4項(xiàng)參數(shù)中，新生血管指數(shù)變化最快；術(shù)后3-4周，4項(xiàng)指標(biāo)的變化開始出現(xiàn)差別；術(shù)后3個(gè)月左右，兩組的改變出現(xiàn)顯著差異。
(四)不良反應(yīng)FK-506組的所有患者對(duì)該藥具有良好的耐受性，滴眼后所有患者均未出現(xiàn)刺痛、瘙癢、角膜上皮毒性等不良反應(yīng)。而CsA組的患者70％反映有輕度刺痛感。
為了有效解決FK-506眼局部用藥問題，我們選擇高危角膜移植作為臨床研究對(duì)象，在藥效學(xué)、耐藥性試驗(yàn)及藥代動(dòng)力學(xué)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)FK-506滴眼液的劑型、濃度及臨床效價(jià)與不良反應(yīng)作全面的探討。
FK-506滴眼液局部應(yīng)用可有效抑制高危角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)。本研究結(jié)果表明在高危角膜移植術(shù)后，F(xiàn)K-506的局部應(yīng)用可使投藥組角膜移植片透明存活時(shí)間、術(shù)后有用視力及其它各項(xiàng)排斥參數(shù)明顯優(yōu)于對(duì)照組。尤其在移植術(shù)后的中晚期，其抑制新生血管、降低移植片不腫混濁的發(fā)生率優(yōu)于CsA。這對(duì)雙眼看失明、條件極差的角膜盲患者的角膜移植手術(shù)提供了一種較有臨床價(jià)值的治療手段。在本研究過程中，我們尚未發(fā)現(xiàn)FK-506滴眼液局部應(yīng)用后任何毒副作用。其安全性也為臨床推廣應(yīng)用提供了重要的前提。
另外在本研究中，我們還發(fā)現(xiàn)FK-506在眼表重建術(shù)及頑固性免疫性角膜病(如蠶蝕性角膜潰瘍、韋格內(nèi)氏肉芽腫)的治療也顯示出良好的臨床效果。
本發(fā)明的各實(shí)施例顯示與實(shí)施例1有相類似的結(jié)果。
本發(fā)明不限于上述實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.一種眼前段及眼表免疫相關(guān)性的疾病治療藥物，為他克莫司，其分子式為C44H69NO12.H2O，或者其它無水物，他克莫司的結(jié)構(gòu)式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于采用的藥物劑型為藥劑學(xué)上所說任何一種眼局部用藥的劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于采用的劑型為滴眼液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于采用的劑型為眼藥膏。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于滴眼液的配方為他克莫司 0.02～0.2克氯化物0～1.5克表面活性劑適量抑菌劑適量增粘劑至粘度為40～50厘泊加水至100毫升。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或5所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于滴眼液配方中的表面活性劑為聚乙氫化蓖麻油。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物，其特征在于眼藥膏的配方為他克莫司0.02～0.2克無水羊毛脂8～15克液狀石蠟2～10克黃凡士林75～95克聚乙烯氫化蓖麻油0.8～8克。
全文摘要
一種眼前段及眼表免疫相關(guān)性疾病治療藥物,為他克莫司,分子式為C
文檔編號(hào)A61K47/14GK1333018SQ0011723
公開日2002年1月30日 申請(qǐng)日期2000年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月7日
發(fā)明者陳家祺, 劉永民 申請(qǐng)人:中山醫(yī)科大學(xué)中山眼科中心