專利名稱：疫苗組合物佐劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疫苗組合物領(lǐng)域，尤其，本發(fā)明涉及用于增強(qiáng)疫苗組合物免疫原性的新的佐劑。
存在有大量的抗原，它們?cè)谧⑸涞絼?dòng)物體內(nèi)時(shí)產(chǎn)生對(duì)這些抗原具有特異性的抗體。免疫的一個(gè)原則是通過將所選擇的抗原給予人或動(dòng)物體來刺激其產(chǎn)生抗體。由此產(chǎn)生的抗體能夠使人或動(dòng)物體抵御由這些抗原引起的繼發(fā)感染。然而，當(dāng)單獨(dú)給予某些抗原時(shí)不對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生足夠的刺激作用。因此，必須加入能夠使軀體免疫應(yīng)答增加的免疫佐劑來獲得足夠量的保護(hù)性抗體。
在已知的佐劑中，可提到在人類疫苗中通常使用的氫氧化鋁和磷酸鋁。然而，這些化合物不具有相對(duì)所有抗原的佐劑性。尤其，它們不能增加流感病毒的免疫原性。
因此需要具有能夠受人支配，并能夠使得以疫苗組合物形式給予的抗原的免疫原性增加，而又沒有任何毒性危險(xiǎn)的佐劑。
另外，具有受人支配且能夠引起免疫應(yīng)答的佐劑是有利的，所述佐劑以產(chǎn)生分泌抗體，如IgAs的形式表現(xiàn)其自己。
至此，本發(fā)明提供利用兩親性化合物來制備疫苗組合物，所述兩親性化合物包含由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基。
本發(fā)明也涉及此兩親性化合物作為疫苗佐劑的用途。
本發(fā)明也涉及疫苗組合物，它含有至少一種抗原，其特征在于另外含有至少一種兩親性化合物，該化合物具有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
本發(fā)明還涉及含有至少一種抗原和一種兩親性化合物的產(chǎn)物，作為組合物同時(shí)、分別或交替用于免疫期間，所述兩親性化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
另外，本發(fā)明還涉及誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物免疫反應(yīng)的方法，該方法是將至少一種抗原給予哺乳動(dòng)物，其特征在于還至少給予一種兩親性化合物，該化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
為了本發(fā)明的目的，術(shù)語兩親性表示一種同時(shí)具有親水部分和疏水部分的化合物。
在能夠產(chǎn)生本發(fā)明化合物的甾醇衍生物中，可提及膽甾醇、植物甾醇和麥角甾醇。膽甾醇衍生物是特別合適的。
本發(fā)明兩親性化合物的陽離子可由季銨或能夠被質(zhì)子化的胺組成。
以酯、醚、酰胺或氨基甲酰鍵的方式，將親脂基團(tuán)連結(jié)到陽離子基團(tuán)上，其中酯、酰胺或氨基甲酰鍵具有優(yōu)點(diǎn)，它們可在細(xì)胞中水解。
2個(gè)基團(tuán)間的連接優(yōu)選通過空間臂來實(shí)現(xiàn)，空間臂由含1-20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基組成。
適于本發(fā)明目的的化合物中，可提及美國專利5283185中所描述的那些化合物，特別是碘化膽甾烯基-3β-甲酰胺基-1，2-亞乙基三甲基銨，膽甾烯基-3β-甲酰胺基-1，2-亞乙基胺，碘化膽甾烯基-3β-氧琥珀酰胺基亞乙基-三甲基銨，3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基〕-膽甾醇3β-〔N-(聚氮雜環(huán)丙烷)氨基甲?；衬戠薮迹渲?，3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇是特別優(yōu)選的。
按照“Advanced Organic Chemistry Part BReaction and Synthesis(F.A.Carey and R.J.Sundberg-P1enum Publishing Corp.)中所描述的一種方法，通過將甾醇和含陽離子基的化合物縮合，可得到本發(fā)明兩親性化合物。尤其，按照美國專利5,283,185中所描述的方法，可制備某些本發(fā)明化合物。
