專利名稱：新型彈性蛋白酶抑制劑的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用于各種生理性和目的用途應(yīng)用的彈性蛋白酶，尤其是人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑的化合物。
人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶被認(rèn)為是造成與許多炎癥性疾病，如慢性支氣管炎、肺囊性纖維化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的組織破壞的因子。J.L.Malech和J.I.Gallin，New Engl.Med，317(11)，687(1987)。彈性蛋白酶對許多結(jié)締組織大分子包括彈性蛋白、纖維結(jié)合素、膠原和proteoglycan具有廣泛的蛋白水解活性。彈性蛋白酶的存在可以促成這些疾病的病理變化。
正常血漿中含有大量的蛋白酶抑制劑，調(diào)控在結(jié)締組織的更新和炎癥中涉及的各種酶。例如，α1蛋白酶抑制劑(α-1-PI)是一種可阻斷彈性蛋白酶活性的絲氨酸蛋白酶抑制劑。α-1-PI以受到相當(dāng)多的關(guān)注，因?yàn)槠溲獫{水平降低到正常值的15％以下與早期肺氣腫有關(guān)。除血漿中得到的蛋白酶抑制劑外，分泌液，包括支氣管、鼻、頸部粘液和精液含有叫做分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑(SLPI)的內(nèi)源性蛋白酶抑制劑，它可以滅活彈性蛋白酶并確信在炎癥細(xì)胞存在時(shí)對于維持上皮細(xì)胞的完整性起重要作用。在一定的病理狀態(tài)下，α-1-PI和SLPI被中性粒細(xì)胞氧化機(jī)制滅活而使中性粒細(xì)胞蛋白酶在一個(gè)基本不含抑制劑的環(huán)境中產(chǎn)生作用。例如，已發(fā)現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)病人的支氣管灌洗液中含有活性彈性蛋白酶和已被氧化滅活的α-1-PI。
除氧化機(jī)制外，中性粒細(xì)胞具有通過抗蛋白酶來避免抑制的非-氧化機(jī)制。慢性肉芽腫疾病病人的中性粒細(xì)胞可以在過量α-1-PI的存在下降解內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)。有相當(dāng)多的體外證據(jù)表明，受激中性粒細(xì)胞可以牢固地結(jié)合在其底物上從而將血清抗蛋白酶從具有牢固的細(xì)胞-底物聯(lián)系的微環(huán)境中有效地排出。大量中性粒細(xì)胞流入到炎癥區(qū)域可導(dǎo)致由于發(fā)生在該區(qū)域的蛋白水解所引起的相當(dāng)程度的組織破壞。
通過用中性粒細(xì)胞的溶解產(chǎn)物、純化的彈性蛋白酶和受激中性粒細(xì)胞降解軟骨基質(zhì)proteoglycan的能力進(jìn)行測定，申請人已經(jīng)確定彈性蛋白酶是與軟骨基質(zhì)變性有關(guān)的主要中性粒細(xì)胞蛋白酶之一。此外，申請人首先發(fā)現(xiàn)了可用作彈性蛋白酶抑制劑，產(chǎn)生有價(jià)值的藥理學(xué)活性的肽類衍生物。例如，在European Patent Application OPI No.0529568中，發(fā)明人Peet等，
公開日為1993年3月3日，公開了用作彈性蛋白酶抑制劑的肽類衍生物，其中羧基末端用一個(gè)五氟乙基羰?；睠(O)C2F5〕基團(tuán)代替，氨基酸的N末端通過多種含有雜環(huán)的基團(tuán)，例如4-嗎啉羰酰基保護(hù)。申請人最近發(fā)現(xiàn)了肽基彈性蛋白酶抑制劑，其中的P2部分被多種含氮的雜環(huán)基團(tuán)取代。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及用作彈性蛋白酶抑制劑的具有以下分子式I的化合物 或水合物、電子等排物，或其藥物可接受的鹽類，其中P4是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或一個(gè)鍵；P3是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic或Tca，或在其ε氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或在其δ氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；”P2是Pip，Aze，Pro(4-OH)，Pro(4-OAc)或Pro(4-OBzl)；R1是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal的側(cè)鏈；X是-CF3，-CF2H，-CFH2，-C(＝O)Y，-C(＝O)P2′-Y，-CF2C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)NBC(＝O)R3，-CHFCH(R1′)NHC(＝O)R3，-H，-C((＝O)R3，-CH(R1)C(＝O)P2′-Y，
-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CHF(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，-CF2(CH2)vCH＝CH2，-CH2Cl或-C(＝O)-C(＝O)-Y；R3是C1-6烷基，苯基，芐基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基；R4是H或C1-6烷基；R1‘是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal的側(cè)鏈；P2’是一個(gè)鍵，Ala或Val；Y是-NHR3，OR3；t是2，3或4；v是1，2或3；k是氫，甲?；?，乙?；牾；郊柞；?丁氧羰?；S氧羰基，甲苯磺酸基，丹?；?，異戊酰基，甲氧琥珀?；?，1-金剛烷磺?；?，1-金剛烷乙?；?，2-羧基苯甲?；揭阴；?，叔-丁基乙?；?，二((1-萘基)甲基)乙酰基，-C(＝O)N-(CH3)2， -A-Rz其中A是 ；并且Rz是一個(gè)含有6，10或12個(gè)碳原子的芳基，被1到3個(gè)獨(dú)立地選自由氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含有1到6個(gè)碳原子的烷基、含有1到6個(gè)碳原子的烷氧基、羰基、烷基羰基氨基，其中的烷基含有1到6個(gè)碳原子、5-四唑基、和含有1到15個(gè)碳原子的?；鶃喕酋０坊绻；鶃喕酋０坊幸粋€(gè)芳基，該芳基還可以被一個(gè)選自氟，氯，溴，碘和硝基的基團(tuán)進(jìn)一步取代所組成的組群的基團(tuán)取代；或 其中Z是N或CH，并且B是以下分子式的基團(tuán) (波狀曲線是與分子的其它部分的連接，即，不是連接到Z)其中R’是氫或一個(gè)C1-6烷基。顯示抗炎效果的分子式I的化合物可用于痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其它炎癥性疾病，例如成人呼吸窘迫綜合征、敗血癥、慢性支氣管炎、炎癥性腸道疾病、彌漫性血管內(nèi)凝血、肺囊性纖維化的治療以及肺氣腫的治療。
發(fā)明詳述分子式I的化合物的電子等排體包括那些其中(a)P2-P4取代基的一個(gè)或多個(gè)α-氨基殘基是非天然構(gòu)型的(當(dāng)存在天然構(gòu)型時(shí))或(b)對正常的肽的酰胺鍵[-C(＝O)NH-]進(jìn)行了修飾，例如，形成-CH2NH-(還原)，-COCH2-(酮)，-CH(OH)CH2-(羥基)，-CH(NH2)CH2-(氨基)，-CH2CH2-(烴)，-CH＝CH-(烯)。本發(fā)明的化合物最好不是電子等排體的形式；尤其優(yōu)選不含有修飾的肽的酰胺基團(tuán)，如果有的話，優(yōu)選保持電子等排的修飾最少。
所選擇的C1-6烷基包括直鏈、支鏈、或環(huán)狀烷基基團(tuán)，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔-丁基，戊基，異戊基，仲-戊基，環(huán)戊基，己基，異己基，環(huán)己基和環(huán)戊基甲基。
分子式I的化合物可以用任何無毒的有機(jī)或無機(jī)酸形成藥物可接受的鹽類。可形成適當(dāng)?shù)柠}的無機(jī)酸的例子包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和酸式金屬鹽例如磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀?？尚纬蛇m當(dāng)?shù)柠}的有機(jī)酸的例子包括單、二和三羰酸。這些酸的例子是，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、枸櫞酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、和磺酸例如甲基磺酸和2-羥基乙基磺酸。
那些其中X是-C(＝O)-C(＝O)-Y的分子式I的化合物可以以水合物或脫水物的形式存在。這些分子式I的三酮化合物的水合物比其中X是-C(＝O)-C(＝O)-Y的分子式I的三酮化合物的脫水物在化學(xué)性質(zhì)上穩(wěn)定的多。基于這個(gè)原因，水合物為優(yōu)選并且在該說明書和權(quán)利要求書中提到的任何三酮化合物根據(jù)環(huán)境許可均應(yīng)采取相應(yīng)的水合物形式。此外，預(yù)期本發(fā)明的化合物在正常的生理?xiàng)l件下是水合物的形式。
每個(gè)α-氨基酸均有一個(gè)特征性的“R-基團(tuán)”，該R-基團(tuán)是連接在”α-氨基酸的α-碳原子上的側(cè)鏈或殘基。例如，R-基側(cè)鏈團(tuán)對于甘氨酸是氫，對于丙氨酸是甲基，對于纈氨酸是異丙基。(因此，在整個(gè)說明書中，R1部分是每個(gè)所指的α-氨基酸的R-基團(tuán))。關(guān)于α-氨基酸的特定的R-基團(tuán)或側(cè)鏈參考A.L.Lehninger’s text on Biochemistry(具體參看第四章)會(huì)有幫助。
天然的氨基酸，除甘氨酸以外，均含有一個(gè)手性碳原子。除非特別說明，優(yōu)選的化合物均是L-構(gòu)型的光學(xué)活性的氨基酸；然而，申請人預(yù)計(jì)分子式I化合物的氨基酸可以是D-或L-構(gòu)型或是D-和L-異構(gòu)體的混合物，包括消旋的混合物。在表I中列出了公認(rèn)的α-氨基酸的縮寫。
具有任何基團(tuán)的、有具體的同種用途的結(jié)構(gòu)相關(guān)的化合物，在其end-use應(yīng)用中，分子式I的化合物的某些基團(tuán)和構(gòu)型為優(yōu)選。
關(guān)于取代基P4，優(yōu)選P4是Ala或一個(gè)鍵的分子式I的化合物。特別優(yōu)選P4是一個(gè)鍵的分子式I的化合物。
關(guān)于取代基P3，優(yōu)選P3是Ile，Val或Ala的分子式I的化合物。特別優(yōu)選P3是Val的分子式I的化合物。
關(guān)于取代基R1，優(yōu)選R1是-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3，分別是氨基酸Val和Nva的特征性“R-基團(tuán)”的分子式I的化合物。特別優(yōu)選R1是-CH(CH3)2的分子式I的化合物。
關(guān)于取代基X，優(yōu)選X是-CF2CF3，-CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CHF(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，或CF2(CH2)vCH＝CH2的分子式I的化合物。特別優(yōu)選X是-CF2CF3的分子式I的化合物。
關(guān)于取代基K，優(yōu)選K是苯甲?；?，叔-丁氧羰?；S氧羰基，異戊酰基，-C(＝O)N(CH3)2，
或 其中Z是N并且B是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或C1-6烷基的分子式I的化合物。特別優(yōu)選K是 其中Z是N并且B是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或C1-6烷基的分子式I的化合物。
優(yōu)選化合物的具體例子包括N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁烷酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-D，L-2-哌啶酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺；通常，分子式I的化合物可以按方案A所述用本領(lǐng)域已知的類似的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)制備。
方案A 方案A提供制備分子式I的化合物的總的合成方案。
P2，P3和K-P4基團(tuán)可以連接到結(jié)構(gòu)式(1)的氨基酸衍生物的游離氨基上。注意結(jié)構(gòu)式(1)代表P1部分，其中的游離羧基被一個(gè)如上定義“X”部分取代。可以通過公知的肽偶聯(lián)技術(shù)將P2，P3和K-P4連接到未保護(hù)的、游離氨基化合物上。此外，P1，P2，P3和K-P4基團(tuán)可以按任何次序連接在一起，只要最終的化合物是K-P4-P3-P2-P1-X。例如，可以將K-P4與P3連接生成K-P4-P3并將其與P2-P1-X連接到；或?qū)-P4與P3-P2連接然后與一個(gè)適當(dāng)?shù)腃-末端保護(hù)的P1連接并將C-末端保護(hù)基轉(zhuǎn)變成X。
