毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，對(duì)來自體內(nèi)和體外的許多非營養(yǎng)性物 質(zhì)如各種藥物、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物，具有生物轉(zhuǎn)化作用，通過新陳代謝將它們徹 底分解或以原形排出體外。進(jìn)入體內(nèi)的酒精90%在肝臟代謝，酒精對(duì)肝臟有直接損害作 用，其損傷機(jī)理是由酒精在肝細(xì)胞內(nèi)代謝引起的。如果長(zhǎng)期過度飲酒，可使肝細(xì)胞反復(fù)發(fā) 生脂肪變性、壞死，最終發(fā)展為酒精性肝炎和酒精性肝硬化，嚴(yán)重者危及生命安全。對(duì)于預(yù) 防和治療酒精性肝損傷，除了戒酒之外，還應(yīng)多食用一些富含高蛋白、維生素和抗氧化的食 物，增加對(duì)肝臟的保護(hù)。
[0003] 毛木耳，學(xué)名（AuriculariaPolytricha)又稱白背毛木耳，屬于擔(dān)子菌門、層菌 綱、木耳目、木耳科、木耳屬中的毛木耳種。毛木耳子實(shí)體膠質(zhì)滑韌，早期杯狀，漸變?yōu)槎鸂睿?葉狀或不規(guī)則形狀，子實(shí)體層的上表面為紫灰色至黑色，下表面長(zhǎng)絨毛，常呈青褐色、淺茶 褐色至瓦灰色。據(jù)中國科學(xué)院成都生物所分析，毛木耳干品中氨基酸的總量為41. 68%，有 人體必需氨基酸7種，占所含氨基酸總量的42. 31%，有其它氨基酸9種，占所含氨基酸總量 的57. 69%。毛木耳是一種食藥同源的真菌，具有潛在開發(fā)應(yīng)用的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何緩解酒精性肝損傷。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了下述A或B的應(yīng)用：
[0006]A、毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備緩解酒精性肝細(xì)胞損傷廣品中的應(yīng)用；
[0007]B、毛木耳蛋白質(zhì)提取物在制備緩解酒精性肝損傷產(chǎn)品中的應(yīng)用；
[0008]所述毛木耳蛋白質(zhì)提取物由下述方法制備：
[0009] 1)將毛木耳子實(shí)體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質(zhì)得到毛木耳水溶性提取物；
[0010] 2)對(duì)所述毛木耳水溶性提取物進(jìn)行飽和度為80 %的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對(duì)所 述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質(zhì)提取物。
[0011] 上述應(yīng)用中，所述用水浸提可為在2-6°C用水浸提10-14小時(shí)，具體可為在4°C用 水浸提12小時(shí)。所述水可為去離子水。
[0012] 上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體可粉碎至50-100目，如100目。
[0013] 上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體和水的質(zhì)量比可為1 :40-60,如1 :40,所述毛木耳 子實(shí)體的質(zhì)量為干重。
[0014] 上述應(yīng)用中，所述毛木耳子實(shí)體可為新鮮的子實(shí)體也可為干燥的子實(shí)體。
[0015] 上述應(yīng)用中，所述干燥的子實(shí)體是將新鮮的毛木耳子實(shí)體在常溫（如20-25°C)下 干燥得到的。
[0016] 上述應(yīng)用中，可采用離心收集所述水溶性物質(zhì)。所述離心采用的離心力可為 6000-15000g(如12000g)，離心時(shí)間可為10-20分鐘（如15分鐘）。
[0017] 上述應(yīng)用中，所述飽和度均為硫酸銨在4°C的飽和度。
[0018] 上述應(yīng)用中，可采用離心收集所述沉淀；所述離心采用的離心力可為 6000-15000g(如12000g)，離心時(shí)間可為10-20分鐘（如15分鐘）。
[0019] 上述應(yīng)用中，所述透析采用的半透膜的截留分子量為3kDa;所述透析可為在 2-6°C透析10-14小時(shí)，具體可為在4°C透析12小時(shí)。
[0020]上述應(yīng)用，還包括將透析后的半透膜內(nèi)的液體在7000-14000g(如8500g)，離心 10-20分鐘（如15分鐘），收集上清液，將該上清液進(jìn)行冷凍干燥，制備成毛木耳蛋白質(zhì)提 取物干粉的步驟。
[0021] 上述應(yīng)用中，所述緩解酒精性肝細(xì)胞損傷為下述1)-5)中的至少一種：
[0022] 1)提高肝細(xì)胞的存活率；
[0023] 2)降低肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯含量；
[0024] 3)降低肝細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量；