然后，可將在醇溶液中得到的兩親性化合物分散在水或含水緩沖液中，并可得到膠束或脂質(zhì)體的懸浮液。優(yōu)選，將本發(fā)明兩親性化合物與中性類脂如磷脂，例如二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)或二油?；字Ｄ憠A(DOPC)組合。這種組合使得本發(fā)明兩親性化合物在水性環(huán)境的相分散過程中形成脂質(zhì)體形式而不是膠束形式。中性類酯與兩親性化合物的摩爾比優(yōu)選大于20％。
當(dāng)給小鼠接種本發(fā)明所獲得的產(chǎn)品時(shí)，不產(chǎn)生任何急性毒性反應(yīng)。
用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的抗原由疫苗組合物中常用的任何抗原組成，或者是單獨(dú)的或者與另一種抗原組合的。
尤其是，本發(fā)明兩親性化合物與流感病毒疫苗結(jié)合時(shí)為好的免疫佐劑，流感病毒具體包括HA蛋白(是一種位于流感病毒包膜表面的血球凝結(jié)素)，NP蛋白(是一種連結(jié)病毒RNA的衣殼核蛋白)和包膜M蛋白或蛋白“材料”。
需要增加免疫原性的抗原和兩親性化合物的膠束或脂質(zhì)體懸浮液的組合是通過所混合組分的疏水和靜電的相互作用自動(dòng)產(chǎn)生的。
所獲得的疫苗組合物具有好的穩(wěn)定性。然而，脂質(zhì)體懸浮液優(yōu)于膠束懸浮液。
另外，可通過過濾和凍干來使脂質(zhì)體懸浮液滅菌。
顯而易見的是，在所獲得的疫苗組合物中加入疫苗中所用的傳統(tǒng)組分是可能的，如水、生理鹽水或緩沖物質(zhì)。
使用本發(fā)明所獲得的免疫組合物可通過給予疫苗常用的所有途徑來進(jìn)行，特別是皮下或鼻內(nèi)途徑。初次免疫和加強(qiáng)免疫選擇不同的途徑也是可能的。
分別給予含有抗原的組合物和含有本發(fā)明兩親性化合物的組合物是可能的；然而，使用與抗原組合的本發(fā)明兩親性化合物的脂質(zhì)體組合物不僅使體液型免疫反應(yīng)增加成為可能，而且使誘導(dǎo)特異細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞成為可能。
閱讀下列非限定性實(shí)施例并參考附圖會(huì)更好地理解本發(fā)明。


圖1描述產(chǎn)生DC chol.圖2-6描述實(shí)施例8所涉及的每一組小鼠中誘導(dǎo)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的試驗(yàn)結(jié)果。
圖7描述實(shí)施例11的結(jié)果。
圖8和9描述實(shí)施例12的結(jié)果。
圖10和11描述實(shí)施例13的結(jié)果。
圖12和13描述實(shí)施例14的結(jié)果。
圖14和15描述實(shí)施例15的結(jié)果。
圖16描述實(shí)施例16的結(jié)果。
實(shí)施例13β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇(DC chol)的合成如X.Gao和L.Huang文章(BBRC 179(1)280-285)所述，按圖1過程，通過氯甲酸膽甾醇酯和N，N-二甲基-1，2-亞乙基二胺來合成DC chol。
在0℃下，將氯甲酸膽甾醇酯(2.25g，5mmol在5ml無水氯仿中)的溶液滴加到過量的N，N-二甲基-1，2-亞乙基二胺溶液(2ml，18.2mmol在3ml無水氯仿中)。經(jīng)蒸發(fā)除去溶劑后，在4℃用無水乙醇進(jìn)行兩次連續(xù)的重結(jié)晶來純化殘?jiān)?，并真空干燥。由此獲得白色粉末形式的0.545g DC chol。通過NMR和質(zhì)譜證實(shí)化合物的結(jié)構(gòu)。所獲得的結(jié)果與上文所述文章中公開的數(shù)據(jù)一致。實(shí)施例2由DC chol 2.3mg膠束懸浮液制備抗流感病毒的疫苗組合物將實(shí)施例1獲得的30mg DC chol溶于100μl乙醇。在45℃溫度并攪拌下，將75μl由此獲得的溶液用Hamilton注射器注入3ml水中。在45℃下再攪拌5分鐘后，將獲得的膠束懸浮液與200μl的抗流感病毒(菌株A/新加坡)的單價(jià)疫苗混合，尤其含有作為抗原的血球凝結(jié)素HA、核蛋白NP和M蛋白。