通常，可以通過將N-末端殘基的α-胺脫保護(hù)并用所述的方法進(jìn)行肽連接，與下一個(gè)適當(dāng)?shù)腘-保護(hù)的氨基酸偶聯(lián)將肽延長。重復(fù)脫保護(hù)和偶聯(lián)過程直至得到想要的序列。偶聯(lián)可以如方案A所述用組成的氨基酸以逐步的方式進(jìn)行，或通過片段(兩到多個(gè)氨基酸)的縮合，或兩種方法的結(jié)合，或通過固相多肽合成，根據(jù)Merrifield，J.Am.Chem.Soc.1993，85，2149-2154所記載的方法，在此引入其公開內(nèi)容用作參考。當(dāng)使用固相合成方法時(shí)，C-末端羧酸與一個(gè)不溶性的載體(通常是聚苯乙烯)連接。這些不溶性載體含有一個(gè)基團(tuán)，該基團(tuán)可與醛基反應(yīng)形成一個(gè)在延長條件下穩(wěn)定但在此后易于斷裂的鍵。這些載體的例子是氯-或溴乙基樹脂，羥甲基樹脂和氨基甲基樹脂。這些樹脂中許多都可以購買到，并且已經(jīng)引入了想要的C-末端氨基酸。對于X是H的分子式I的化合物，在方案A的反應(yīng)中還可以使用連接化合物將樹脂連接到結(jié)構(gòu)式(I)的氨基酸衍生物(其中X是H)的醛基官能團(tuán)上。適當(dāng)?shù)倪B接化合物的例子是 另外，本發(fā)明的化合物還可以用自動(dòng)多肽合成儀進(jìn)行合成。除前述之外，在Stewart和Young，”Solid Phase Peptide Synthsis”，第二版，PierceChemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend編，”The PeptidesAnalysis，Synthsis，Biology”，1，2，3，5和9卷，AcademicPress，New York，1980-1987；Bodanszky，”Peptide ChemistryA Practicaltexrbook”，Springer-Verlag，New York(1988)；和Bodanszky等，”ThePractice of Peptide Synthsis”Springer-Verlag，New York(1984)中也記載了多肽的合成，在此引入其公開內(nèi)容用作參考。
氨基酸之間、氨基酸與多肽之間，或者兩個(gè)多肽片段之間的偶聯(lián)可以通過標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)方法進(jìn)行，例如疊氮化合物的方法、混合碳酸-羧酸酸酐(氯甲酸異丁基酯)的方法、碳二亞胺(二環(huán)己基碳二亞胺，二異丙基碳二亞胺，或水溶性碳二亞胺)的方法，活性酯(對-硝基苯基酯，N-羥基-琥珀酰亞胺酸酯)的方法，Woodward試劑K的方法，羰基二咪唑的方法，磷試劑例如BOP-Cl，或氧化-還原的方法。其中的一些方法(尤其是碳二亞胺的方法)可以通過加入1-羥基苯并三唑得到改善。這些偶聯(lián)反應(yīng)可以以溶液(液相)或固相的形式進(jìn)行。
組成氨基酸的功能基在偶聯(lián)反應(yīng)中通常必須保護(hù)以避免不想要的鍵的形成?？墒褂玫谋Ｗo(hù)基列于Greene，”Protective Groups in OrganicChemistry”，John Wile & Sons，New York(1981)和”ThePeptidesAnalysis，Synthsis，Biology”，Vol.3，Academic Press，NewYork(1981)，其公開的內(nèi)容在此作為參考文獻(xiàn)。
C-末端殘基的α-羧基通常通過可以斷裂形成羧酸的酯來保護(hù)。可使用的保護(hù)基包括1)烷基酯例如甲酯和叔-丁酯，2)芳基酯例如芐酯和取代的芐酯，或3)可以通過弱堿處理或溫和的還原方法進(jìn)行斷裂的酯例如三氯乙酯和苯甲酰酯。
每一個(gè)要偶聯(lián)到延長肽鏈上的氨基酸的α-氨基都必須進(jìn)行保護(hù)?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何保護(hù)基。它們的例子包括1)?；屠缂柞；?，三氟乙酰基，鄰苯二甲?；蛯?甲苯磺?；?；2)芳香氨基甲酸酯型例如芐氧羰基(CBz或Z)和取代的芐氧羰基，1-(對-二苯基)-1-甲基乙氧基-羰基；和9-芴基甲氧羰基(Fomc)；3)脂肪族氨基甲酸酯型例如叔丁氧羰?；?Boc)，乙氧羰?；?，二異丙基甲氧羰?；?，和烯丙基氧羰?；?；4)環(huán)烷基氨基甲酸酯型例如環(huán)戊基氧羰?；徒饎偼榛豸术；?；5)烷基型例如三苯甲基和芐基；6)胺烷基硅烷例如三甲基硅烷；和7)硫醇型例如苯硫代羰?；投珑牾；?。優(yōu)選的α-氨基保護(hù)基是Boc或Fomc，優(yōu)選Boc。許多用于多肽合成的適當(dāng)保護(hù)的氨基酸都可以購買到。
在與下一個(gè)氨基酸偶聯(lián)之前，先將新引入的氨基酸殘基的α-氨基保護(hù)基斷裂。當(dāng)使用Boc保護(hù)基時(shí)，選用的方法是三氟乙酸，純凈的或溶于二氯甲烷中的，或溶于二惡烷或乙酸乙酯的HCl。然后將得到的銨鹽用堿性溶液例如緩沖溶液或溶于二氯甲烷的三乙胺在偶聯(lián)之前或就地中和。當(dāng)使用Fomc保護(hù)基時(shí)，選用的試劑是溶于二氯甲烷的哌啶或取代的哌啶，但也可使用任何二級胺或堿性水溶液。脫保護(hù)在0℃到室溫之間進(jìn)行。
任何帶有側(cè)鏈官能團(tuán)的氨基酸在多肽的制備過程中必須用上述的基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，對這些側(cè)鏈官能團(tuán)的適當(dāng)保護(hù)基的選擇和使用依賴于氨基酸和多肽中的其它保護(hù)基的存在。對這些保護(hù)基選擇的重點(diǎn)是它必須在α-氨基的脫保護(hù)和偶聯(lián)中不會(huì)被除去。
例如，當(dāng)使用Boc作為α-氨基的保護(hù)基時(shí)，以下側(cè)鏈保護(hù)基是合適的對-甲苯磺?；?tosyl)部分可用來保護(hù)氨基酸例如Lys和Arg的氨基側(cè)鏈；對-甲基芐基，乙酰氨基甲基，芐基(Bzl)，或叔-丁基磺?；糠挚捎脕肀Ｗo(hù)氨基酸例如半胱氨酸的含硫側(cè)鏈；芐基(Bzl)醚可用來保護(hù)氨基酸例如Ser和Thr的含羥基側(cè)鏈。
當(dāng)使用Fmoc進(jìn)行α-氨基的保護(hù)時(shí)，基于叔-丁基的保護(hù)基通常是可以接受的。例如，Boc可用于賴氨酸，叔-丁基醚用于絲氨酸和蘇氨酸，叔-丁基酯用于谷氨酸。
在多肽的延長完成時(shí)除去所有的保護(hù)基。當(dāng)使用液相合成時(shí)，依據(jù)保護(hù)基的選擇可使用任何方式除去保護(hù)基。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。
當(dāng)使用固相合成時(shí)，通常在除去保護(hù)基的同時(shí)將多肽從樹脂上斷裂下來。當(dāng)在合成中使用Boc保護(hù)方案時(shí)，用含有添加劑例如二甲硫醚、茴香醚、茴香硫醚、或?qū)?甲苯酚的無水HF在0℃處理是將多肽從樹脂上斷裂的優(yōu)選方法。多肽的斷裂還可以通過其它酸性試劑例如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物來完成。如果使用了Fmoc保護(hù)方案時(shí)，N-末端的Fmoc基團(tuán)用前述的試劑斷裂。其它的保護(hù)基和多肽從樹脂的斷裂用三氟乙酸和各種添加劑例如茴香醚等的溶液。
對于X是H的那些分子式I的化合物，分子式I的多肽可以通過酸/甲醛水溶液從連接化合物和樹脂上斷裂下來。
另外，分子式I的化合物還可以按方案B所描述用本領(lǐng)域已知的類似的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)制備。
方案B 方案B提供另外一種制備分子式I的化合物的通用合成方案。
可以如前方案A所述將P2，P3和K-P4基團(tuán)連接到結(jié)構(gòu)式(2)的氨基醇衍生物的游離氨基上生成結(jié)構(gòu)式(3)的肽基醇。
然后將肽基醇的醇功能基用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法，例如用草酰氯和二甲亞砜的Swern氧化，進(jìn)行氧化生成分子式I的化合物。
方案A和B所用的原料是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易得的。例如，氨基酸P2，P3和K-P4其中K是氫可以購買到，而結(jié)構(gòu)式(L1)的連接化合物在J.Am.Chem.Soc.，114，3157-59(1992)中有記載。另外，歐洲專利申請OPINo.0363284，1990年4月11日，記載了取代的氨基酸K-P4其中K是乙?；?，琥珀?；?，苯甲?；?丁氧羰?；?，芐氧羰基，甲苯磺?；?，丹?；?，異戊酰基，甲氧琥珀?；?，1-金剛烷胺苯磺?；?，1-金剛烷胺乙?；?，2-羧基苯甲?；?，苯乙酰基，叔-丁基乙酰基，二[(1-萘基)-甲基]乙?；?，或-A-Rz其中A是 Rz是一個(gè)含有Rz是一個(gè)含有6，10或12個(gè)碳原子的芳基，被1到3個(gè)獨(dú)立地選自由氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含有1到6個(gè)碳原子的烷基、含有1到6個(gè)碳原子的烷氧基、羰基、烷基羰基氨基，其中的烷基含有1到6個(gè)碳原子、5-四唑基、和含有1到15個(gè)碳原子的酰基亞磺酰胺基(即酰胺基磺?；突酋０坊驶?，如果?；鶃喕酋０坊幸粋€(gè)芳基，該芳基還可以被一個(gè)選自氟，氯，溴，碘和硝基的基團(tuán)進(jìn)一步取代所組成的組群的基團(tuán)取代；以及其它這類的與其功能相當(dāng)?shù)哪┒税被Ｗo(hù)基。
起始的結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是易得的。例如，保護(hù)了的結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物(其中X是H)是文獻(xiàn)中公知的，并且在歐洲專利申請OPI No.0275101，1988年七月20日，和歐洲專利申請OPI No.0363284，1990年4月11日中也有記載。另外，歐洲專利申請OPINo.0503203，1992年九月16日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物，其中X是-CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH＝CH3。歐洲專利申請OPINo.0195212，1986年九月24日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物，其中X是-CF3，-CF2H，-C(＝O)-Y，CF2CH(R1’)-C(＝O)P2-Y和-C(＝O)-P2’-Y。OPINo.0275101，1988年七月20日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-CF2CH(R1’)NHC(＝O)R3并且可以通過類似的方法使用溴-氟乙酸乙酯代替溴-二氟乙酸乙酯制得結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-CHFCH(R1’)NHC(＝O)R3。Biochem.J(1987)，241，871-5，Biochem.J(1986)，239，633-40和美國專利號(hào)4518528，1985年五月21日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-CFH2。歐洲專利申請OPINo.0363284，1990年四月11日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物，其中X是-CO2R3，C(＝O)-R3-CH(R1)-C(＝O)P2’-Y。歐洲專利申請OPINo.0275101，1988年七月20日，記載了結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-CF2CH(R1’)NHC(＝O)R3。另外，歐洲專利申請OPI No.0410411，1991年一月30日，記載了結(jié)構(gòu)式(15)的氨基化合物其中X是-CF2CF3。在J.Am.Chem.Soc.1992，114，3156-3157中記載了從相應(yīng)的酸制備用于合成分子式I的化合物(其中X是H)的連接化合物反-4-(氨甲基)-環(huán)己酸芐酯。
另外，方案A和B的所用的其它原料可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的合成方法制備。
結(jié)構(gòu)式的取代的氨基酸K-P4其中K是 其中Z 是N或CH，并且B 是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或C1-6烷基用本領(lǐng)域公知的類似的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)制備。在方案C中概述了取代氨基酸K-P4其中K是 其中B是-C(＝O)-的制備方法，其中P4和Z如上所定義或與這些基團(tuán)在功能上相當(dāng)。
方案C 特別地，通過將氨基酸K-P4(其中K是氫)與結(jié)構(gòu)式(4)的酰氯在一到四摩爾當(dāng)量可起到鹵化氫受體作用的適當(dāng)?shù)陌返拇嬖谙屡悸?lián)制得氨基酸K-P4其中K是 其中B是-C(＝O)-。用作鹵化氫受體的適當(dāng)?shù)陌肥怯袡C(jī)叔胺例如三(低級烷基)胺，例如，三乙胺，或芳香胺例如甲基吡啶、可力丁、和吡啶。當(dāng)使用吡啶、甲基吡啶、或可力丁時(shí)，它們可以大大過量從而還可以起到反應(yīng)溶劑的作用。特別適合于反應(yīng)的是N-甲基嗎啉(“NMM”)。偶聯(lián)反應(yīng)的進(jìn)行可以通過向氨基酸K-P4(其中K是氫)的溶液中加入過量的，例如1-5倍，優(yōu)選大約4倍摩爾過量的胺，然后加入結(jié)構(gòu)式(4)的酰氯。溶劑可以是任何適當(dāng)?shù)娜軇?，例如，石油醚、氯代烴例如四氯化碳，氯化乙烯，二氯甲烷，或氯仿、氯代芳烴例如1，2，4-三氯苯，或鄰-二氯苯、二硫化碳、醚性溶液例如二乙醚，四氫呋喃，或1，4-二氧六環(huán)、或芳烴溶劑例如苯，甲苯或二甲苯。二氯甲烷是該偶聯(lián)反應(yīng)的優(yōu)選溶劑。依據(jù)反應(yīng)試劑、溶劑、濃度、以及其它因素，例如溫度，可以從大約0℃到60℃，通常在室溫下，即25℃，反應(yīng)可以進(jìn)行15分鐘到6小時(shí)。N-保護(hù)的氨基酸K-P4，其中K是 其中B是-C(＝O)-可以通過任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)例如硅膠色譜從反應(yīng)混合物中分離。取代的氨基酸K-P4，其中K是 其中B不是-C(＝O)-可以類似地進(jìn)行制備，僅在方案C中用適當(dāng)?shù)闹虚g體 其中B不是-C(＝O)-并且A是Cl或OH(相應(yīng)的酸，酰氯或磺酰氯)代替結(jié)構(gòu)式(5)的化合物。
