一種植物源殺菌、抗病毒制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及藥用植物殺菌、抗病毒成分提取及制劑的 研制。
【背景技術(shù)】
[0002] 化學(xué)殺菌劑的廣泛使用帶來了環(huán)境污染、殘毒危害、病毒抗藥、人畜安全受到威脅 等一系列問題。從植物中尋找抗病毒活性物質(zhì)是開發(fā)無公害生物抗病毒制劑的一條有效途 徑，以此來緩解當(dāng)前化學(xué)藥物嚴(yán)重污染問題。中國(guó)藥用植物資源十分豐富，其中許多植物具 有強(qiáng)大的殺菌抗病毒功能，為人類開發(fā)利用這些藥用植物資源提供了便利的條件。
[0003] 據(jù)統(tǒng)計(jì)，地球上的植物至少有50萬種，而植物產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)種類繁多，已 超過40萬種。Wilkins等曾報(bào)道有1389種植物有可能作為殺菌劑的原材料，Grange和 Ahmed報(bào)道約有2400種植物具有防治有害生物的活性。目前人們認(rèn)為具有抑菌、殺菌抗病 毒活性的植物，大部分資源集中在菊科、唇形科、木蘭科、馬兜鈴科、寥科、木犀科、百合科、 萌蘆科、莎草科、豆科、十字花科等植物中，除此之外還有樟科的肉桂、香葉樹、暴馬丁香、 Thymbra spicata、Satureja thymbra、白桂等。
[0004] 有關(guān)植物及其提取物的抗菌、抑菌作用已有相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，主要集中在對(duì)人、動(dòng) 物的殺菌治療和作為農(nóng)作物殺菌劑的試驗(yàn)及應(yīng)用研究。張薇等（2007)對(duì)植物揮發(fā)性物質(zhì) 的化學(xué)成分及其抵抗微生物的能力以及與生態(tài)學(xué)相關(guān)可能產(chǎn)生的增效作用進(jìn)行了研究；索 菲婭等（2006)對(duì)孜然揮發(fā)油、孜然醇提物、孜然水提物、孜然醇后水提物，用Bauer-Kirby 法實(shí)驗(yàn)探討了各提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等7種細(xì)菌和酵母菌的抑菌效果；司 紅彬等（2006)測(cè)定了黃連、魚腥草、大青葉和苦參4味中藥及其相互配比（I : 1)對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 大腸桿菌的最小抑菌濃度MIC值介于3. 91~62. 50mg/mL之間；陳枝M等（2006)測(cè)定了 黃連、黃柏、虎杖、丁香、石榴皮、七葉一枝花、五倍子、白頭翁、仙鶴草、連翹、金銀花、苦參、 蛇床子、訶子等14味中藥對(duì)白色念珠菌的抗菌作用，黃連的最小抑菌濃度為6. 25mg/mL，黃 柏、虎杖的最小抑菌濃度為25. 00mg/mL，丁香、石植皮、七葉一枝花、五倍子的最小抑菌濃度 為50.0 Omg/mL ;蔡金等（2006)測(cè)定了 20種具有抗菌消炎作用的中藥水提物對(duì)啤酒酵母、 假絲酵母、黑曲霉及擬青霉的抗菌活性，其中苦參總堿，黃芩提取物具有較強(qiáng)的抑菌活性， 對(duì)假絲酵母的抑菌濃度小于0. 〇〇625g/mL ;王德海等（2005)采用試管法和平板法，分別測(cè) 定了 10種中草藥對(duì)臨床分離的一株雞關(guān)節(jié)炎源性金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC)， 發(fā)現(xiàn)黃連、大青葉、艾葉、連翹4種中草藥體外抗菌效果更明顯；陳文偉等（2005)檢測(cè)了 8 種中草藥對(duì)耐藥金葡菌的最小抑菌濃度分別為：九節(jié)茶、白芍、黃芩為62. 5mg/mL，丹皮、黃 連、厚樸為15. 6mg/mL，夏枯草為7. 8mg/mL，訶子為1.0 mg/mL ;王興華等（2005)測(cè)定了多種 藥用植物及不同復(fù)方對(duì)4種植物病原菌的MIC，復(fù)方藥物的最佳組方為：雷公藤5g、蛇床子 l〇g、大黃5g、苦參10g、馬齒莧10g、黃柏10g、黃芩10g，對(duì)4種植物病原菌的MIC分別為： 黃瓜黑斑病菌3. 2 %，青椒枯萎病菌5. 0 %，黃瓜枯萎病菌4. 4%，禾谷類作物病菌3. 0 %;劉 志春等（2004)測(cè)定了五味子等29種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌的抑菌 作用，其中五味子的抑菌作用最強(qiáng)，抑菌圈最大者達(dá)40mm，MIC為6. 