將獲得的混合物分為0.3ml劑量的疫苗。每一劑量含有5μl的HA和2.3mg的DC chol。實(shí)施例3由DC chol 0.45mg的膠束懸浮液制備抗流感病毒的疫苗組合物按實(shí)施例2的方法，從6mg實(shí)施例1所獲得的DC chol進(jìn)行制備。實(shí)施例4制備由DC chol和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)組成的脂質(zhì)體懸浮液混合18mg的二油?；字Ｒ掖及?DOPE)和4.5mg由實(shí)施例1獲得的溶于3ml氯仿的DC chol。
真空蒸去氯仿形成類脂膜，真空干燥并重新懸浮在3ml水中。
在4℃下水合24小時(shí)后，在超聲浴(Laboratory Supplies-Hicksville-N.Y.)中，將分散體超聲5-10分鐘，形成脂質(zhì)體。
在4℃下，該懸浮液至少穩(wěn)定6個(gè)月。實(shí)施例5制備由DC chol和二油?；字Ｄ憠A(DOPC)組成的脂質(zhì)體懸浮液按實(shí)施例4的方法，用18mg的二油?；字Ｄ憠A(DOPC)代替18mg的DOPE來進(jìn)行制備。
在4℃下，所獲得的脂質(zhì)體懸浮液至少穩(wěn)定6個(gè)月。實(shí)施例6由DC chol/DOPE脂質(zhì)體懸浮液制備抗流感病毒的疫苗組合物將3ml實(shí)施例4獲得的脂質(zhì)體懸浮液和0.2ml含有相當(dāng)于50μg由血球凝結(jié)素HA組成的抗原的菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗混合。
然后，將獲得的混合物分成10個(gè)0.3ml的疫苗，每個(gè)疫苗含有5μg的HA和0.45mg的DC chol。實(shí)施例7由DC chol/DOPC脂質(zhì)體懸浮液制備抗流感病毒的疫苗組合物將3ml實(shí)施例5獲得的脂質(zhì)體懸浮液和0.2ml菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗混合。
然后，將獲得的混合物分成10個(gè)0.3ml的疫苗，每個(gè)疫苗含有5μg的HA和0.45mg的DC chol。實(shí)施例8免疫接種通過在0天、21天和36天皮下注射下列疫苗組合物來對(duì)5組Balb/c小鼠(每組4只)進(jìn)行免疫接種A組0.3ml稀釋的菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗，在0.3mlPBS中含有5μgHA，B組0.3ml由實(shí)施例2獲得的疫苗組合物，C組0.3ml由實(shí)施例3獲得的疫苗組合物，D組0.3ml由實(shí)施例6獲得的疫苗組合物，
E組0.3ml由實(shí)施例7獲得的疫苗組合物。實(shí)施例9抗-HA抗體的測(cè)定為了進(jìn)行中和抗體的測(cè)定，在21天、36天和51天抽取小鼠的血清樣品，并通過流感病毒誘導(dǎo)的血球凝結(jié)素抑制技術(shù)來滴定抗-HA抗體。
下表1描述各組小鼠注射一次后獲得的結(jié)果，表2為注射2次后獲得的結(jié)果。
表1平均log(2)
表2
小鼠血清中中和抗體的滴定度以最高稀釋液誘導(dǎo)的血球凝結(jié)素抑制作用的log2形式來表示。
這些結(jié)果清楚地表明DC chol的輔助作用。在效果上，與接受不含佐劑疫苗的小鼠(A組)相比，接受DC chol小鼠組的抗-HA抗體的濃度明顯較高。
重要的是注意到B、C、D和E組的中和抗體高于A組的，甚至在不同的疫苗組合物注射一次之后也是如此。在第二次注射后，這些滴定度稍有增加并且穩(wěn)定。第三次注射后獲得的結(jié)果基本上等于第二次注射后的結(jié)果(未顯示)。
用三價(jià)流感疫苗(包括菌株A/得克薩斯、菌株B/巴拿馬和菌株A/北京)所進(jìn)行的試驗(yàn)也表明了DC chol的輔助功能。實(shí)施例10證明對(duì)細(xì)胞毒T細(xì)胞的誘導(dǎo)作用在第51天取出實(shí)施例8所述各組小鼠的脾細(xì)胞。
相應(yīng)于試驗(yàn)疫苗的菌株A/新加坡感染的同源刺激細(xì)胞存在下，體外再一次刺激這些效應(yīng)器細(xì)胞。用P851肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞系作為靶細(xì)胞來證明這些刺激細(xì)胞的特異細(xì)胞毒功能，所述細(xì)胞系是通過與一種病毒血球凝結(jié)素CTL表位肽(對(duì)HA產(chǎn)生特異性應(yīng)答)或者與一種病毒核蛋白的CTL表位肽(對(duì)NP產(chǎn)生特異性應(yīng)答)培養(yǎng)致敏的。測(cè)量P815細(xì)胞的非特異性溶菌(背景)，所述細(xì)胞是未致敏的或用HIV病毒CTL表位肽(V3MN)致敏的。