結(jié)構(gòu)式(4)的酰氯以及適當(dāng)?shù)姆肿邮?其中B不是-C(＝O)-并且A是Cl或OH(相應(yīng)的酸，酰氯或磺酰氯)的中間體可以購買到或可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法方便地制備。
例如，適當(dāng)?shù)姆肿邮?的中間體可以如方案D所述進(jìn)行制備，其中所有的取代基如上所定義。
方案D
方案D提供一種制備分子式 其中Z如前所定義的適當(dāng)?shù)闹虚g體的通用合成方法。
在步驟a中，將適當(dāng)?shù)?，5-吡啶二羧酸，2-甲酯(6)(Nippon KagakuZasshi，1967，88，563)的羧酸功能基用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法轉(zhuǎn)變成它的酰氯，例如亞硫酰氯，生成相應(yīng)的6-甲氧甲酰煙酰氯(7)。
在步驟b中，將酰氯(7)通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法用嗎啉(8)酰胺化生成相應(yīng)的5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸甲酯(9)。
在步驟c中，將甲酯功能基(9)通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法，例如氫氧化鋰的甲醇溶液進(jìn)行水解，生成5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸(10)。
另外，分子式 的適當(dāng)?shù)闹虚g體可以如方案E所述進(jìn)行制備，其中所有的取代基如前所定義。
方案E
方案E提供制備分子式 其中Z如前所定義的適當(dāng)?shù)闹虚g體的通用合成方法。
在步驟a中，將適當(dāng)?shù)?，5-吡啶二羧酸，2-甲酯(6)(Nippon KagakuZasshi，1967，88，563)的游離羧酸功能基用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法，例如叔-丁醇的六環(huán)己基碳二亞胺的加合物(Synthsis，1979，570)轉(zhuǎn)變成它的叔丁酯，生成相應(yīng)的2，5-吡啶二羰酸，2-甲酯，5-叔-丁酯(11)。
例如，將2，5-吡啶二羧酸，將2-甲酯(6)與過量一摩爾的叔-丁醇的六環(huán)己基碳二亞胺加合物在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，例如二氯甲烷中結(jié)合。反應(yīng)一般在0℃到室溫的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間的為2到24小時(shí)。用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)提取方法將2，5-吡啶二羧酸，2-甲酯，5-叔-丁酯(11)從反應(yīng)混合物中分離并可以通過重結(jié)晶進(jìn)行純化。
在步驟b中，將(11)的甲酯功能基用嗎啉(8)酰胺化生成相應(yīng)的6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔-丁酯(12)。
例如，將2，5-吡啶二羧酸，2-甲酯，5-叔-丁酯(11)與一摩爾過量的嗎啉在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，例如四氫呋喃中結(jié)合。反應(yīng)一般在從室溫到回流的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間從5小時(shí)到3天。用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)提取方法將6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔-丁酯(12)從反應(yīng)混合物中分離并可以通過重結(jié)晶進(jìn)行純化。
在步驟c中，將(12)的叔-丁酯用例如，HCl的硝基甲烷溶液進(jìn)行水解，生6-(嗎啉-4-羰基)煙酸(13)。
結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-C(＝O)-C(＝O)-Y可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知和理解的技術(shù)和方法制備。
例如，結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-C(＝O)-C(＝O)-Y可以如方案F所述進(jìn)行制備，其中所有的取代基如前所定義。
方案F
特別地，如方案F中所述，結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物其中X是-C(＝O)-C(＝O)-Y的制備可以通過將適當(dāng)?shù)腘-Boc保護(hù)的三羰基化合物(20)用適當(dāng)?shù)乃?，例如氯化氫的乙酸乙酯或硝基甲烷溶液，或純凈的三氟乙酸或其在二氯甲烷中的溶液處理，隨后用適當(dāng)?shù)膲A形成游離的堿(21)。
中間體(20)通過將產(chǎn)物(19)用(a)臭氧和二甲硫醚或(b)單純氧或(c)Oxone處理生成。臭氧化反應(yīng)通?？梢酝ㄟ^例如，將過量的臭氧通入適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(20)的產(chǎn)物的冷卻溶液中進(jìn)行。適當(dāng)?shù)娜軇┌梢匀芙猱a(chǎn)物(20)的任何惰性溶劑，例如，簡單鏈烷酸的烷基酯例如乙酸乙酯；氯代烴例如四氯化碳、氯仿、1，2-二氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、和二氯甲烷；芳烴例如苯、甲苯、二甲苯；氯代芳烴例如1，2，4-三氯苯和鄰-二氯苯；或醚性溶劑例如二乙醚、四氫呋喃(THF)、和1，4-二氧六環(huán)。優(yōu)選二氯甲烷。
臭氧化反應(yīng)混合物的溫度可以以任何溫度來進(jìn)行反應(yīng)，一般從定義-78℃到0℃，優(yōu)選從大約-78℃到-35℃，最為優(yōu)選-70℃。反應(yīng)時(shí)間依據(jù)產(chǎn)物、反應(yīng)物濃度、溫度及其它因素而變化。通常，將臭氧通入反應(yīng)混合物中直至溶液變藍(lán)顯示臭氧過量。
然后將臭氧化物用過量的還原劑例如金屬鋅或優(yōu)選的鋅的二甲基硫化物處理。以任何常用的方式，一般是除去溶劑(通過蒸發(fā))將化合物(20)以水合物的形式從反應(yīng)混合物中分離出來。純化可以通過，例如閃式色譜分離來完成(Still，W.C；Kahn，M；Mitra，A.；J.Org.Chem.1978，43，2923)。
當(dāng)需要更溫和或選擇性更強(qiáng)的溶劑時(shí)，可以使用Oxone代替臭氧。一般地，將產(chǎn)物(19)用1.5當(dāng)量的Oxone的THF-H2O溶液處理并將生成的水合的三羰基化物從反應(yīng)混合物中分離出來。
使用單純氧氧化也是公知的。更具體的講，產(chǎn)物的單純氧氧化生成三羰基酯已經(jīng)被Wasserman等，J.Amer.Chem.Soc.，11，371(1989)所報(bào)道。單純氧可以通過氧氣的染料增感激活產(chǎn)生。適當(dāng)?shù)娜玖习倒寮t、曙紅Y和亞甲基藍(lán)。其它增感劑包括萘噻吩(inaphthalenethiophene)。一般地，玫瑰紅、曙紅Y連接在堿性陰離子交換樹脂上而亞甲基藍(lán)連接在酸性陽離子交換樹脂上。激活通過紫外燈例如碘鎢燈來完成。適當(dāng)?shù)娜軇┦侨魏未龠M(jìn)而不干擾所需反應(yīng)的溶劑。這樣的溶劑包括芳烴例如苯和甲苯；烴例如己烷；醚性溶劑例如二乙醚、四氫呋喃(THF)，1，4-二氧六環(huán)；氯代烴例如二氯甲烷和氯仿；和二硫化碳?；旌衔镆彩强尚械?。反應(yīng)混合物的溫度可以是從大約-78℃到30℃一般從大約-78℃到-50℃的任何適當(dāng)?shù)臏囟取７磻?yīng)時(shí)間依據(jù)反應(yīng)物、溶劑、濃度、和溫度而變化，可以從大約1分鐘到2小時(shí)?？梢酝ㄟ^以上臭氧分解反應(yīng)混合物中的產(chǎn)物的分離和說明所描述的方法進(jìn)行純化和分離。
結(jié)構(gòu)式(19)的N-Boc保護(hù)的產(chǎn)物通過將結(jié)構(gòu)式(14)的N-Boc保護(hù)的氨基酸與結(jié)構(gòu)式(16)的磷用水溶性碳二亞胺(WSCDI)例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(17)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(18)甲碘化物在4-二甲氨基吡啶(DAMP)的存在下在適當(dāng)?shù)娜軇├鏣HF或二氯甲烷中偶聯(lián)進(jìn)行制備。反應(yīng)需要大約30分鐘到12小時(shí)，一般是大約2到3小時(shí)，依據(jù)氨基酸、產(chǎn)物、溶劑、和溫度，溫度可以是從大約-15℃到60℃，但一般在0℃。分離和純化通過將反應(yīng)混合物濾除固體產(chǎn)物并隨后將濾液在例如硅膠上進(jìn)行色譜分離來完成。
結(jié)構(gòu)式(16)的所三價(jià)磷產(chǎn)物，Wittig試劑從相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(15)的α-鹵代羧酸衍生物以常用的方式制備，即將α-鹵代酯與一個(gè)三級膦例如三苯膦反應(yīng)生成磷鹽。當(dāng)用強(qiáng)堿例如有機(jī)鋰化合物，例如二異丙氨基鋰(LDA)、氫化鈉、或氨基鈉處理時(shí)，酸性質(zhì)子被脫去而形成所需產(chǎn)物。在形成Wittig試劑時(shí)使用的適當(dāng)?shù)娜軇┌ㄈ魏味栊匀軇┌?，例如，芳烴例如苯或甲苯、氯代烴例如四氯化碳，氯仿或二氯甲烷、或醚性溶劑例如二乙醚或THF。
反應(yīng)通常可以在大約0℃到60℃下進(jìn)行，一般在室溫，即25℃下進(jìn)行。α-鹵代酯鹵素基團(tuán)優(yōu)選是溴，但也可以是氯或碘或任何可以形成穩(wěn)定鏻鹽的良好的離去基團(tuán)例如甲磺酰酯或甲苯磺酰酯基團(tuán)。
另外，結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物(其中X為-CHF(CH2)tCH3)可以按方案G中描述方法制備，方案G中所有取代基如前定義。
方案G
方案G提供制備結(jié)構(gòu)式(1)的氨基酸(其中X是-CHF(CH2)tCH3)的通用合成方法。在方案G中，除非特別聲明，所有的取代基均如前所定義。
在步驟a中，將結(jié)構(gòu)式(22)的適當(dāng)酸用N-甲基-N-甲氧基胺通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知和理解的技術(shù)和方法，例如使用1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和1-羥基苯并三唑(HOBT)的偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行酰胺化，生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(25)的酰胺。
在步驟b中，將適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(23)的酰胺用適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(24)的烷基金屬化合物烷基化生成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(25)的酮基化合物。
例如，將適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(23)的酰胺用適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(24)的烷基金屬化合物在適當(dāng)?shù)姆琴|(zhì)子、無水有機(jī)溶劑例如四氫呋喃或二乙醚中處理。反應(yīng)一般在-78℃到-40℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)時(shí)間從30分鐘到5小時(shí)。相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(25)的酮基化合物通過本領(lǐng)域公知的提取方法從反應(yīng)區(qū)回收并可以通過色譜分離進(jìn)行純化。
在步驟c中，將適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(25)的酮基化合物用結(jié)構(gòu)式(26)的N-氟磺酰胺化合物，或其它氯化試劑(27)，(28)或(29)氟化生成結(jié)構(gòu)式(30)的保護(hù)的氨基化合物，即其中的氨基末端基團(tuán)用Boc基團(tuán)取代并且X是-CHF(CH2)tCH3的結(jié)構(gòu)式(1)的氨基化合物。
