專利名稱：紫杉化合物的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用離心分配色譜法純化紫杉化合物(taxoides)的方法。
更具體地，本發(fā)明涉及一種塔佐泰勒(Taxotere)和10-脫乙酰漿果赤霉素III的純化方法。
在例如EP0253738或EP0336891中或在PCT國際申請WO92/09589所描述的條件下，由紫杉葉提取的10-脫乙酰漿果赤霉素可用于制備塔佐泰勒。
由紫杉葉提取得到的10-脫乙酰漿果赤霉素III，因其來源種類而所含雜質(zhì)主要是紫杉化合物類產(chǎn)物，例如，αα-苯甲酸基-4-乙酸基-5β.20-摻氟基-1β、7β、13α、19-五羥基-4-乙酸基-5β、20-摻氧基-1β、7α、10β、13α-四羥基-11-紫杉烯或紫杉堿。
由10-脫乙酰漿果赤霉素III半合成法得到的塔佐泰勒含有的主要雜質(zhì)是10-脫乙酰漿果赤霉素III中的打質(zhì)酯化產(chǎn)物，以及來自于基側(cè)鏈2′位碳的差向異構(gòu)作用的其他質(zhì)雜。
10-脫乙酰漿果赤霉素III和塔佐泰勒本身一般都可采用液相色譜柱法，尤其是高效液相色譜(HPLC)二氧化硅柱法純化。然而，如果這些方法特別適合純化幾十克，則它們往工業(yè)上延伸會遇到諸如消耗溶劑的量、被有毒殘留物污染的載體(二氧化硅)的操作與破壞之類的限制，這些限制變得及為重要。
在構(gòu)成毒性往往很高、脆性很大的產(chǎn)品的紫杉化合物的情況下，特別重要的是提出這樣一些純化方法，它們具有很高的生產(chǎn)率，不需要購買、使用和破壞貴重的固體載體，需要使用少量的溶劑，并且連續(xù)生產(chǎn)很容易自動化。
現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)，并且正是構(gòu)成本發(fā)明的目的，紫杉化合物的純化，特別是塔佐泰勒和10-脫乙酰漿果青霉素III的純化，可采用離心分配色譜法(CPC)或高速逆流色譜法實施，其方法的原理如由A.Foueaul+和D.Rosset，Ana Lusis，16(3)，157-167(1988)作過描述。
離心分配色譜法是通過以邏輯和自動方式相繼建立平衡，使待分離的混合物組分在兩種不相混溶的液相之間進行分配。
該方法的特點在于高效分配機制、固定相很強的保留性能、移動相的高速度，這些特點導(dǎo)致在幾小時內(nèi)極好分離。
離分配色譜法需要使用提供兩種部分混溶相的兩種或多種溶劑。盡管具有這種特性的溶劑數(shù)量無限但在工業(yè)上尤其重要的是使用不含氯、無毒的工業(yè)溶劑。在工業(yè)上可使用的危險性小的溶劑中，可以列舉諸如甲醇之類的醇、甲基異丁基酮之類的酮和正庚烷或異辛烷之類的脂族烴、甲基叔丁基醚之類的醚、乙酸乙酯之類的酯。
為了實現(xiàn)有效純化，必需選擇一種溶劑混合物，其混合物快速完全分離得到兩相，它們的分配系數(shù)為0.1-10，優(yōu)選為0.5-5，更優(yōu)選為1附近。
分配系數(shù)(K)例如是10的產(chǎn)品，在上面相的溶解比下面相高10倍。因此，若上面的相是移動相，則很快被洗脫，若下面的相是移動相，則很長時間之后被洗脫，且分辨率底。相反地，當(dāng)K在1附近時，其溶解度在兩相中實際上是相同的，兩種洗脫方式都能使用，或許能將這兩種洗脫方式結(jié)合起來使用，以達(dá)到最大的分辨率。
在10-脫乙酰漿果專業(yè)戶霉素III的特殊情況下，脂族烴、酯、礅和水的混合物是特別適合的，如下庚烷-乙酸乙酰-甲醇-水(以體積計為1-2-1-2)混合物，特別是脂族酮和水的混合物，如甲基異丁基酮-丙酮-水(以體積計為2-3-2)混合物。
此外，流動相的流量固定時，固定相保留(平衡固定相的占該設(shè)備總體積的分?jǐn)?shù))應(yīng)盡可能高，至少等于50％是必要的。
另外，為了提高生產(chǎn)率，特別關(guān)系到能在高流量下工作，而流量受到轉(zhuǎn)子所施加的最大壓力的制約。
在塔佐泰勒特定情況下，使用脂族烴、酯、醇和水的混合物是有利的，例如正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以體積計為2-4-3-2)系統(tǒng)，它的保留為80％。分配系數(shù)為約0.5，這樣得到的參很窄，可快速洗脫，于是達(dá)到生產(chǎn)率很明顯的提高。