通過基于載有Cr-51的靶細(xì)胞并在細(xì)胞溶解期間釋放放射元素的放射活性技術(shù)來測(cè)量靶細(xì)胞的溶解。
圖2-6描述按各試驗(yàn)組小鼠的效應(yīng)器細(xì)胞與靶細(xì)胞之比計(jì)算的細(xì)胞毒百分?jǐn)?shù)，所顯示的結(jié)果表明使用DC chol特別是與中性類脂組合的脂質(zhì)體組合物是特別有利的，因?yàn)檫@些組合物除了由DC chol輔助作用所產(chǎn)生的體液型免疫反應(yīng)外，使誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞成為可能。實(shí)施例11研究以所使用的DC chol劑量為函數(shù)的免疫反應(yīng)制備300μl的疫苗組合物，均含有菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗并含有15或5μg的HA，以變化的濃度與DC chol/DOPC脂質(zhì)體組合。用類似于實(shí)施例4的方法來制備脂質(zhì)體懸浮液，但用13.5mg的二油?；字Ｄ憠A(DOPC)代替18mg的二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)并用一定量的水溶解獲得的類脂膜，水的量按所需DC chol的濃度來改變。
在0天和28天給各組8-10周齡雌性Balb/c小鼠(每組5只)注射疫苗組合物。在42天抽取血清樣品并通過凝集抑制(HAI)技術(shù)測(cè)定抗-HA抗體。
以該方法試驗(yàn)下列組合物15μg的HA+0μg的DC chol15μg的HA+400μg的DC chol5μg的HA+0μg的DC chol5μg的HA+25μg的DC chol5μg的HA+50μg的DC chol5μg的HA+100μg的DC chol5μg的HA+200μg的DC chol5μg的HA+300μg的DC chol5μg的HA+400μg的DC chol將最高稀釋液誘導(dǎo)的血凝集抑制作用的以2為底的對(duì)數(shù)值所表示的結(jié)果描述在圖7中，表明DC chol劑量僅在100μg以上時(shí)所獲得的DC chol的輔助作用最大。實(shí)施例12證明對(duì)不同的抗體類型的誘導(dǎo)作用對(duì)三組8-10周齡雌性BALB/c成年小鼠(每組5只)中誘導(dǎo)的抗體進(jìn)行比較研究，它們?cè)?天和28天接受兩次皮下注射下列疫苗組合物第一組0.3ml稀釋的菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗，在0.3ml PBS中含有5μgHA，第二組0.3ml稀釋的菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗，含有5μgHA和0.1mg作為佐劑的氫氧化鋁，第三組0.3ml由實(shí)施例11獲得的疫苗組合物，并在與DOPC的組合中含有5μg的HA和400μg的DC chol。
在28天和42天抽取小鼠的血清樣品，并通過ELISA技術(shù)測(cè)定所產(chǎn)生的IgG1和IgG2。
在首次應(yīng)答中獲得的結(jié)果描述在圖8中，并將二次應(yīng)答中獲得的結(jié)果描述在圖9中。
這些結(jié)果說明與現(xiàn)有技術(shù)中的佐劑氫氧化鋁相比DC chol在首次應(yīng)答和二次應(yīng)答中的輔助作用。另外，會(huì)注意到，DC chol通過促進(jìn)TH1型淋巴細(xì)胞的發(fā)展所起的作用使IgG2a的產(chǎn)生得以大量地增加。實(shí)施例13證明DC chol在老齡小鼠中的作用按實(shí)施例12進(jìn)行相同的試驗(yàn)，但只是試驗(yàn)小鼠為更難以受刺激的20-22月齡的小鼠。
在首次應(yīng)答中獲得的結(jié)果描述在圖10中并在圖11中描述二次應(yīng)答的結(jié)果。
DC chol在首次應(yīng)答和二次應(yīng)答中也都具有輔助作用，特別是對(duì)IgG2a抗體的誘導(dǎo)。實(shí)施例14成年小鼠和老齡小鼠中HAI的濃度在實(shí)施例12和13所進(jìn)行的試驗(yàn)中，通過血凝集抑制(HAI)試驗(yàn)測(cè)定免疫接種小鼠的中和抗體。