例如，將適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)式(25)的酮基化合物用適當(dāng)?shù)姆?親核性的堿，例如二異丙氨基鋰在適當(dāng)?shù)臒o水非質(zhì)子有機(jī)溶劑例如四氫呋喃中在-78℃到-40℃的溫度范圍內(nèi)處理5分鐘到2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用結(jié)構(gòu)式(26)的N-氟磺酰胺化合物處理，反應(yīng)在-78℃到-40℃的溫度范圍進(jìn)行反應(yīng)時(shí)間從30分鐘到10小時(shí)。通過本領(lǐng)域公知的提取方法將N-t-Boc保護(hù)的結(jié)構(gòu)式(1)氨基化合物(其中X是-CHF(CH2)tCH3)從反應(yīng)區(qū)回收并可以通過色譜分離進(jìn)行純化。
制備結(jié)構(gòu)式(1)的化合物(其中X＝-CF2CF3)的其它途徑在方案H中說明。
化合物(31)定義的所需原料可通過購買或應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)已知的原理或技術(shù)方便的得到。術(shù)語“Pg”指如前所定義的適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基。
方案H
在方案H，步驟a中將保護(hù)的氨基酸(31)轉(zhuǎn)變?yōu)閔ydroxmate(32)。該酰胺化可以通過象兩個(gè)氨基酸之間那樣的偶聯(lián)反應(yīng)用保護(hù)的氨基酸(31)和N-烷基O-烷基羥胺進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)反應(yīng)可以用如前所述的用于兩個(gè)氨基酸之間的偶聯(lián)的標(biāo)準(zhǔn)方法完成，生成hydroxmate(32)。
在步驟b中，將保護(hù)的hydroxmate(32)轉(zhuǎn)變?yōu)楸Ｗo(hù)的五氟酮(34)[或(35)]。該反應(yīng)可以用下列參考文獻(xiàn)M.R.Angelastro，J.P.Burkhart，P.Bey，N.P.Peet，TetrahedronLetters，33(1992)，3265-3268中描述的反應(yīng)類型的反應(yīng)進(jìn)行。
在步驟c中，將hydroxmate(32)在如T.H.Green“Protection Groupsin Organic Synthesis”，John Wiley和Sons，1981，第7章所描述的本領(lǐng)域公知的條件下脫保護(hù)，生成脫保護(hù)的hydroxmate。將脫保護(hù)的hydroxmate通過用前述方法與下一個(gè)適當(dāng)保護(hù)了的氨基酸通過肽鍵偶聯(lián)、或通過片段的縮合、或通過兩種方法的結(jié)合進(jìn)行延長，生成延長了的多肽(33)。
在步驟d中，將酮(34)在前述條件下脫保護(hù)。將脫保護(hù)的酮(34)通過用前述方法與下一個(gè)適當(dāng)保護(hù)了的氨基酸通過肽鍵偶聯(lián)、或通過片段的縮合、或通過兩種方法的結(jié)合進(jìn)行延長，生成延長了的酮(35)。
另外，相應(yīng)的N-保護(hù)的氨基酸酯(31)[即PgNHCH(R1)C(＝O)OR2，(32a)，其中R2和Pg如前所定義]可以代替hydroxmate(32)。相應(yīng)的保護(hù)的氨基酸酯(31)可購買到或從(31)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法容易地合成。在步驟b中，將氨基酸酯(32a)以與相應(yīng)的hydroxmate所用的完全類似的方式轉(zhuǎn)變?yōu)镹-保護(hù)的五氟酮(34)[或(35)]。步驟c和d與使用hydroxmate(32)時(shí)相似。
例如，可以將氨基酸酯(32a)與適當(dāng)?shù)娜噭?，例?-8當(dāng)量的全氟乙基碘或全氟乙基溴反應(yīng)。所述反應(yīng)在適當(dāng)?shù)膲A金屬堿，例如4-8當(dāng)量的MeLi/LiBr的存在下，在適當(dāng)?shù)臒o水溶劑(或混合溶劑)，例如乙醚，四氫呋喃，或甲苯中進(jìn)行。其它適當(dāng)?shù)膲A金屬堿的例子包括t-BuLi，EtMgBr，PhMgBr，n-BuLi，及此類。反應(yīng)在-100℃到0℃，優(yōu)選-30℃到-80℃的降低溫度下進(jìn)行，分別生成保護(hù)的全氟丙基氨基酮和保護(hù)的全氟丁基氨基酮。步驟c和d與使用hydroxmate(32)時(shí)相似。
另外，可以首先將N-保護(hù)的氨基酸酯(32a)脫保護(hù)并與一個(gè)適當(dāng)?shù)腘-保護(hù)的肽在適當(dāng)?shù)呐悸?lián)劑及適當(dāng)?shù)呐悸?lián)溶劑的存在下進(jìn)行偶聯(lián)。由此形成的N-保護(hù)的多肽酯[KP4P3P2NH-CH(R1)C(＝O)OR2，(33a)]然后以與相應(yīng)的hydroxmate所用的完全類似的方式進(jìn)行全氟化。步驟c和d與使用hydroxmate(32)時(shí)相似。
所有在分子式1的合成中用到的氨基酸均是可購買到的或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員易于合成的。例如，P2中定義的氨基酸衍生物Pro(4-Ac)可以通過將Pro的殘基用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的技術(shù)進(jìn)行酯化來制備。
下述實(shí)施例代表方案A至方案H所述的一般性合成。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅是用來說明而不是以任何方式對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定。在此用到的系列術(shù)語具有所述的意義“g”指克；“mmol”指毫摩爾；“mL”指毫升；“bp”指沸點(diǎn)；“℃”指攝氏度；“mmHg”指毫米汞柱“μL”指微升；“μg”指微克；“μM”指微摩爾；“DME”指1，2-二甲氧基乙烷；“DDC”指二環(huán)己基碳二亞胺；“h”指小時(shí)；“DMF”指N，N’-二甲基甲酰胺；“conc”指濃縮；“NMM”指N-甲基嗎啉；“in vacuo”指減壓下蒸除溶劑。
實(shí)施例1N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁酰胺的制備 a)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-琥珀酰亞胺的制備向冷的(冰浴)、攪拌下的BOC-L-纈氨酸(4.56g，0.021mol)和N-羥基琥珀酰亞胺(2.41g，0.021mol)的DMF(50mL)的溶液中加入DCC(4.75g，0.023mol)。反應(yīng)液在5℃攪拌6h然后置于冰箱中放置過夜。然后將反應(yīng)液冷過濾、Et2O洗滌、濃縮得到固體，將其用EtOAc/己烷重結(jié)晶得到白色結(jié)晶固體狀所需產(chǎn)物(4.59g，69.5％)mp123-124℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.00-4.95(d，1H，J＝9.3Hz)，4.62(dd，1H，J＝4.97Hz)，2.85(s，4H)，2.75-2.44(m，1H)，1.45(s，9H)，1.25-0.90(m，6H)；13CNMR(CDCl3)δ168.6，167.9，155.1，155.0，80.4，77.4，77.2，77.0，76.6，76.5，57.0，31.6，31.1，28.2，28.1，28.0，27.99，27.93，25.5，18.6，17.3；MS(Cl/CH4) m/z 315(MH+)，299，287，259，241，215(基峰)，173，172，145，144，116，100，72。C14H22N2O6的分析理論值C，53.49；H，7.05；N，8.91。實(shí)測值C，53.67；H，7.06；N，8.81。b)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-L-2-氮雜環(huán)丁烷羧酸向攪拌下的(S)-(-)-2-氮雜環(huán)丁烷羧酸(1.0g，10mmol)和Et3N(1.5mL，11mmol)的DMF(30mL)溶液中加入(a)部分的產(chǎn)物(2.8g，9.0mmol)并將反應(yīng)液加熱至120℃2.5h。冷卻中將反應(yīng)液減壓濃縮并將油狀殘余物溶于EtOAc并用1N HCl(2×30mL)洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮得到白色泡沫狀所需產(chǎn)物(1.88g，65％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.15(br，s，1H)，5.09(d，1H，J＝8.8Hz，NH)，5.00(dd，1H，J＝9.2，7.2Hz，Val的α-CH)，4.43(dd，1H，J＝7.0，1.49Hz)，4.17(m，1H)，3.94(appt，1H，J＝8Hz)，2.62(m，3H)，1.44(s，9H，tBu)，0.97(d，6H，J＝6.7Hz，2×CH3)c)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁酰胺在氮?dú)庀?，向攪拌下?b)部分的產(chǎn)物(1.80g，6.0mmol)和NMM(0.66mL，6.0mmol)的干燥CH2Cl2(50mL)溶液中于-20℃下滴加氯甲酸異丁酯(0.79mL6.0mmol)。20分鐘后，加入4-氨基-1，1，1，2，2-五氟-5-甲基-3-己酮鹽酸鹽(1.54g，6.0mmol)(來自歐洲專利申請OPINo.0410411，1991年1月30日公開)，隨后立即加入另一部分等量的NMM(0.66mL，6.0mmol)。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌1h，然后倒入冷的稀HCl中并用CH2Cl2萃取。有機(jī)萃取液用水、稀NaHCO3溶液、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)。減壓濃縮得到無色油狀所需產(chǎn)物(2.20g，73％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.4(m，1H，NH)，5.12-4.90(m，2H)，4.38(m，1H)，4.11(m，1H)，4.00(m，1H)，2.73(m，1H)，2.42(2m，2H)，1.92(m，2H)，1.45(s，9H，t-Bu)，1.11-0.85(m，12H，4×CH3)；19F NMRδ-82.14(s，CF3)，-120.99和-123.09，-121.23和-122.84(2AB四重峰，J＝296Hz，CF2)d)L-纈氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁酰胺鹽酸鹽在冰浴溫度下，向攪拌下的(c)部分產(chǎn)物(2.0g3.98mmol)的EtOAc(40mL)溶液中通入HCl氣體4分鐘。然后將反應(yīng)液在室溫下攪拌2h，減壓濃縮并與EtOAc共沸得到白色泡沫狀所需產(chǎn)物(1.63g，96％)。IR(薄膜)3196，2972，2937，2883，2636，1755，1655，1523，1471，1398，1373，1350，1222，1201，1159，1116，1093，1066，1014，979，922，835，815，734，646，588；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.09(d，1H，J＝8.2Hz，NH)，8.02(d，1H，J＝8.5Hz，NH)，5.15(m，1H)，5.00(m，1H)，4.55(m，1H)，4.13(m，1H)，3.90(m，1H)，2.56(m，2H)，2.30(m，3H)，1.12-0.84(m，12H，4×CH3)；13C NMR(CDCl3)δ193.2，170.7，170.4，170.3，169.9，62.2，61.5，59.7，59.5，55.1，55.0，50.1，30.0，29.9，28.9，28.7，19.8，19.7，18.8，18.5，18.2，18.1，17.8，16.6，16.3；19F NMRδ-82.06 and-82.14(2s，CF3)，-121.16和-122.76，-121.33和-122.88(2AB四重峰，J＝296Hz，CF2)；MS(Cl/CH4)m/z(相對強(qiáng)度)442(6)，430(18)，402(MH+，100)，303(9)，72(42)。分析理論值C16H24F5N3O3·HClC，43.89；H，5.53；N，9.59。實(shí)測值C，43.43；H，6.07；N，9.23。e)N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁酰胺(MDL 104238)向攪拌下的4-(4-嗎啉羰基)苯甲酸(975mg，4.14mmol)和氯化芐基三乙基銨(4mg，0.008mmol)的1，2-二氯乙烷(30mL)懸浮液中加入亞硫酰氯(0.3mL，4.14mmol)并將反應(yīng)液加入回流。2.5h后，將反應(yīng)液冷卻至室溫并減壓濃縮。然后將殘余物與CCl4共沸并放置在真空下得到淡橙色油狀嗎啉代鄰苯二酰氯(定量)，可不用進(jìn)一步純化直接使用。在一個(gè)分離圓底燒瓶內(nèi)，將攪拌下的(d)部分的產(chǎn)物(1.5g，3.43mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液冷卻至-20℃。