[0025] 4)降低肝細(xì)胞對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0026]5)降低肝細(xì)胞對(duì)谷草轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0027] 所述緩解酒精性肝損傷為下述1) -5)中的至少一種：
[0028] 1)提高肝細(xì)胞的存活率；
[0029] 2)降低肝細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯含量；
[0030] 3)降低肝細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量；
[0031] 4)降低肝細(xì)胞對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶的釋放量；
[0032] 5)降低肝細(xì)胞對(duì)谷草轉(zhuǎn)氨酶的釋放量。
[0033] 上文中，所述酒精性肝細(xì)胞損傷具體可為人酒精性肝細(xì)胞損傷，所述酒精性肝損 傷具體可為人酒精性肝損傷。所述肝細(xì)胞具體可為L(zhǎng)-02細(xì)胞。
[0034] 實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的方法制備的毛木耳蛋白質(zhì)提取物對(duì)L-02細(xì)胞無細(xì)胞毒 性，能夠提升酒精性損傷L-02細(xì)胞的存活率，具有保肝的作用，可用于緩解酒精性肝細(xì)胞 損傷。當(dāng)培養(yǎng)液中毛木耳蛋白質(zhì)提取物中蛋白質(zhì)濃度為30yg/mL時(shí)，治療組L-02細(xì)胞存 活率最高，可以達(dá)到87. 86%，比損傷模型組（細(xì)胞存活率為45. 01% )的細(xì)胞存活率提高 42. 85%。毛木耳蛋白質(zhì)提取物可以有效地降低細(xì)胞內(nèi)TG和ROS的含量，使治療組與損傷 模型組能夠形成統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異（P〈〇. 05)。同時(shí)，毛木耳蛋白質(zhì)提取物還可以減少 L-02細(xì)胞損傷，降低胞內(nèi)酶ALT和AST的釋放，保護(hù)L-02細(xì)胞的完整性，具有保肝的作用。 治療組（817±33ymol/mg蛋白質(zhì)）L-02細(xì)胞內(nèi)的TG含量比損傷模型組（2627±11ymol/ 1^蛋白質(zhì)）降低了 68.90%;治療組1-02細(xì)胞內(nèi)的1^的平均熒光強(qiáng)度（4898±406)比損 傷模型組（1〇548±319)降低了 53. 56%;治療組L-02細(xì)胞釋放的ALT含量（8096±194U/ 1^蛋白質(zhì)）比損傷模型組（16544±468"11^蛋白質(zhì)）降低了51.06%;治療組1-02細(xì)胞釋 放的AST含量（6979±221U/mg蛋白質(zhì)）比損傷模型組（15072±579U/mg蛋白質(zhì)）降低了 53. 70% 〇
【附圖說明】
[0035] 圖1為不同濃度乙醇對(duì)L-02細(xì)胞活性的影響。
[0036] 圖2為毛木耳蛋白質(zhì)提取物的細(xì)胞毒性檢測(cè)。
[0037] 圖3為毛木耳蛋白質(zhì)提取物保護(hù)酒精性損傷L-02細(xì)胞的效果圖。圖中損傷組為 損傷模型組，10、20、30、40、50分別為1-5號(hào)含乙醇和毛木耳蛋白質(zhì)提取物的培養(yǎng)液的治療 組。
[0038] 其中，圖2中的蛋白質(zhì)濃度為毛木耳蛋白質(zhì)提取物中的蛋白質(zhì)在培養(yǎng)液中的終濃 度。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0040] 下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0041] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0042]下述實(shí)施例中的毛木耳（Auriculariapolytricha(Mont. )Sacc. ) 3 號(hào)（趙爽 等.毛木耳菌絲體產(chǎn)多糖發(fā)酵條件的優(yōu)化.食品科技.2012年第37卷第4期）公眾可從 北京市農(nóng)林科學(xué)院獲得該菌種，以重復(fù)本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)。
[0043] 下述實(shí)施例中的L-02細(xì)胞株（人肝細(xì)胞）為中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫的產(chǎn)品。
[0044] 下述實(shí)施例中的RPMI 1640培養(yǎng)液為Invitrogen公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為 11875-093。
[0045] 下述實(shí)施例中的BCA蛋白定量試劑盒為北京博邁德生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品 目錄號(hào)為PP0103。
[0046] 下述實(shí)施例中的組織甘油三酯測(cè)定試劑盒為北京普利萊基因技術(shù)有限公司產(chǎn)品， 產(chǎn)品目錄號(hào)為E1013。
[0047] 下述實(shí)施例中的組織內(nèi)活性氧測(cè)定試劑盒為北京普利萊基因技