專利名稱：防治植物病毒病的生物復配制劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種生物制劑及其應(yīng)用，特別是涉及ー種用于防治植物病毒病的生物復配制劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
病毒是ー類無細胞結(jié)構(gòu)的極其微小的專性寄生物，必須用電鏡才能觀察到它的形態(tài)。植物病毒的形態(tài)多呈球形或桿狀，它不是一個細胞體，而是個微粒，稱為病毒粒體。這種粒體是核酸和蛋白質(zhì)兩種物質(zhì)組成的，核酸位于中心或中軸，蛋白質(zhì)包圍在核酸外面。病毒用自我復制(利用寄主活細胞的各種原料)的方法進行繁殖，由病毒侵染植物引起的病害稱為病毒病。植物病毒感染植物后，對植物細胞的影響與動物病毒一祥，會打亂植物細胞 的正常代謝活動，使植物的生長和發(fā)育遭到破壞，從而降低農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。受害植物通常表現(xiàn)為變色、壞死、畸形等癥狀。植物病毒除借帶毒的繁殖材料如接穗、鱗莖、塊根、塊莖等傳播外，主要是通過昆蟲，以及螨類、土壌中的真菌、線蟲等媒介體傳播。據(jù)統(tǒng)計，毎年由于病毒病的危害，全世界的糧食損失為200億美元。微生物蛋白農(nóng)藥是ー種新型生物農(nóng)藥，無毒無殘留，環(huán)境友好，能激活植物的一系列代謝調(diào)控反應(yīng)，從而使植物對病蟲害產(chǎn)生抗性，促進植物生長，提高作物品質(zhì)，増加作物產(chǎn)量。極細鏈格孢激活蛋白主要是通過提高植物自身的免疫系統(tǒng)而激活植物對于植物病毒病的抗性。氨基寡糖素是ー類開發(fā)較早的生物農(nóng)藥，在植物與病原菌的相互作用中，病原菌分泌的細胞壁降解酶通過水解植物細胞壁而釋放出寡糖信號分子，并以極低濃度傳達給植物受侵染的信息，誘導植物編碼植保素和其他防御化合物合成酶基因的表達，啟動植物細胞的防御反應(yīng)。這兩種生物農(nóng)藥對植物病毒病來說具有較好的防治結(jié)果，但從生產(chǎn)實踐中講，還是期望有更高防治效果并且使用成本較低、用量較少的藥劑出現(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種防治植物病毒病效果更好、用量較少、使用成本較低的生物復配制劑，及其在植物病毒病防治上的應(yīng)用。本發(fā)明ー種防治植物病毒病的生物復配制劑，由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比I : (0. 5 2. 0)復配而成，其中極細鏈格孢激活蛋白母液是將極細鏈格孢激活蛋白含量為10%的極細鏈格孢激活蛋白母藥用0. I %的吐溫-80水溶液稀釋制得，氨基寡糖素母液是將氨基寡糖素含量為7. 5%的氨基寡糖素母藥用0. 1%的吐溫-80水溶液稀釋制得。其中所述的極細鏈格孢激活蛋白母藥由中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠提供，氨基寡糖素母藥由遼寧省大連凱飛化學股份有限公司提供。上述生物復配制劑，優(yōu)選極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液的體積比為
I Io
本發(fā)明的生物復配制劑可用于防治植物病毒病。上述生物復配制劑在防治植物病毒病中的應(yīng)用，優(yōu)選在防治番茄黃化曲葉病毒病、水稻條紋病毒病或煙草花葉病毒病中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果通過將極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按一定比例進行復配，得到ー種復配制劑，該制劑可最大限度的發(fā)揮極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的藥效，使藥劑的活性有了很大提高，藥劑的使用劑量和使用成本有了很大的降低。比這兩種母藥單獨使用更有效地防治植物病毒病的發(fā)生，特別是在番茄黃化曲葉病毒病(TYLCV)、水稻條紋病毒病(RSV)、煙草花葉病毒病(TMV)的防治上具有更好的防治效果。
具體實施例方式下面結(jié)合本發(fā)明具體的試驗過程，進ー步闡述本發(fā)明。實施例I :本發(fā)明對番茄黃化曲葉病毒病的防治效果試驗 步驟一、藥液的配制母液的制備10%極細鏈格孢激活蛋白母藥、7. 5%氨基寡糖素母藥分別用O. 1%的吐溫-80水溶液稀釋，先分別配制成1000mg/L單劑母液，然后再分別以體積比I : I、