加入NMM(1.35mL，12.3mmol)，隨后立即滴加嗎啉代鄰苯二酰氯的CH2Cl2(5mL)溶液，滴加的速度保持內(nèi)部反應(yīng)溫度在-10℃或更低。加完后，將反應(yīng)混合物升至室溫。在室溫1.5h后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，1N HCl(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、鹽水(1×20mL)洗滌，干燥(MgSO4)并減壓濃縮得到白色泡沫，將其立即進(jìn)行閃式色譜分離(用1∶27MeOH-CH2Cl2洗脫)得到白色泡沫狀所需產(chǎn)物(MDL104238)(335mg，16％)；IR(KBr)3690，3678，3429，3271，3011，2972，2931，2899，2876，2862，1755，1680，1631，1520，1494，1458，1437，1398，1373，1361，1330，1302，1280，1259，1234，1199，1159，1114，1068，1024，1012，896，860，842，787，773，763，669，597，563，540；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.32(m，1H，NH)，7.86(d，2H，J＝8.5Hz，芳基氫)，7.49(d，2H，J＝7.9Hz，芳基氫)，6.70(m，1H，NH)，5.00(m，2H)，4.50(m，2H)，4.19(m，1H)，4.86-3.30(一系列m，8H)2.82-1.95(一系列m，4H)，1.05(m，9H，3×CH3)，0.88(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)；13C NMRδ174.07，174.05，170.6，169.2，166.4，138.66，138.62，135.0，134.9，127.4，127.3，66.8，66.7，62.0，61.7，59.7，59.6，54.1，54.0，49.3，31.5，31.4，28.7，28.5，20.0，19.0，18.8，18.2，18.1，18.09，18.05，16.1，16.0；19F NMRδ-82.12(s，CF3)，-120.98和-123.12，-121.20和-122.86(2AB四重峰，J＝296Hz，CF2)；MS(Cl/CH4)m/z(相對強(qiáng)度)647，619(MH+)，303，(100)，289，218。分析理論值C28H35F5N4O6·0.3H2OC，53.90；H，5.75；N，898。實(shí)測值C，53.75；H，5.86；N，8.86。
實(shí)施例2N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-D，L-2-哌啶酸的制備 a)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-D，L-2-哌啶酰胺向攪拌下的D，L-哌啶酸(1.30g，10mmol)和Et3N(1.5mL，11mmol)的DMF(30mL)溶液中加入實(shí)施例1，(a)部分的產(chǎn)物(2.0g，6.0mmol)并將反應(yīng)液加入至120℃2.5h。冷卻中，將反應(yīng)液減壓濃縮并將油狀殘余物溶于EtOAc，3N HCl(2×30mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮得到黃色泡沫，將其閃式色譜分離得到白色泡沫狀的所需化合物(579mg，29％)，為兩個(gè)化合物的混合物；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.94(br s，1H)，5.62(d，1H，J＝9.8Hz，NH)，5.45(d，.5H，J＝3.98Hz，L-Pec)，5.07(d，.5H，J＝9.25，D-Pec)，4.60(dd，.5H，J＝8.83，5.06Hz，α-CH of Val)，4.25(dd，.5H，J＝8.69，4.66Hz，Val of D-compound)，3.93(app d，1H，J＝12.47Hz，Pec)，3.25(m，1H，Pec)，2.31(m，1H，Pec)，2.20(m，.5H，Val of D-compound)，2.01(m，.5H，Val)，1.78-1.33(m，5H，Pec)，1.44(s，9H，tBu)，1.01-0.86(m，6H，2×CH3).b)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-D，L-2-哌啶酰胺在氮?dú)庀?，向攪拌下的?shí)施例2，(a)部分的產(chǎn)物(450mg，1.37mmol)和NMM(0.15mL，1.37mmol)的無水CH2Cl2(20mL)溶液中于-20℃下滴加氯甲酸異丁酯(0.18mL，1.37mmol)。20分鐘后，加入4-氨基-1，1，1，2，2-五氟-5-甲基-3-己酮鹽酸鹽(351mg，1.37mmol)。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1h，然后倒入冷的稀HCl中并用CH2Cl2萃取。有機(jī)萃取液用水、稀NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)。減壓濃縮得到無色泡沫狀所需化合物(580mg，80％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.98(m，1H，NH)，5.36-4.88(m，3H)，4.60(m，1H)，4.43(m，1H)，3.92(m，1H)，3.10(m，1H，CH of Pec)，2.36-1.92(series of m，3H，Pec and CH or Val)，1.79-1.24(m，4H)，1.45(s，9H，tBu)，1.05-0.83(m，12H，4×CH3)；19F NMRδ-82.10(s，CF3)，-120.74--123.40(m，CF2).c)L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-D，L-2-哌啶酰胺，鹽酸鹽在冰浴溫度下，向攪拌下的實(shí)施例2(b)的產(chǎn)物(530mg，1.0mmol)的EtOAc(10mL)溶液中通入HCl氣體4分鐘。然后將反應(yīng)液在室溫下攪拌2h，減壓濃縮并與EtOAc共沸得到白色泡沫狀所需產(chǎn)物(460mg，99％)。d)N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-D，L-2-哌啶酰胺(MDL 105759)向攪拌下的4-(4-嗎啉羰基)苯甲酸(0.28g，120mmol)和氯化芐基三乙基銨(2mg，0.004mmol)的1，2-二氯乙烷(25mL)懸浮液中加入亞硫酰氯(0.09mL，1.20mmol)并將反應(yīng)液加入回流。2.5h后，將反應(yīng)液冷卻至室溫并減壓濃縮。然后將殘余物與CCl4共沸并放置在真空下得到淡橙色油狀嗎啉代鄰苯二酰氯(定量)，可不用進(jìn)一步純化直接使用。在一個(gè)分離圓底燒瓶內(nèi)，將攪拌下的實(shí)施例2(c)的產(chǎn)物(450mg，10.0mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液冷卻至-20℃。加入NMM(0.5mL，4.0mmol)，隨后立即滴加嗎啉代鄰苯二酰氯的CH2Cl2(5mL)溶液，滴加的速度保持內(nèi)部反應(yīng)溫度在-10℃或更低。加完后，將反應(yīng)混合物升至室溫。在室溫1.5h后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，1N HCl(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、鹽水(1×20mL)洗滌，干燥(MgSO4)并減壓濃縮得到泡沫粗品(410mg)，將該白色泡沫狀粗品立即進(jìn)行閃式色譜分離(用1∶27MeOH-CH2Cl2洗脫)得到白色泡沫狀所需產(chǎn)物(MDL 105759)(270mg，42％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95-7.76(m，2H，aryl)，7.58-7.39(m，2H)，7.20-6.86(m，2H，aryl)，5.40-4.30(m，4H)，4.20-3.20(m，10H，2×NCH2CH2O and NCH2of Pro)，2.60-1.95(m，3H)，1.90-1.82(m，4H)，1.25-0.75(m，12H)；19F NMR (CDCl3)δ-81.97(m，CF3)，-121.82 and -119.87(m，CF2)；MS(Cl/CH4)m/z(rel.intensity)647(MH+)，564，536，474，428，363，331(100)，317，289，246，218，186，158，104，84，72。
實(shí)施例3N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺的制備 a)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-反-4-羥基脯氨酸向攪拌下的反-4-羥基脯氨酸(1.31g，10mmol)和Et3N(1.4mL，10mmol)的DMF(40mL)溶液中加入實(shí)施例1，(a)的產(chǎn)物(3.14g，10mmol)并將反應(yīng)液加入至110℃3h。冷卻中，將反應(yīng)液減壓濃縮并將油狀殘余物溶于EtOAc，3N HCl(2×30mL)、H2O(2×10mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮得到白色泡沫狀的所需化合物(1.85g，56％)；1H NMR(300 HHz，CDCl3)δ5.70-5.25(m，1H，NH)，5.05(m，1H)，4.80-3.95(m，4H)，3.85-2.80(series of m，3H)，2.35-1.80(m，2H)，1.44(s，9H，tBu)，1.01-0.95(m，6H，2×CH3)；MS(Cl/CH4)m/z(rel intensity)，331(MH+)，303，275(100)，259，231，217，172，162，144，132，116，86，72。b)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺在氮?dú)庀?，向攪拌下的?shí)施例3(a)的產(chǎn)物(1.80g，5.60mmol)和NMM(0.60mL，5.60mmol)的無水CH2Cl2(30mL)溶液中于-20℃下滴加氯甲酸異丁酯(0.70mL，5.60mmol)。20分鐘后，加入4-氨基-1，1，1，2，2-五氟-5-甲基-3-己酮鹽酸鹽(1.40g，5.60mmol)，隨后立即加入另一部分等量的NMM(0.60mL，5.60mmol)。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1h，然后倒入冷的稀HCl中并用CH2Cl2萃取。有機(jī)萃取液用水、稀NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并減壓濃縮得到油狀粗品，將其閃式色譜分離(5％MeOH/CH2Cl2)得到白色泡沫狀所需化合物(1.44g，48％)；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.98(br d，.5H，J＝7.6Hz，NH)，7.73(br d，.5H，J＝7.6Hz，NH)，5.47(br d，1H，J＝8.6Hz，NH)，5.04-4.95(m，1H)，4.76-4.67(m，1H)，4.49(br s，1H)，4.23(m，1H)，3.94(br d，1H，J＝10.8Hz)，3.66-3.59(m，1H)，2.50-1.98(series of m，4H)，1.42(s，9H，t-Bu)，1.09-0.88(m，12H，4×CH3)；13C NMRδ173.9，173.2，170.6，170.4，156.3，156.2，80.5，80.4，77.4，77.2，77.0，76.5，70.0，69.8，59.7，59.5，58.2，57.7，57.6，55.7，55.5，35.7，34.7，31.0，30.9，29.0，28.6，28.3，28.2，20.2，19.9，19.3，19.7，18.3，18.2，16.4，16.1；19F NMRδ-82.17(s，CF3)，-82.18(s，CF3)，-121.6 and-122.8(AB quartet，J＝296Hz，CF2)；MS(CI/CH4) m/z (relintensity)549(MNH4+，12)，532(MH+，54)，482(11)，330(15)，245(100)，189(15)。c)N-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺鹽酸鹽和N-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺鹽酸鹽在冰浴溫度下，向攪拌下的實(shí)施例3(b)的產(chǎn)物(1.44g，2.70mmol)的EtOAc(20mL)溶液中通入HCl氣體4分鐘。然后將反應(yīng)液在室溫下攪拌2h，減壓濃縮并與EtOAc共沸得到白色泡沫狀的所需衍生物的組合(1.27g，100％)，乙酰氧基是較少的衍生物。d)N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺(MDL 105160)和N-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺(MDL105683)向攪拌下的4-(4-嗎啉羰基)苯甲酸(280mg，1.90mmol)和氯化芐基三乙基銨(2mg，0.004mmol)的1，2-二氯乙烷(20mL)懸浮液中加入亞硫酰氯(0.15mL，1.90mmol)并將反應(yīng)液加入回流。2h后，將反應(yīng)液冷卻至室溫并減壓濃縮。然后將殘余物與CCl4共沸并放置在真空下得到淡橙色油狀嗎啉代鄰苯二酰氯(定量)，可不用進(jìn)一步純化直接使用。