免疫調節(jié)綴合物的制作方法
【專利說明】免疫調節(jié)綴合物 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明涉及包含與至少一種免疫調節(jié)劑綴合的甘露糖的碳水化合物聚合物、其制 備以及在免疫調節(jié)組合物和疫苗組合物中的用途。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 近年來主要致力于發(fā)現(xiàn)通過刺激免疫系統(tǒng)的某些關鍵方面以及通過抑制某些其 它方面起作用的新的藥物化合物。本文被稱為免疫調節(jié)劑的這些化合物可以適用于治療多 種多樣的疾病和病狀。例如，某些免疫調節(jié)劑可以適用于治療病毒性疾?。ɡ?，人乳頭瘤 病毒、肝炎、皰瘆）、瘤形成（例如，基底細胞癌、鱗狀細胞癌、光化性角化癥、黑色素瘤）、以 及Th2-介導的疾?。ɡ?，哮喘、過敏性鼻炎、特應性皮炎、多發(fā)性硬化癥），并且還適用作 疫苗佐劑。
[0004] 甘露糖的一些多糖（碳水化合物聚合物）（例如，甘露聚糖）、β (1，3)葡萄糖（例 如，葡聚糖）、β (1，4)乙?；事短牵ㄒ阴徉?、β (1，4) N-乙?；?葡糖胺（殼聚糖） 以及雜多糖如鼠李糖聚半乳糖醛酸聚糖（rhamnogalacturonan)(果膠）已經(jīng)顯示出刺激免 疫系統(tǒng)。
[0005] 多糖與C-型凝集素受體的結合誘導免疫刺激，如通過吞噬作用、增殖應答、細胞 因子的釋放以及免疫系統(tǒng)的其它活性的增加所顯示的。由于這種免疫刺激活性，這些多糖 已經(jīng)被建議用于疫苗組合物中。特別感興趣的是甘露聚糖。
[0006] 甘露聚糖是由C-型凝集素受體如甘露糖受體（CD206)和DC-SIGN(CD209)識別的 聚甘露糖。由于它們在抗原呈遞細胞上的存在，已經(jīng)針對這些受體攝取含有甘露糖、巖藻糖 或葡萄糖的化合物對它們進行了表征。甘露聚糖與甘露糖受體的結合例如誘導內吞作用， 接著是其遞送至胞內體（endosomal)途徑中。關于甘露糖化抗原的早期研宄指示抗原上甘 露糖殘基的存在大大增強了樹突細胞（DC)的抗原攝取和主要組織相容性復合體（MHC)II 類限制性抗原呈遞。甘露聚糖與至少一種抗原的綴合也增強它的攝取和呈遞。
[0007] 需要用于疾病的治療或預防的其它免疫調節(jié)組合物和疫苗組合物以及用于其制 備的可靠方法。此外，鑒于免疫調節(jié)劑的較大治療潛力，并且盡管已經(jīng)進行的工作，仍然存 在相當大的持續(xù)的需要來擴展它們的用途和治療益處。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了用于刺激免疫應答的新化合物。
[0010] 第一方面，本發(fā)明提供一種包含碳水化合物聚合物的免疫調節(jié)化合物，所述碳水 化合物聚合物包含甘露糖，其中所述碳水化合物聚合物與至少一種免疫調節(jié)劑綴合。
[0011] 在一個實施方案中，存在多于一種免疫調節(jié)劑，并且每種免疫調節(jié)劑是相同的或 不同的。例如，碳水化合物聚合物包含可以與免疫調節(jié)劑直接綴合或經(jīng)由接頭綴合的多于 一個官能團?？商娲鼗蛄硗獾?，碳水化合物聚合物經(jīng)由分支接頭與多于一種免疫調節(jié)劑 綴合。
[0012] 在一個實施方案中，碳水化合物聚合物大于約lOOOkDa。