離心分配色譜法可采用任何級達(dá)到此效果的已生產(chǎn)的設(shè)備實施，如Yoichiro Ito[CRC erit.Rev.Anal.ehem，17 65(1986)]指出的設(shè)備，或京都Sanki工程有限公司(日本)生產(chǎn)的設(shè)備。
當(dāng)采用本發(fā)明方法得到塔佐泰勒和10-脫乙酯漿果專業(yè)戶霉素時，本發(fā)明還涉及純化的塔佐泰勒和10-脫乙酰漿果赤霉素。
下述實施例表明本發(fā)明是如何實施的。
實施例1塔佐泰勒的純化塔佐泰勒[即(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基丙酸(4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β、20-摻氧基-1α、7β、10β-三羥基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基)酯，是在EP0336841中描述的條件下，在乙酸存在下用鋅處理下述化合物得到的(2R、3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基-丙酸-[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β.20-橋氧基-1β-羥基-7β、10β-雙-(2、2、2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫杉烯-13α-基]酯。
將10克(2R，3S)3-叔丁基羰基氨基-3-苯基-2-羥基-丙酸-[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β、20-橋氧基-1β-羥基-7β.10β-雙-(2.2.2.-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫極烯-13α基]酯溶入到150厘米3甲基波丁基醚中，然后加10克鋅。在蒸發(fā)至干酸，得到灰色粉末，將基粉末放入反應(yīng)器中。
然后攪拌，在5分鐘加入6厘米3乙酸和50厘米3乙腈的混合物。在反應(yīng)器外面用45℃水溶加熱1小時。在水溶中冷卻之后，在劇烈攪拌下加入850厘米3甲基叔丁基醚，然后用孔隙度4的燒結(jié)玻璃器皿過濾鋅鹽和過量的鋅。
疚濾液濃縮至干。這樣得到蛋糖霜(meringue)(12克)，立刻將它放到20厘米3乙酸乙酯、15厘米3甲醇、10厘米3正庚烷和10厘米3水中。
在Sanki LLI-07設(shè)備上進行離心分配色譜。使用各有將壓力限制列55巴的節(jié)流閥的兩臺活塞泵給離心機供料。一臺泵借助選擇閥輸送兩相中的一相或另一相；另一泵留給注入用。
在低旋轉(zhuǎn)(200轉(zhuǎn)/分)和高流量(110厘米3/分)下固定相填滿其設(shè)備之后，立刻加物料。
由水相開始注入兩相，并且用水相以流量60厘米3/分洗脫正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以體積計2-4-3-2)系統(tǒng)。回收1.9外固定相，即保留為71％，然后回收鎦分，每個鎦分為15厘米3。將第72-110個鎦分合并，濃縮到體積140厘米3。過濾分離所生成的沉淀。這樣得到塔佐泰勒三水合物，以內(nèi)歸一化測定達(dá)99.7％，產(chǎn)率為80.5％。
實施例2塔佐泰勒的純化如實施例1那樣操作，但使用82克(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基2-2羥基-丙酸-[-4乙酸基-2α-苯甲酸基-5β.20-橋氧基-1β-羥基-7β.10β-雙-(2.2.2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧化-11-紫杉烯-13α基]酯、82克鋅和150厘米3由49.2厘米3乙酸和328厘米3乙腈組成的混合物，得到115克粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物在理論上含有49.69克塔佐泰勒，即53克塔佐泰勒三水合物。
用450厘米3甲基叔丁基醚再提取上述粗產(chǎn)物，然后用總量450厘米3含15克氯化納的水洗滌3次。合并的水相用2次200厘米3甲基波丁基醚提取。將三次醚化提取物合并濃縮到干。這樣得到干2克蛋糖霜，它再用120厘米3甲醇溶解。
在得到和淺黃色溶液里，依次加入160厘米3乙酸乙酯、80厘米3水和80厘米3正庚烷。
于是得到總體積為460厘米3二個透明液相，其上層只是總本積的約1/4而不是35％無塔佐泰勒。