在一個(gè)分離圓底燒瓶內(nèi)，將攪拌下的實(shí)施例3(c)的產(chǎn)物(800mg，1.71mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液冷卻至-20℃。加入NMM(0.42mL，3.80mmol)，隨后立即滴加嗎啉代鄰苯二酰氯的CH2Cl2(5mL)溶液，滴加的速度保持內(nèi)部反應(yīng)溫度在-10℃或更低。加完后，將反應(yīng)混合物升至室溫。在室溫2h后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，1N HCl(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、鹽水(1×20mL)洗滌，干燥(MgSO4)并減壓濃縮得到兩個(gè)化合物的泡沫狀粗品混合物(MDL 105160是主要產(chǎn)物，MDL 105683較少的產(chǎn)物)。e)N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺(MDL 105160)將實(shí)施例3(d)所述的兩個(gè)化合物的混合物立即在SiO2上進(jìn)行閃式色譜分離，用1∶27 MeOH/CH2Cl2洗脫得到具有較大Rf值(Rf大約為0.3-0.4)的白色泡沫狀所需化合物(MDL 105160)(160mg，14.5％)；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.82(m，2H，aryl)，7.45(d，2H，J＝8.3Hz，aryl)，7.35(d，.5H，J＝8.4Hz，NH)，6.91(d，1H，J＝8.7Hz，NH)，4.99(m，1H)，4.84(t，1H)，4.72(t，1H)，4.68(m，1H)，4.55(br s，1H)，4.18(m，1H)，3.8-3.4(br s overlapping m，9H)，2.86-2.03(series of m，4H)，1.26(m，9H，3×CH3)，0.96(m，3H，CH3)；13C NMRδ173.2，172.5，170.7，170.4，169.2，167.1，138.8，134.9，127.52，127.50，127.4，127.3，77.55，77.52，77.51，77.46，77.44，77.3，77.2，77.1，77.0，76.88，76.85，76.6，76.56，76.54，70.1，69.9，66.8，59.6，59.5，58.5，57.9，57.0，56.0，56.0，55.7，36.0，34.9，31.42，31.40，31.3，29.2，28.8，20.0，19.85，19.83，19.4，19.2，18.4，16.5，16.4，16.3，16.2；19F NMR(CDCl3)δ-82.1，-82.15(s，CF3)，-121.31，-123.02(AB quartet J＝293Hz，CF2)and -121.35，-122.82(AB quartet，J＝298Hz，CF2)；MS(Cl/CH4)m/z(rel intensity)649(MH+)，361，334，333(100)，317，289，218，200，111，86。分析理論值C29H37F5N4O7C，53.70；H，5.75；N，8.64。實(shí)測值C，53.44；H，5.77；N，8.38。
實(shí)施例4N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺的制備 a)N-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺(MDL 105683)MDL 105683是從如實(shí)施例3(e)所述的進(jìn)行閃式色譜分離的兩個(gè)化合物的混合物中得到的Rf值較小的物質(zhì)(Rf大約0.05-0.1)。所述方法得到的是白色泡沫狀的MDL 105683(90mg，7.6％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.84(d，2H，J＝8.4Hz，aryl)，7.72(.5H，J＝8.4Hz，NH)，7.47(d，2H，J＝8.3Hz，aryl)，6.74(d，1H，J＝8.6Hz，NH)，5.36(m，1H)，5.00(m，1H)，4.83(dd，.5H，J＝8.6，7.2Hz)，4.69(t，.5H)，4.08(br d，1H)，3.9-3.3(br s overlapping m，9H)，2.81(m，.5H)，2.64(m，.5H)，2.41-2.06(series of m，3H)，2.04(s，3H，OCH3)，1.02(m，9H，3×CH3)，0.94(m，3H，CH3)；13C NMRδ173.0，172.3，170.4，170.1，169.9，169.2，166.3，138.7，127.4，127.3，72.5，72.4，66.8，59.6，59.5，58.5，57.8，56.3，56.2，53.2，52.9，34.0，32.8，31.8，31.7，31.6，29.3，29.2，28.8，24.9，20.9，20.0，19.8，19.5，19.3，17.95，17.92，17.7，16.4，16.2；19F NMR(CDCl3)δ-82.1，-82.13(s，CF3)，-121.22，-123.06(AB quartet J＝296Hz，CF2)and-121.28，-122.86(AB quartet，J＝301Hz，CF2)；MS(Cl/CH4)m/z (rel intensity)691(MH+)，631，472，444，389，375(100)，349，318，317，289，264，225，218，128，100。分析理論值C31H39F5N4O8C，53.91；H，5.69；N，8.11。實(shí)測值C，54.40；H，5.79；N，8.15。
實(shí)施例5N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺的制備 a)反-4-芐氧基脯氨酸鹽酸鹽向冰浴冷卻的叔-丁氧羰酰基-O-芐基-L-羥基脯氨酸(5.0g，15.6mmol)的EtOAc(30mL)溶液中通入HCl(g)2分鐘。然后將反應(yīng)液密封，室溫下攪拌1h并減壓濃縮得到白色固體，將其與乙醚一起研制并真空干燥得到所需化合物(3.92g，98％)，mp188-190℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.1(br s，1H)，7.3(m，5H)，4.56(s，2H)，4.4-4.2(m，2H)，3.6-3.38(m，3H)，2.6-2.58(m，1H)，2.26-2.1(m，1H)；m/z(rel.intensity)262(M++C3H5)，250(M++C2H5)，222(MH+，100)，176，130，107，91，85，69。b)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨酰-反-4-芐氧基脯氨酸向攪拌下的反-4-芐氧基-L-脯氨酸鹽酸鹽(2.57g，10mmol)和Et3N(3.0mL，22mmol)的DMF(25mL)溶液中加入實(shí)施例1，(a)的產(chǎn)物(3.14g，10mmol)并將反應(yīng)液加入至80℃1.5h。冷卻中，將反應(yīng)液減壓濃縮并將油狀殘余物溶于EtOAc，3N HCl(2×30mL)、H2O(2×10mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮得到所需化合物(1.8g，42％)。重結(jié)晶(EtOAc/己烷)得到白色固體mp125-128；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.0(br s，1H)，7.4-7.2(m，5H)，5.35(d，1H，J＝9.2Hz，NH)，4.65(m，1H)，4.52(m，2H)，3.70(m，1H)，2.5-1.8(series of m，3H)，1.44(s，9H，tBu)，0.98(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，0.92(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)。c)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺在氮?dú)庀?，向?qū)嵤├?(b)的產(chǎn)物(1.40g，3.30mmol)和NMM(0.36mL，3.30mmol)的無水CH2Cl2(20mL)溶液中于-20℃下滴加氯甲酸異丁酯(0.43mL，3.30mmol)。20分鐘后，加入4-氨基-1，1，1，2，2-五氟-5-甲基-3-己酮鹽酸鹽(840mg，3.30mmol)，隨后立即加入另一部分等量的NMM(0.36mL，3.30mmol)。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1h，然后升至室溫并倒入冷的稀HCl中并用CH2Cl2萃取。有機(jī)萃取液用水、稀NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮得到白色固體狀所需化合物(2.0g，95％)mp 91-93℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.96(.5H，NH)，7.33(m，5H)，5.28(m，1H，NH)，4.95(m，1H)，4.83(m，1H)，4.70(t，.5H)，4.54(q，2H，CH2Ph)，4.30(m，2H)，4.07-3.9(m，1H)，3.60(m，1H)，2.68(dt，.5H)，2.49(dt，.5H)，2.33(m，1H)，2.2-1.88(m，3H)，1.44(s，9H，tBu)，1.09-0.86(m，12H，4×CH3)。d)N-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺，鹽酸鹽在冰浴溫度下，向攪拌下的實(shí)施例5(c)的產(chǎn)物(330mg，0.53mmol)的EtOAc(10mL)溶液中通入HCl氣體2分鐘。然后將反應(yīng)液在室溫下攪拌1h，減壓濃縮并與EtOAc共沸得到白色泡沫狀所需化合物(240mg，81％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.22(m，2H，NH2)，7.33(m，5H)，5.04(app q，1H)，4.88(dq，1H)，4.52(q，2H，CH2Ph)，4.33(m，1H)，4.0-3.8(series of m，4H)，2.42-2.1(m，4H)，1.09-0.86(m，12H，4×CH3)。e)N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺(MDL 104865)向攪拌下的4-(4-嗎啉羰基)苯甲酸(280mg，1.90mmol)和氯化芐基三乙基銨(2mg，0.004mmol)的1，2-二氯乙烷(20mL)懸浮液中加入亞硫酰氯(0.15mL，1.90mmol)并將反應(yīng)液加入回流。2h后，將反應(yīng)液冷卻至室溫并減壓濃縮。然后將殘余物與CCl4共沸并放置在真空下得到淡橙色油狀嗎啉代鄰苯二酰氯(定量)，可不用進(jìn)一步純化直接使用。在一個(gè)分離圓底燒瓶內(nèi)，將攪拌下的實(shí)施例5(d)的產(chǎn)物(558mg，1.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液冷卻至-20℃。加入NMM(0.40mL，4.0mmol)，隨后立即滴加嗎啉代鄰苯二酰氯的CH2Cl2(5mL)溶液，滴加的速度保持內(nèi)部反應(yīng)溫度在-10℃或更低。加完后，將反應(yīng)混合物升至室溫。在室溫下2h后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，1N HCl(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、鹽水(1×20mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮得到泡沫粗品，將其立即進(jìn)行閃式色譜分離(1∶27 MeOH-CH2Cl2洗脫)得到白色泡沫狀所需化合物(520mg，70％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.84(dd，2H，aryl)，7.78(d，.5H，NH)，7.45(dd，2H，aryl)，7.29(m，5H)，7.21(d，.5H，NH)，6.87(d，1H，NH)，4.98(m，1H)，4.82(m，1H)，4.69(t，.5H)，4.54(dq，2H，CH2Ph)，4.31(br s，1H)，4.08(dq，1H)，3.9-3.25(series of m，9H)，2.69(dt，.5H)，2.46(dt，.5H)，2.34(m，1H)，2.17(m，1H)，1.02(m，9H，3×CH3)，0.89(m，3H，CH3)；13C NMR(CDCl3)δ193.1，172.9，172.2，170.7，170.4，169.3，166.2，138.4，137.5，137.4，135.2，128.5，128.4，128.2，127.9，127.8，127.78，127.73，127.71，127.5，127.4，127.3，119.5，115.76，107.1，106.6，71.4，71.2，66.7，59.6，59.4，58.7，58.0，56.0，52.6，52.3，48.14，48.11，48.10，48.0，42.6，42.57，42.52，42.4，33.5，32.4，31.8，29.1，28.6，20.0，19.8，19.4，19.3，17.8，17.6，16.3，16.1；19F NMR(CDCl3)δ-82.10，-82.13(s，CF3)，-121.3，-122.9 and-121.4，-122.8(AB quartet，J＝296Hz，CF2)；MS(CI/CH4)m/z(rel.intensity)767(M++29)，740(10)，739(MH+，27)，632(11)，520(7)，492(5)，424(18)，423(100)，403(3)，345(5)，317(30)，289(4)，218(3)，176(11)，91(2)。分析理論值C36H43F5N4O7·0.4H2OC，57.95；H，5.92；N，7.54。實(shí)測值C，58.10；H，5.84；N，7.49。