[0013] 在一個實施方案中，碳水化合物聚合物是氧化的。氧化的碳水化合物聚合物在與 免疫調節(jié)劑綴合之前可以具有至少150個醛基。
[0014] 在一個實施方案中，氧化的碳水化合物聚合物進一步與至少一種抗原或編碼所述 至少一種抗原的核酸綴合?？乖梢詠碜匀魏蝸碓矗绮《镜?、細菌的、原生動物的、真菌 的、腫瘤抗原、自身抗原或過敏原?？乖梢允抢缯麄€生物體、蛋白質或抗原肽?？乖梢?與氧化的甘露聚糖任選地經(jīng)由接頭直接地綴合；或任選地經(jīng)由接頭通過與免疫調節(jié)劑綴合 來與氧化的甘露聚糖間接地綴合。類似地，核酸可以與氧化的甘露聚糖（經(jīng)由，例如，IRM) 直接地或間接地綴合。
[0015] 在一個實施方案中，氧化的碳水化合物聚合物與至少一種抗原共價地綴合。
[0016] 在一個實施方案中，氧化的碳水化合物聚合物經(jīng)由聚陽離子與至少一種核酸綴 合。
[0017] 在一個實施方案中，碳水化合物聚合物是甘露聚糖。甘露聚糖可以來自任何來源， 如真菌，更優(yōu)選地酵母。
[0018] 在一個實施方案中，在與免疫調節(jié)劑和/或抗原或編碼所述抗原的核酸綴合之前 并且在用氨基萘-1，3, 6-三磺酸（ANTS)標記之后，甘露聚糖的大小分布基于蛋白質標準是 在約150至約250kDa之間和/或基于碳水化合物標準是在約800至約3000kDa之間。
[0019] 在一個實施方案中，免疫調節(jié)劑是Toll-樣受體（TLR)激動劑，例如像鳥苷類 似物、脫氮-腺苷類似物、咪唑并喹啉或其衍生物。在優(yōu)選實施方案中，TLR激動劑是 洛索立賓（Loxoribine)、艾沙托立賓（Isatoribine)、咪喹莫特（Imiquimod)、瑞喹莫德 (Resiquimod)或其衍生物。
[0020] 在一個實施方案中，每種免疫調節(jié)劑經(jīng)由接頭與碳水化合物聚合物綴合，并且在 綴合之前每個接頭包含能夠與所述免疫調節(jié)劑或所述碳水化合物聚合物綴合的一個或多 個官能團，并且所述官能團可以任選地包含適合的離去基團或保護基團。
[0021] 在一個實施方案中，每個官能團選自由以下組成的組：醛、酮、甲?；㈦?、酰肼、 胺、酰胺、羧酸、炔、馬來酰亞胺、巰基以及鹵素。
[0022] 在一個實施方案中，胺的保護基團是BOC基團。
[0023] 在一個實施方案中，甲?；碾x去基團是對硝基苯氧基。
[0024] 在一個實施方案中，每種免疫調節(jié)劑經(jīng)由接頭與碳水化合物聚合物綴合，所述接 頭包含：
[0025] i)與所述碳水化合物聚合物綴合的官能團（⑴型基團）；
[0026] ii)與所述免疫調節(jié)劑綴合的官能團（(ii)型基團）；以及
[0027] iii)間隔基；
[0028] 并且其中每個接頭可以是彼此相同的或不同的。
[0029] 在一個實施方案中，（i)型基團是腙。
[0030] 在一個實施方案中，（ii)型基團是氨基甲酸酯基團。
[0031] 在一個實施方案中，間隔基包含一個或多個不同類型的連接單元。在一個實施方 案中，每個連接單元可以獨立地選自由以下組成的組：乙二醇和/或丙二醇的聚合物；聚芳 基；氨基酸殘基或其衍生物；烷基或烯基鏈；含有苯基的部分；以及糖類。
[0032] 在一個實施方案中，間隔基包含聚合物，所述聚合物包含1至100個乙二醇和/或 丙二醇單元。例如，間隔基可以包含聚合物，所述聚合物包含1至10個乙二醇和/或丙二 醇單元、1至5個氨基酸殘基或其衍生物、以及含有苯基的部分。