25-10.0 Omg/mL ;王理達(dá) 等（2001)對(duì)13種生藥的醇提物及13種單體化合物進(jìn)行啤酒酵母突變性GL7和威克海姆 原藻的敏感性測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃柏、丁香、烏梅、黃連、山豆根對(duì)二者均有強(qiáng)烈抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種植物源殺菌、抗病毒制劑及其制備方法，以虎杖、千里光、魚腥 草、仙人掌、苦參等植物為原材料，通過獨(dú)特的配方工藝，研發(fā)出殺菌力強(qiáng)、無毒副作用的純 植物天然殺菌、抗病毒制劑產(chǎn)品。
[0006] 該產(chǎn)品為純植物天然殺菌、抗病毒制劑，具有無刺激性、無毒副作用、無殘留、穩(wěn)定 和安全高效的特點(diǎn)。
[0007] 本發(fā)明植物源殺菌、抗病毒制劑，包括組分為下列原料的水提物：虎杖、千里光、魚 腥草、仙人掌和苦參；各原料水提物的體積百分比為：虎杖液15-60%，魚腥草液10-40%， 千里光液5-60 %，仙人掌液5-40 %，苦參液5-40 %。
[0008] 進(jìn)一步的，本發(fā)明植物源殺菌、抗病毒制劑，包括組分為下列原料的水提物：虎杖、 千里光、魚腥草、仙人掌和苦參；各原料水提物的體積百分比為：虎杖液35-55%，魚腥草液 10-30 %，千里光液5-25 %，仙人掌液5-30 %，苦參液5-30 %。
[0009] 進(jìn)一步的，一種植物源殺菌、抗病毒劑，所述殺菌劑的組分為下列原料的水提物的 重量百分比：虎杖液45%，魚腥草液20%，千里光液15%，仙人掌液10%，苦參液10%。
[0010] 所述原料的水提物是在原料中加入10~30倍原料重量（w/v)的水，在60_100°C 下水提1~3h，提取1~3次，合并提取液，得到原料的水提物。
[0011] 所述虎杖液的制備為虎杖和水按重量體積比為1 : 10-20,在60-100°C下水 提l_3h，提取1_3次；所述千里光液的制備為千里光和水按重量體積比為1 : 10-30,在 60-100°(：下水提2-411，提取1-3次；
[0012] 所述魚腥草液的制備為：將有機(jī)溶劑和水按1:3的比例混合為提取溶劑，加入魚 腥草于提取溶液中，魚腥草和提取溶液的料液比按重量體積為1 : 5-30,在40-70°C下提 2_3h，提取過濾2-3次，合并過濾后的濾液，升溫至80-KKTC，回收有機(jī)溶劑，剩余濾液即為 魚腥草液。
[0013] 所述的有機(jī)溶劑為甲醇和石油醚中的任意一種。
[0014] 所述仙人掌液的制備為仙人掌：將仙人掌殺菌粉碎后，仙人掌：加水比1 : 10-30 (w/v)，提取溫度為50-70 °C，提取1-3次；
[0015] 所述苦參液的制備為苦參和水按重量體積比為1 : 5-15,在80-100°C下水提 l-2h，提取1-3次。
[0016] 進(jìn)一步的，所述虎杖液的制備：虎杖和水按重量體積比為1 : 10,在100°C下水提 2h，提取3次；所述千里光液的制備為千里光和水按重量體積比為1 : 30,在KKTC下水提 2h，提取1次；
[0017] 所述魚腥草液的制備為魚腥草：將有機(jī)溶劑和水按1:3的比例混合為提取溶劑， 加入魚腥草于提取溶液中，魚腥草和提取溶液的料液比按重量體積比為1 : 25,在50°C下 提4h，提取過濾1-3次，合并過濾后的濾液，升溫至80-KKTC，回收有機(jī)溶劑，剩余濾液即為 魚腥草液；
[0018] 所述仙人掌液的制備為將仙人掌殺菌粉碎后，仙人掌和水按重量體積比為I : 10-30,在100°C的溫度下提取I. 5h，提取3次；
[0019] 所述苦參液的制備為苦參和水按重量體積比為1 : 5-15,在100°C下水提2h，提取 1次。
[0020] 所述的植物源殺菌、抗病毒劑的制備方法是將虎杖、魚腥草、千里光、仙人掌和苦 參的水提物分別配制成含生藥濃度lg/L的溶液，按比例混合，即得到植物源殺菌、抗病毒 劑。
[0021] 魚腥草中含有大量的蛋白質(zhì)，脂肪，糖類，黃酮和揮發(fā)油，其中黃酮和揮發(fā)油具有 很好的藥用價(jià)值，具有抗病原微生物作用，抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌，枯草桿菌，卡他 球菌，痢疾桿菌，流感桿菌、肺炎雙球菌，具有強(qiáng)性殺菌作用，同時(shí)魚腥草提取物的抑菌作用 有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。
[0022] 仙人掌中含有大量的氨基酸，同時(shí)還含有生物堿，黃酮甙，強(qiáng)心甙和皂甙等活性成 分，能夠抑制破壞菌體內(nèi)部蛋白質(zhì)，同時(shí)抑制蛋白質(zhì)的合成，從而抑制細(xì)菌。