實(shí)施例6Boc-Val-CF2F3其它制備方法 將288.0g(1.11mol)Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸和4.7L無水Et2O的混合物加入到一個(gè)裝有攪拌棒、溫度計(jì)、干冰冷凝器、氣體分散管及連續(xù)N2清洗的12L三頸瓶中。將得到的溶液冷卻至-60℃到-65℃。在30分鐘內(nèi)，通過氣體分散管向Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸溶液中加入總量為885.2g(3.60mol)的C2F5I并保持溫度為大約-65℃。氣體加完后，立即在1h內(nèi)加入總量為2.39L的1.5M CH3Li·LiBr的Et2O溶液(3.59mol)，保持反應(yīng)溫度為-52℃到-58℃。在加入1/3的CH3Li·LiBr后出現(xiàn)沉淀，但在全部加完后呈現(xiàn)透明溶液。將得到的溶液在-52℃到-58℃攪拌1h。反應(yīng)通過GC進(jìn)行監(jiān)測(MDL101286的Rt＝1.3分鐘，Boc-ValN-甲基-O-甲基異羥肟酸的Rt＝5.1分鐘)并發(fā)現(xiàn)含有7.2％的Boc-ValN-甲基-O-甲基異羥肟酸。在15分鐘內(nèi)加入總量為255mL(3.47mol)的丙酮，保持反應(yīng)溫度為-52℃到-58℃并將得到的混合物攪拌10分鐘。將混合物加入到一個(gè)含有4.7L冷卻至大約0℃的0.75M KHSO4的22L燒瓶內(nèi)終止反應(yīng)。分離有機(jī)層并用3LH2O洗滌。有機(jī)層用500gMgSO4干燥并濾除干燥劑。濾液在40℃/100torr下濃縮至重409g的半固體。將粗品在45℃溶于1.2L己烷并在30分鐘內(nèi)緩慢降溫至-25℃到-30℃。濾出結(jié)晶固體并用250mL己烷在-30℃洗滌。將得到的MDL101286真空干燥(25℃/100torr)得到176.7g。將濾液在35℃/100torr濃縮至重153.5g的殘余物。將該物質(zhì)置于Kuglrohr蒸餾器內(nèi)，前餾分收集至40℃/0.6torr。更換收集器，在40℃-60℃/0.6torr收集到總量為100.5g的MDL101286粗品。將粗產(chǎn)物在大約50℃溶于500mL己烷。得到的溶液冷卻至-30℃。濾出結(jié)晶的固體并用100mL冷(-30℃)己烷洗滌。產(chǎn)物在25℃/100torr下真空干燥得到另外68.0g的MD1101286，總產(chǎn)量為244.7g(70％收率)，GC純度為99.9％。分析理論值，C12H18F5NO3(319.28)C，45.14，H，5.68，N，4.39；實(shí)測值C，45.30，45.49，H，5.50，5.58，N，4.26，4.35。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療染有中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病的病人的方法，包括向病人施用有效治療量的分子式I的化合物。術(shù)語“中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病”指特征為白細(xì)胞遷移至炎癥部位并且參與生物matirces的蛋白水解降解的疾病和情況。用分子式I的化合物治療特別有用的中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病包括肺氣腫、肺囊性纖維化、成人呼吸窘迫綜合征、敗血癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性支氣管炎、炎癥性腸道疾病。用于治療中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病的特別優(yōu)選的分子式I的化合物包括N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁烷酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-D，L-2-哌啶酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺；N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺。
在此使用的術(shù)語“病人”指處于一個(gè)具體炎癥性疾病階段的溫血?jiǎng)游锢绮溉閯?dòng)物。豚鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、牛、羊、和人應(yīng)理解為均在該術(shù)語所指的動(dòng)物范圍內(nèi)。
術(shù)語“有效治療量”指在給病人單或多劑量施用時(shí)，緩解中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病癥狀的有效量。在此使用的呼吸性疾病的“癥狀緩解”指沒有治療的情況下所預(yù)期的嚴(yán)重程度的減輕，而不是指疾病的完全消除或治愈。在確定有效治療量或劑量中，參與的診斷醫(yī)師應(yīng)考慮大量因素，包括(但不僅限于)哺乳動(dòng)物的種類；其大小、年齡、一般狀況；涉及的特殊疾?。患膊∩婕暗某潭群图膊〉膰?yán)重程度；各個(gè)病人的反應(yīng)；施用的具體化合物、給藥方式、給藥制劑的生物利用度；選擇的給藥方案；輔助治療的使用；和其它相關(guān)情況。
分子式I的化合物的有效治療量預(yù)計(jì)為大約每天每公斤體重0.1毫克(mg/kg/天)到大約100mg/kg/天。優(yōu)選量預(yù)期為大約0.5到10mg/kg/天。
本發(fā)明的化合物是彈性蛋白酶，尤其是人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的非常有效的抑制劑。確信本發(fā)明的化合物通過抑制彈性蛋白酶產(chǎn)生抑制效果，從而緩解彈性蛋白酶介導(dǎo)的疾病，包括(但不僅限于)肺氣腫、肺囊性纖維化、成人呼吸窘迫綜合征、敗血癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。然而，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不受任何在解釋其在end-use應(yīng)用中的效果的具體理論或推測的機(jī)制的限制。
在感染有上述疾病的病人的有效治療中，分子式I的化合物可以以任何能夠產(chǎn)生化合物的生物利用有效量的形式或方式進(jìn)行給藥，包括口服、氣霧劑、和胃腸外途徑。例如，分子式I的化合物可以通過口服、氣霧劑、皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮、鼻內(nèi)、直腸、局部及此類的方式給藥。通常優(yōu)選口服或氣霧劑給藥。依據(jù)所選化合物的具體性質(zhì)、所需治療的疾病狀態(tài)、疾病的階段、和其它相關(guān)情況，制劑制備領(lǐng)域的技術(shù)人員可以方便地選擇適當(dāng)?shù)慕o藥形式或方式。Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishig Co.(1990)。
化合物可以單獨(dú)給藥或以與其它藥物可接受的載體或賦形劑結(jié)合的藥物組合物的形式給藥，載體和賦形劑的比例和性質(zhì)由所選化合物的溶解性和化學(xué)性質(zhì)、選擇的給藥途徑、以及標(biāo)準(zhǔn)的藥物實(shí)踐確定。本發(fā)明的化合物，當(dāng)其本身有效時(shí)，為了穩(wěn)定性、方便結(jié)晶、增加溶解度及此類的目的，還可以以其藥物可接受的鹽的形式制成制劑或給藥，例如酸加成的鹽。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有與一種或多種惰性載體混和或結(jié)合的分子式I的化合物的組合物。這些組合物可以用作，例如，分析標(biāo)準(zhǔn)、大量運(yùn)輸?shù)姆奖惴椒?、或藥物組合物。分子式I的化合物的可測量量是可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知和理解的標(biāo)準(zhǔn)分析方法和技術(shù)方便地進(jìn)行測量的量。分子式I的化合物的可測量量通常為組合物重量的大約0.001％到75％。惰性載體可以是任何不會(huì)降解或與分子式I的化合物發(fā)生共價(jià)反應(yīng)的物質(zhì)。適當(dāng)?shù)亩栊暂d體的例子是水；緩沖水溶液，例如通常在高效液相色譜(HPLC)分析中所使用的；有機(jī)溶劑，例如乙氰、乙酸乙酯、己烷及此類；以及藥物可接受的載體或賦形劑。
更具體地講，本發(fā)明提供含有與一種或多種藥物可接受載體或賦形劑混和或結(jié)合的有效治療量的分子式I的化合物的藥物組合物。
藥物組合物以藥物領(lǐng)域公知的方式制備。載體或賦形劑可以是可用作活性成分的賦形劑或媒介物的固體、半固體、或液體物質(zhì)。適當(dāng)?shù)妮d體或賦形劑是本領(lǐng)域公知的。藥物組合物可以采取口服、胃腸外、或局部應(yīng)用并可以通過片劑、膠囊、栓劑、溶液、懸浮劑或此類的方式向病人給藥。
本發(fā)明的化合物可以進(jìn)行口服給藥，例如，與惰性稀釋劑或可食用載體一起。可以將它們封裝在明膠膠囊內(nèi)或壓成片。為了口服治療給藥的目的，可以將化合物中摻入賦形劑并以片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖漿、片、口香糖及此類的方式使用。這些制劑中應(yīng)至少含有4％的發(fā)明化合物-活性成分，但可以依據(jù)具體的形式進(jìn)行變化，通?？梢栽趩卧亓康?％到大約70％之間。組合物中的化合物的量應(yīng)是可以獲得適當(dāng)劑量的。制備了根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑，每一個(gè)口服劑量單元中含有5.0-300毫克本發(fā)明的化合物。
片劑、丸劑、膠囊、錠劑及此類還可以含有一種或多種以下添加劑粘合劑例如微晶纖維素、黃蓍樹膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖；崩解劑例如藻酸、Primogel、玉米淀粉及此類；潤滑劑例如硬脂酸鎂或Sterotex；glidants例如膠體二氧化硅；還可以加入甜味劑例如蔗糖或糖精或矯味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙類矯味劑。當(dāng)劑量單元是膠囊的形式時(shí)，除以上類型的物質(zhì)外，它還可以含有液體載體例如聚乙二醇或脂肪油。其它的劑量單元形式可以含有調(diào)節(jié)劑量單元的外觀的其它各種物質(zhì)，例如包衣。因此，片劑或丸劑可以可以用糖、紫膠、或其它腸溶性包膜劑。除本化合物外，糖漿可以含有作為甜味劑的蔗糖以及某種防腐劑、染料和著色劑和矯味劑。制備這些組合物時(shí)使用的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是藥物醇的并且在使用量下無毒。
為達(dá)到胃腸外治療給藥的目的，可以將本發(fā)明的化合物摻入到溶液或懸浮劑中。這些制劑應(yīng)含有至少0.1％的本發(fā)明的化合物，但可以在其重量的0.1到大約50％之間變動(dòng)。本發(fā)明的化合物在這些組合物中的量應(yīng)是可以獲得適當(dāng)劑量的。制備了根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選組合物和制劑，每一個(gè)胃腸外的劑量單元中含有5.0-100毫克本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的分子式I的化合物和可以通過氣霧劑給藥。術(shù)語氣霧劑用于表示從膠體性質(zhì)的系統(tǒng)到由加壓包裝組成的系統(tǒng)的各種系統(tǒng)?？梢酝ㄟ^液化或壓縮的氣體或通過可以發(fā)放活性成分的適當(dāng)?shù)谋孟到y(tǒng)輸送藥物。分子式I的化合物的氣霧劑可以以單相、雙相、或三相的系統(tǒng)傳送以釋放活性成分。氣霧劑的發(fā)放系統(tǒng)包括必須的容器，活化劑，閥門，輔助容器及此類。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定優(yōu)選的氣霧劑。
本發(fā)明的分子式I的化合物還可以局部給藥，這樣做時(shí)載體可以適當(dāng)?shù)暮腥芤海幐嗷蚰z基，例如，可以含有一種或多種以下物質(zhì)凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑例如水和乙醇、以及乳化劑和穩(wěn)定劑。局部制劑可以含有分子式的化合物或其藥物鹽的濃度從大約0.1到大約10％w/v(重量每單位體積)。
溶液或懸浮劑還可以包括一種或多種以下添加劑用于注射的無菌稀釋劑例如水，0.6％食鹽水溶液，固定油類，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑例如芐醇或羥基苯甲酸甲酯；抗氧劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑例如乙二胺四乙酸；緩沖劑例如乙酸鹽、枸櫞酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)整強(qiáng)度的物質(zhì)例如氯化鈉或葡萄糖。腸胃外制劑可以封裝在玻璃或塑料的安瓿、一次性注射器或多劑量管內(nèi)。