離心分配色譜設(shè)備是以流量110厘米3/分和旋轉(zhuǎn)速度為200轉(zhuǎn)/分用右機相充滿的。設(shè)備滿后，將旋轉(zhuǎn)速度提高到800轉(zhuǎn)/分加入水相，然后在加入有機相之后，用200厘米3有機相洗滌；再用水相以流量60厘米3/分洗脫。
回收2.5升過量固定相，即保留為67.7％。
在通過200厘米3移動水相后，回收36)個餾分，每個餾分為12-13厘米3。第25-110餾分濃縮至體積200厘米3，得到46.5克塔佐泵勒三水合物沉淀，其純度為99.1％，產(chǎn)率為87.7％。
實施例310-脫乙酰漿果赤霉素III在總體積245厘米3的Sanki HPCPC系列1000色譜儀上進行離心分配色譜分離。
通過甲基異丁基酮-丙酮-水(按體積計為2-3-2)混合物以有機相流量6厘米3/分和水相流量3厘米3/分1小時泵送，以下行方式使轉(zhuǎn)子以100轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)。
然后將旋轉(zhuǎn)速度增加到1200轉(zhuǎn)/分，再加入1.5克已結(jié)晶粗10-脫乙酰-漿果赤霉素III，其含有83.3％10-脫乙酰漿果赤霉素III和3.4％10-脫乙酰-19-羥基漿果赤霉素III。
其后以下行方式用水相、流量為3厘米3/分洗脫，每隔2分鐘回收餾分，每個餾分為6厘米3。
在第39-52個餾分中含有10-脫乙酰-19-羥基漿果赤霉素。
在第61個餾分，實例洗脫方向，這時以下行方式使用有機相作為流動相，流量為5厘米3/分，并且每隔2分種回收餾分，每個餾分為10厘米3。
第70-84個餾分含有10-脫乙酰漿果赤霉素III，將這些餾分減壓濃縮。于15厘米3乙腈中重結(jié)晶之后，得到1.25克白色晶體狀的、乙腈溶劑化的10-脫乙酰-漿果赤霉素III(1摩爾)采用內(nèi)歸-化由HPLC測定其純度為98％。
產(chǎn)率(修正)是91.2％。
權(quán)利要求
1.采用由水與不含氯和無毒的溶劑組成的在兩個部分混溶相之間離心分配色譜法純化10-脫乙酰漿果赤霉素III和塔佐泰勒的方法，所述溶劑選自于醇、醚、酯、酮和脂族烴，該方法的特征在于為純化10-脫乙酰將果赤霉素III，使用在兩相之間的分配系數(shù)為0.1-10的脂族烴、酯、醇和水的混合物，或在兩相之間的分配系數(shù)為0.1-10的脂族酮與水的混合物，為純化塔佐泰勒，使用在兩相之間的分配系數(shù)為0.1-10的脂族烴、酯、醇和水的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在兩相之間的分配系數(shù)為0.5-5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在兩相之間的分配系數(shù)為1附近。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于為分離10-脫乙酰-將果赤霉素III，使用正庚烷、乙酸乙酯、甲醇和水的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于使用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合物(以體積計為1-2-1-2)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于使用甲基異丁基酮、丙酮和水的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于使用甲基異丁基酮-丙酮-水混合物(以體積計為2-3-2)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于為了純化塔佐泰勒，使用正庚烷、乙酸乙酯、甲醇和水混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于使用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合物(按體積計為2-4-3-2)。
全文摘要
用離心分配色譜法純化紫杉化合物(塔佐泰勒、10-脫乙?！獙⒐嗝顾丌?的方法。
文檔編號A61K36/15GK1119860SQ94191548
公開日1996年4月3日 申請日期1994年3月18日 優(yōu)先權(quán)日1993年3月22日
發(fā)明者A·度蘭德, A·格鮑德, R·馬格拉夫 申請人:羅納-布朗克·羅萊爾股份有限公司