I: 2、2 : 1、2 3、3 2的比例復配成五組復配劑母液，備用。濃度的設(shè)定根據(jù)藥劑活性分別將極細鏈格孢激活蛋白單劑母液、氨基寡糖素單劑母液、五組復配劑母液分別用O. I %的吐溫-80水溶液配置成10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L和160mg/L 5個系列濃度的藥液，每個濃度的藥液設(shè)置3個重復試驗。步驟ニ、供試靶標供試革巴標為中國番爺黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV),因該屬病毒在自然條件下只能由煙粉風(Bemisia tabaci)以持久方式傳播。傳毒介體的篩選2008年4 5月從南方重病區(qū)中采集煙粉虱若蟲，在感病品種上進行飼養(yǎng)，交配后單頭雌蟲單獨產(chǎn)卵，再采用斑點免疫結(jié)合法檢測雌蟲帶毒情況，保留帶毒雌蟲的后代，飼養(yǎng)2 3代后獲得煙粉虱群體，選擇帶毒率大于50%的群體分別飼養(yǎng)，獲得TYLCV傳毒介體煙粉虱，連續(xù)5代監(jiān)測其群體帶毒率均大于50%，備用。步驟三、防治效果的試驗選用感病品種將感病品種播于IOOOmL燒杯中，每杯播種25株苗。待秧苗長至3葉時進行接種，接種前2d淘汰病弱苗，挑選生長一致的幼苗20株，用防蟲網(wǎng)蓋好用于接種，備用。藥劑處理用噴霧法將藥劑均勻噴灑于備用的番茄苗葉面至全部潤濕，待藥液自然風干后備用。每處理3盆，4次重復，并設(shè)只含溶劑和表面活性劑而不含有效成分的處理作空白對照。接種與培養(yǎng)保護性試驗一般為藥劑處理后24h左右進行接種；治療性藥劑一般在藥劑處理前24h接種。采用傳毒介體煙粉虱接種，接種時間48h，接種強度4頭/株和番茄接種齡期3 4葉齡。按有效接種蟲量4頭/株將2 4齡接入杯中，每天趕蟲2次以確保被測番茄苗均勻獲毒。接種后移走全部煙粉虱，再將番茄苗移栽至塑料小盆內(nèi)培養(yǎng)。接種后在每天連續(xù)光照/黑暗各12h交替(光照強度為5000LUX 20000LUX)、溫度為18 20°C的條件下培養(yǎng)7d。接種7d后開始調(diào)查病害，每隔I天調(diào)查I次，共調(diào)查15次。
調(diào)查待空白對照病葉率達到50%以上時，分級調(diào)查各處理發(fā)病情況，每處理至少調(diào)查30片葉。采用如下分級方法。O級整株健康無黃化曲葉；1級輕度矮化。株高為健株株高的I 4/5左右；3級矮化。株高為健株株高的4/5 2/3左右，頂部典型黃化曲葉；5級明顯矮化。株高為健株株高的2/3 1/2左右，頂部典型黃化曲葉；7級明顯矮化。株高為健株株高的1/2 1/3左右，整株典型癥狀；9級嚴重矮化。株高為健株株高的1/3以下，整株典型癥狀，或提早枯死。步驟四、數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析計算方法根據(jù)調(diào)查結(jié)果，按公式(I)、(2)計算各處理濃度對供試靶標的病情指數(shù)和防治效
果O 病情指數(shù)按公式(I)計算，單位為百分率)。
Σ (N1Xi)X= .................xlOO...................................(I)
NX9式中-X——病情指數(shù)；隊——各級病葉數(shù)；i——各級相對級數(shù)值；隊——調(diào)查總 葉數(shù)。防治效果按公式⑵計算。
CK-PTP=..............xlOO.........................(2)
CK式中P——防治效果，單位為百分率)；CK——空白對照病情指數(shù)；PT——藥劑處理病情指數(shù).對藥劑混劑聯(lián)合毒力測定，根據(jù)孫云沛法計算混劑的共毒系數(shù)(CTC)，評價混劑的聯(lián)合作用類型孫云沛法根據(jù)共毒系數(shù)(CTC)來評價藥劑混用的增效作用，即CTC彡80為拮抗作用，80 < CTC < 120為相加作用，CTC彡120為增效作用。共毒系數(shù)(CTC)按式(3)、(4)、(5)計算
SATI= ..........xlOO....................(3)