圖12描述首次應(yīng)答中獲得的結(jié)果并將二次應(yīng)答的結(jié)果描述在圖13中。以最高稀釋液血凝集的以2為底的對(duì)數(shù)值來表示滴定度，所得滴定度清楚地表明DC chol/DOPC脂質(zhì)體在成年小鼠和老齡小鼠中的輔助作用。實(shí)施例15鼻內(nèi)免疫接種按實(shí)施例11所述方法制備疫苗組合物，只是50μl中含有5μg的HA(菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗)和200μg以DC chol/DOPC(質(zhì)量比為1-4)脂質(zhì)體形式存在的DC chol。
以四周間隔兩次鼻內(nèi)免疫接種兩組BALB/c小鼠(每組4只)。
第一組小鼠(G1)接受50μl含有200μg DC chol的疫苗組合物，而第二組(G2)接受50μl相同的單價(jià)流感疫苗但不含佐劑。通過ELISA測(cè)定加強(qiáng)免疫接種后3周抽取的血清樣品來分析各組的免疫反應(yīng)。
以ELISA滴定度的以10為底的對(duì)數(shù)值的形式表示結(jié)果，涉及血清IgG的結(jié)果描述在圖14中，涉及血清IgA的結(jié)果描述在圖15中。
由此會(huì)注意到，在嚴(yán)格的粘膜給藥方案中，DC chol/DOPC脂質(zhì)體通過至少兩個(gè)因素來增加局部和總體的免疫反應(yīng)。
也觀察了DC chol/DOPC脂質(zhì)體在總體免疫反應(yīng)中的輔助作用，取代用ELISA測(cè)量IgG和IgA，用HAI測(cè)量抗-HA抗體；在ELISPOT計(jì)數(shù)免疫接種的肺中細(xì)胞分泌IgG的數(shù)量和細(xì)胞分泌IgA的數(shù)量中，也觀察了局部免疫反應(yīng)的增加，并且在免疫接種小鼠的鼻咽洗出液中通過ELISA測(cè)量也確定了特異IgG(或者IgA)濃度與總IgG(或者IgA，分別地)濃度的比例。實(shí)施例16通過皮下和鼻內(nèi)結(jié)合給藥來免疫接種以4周間隔，隨機(jī)用下列疫苗組合物兩次免疫接種兩組BALB/c小鼠(每組4只)第三組(G3)皮下注射300μl含有4μgHA(菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗形式)和6μg DC chol(DC chol/DOPC脂質(zhì)體形式)的疫苗組合物，和鼻內(nèi)給予50μl含有0.25μgHA(菌株A/新加坡單價(jià)流感疫苗形式)和6μg DC chol(DC chol/DOPC脂質(zhì)體形式)的疫苗組合物，第四組(G4)皮下注射300μl含有4μgHA和200μg DC chol的疫苗組合物，和鼻內(nèi)給予50μl含有0.25μgHA和200μg DC chol的疫苗組合物。
加強(qiáng)給藥后3周抽取免疫小鼠的血清樣品，通過HAI血凝集抑制技術(shù)測(cè)定每個(gè)小鼠的中和抗體的濃度。
以滴定度以2為底的對(duì)數(shù)值來表示結(jié)果，將獲得的結(jié)果描述在圖16中，表明在皮下和鼻內(nèi)途徑的混合給藥方案中，DC chol具有輔助作用，并且DC chol劑量從6增加到200μg使免疫反應(yīng)增加。
當(dāng)取代用HAI測(cè)量抗-HA抗體的濃度，通過ELISA測(cè)量血清IgG或者通過ELISPOT技術(shù)測(cè)量免疫接種小鼠肺中細(xì)胞分泌IgG的數(shù)量和細(xì)胞分泌IgA的數(shù)量或者測(cè)量免疫接種小鼠的鼻咽洗出液中特異IgG(或者IgA)的量與總IgG(或者IgA，分別地)的量的比例，可觀察相同劑量作用。
用DOPE取代DOPC，以及改變DC chol/中性類脂的比例，維持中性類脂和DC chol不低于20％的摩爾比，獲得了類似于實(shí)施例11-16的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.兩親性化合物在制備疫苗組合物中的用途，所述化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
2.權(quán)利要求1的用途，其特征在于親脂基團(tuán)為膽甾醇衍生物。
3.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于陽離子基團(tuán)為季銨或能夠被質(zhì)子化的胺。
4.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于通過以酯、醚、酰胺或氨基甲酰鍵的方式，將親脂基團(tuán)連結(jié)到陽離子基團(tuán)上。