[0033] 在一個實施方案中，接頭在綴合之后是可裂解的。例如，接頭包含選自由酯、氨基 甲酸酯、腙、酰胺以及縮醛組成的組的可裂解的基團。
[0034] 在優(yōu)選的實施方案中，碳水化合物聚合物和免疫調節(jié)劑通過與式I的接頭反應連 接：
[0035]
【主權項】
1. 一種包含碳水化合物聚合物的免疫調節(jié)化合物，所述碳水化合物聚合物包含甘露 糖，其中所述碳水化合物聚合物與至少一種免疫調節(jié)劑綴合。
2. 如權利要求1所述的化合物，其中當存在多于一種免疫調節(jié)劑時，每種免疫調節(jié)劑 可以是相同的或不同的。
3. 如權利要求1或權利要求2所述的化合物，其中所述碳水化合物聚合物大于約 1000 kDa0
4. 如權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中所述碳水化合物聚合物是氧化的。
5. 如權利要求4所述的化合物，其中所述碳水化合物聚合物進一步與至少一種抗原或 編碼所述抗原的核酸綴合。
6. 如權利要求4或權利要求5所述的化合物，其中所述氧化的碳水化合物聚合物在與 所述免疫調節(jié)劑和/或抗原或編碼所述抗原的核酸綴合之前具有至少150個醛基。
7. 如權利要求5或權利要求6所述的化合物，其中所述抗原是病毒的、細菌的、原生動 物的、真菌的、或腫瘤抗原、自身抗原或過敏原。
8. 如權利要求5至7中任一項所述的化合物，其中所述氧化的碳水化合物聚合物與所 述至少一種抗原共價綴合。
9. 如權利要求5至7中任一項所述的化合物，其中所述氧化的碳水化合物聚合物經(jīng)由 聚陽離子與所述至少一種核酸綴合。
10. 如權利要求1至9中任一項所述的化合物，其中所述碳水化合物聚合物是甘露聚 糖。
11. 如權利要求10所述的化合物，其中所述甘露聚糖來自酵母。
12. 如權利要求10或權利要求11所述的化合物，其中在與所述免疫調節(jié)劑和/或抗原 或編碼所述抗原的核酸綴合之前并且在用氨基萘-1，3, 6-三磺酸（ANTS)標記之后，所述甘 露聚糖的大小分布基于蛋白質標準是在約150~250kDa之間且/或基于碳水化合物標準 是在約800~3000kDa之間。
13. 如權利要求1至12中任一項所述的化合物，其中所述至少一種免疫調節(jié)劑是 Toll-樣受體（TLR)激動劑。
14. 如權利要求13所述的化合物，其中所述至少一種TLR激動劑選自：鳥苷類似物、脫 氮-腺苷類似物、咪唑并喹啉及其衍生物。
15. 如權利要求13或權利要求14所述的化合物，其中所述TLR激動劑選自：洛索立賓、 艾沙托立賓、咪喹莫特、瑞喹莫德及其衍生物。
16. 如權利要求1至15中任一項所述的化合物，其中每種免疫調節(jié)劑經(jīng)由接頭與所述 碳水化合物聚合物綴合，并且其中在綴合之前每個接頭包含能夠與所述免疫調節(jié)劑或所述 碳水化合物聚合物綴合的一個或多個官能團，并且其中所述官能團可以任選地包含適合的 離去基團或保護基團。
17. 如權利要求16所述的化合物，其中每個官能團選自：醛、酮、甲?；?、肼、酰肼、胺、 酰胺、羧酸、炔、馬來酰亞胺、巰基以及鹵素。
18. 如權利要求17所述的化合物，其中所述胺的適合的保護基團是BOC基團。
19. 如權利要求17所述的化合物，其中所述甲?；倪m合的離去基團是對硝基苯氧 基。
20. 如權利要求1至19中任一項所述的化合物，其中每種免疫調節(jié)劑經(jīng)由接頭與所述 碳水化合物聚合物綴合，所述接頭包含： υ與所述碳水化合物聚合物綴合的官能團（α)型基團）； ii) 與所述免疫調節(jié)劑