M式中ΑΤΙ——混劑實測的毒力指數(shù)；S——標準藥劑的LD5tl,單位為毫克每升(mg/L) ；M-供試混劑的LD5tl,單位為毫克姆升(mg/L)。TTI = TIAXPA+TIBXPB.....................(4)式中TTI——混劑的理論毒カ指數(shù)；ΤΙΑ——A藥劑的毒力指數(shù)；Pa——A藥劑在混劑中的百分含量，單位為百分率)；TIb——B藥劑的毒力指數(shù)；Pb——B藥劑在混劑中的百分含量，單位為百分率
(% )ο
ATICTC= ..........xlOO..................(5)
TTI
式中CTC—共毒系數(shù);ATI——混劑實測毒力指數(shù)；TTI——混劑理論毒力指數(shù)。結(jié)果與分析根據(jù)調(diào)查結(jié)果(見表1-2)，計算試驗藥劑的殺菌效果、毒力回歸方程，結(jié)果見表I-I ο
統(tǒng)計分析用PBT數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件進行分析，根據(jù)各藥劑濃度對數(shù)值及對應(yīng)的防治效果的幾率值作回歸分析，計算各藥劑的LD5tl值及其95%置信限。對藥劑混劑聯(lián)合毒力測定，根據(jù)孫云沛法計算混劑的共毒系數(shù)(CTC)，評價混劑的聯(lián)合作用類型。結(jié)論根據(jù)室內(nèi)毒力測定結(jié)果，極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素對番茄黃化曲葉病毒病菌的室內(nèi)毒力回歸方程分別為Y = I. 2495X+3. 1953，Y=L 0578X+3. 5542，根據(jù)回歸方程計算出極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素分別對番茄黃化曲葉病毒病菌的LD5tl分別為27. 8221mg/L，23. 2711mg/L ;而兩者復配配比對番茄黃化曲葉病毒病菌的共毒系數(shù)(CTC)最高的是激活蛋白氨基寡糖(I D組合，為493. 9979，其次為激活蛋白氨基寡糖(I 2)組合，為394. 5271，其余三組共毒系數(shù)均大于120?？梢姌O細鏈格孢激活蛋白與氨基寡糖素復配對番茄黃化曲葉病毒病菌均表現(xiàn)為增效，尤其是激活蛋白氨基寡糖(I D組合對番茄黃化曲葉病毒病更敏感，活性高。表1-1.極細鏈格孢激活蛋白與氨基寡糖素單劑及復配制劑對番茄黃化曲葉病毒病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種防治植物病毒病的生物復配制劑，其特征在干由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比I : (O. 5 2. O)復配而成，其中極細鏈格孢激活蛋白母液是將極細鏈格孢激活蛋白含量為10%的極細鏈格孢激活蛋白母藥用O. I %的吐溫-80水溶液稀釋制得，氨基寡糖素母液是將氨基寡糖素含量為7.5%的氨基寡糖素母藥用O. 1%的吐溫-80水溶液稀釋制得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的生物復配制劑，其特征在干由所述極細鏈格孢激活蛋白母液和氨基寡糖素母液按體積比I : I復配而成。
3.權(quán)利要求I或2所述的生物復配制劑在防治植物病毒病中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物復配制劑在防治植物病毒病中的應(yīng)用，其特征在于所述植物病毒病為番爺黃化曲葉病毒病、水稻條紋病毒病或煙草花葉病毒病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于防治植物病毒病的生物復配制劑及其應(yīng)用。其目的是為了提供一種最大限度的發(fā)揮極細鏈格孢激活蛋白和氨基寡糖素各自的藥效，使藥劑的活性有很大提高，更有效地防治植物病毒病發(fā)生的生物藥劑。本發(fā)明由濃度為1000mg/L的極細鏈格孢激活蛋白母液和濃度為1000mg/L的氨基寡糖素母液按體積比1∶(0.5～2.0)復配而成，當體積比為1∶1時該復配制劑的活性最高，防治效果最好。
文檔編號A01N43/16GK102687730SQ20111007380
公開日2012年9月26日 申請日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者曾洪梅, 楊秀芬, 袁京京, 邱德文, 郭立華 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所