5.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于通過1-20個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基將親脂基團(tuán)和陽離子基團(tuán)分開。
6.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于兩親性化合物選自下列化合物碘化膽甾烯基-3β-甲酰胺基-1，2-亞乙基三甲基銨，膽甾烯基-3β-甲酰胺基-1，2-亞乙基胺，碘化膽甾烯基-3β-氧基琥珀酰胺基亞乙基-三甲基銨，3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇3β-〔N-(聚氮雜環(huán)丙烷)氨基甲?；衬戠薮肌?、3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇在制備疫苗組合物中的用途。
8.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于兩親性化合物與中性類脂相結(jié)合。
9.權(quán)利要求8的用途，其特征在于結(jié)合的中性類脂的比例至少為20％。
10.權(quán)利要求8或9的用途，其特征在于中性類脂為二油?；字Ｒ掖及?DOPE)或二油?；字Ｄ憠A(DOPC)。
11.上述任一權(quán)利要求的用途，其特征在于將兩親性化合物以脂質(zhì)體形式分散在水性環(huán)境中。
12.兩親性化合物在疫苗使用中作為佐劑的用途，所述化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
13.權(quán)利要求12的用途，其特征在于所述兩親性化合物為3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇。
14.權(quán)利要求12或13的用途，其特征在于兩親性化合物與中性類脂相組合。
15.含有至少一種抗原的疫苗組合物，其特征在于另外至少含有一種兩親性化合物，所述化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
16.權(quán)利要求15的疫苗組合物，其特征在于所述親脂基團(tuán)為膽甾醇衍生物。
17.權(quán)利要求15或16的疫苗組合物，其特征在于所述兩親性化合物為3β-〔N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲?；?膽甾醇。
18.權(quán)利要求15-17的任一疫苗組合物，其特征在于所述兩親性化合物為至少包含一種抗原的脂質(zhì)體形式。
19.權(quán)利要求15-18的任一疫苗組合物，其特征在于所述兩親性化合物與中性類脂相組合。
20.權(quán)利要求15-19的任一疫苗組合物，其特征在于至少含有一種流感病毒抗原。
21.誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物免疫反應(yīng)的方法，是給予哺乳動(dòng)物至少一種抗原，其特征在于另外還至少給予一種兩親性化合物，所述化合物含有由連結(jié)到極性基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
22.權(quán)利要求21的方法，其特征在于與抗原同時(shí)給予所述兩親性化合物。
23.權(quán)利要求21或22的方法，其特征在于抗原為流感病毒血球凝結(jié)素。
24.含有至少一種抗原和一種兩親性化合物的產(chǎn)物，其作為組合產(chǎn)品同時(shí)、分別或交替用于接種，所述化合物含有由連結(jié)到陽離子基團(tuán)上的甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
全文摘要
在疫苗組合物釋放中用兩親性化合物作為佐劑，所述兩親性化合物包括與陽離子基團(tuán)結(jié)合的由膽甾醇衍生的親脂基團(tuán)。具體來說，親脂基團(tuán)為膽甾醇衍生物且陽離子基團(tuán)為季銨或可被質(zhì)子化的胺。也公開了包括一種或多種抗原和至少一種兩親性化合物的疫苗組合物，所述兩親性化合物包括與陽離子基團(tuán)結(jié)合的由膽甾醇衍生的親脂基團(tuán)。
文檔編號(hào)A61K47/28GK1168629SQ9519660
公開日1997年12月24日 申請(qǐng)日期1995年11月14日 優(yōu)先權(quán)日1994年11月14日
發(fā)明者J·哈恩斯勒, E·特拉諾伊, J·羅果 申請(qǐng)人:梅諾血清和疫苗開發(fā)研究所