[0023] 本發(fā)明植物源殺菌、抗病毒制劑的制備方法為將虎杖、魚腥草、千里光、仙人掌和 苦參的水提物分別配制成含生藥濃度lg/L的溶液，按比例混合，即得到植物源殺菌、抗病 毒劑。
[0024] 本發(fā)明植物源抗病毒制劑的主要技術(shù)指標(biāo)如下：
[0025] (1)棕色半透明液體，并有微量不溶物沉淀；略帶酸味，無其他雜味；
[0026] (2)pH值（I : 10 溶液）7.0-8.5,總固體含量 0· 1-2%，汞彡 lmg/kg，砷彡 IOmg/ kg，鉛彡 40mg/kg ;
[0027] (3)對(duì)流感病毒及大腸桿菌，枯草桿菌，卡他球菌，痢疾桿菌，流感桿菌、肺炎雙球 菌，金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和淋球菌均具有抑制性，抑菌率達(dá)100%，具有強(qiáng)力的殺菌 抗病毒作用；
[0028] (4)小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、家兔皮膚刺激試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)表明，"植物 源殺菌劑"穩(wěn)定、安全、無毒副作用；
[0029] (5)可用于公共場(chǎng)所的消毒及垃圾、污水的殺菌、除臭。
[0030] 本發(fā)明的特點(diǎn)：
[0031] 1.純植物制劑：以虎杖、千里光、魚腥草、仙人掌、苦參等植物為原材料，產(chǎn)品穩(wěn) 定、安全、無殘留、無毒副作用。
[0032] 2.殺菌抗病毒效果顯著：對(duì)流感病毒及大腸桿菌，枯草桿菌，卡他球菌，痢疾桿 菌，流感桿菌、肺炎雙球菌，金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和淋球菌的抑菌率達(dá)100% ;對(duì)生 活垃圾和污水中細(xì)菌的殺菌效果顯著。
[0033] 3.植物源殺菌抗病毒制劑除可應(yīng)用于外科抗菌消炎外，還可廣泛應(yīng)用于對(duì)生活垃 圾、糞便、污水、公共廁所的殺菌除臭，達(dá)到殺菌、防病和改善生態(tài)環(huán)境的作用，提高人們的 生活質(zhì)量。且用量少，每噸垃圾只需用本產(chǎn)品10公斤，每m3污水只需用本產(chǎn)品50mL，就可 有效殺滅其中存在的病毒及細(xì)菌，達(dá)到除臭的目的。
[0034] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)：
[0035] 植物源殺菌抗病毒制劑的優(yōu)勢(shì)特色與抗生素等的比較，主要體現(xiàn)在藥效的整體性 和藥源的天然性兩方面。其一，西藥大多數(shù)是化學(xué)合成的，成分單一；而植物藥來源于天然， 大多含有復(fù)雜的化學(xué)成分，由多味植物藥配伍組成的復(fù)方，其化學(xué)成分就更復(fù)雜；多種化學(xué) 成分作用于動(dòng)物體，往往會(huì)產(chǎn)生多元組合效應(yīng)。其二，由于植物藥絕大多數(shù)來自天然，因而 具有許多天然的屬性，如化學(xué)成分組合的天然合理性，功效的整體性和雙向性，以及毒副作 用小，不易導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗耐藥性，很少在動(dòng)物體內(nèi)形成有害殘留等。植物藥的這些 天然屬性是許多西藥所沒有的。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 植物源殺菌抗病毒制劑配方優(yōu)化
[0039] 1.藥用植物的篩選
[0040] 通過市場(chǎng)調(diào)查和查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，選取藥理作用比較接近、并在藥理上有互補(bǔ) 性的虎杖、千里光、魚腥草、仙人掌、苦參等植物作為原材料。
[0041] 2.藥用植物的浸提條件研究
[0042] 以浸膏得率為指標(biāo)，采用L9(34)正交表設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，研究提取溫度、提取時(shí)間、 提取次數(shù)、原料加水比對(duì)浸膏得率的影響。
[0043] (1)虎杖
[0044] 表1-1因素水平表

[0052] F0.05 (2, 4) = 6. 94 ；F0.01(2,4) =18.00
[0053] 方差分析結(jié)果表明，因素 A(提取溫度）和因素 D(原料加水比）影響顯著，因素作 用的主次順序D -A -C