用N-MeoSuc-Ala-Ala-Pro-Val-p-硝基酰苯胺(可購買到)作為底物對人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶進(jìn)行體外測定。分析的緩沖劑、pH及分析的技術(shù)與Mehdi等，Biochemcial and BiophysicalResearchCommunications，166，595(1990)中所描述的相似。酶是從人唾液中純化的，盡管最近它已可以購買到。此刻的抑制劑的動(dòng)力學(xué)特性通過Dixon繪圖法分析，雖然Williams和Morrison已對慢-和/或牢固結(jié)合的抑制劑特性使用的數(shù)據(jù)分析技術(shù)做了綜述。在J.Bieth，B.Spiess和C.G.Wermuth，Biochemical Medicine，11(1974)350-375中記載了高度靈敏及易得的彈性蛋白酶的底物的合成及分析中的應(yīng)用。表2概述了選擇的本發(fā)明的化合物的抑制彈性蛋白酶的能力。
表2 *for human neutrophil elastase，using N-MeOSucAlaAlaProVal-pNA as substrate*對人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶，用N-MeoSucAlaAlaProVal-pNA作為底物。
表2(續(xù)) *對人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶，用N-MeoSucAlaAlaProVal-pNA作為底物。
序列表(1)普通信息(I)申請人(A)姓名MARION MERRELL DOW INC.
(B)街道2110 E.GALBRAITH ROAD(C)城市辛辛那提(D)州俄亥俄(E)國家美國(F)郵政編碼(ZIP)45215(G)電話513-948-7960(H)傳真513-948-7961(I)電報(bào)214320(ii)發(fā)明名稱新型特性蛋白酶抑制劑(iii)序列數(shù)4(iv)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)媒體類型軟盤(B)計(jì)算機(jī)IBM PC兼容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatenfIn Release #1.0，Version#1.30(EPO)(2)序列標(biāo)號(hào)1的信息(I)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述序列標(biāo)號(hào)1xaa xaa xaa xaa
1(2)序列標(biāo)號(hào)2的信息(I)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述序列標(biāo)號(hào)2xaa xaa xaa xaa1(2)序列標(biāo)號(hào)3的信息(I)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述序列標(biāo)號(hào)3xaa xaa xaa xaa1(2)序列標(biāo)號(hào)4的信息(I)序列特征(A)長度4個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述序列標(biāo)號(hào)4xaa xaa xaa xaa權(quán)利要求
1.一種分子式 的化合物或其水合物、電子等排物，或藥物可接受的鹽，其中P4是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或一個(gè)鍵；P3是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic或Tca，或在其ε氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或在其δ氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；”P2是Pip，Aze，Pro(4-OH)，Pro(4-OAc)或Pro(4-OBzl)；R1是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal的側(cè)鏈；X是-CF3，-CF2H，-CFH2，-C(＝O)Y，-C(＝O)P2′-Y，-CF2C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)NHC(＝O)R3，-CHFCH(R1′)NHC(＝O)R3，-H，-C(＝O)R3，-CH(R1)C(＝O)P2′-Y，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CHF(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，-CF2(CH2)vCH＝CH2，-CH2Cl或-C(＝O)-C(＝O)-Y；R3是C1-6烷基，苯基，芐基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基；R4是H或C1-6烷基；R1‘是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal的側(cè)鏈；P2’是一個(gè)鍵，Ala或Val；Y 是-NHR3，OR3；t 是2，3或4；v 是1，2或3；k 是氫，甲?；阴；牾；郊柞；?，叔-丁氧羰?；S氧羰基，甲苯磺酸基，丹?；愇祯；?，甲氧琥珀酰基，1-金剛烷磺酰基，1-金剛烷乙?；?，2-羧基苯甲?；揭阴；?，叔-丁基乙?；?，二((1-萘基)甲基)乙?；?，-C(＝O)N-(CH3)2， -A-Rz其中A是 ；并且Rz是一個(gè)含有6，10或12個(gè)碳原子的芳基，被1到3個(gè)獨(dú)立地選自由氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含有1到6個(gè)碳原子的烷基、含有1到6個(gè)碳原子的烷氧基、羧基、烷基羰基氨基，其中的烷基含有1到6個(gè)碳原子、5-四唑基、和含有1到15個(gè)碳原子的?；鶃喕酋０坊?，如果酰基亞磺酰胺基含有一個(gè)芳基，該芳基還可以被一個(gè)選自氟，氯，溴，碘和硝基的基團(tuán)進(jìn)一步取代所組成的組群的基團(tuán)取代；或 其中Z是N或CH，并且B是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或一個(gè)C1-6烷基。
2.一種權(quán)利要求1的化合物，其中R1是-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3。
3.一種權(quán)利要求2的化合物，其中X是-CF2CF3，-CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CHF(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，或CF2(CH2)vCH＝CH2。
4.一種權(quán)利要求3的化合物，其中K是苯甲?；?，叔丁氧羰?；?，芐氧羰基，異戊?；?，-C(＝O)N(CH3)2， 或 其中Z是N并且B是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或一個(gè)C1-6烷基。
5.一種權(quán)利要求4的化合物，其中P3是Ile，Val，或Ala。
6.一種權(quán)利要求5的化合物，其中P3是Ala或一個(gè)鍵?！?br> 7.一種權(quán)利要求6的化合物，其中R1是-CH(CH3)2。
8.一種權(quán)利要求7的化合物，其中X是-CF2CF3。
9.一種權(quán)利要求8的化合物，其中K是 Z是N并且B是以下分子式的基團(tuán) 并且其中R’是氫或一個(gè)C1-6烷基特別優(yōu)選。
10.一種權(quán)利要求9的化合物，其中P3是Val。
11.一種權(quán)利要求10的化合物，其中P4是一個(gè)鍵。
12.一種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-L-2-氮雜環(huán)丁烷酰胺。
13.一種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-D，L-2-哌啶酰胺。
14.一種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-羥基脯氨酰胺。
15.一種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲酰基]-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-乙酰氧基脯氨酰胺。
16.一種根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是N-[4-(4-嗎啉羰基)苯甲?；鵠-L-纈氨酰-N’-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧丁基]-反-4-芐氧基脯氨酰胺。
17.一種含有權(quán)利要求1的化合物及載體的組合物。
18.一種含有權(quán)利要求1的化合物及藥物可接受載體的藥物組合物。
19.一種治療感染中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病的病人的方法，所述方法包括向病人施用有效治療量的分子式 的化合物或其水合物、電子等排物，或藥物可接受的鹽，其中P4是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或一個(gè)鍵；P3是Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic或Tca，或在其ε氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Lys或在其δ氨基用一個(gè)嗎啉-B-基團(tuán)取代的Orn；”P2是Pip，Aze，Pro(4-OH)，Pro(4-OAc)或Pro(4-OBzl)；R1是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal側(cè)鏈；X是-CF3，-CF2H，-CFH2，-C(＝O)Y，-C(＝O)P2′-Y，-CF2C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)C(＝O)P2′-Y，-CF2CH(R1′)NHC(＝O)R3，-CHFCH(R1′)NHC(＝O)R3，-H，-C(＝O)R3，-CH(R1)C(＝O)P2′-Y，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR4，-CHF(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCONHR4，-CF2(CH2)tCH2OR4，-CF2(CH2)vCH＝CH2，-CH2Cl或-C(＝O)-C(＝O)-Y；R3是C1-6烷基，苯基，芐基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基；R4是H或C1-6烷基；R1‘是Ala，Leu，Ile，Val，Nva或bVal的側(cè)鏈；P2’是一個(gè)鍵，Ala或Val；Y是-NHR3，OR3；t是2，3或4；v是1，2或3；k是氫，甲?；?，乙酰基，琥珀酰基，苯甲?；?，叔-丁氧羰酰基，芐氧羰基，甲苯磺酸基，丹酰基，異戊酰基，甲氧琥珀?；?，1-金剛烷磺酰基，1-金剛烷乙?；?，2-羧基苯甲?；揭阴；?，叔-丁基乙?；?，二((1-萘基)甲基)乙?；?，-C(＝O)N-(CH3)2， -A-Rz其中A是 ；并且R2是一個(gè)含有6，10或12個(gè)碳原子的芳基，被1到3個(gè)獨(dú)立地選自由氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含有1到6個(gè)碳原子的烷基、含有1到6個(gè)碳原子的烷氧基、羧基、烷基羰基氨基，其中的烷基含有1到6個(gè)碳原子、5-四唑基、和含有1到15個(gè)碳原子的酰基亞磺酰胺基，如果?；鶃喕酋０坊幸粋€(gè)芳基，該芳基還可以被一個(gè)選自氟，氯，溴，碘和硝基的基團(tuán)進(jìn)一步取代所組成的組群的基團(tuán)取代；或 其中Z是N或CH，并且B是以下分子式的基團(tuán) 其中R’是氫或一個(gè)C1-6烷基。
20.一種根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中的中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病是肺氣腫。
21.一種根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中的中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病是肺囊性纖維化。
22.一種根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中的中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病是慢性支氣管炎。
23.一種根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中的中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥性疾病是炎性腸道疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及彈性蛋白酶，尤其是人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑的化合物。該抑制劑是短鏈的合成多肽，其中的P
文檔編號(hào)A61P21/00GK1149877SQ95193386
公開日1997年5月14日 申請日期1995年5月5日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月2日
發(fā)明者W·A·小麥茲, S·L·加里昂, J·P·布爾克哈特, M·R·安格拉斯特羅, N·P·皮特 申請人:赫徹斯特馬里恩魯斯公司