本發(fā)明屬于化妝品，具體涉及一種具有美白控油功效的藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液的制備方法。

背景技術(shù)：

1、藜麥(chenopodium?quinoa?willd.)，又稱南美藜、藜谷、奎奴亞藜等，是一年生雙子葉植物，屬于莧科藜屬，具有悠久的栽培歷史。藜麥原產(chǎn)于南美洲安第斯山脈高海拔(2800-4200m)地區(qū)，在當(dāng)?shù)赜谐^5000年的種植歷史，因其豐富的營(yíng)養(yǎng)和多樣的保健功能而被稱為“谷物之母”。藜麥對(duì)鹽堿、干旱、霜凍、病蟲害等生物、非生物脅迫具有良好適應(yīng)性，被許多國(guó)家推廣種植。但藜麥對(duì)種植氣候、地理等要求較高，中國(guó)藜麥種植目前仍處于初始階段，種植范圍較窄，主要分布于青海、甘肅和山西等地，這使得藜麥品質(zhì)良莠不齊，一些優(yōu)異品種價(jià)格高昂，難以廣泛應(yīng)用于市場(chǎng)。藜麥具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，能夠滿足人體所需基本營(yíng)養(yǎng)元素，富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、氨基酸、纖維素等微量元素，其含量均高于其他糧食作。研究表明，藜麥不僅含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還含有多酚、皂苷、黃酮等生物活性物質(zhì)，具有強(qiáng)的抗氧化能力，在抗氧化、降血脂、增強(qiáng)免疫等生理功效上起到重要作用。

2、植物組織培養(yǎng)技術(shù)是一種無性繁殖的新技術(shù)，它基于植物細(xì)胞具有全能性的理論。這種技術(shù)包括將植物組織或細(xì)胞進(jìn)行無菌操作，接種在含有各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括能夠快速繁殖植物、不受自然生長(zhǎng)的限制、可以生產(chǎn)出無病毒植株、能夠進(jìn)行基因突變和品種改良等。

3、發(fā)酵技術(shù)具有悠久的歷史，在我國(guó)，傳統(tǒng)發(fā)酵食品的歷史可以追溯到約9000年前。發(fā)酵技術(shù)是利用細(xì)胞的生長(zhǎng)特性及生物催化反應(yīng)體系，與有機(jī)物底物發(fā)生反應(yīng)，最終得到目標(biāo)產(chǎn)物，即生物反應(yīng)合成物質(zhì)或細(xì)胞。這一技術(shù)不僅改變了底物原有的性能，還能產(chǎn)生新的功效物質(zhì)。發(fā)酵的形式一般分為兩種，一種是液體發(fā)酵，另一種是固體發(fā)酵。發(fā)酵技術(shù)與化學(xué)方法相比，具有較好的可控性、較高的安全性、節(jié)能、產(chǎn)生的副產(chǎn)物少以及對(duì)環(huán)境污染少等優(yōu)點(diǎn)，并且微生物的分解性可以使特殊結(jié)構(gòu)的生物合成保持高度均一，確保產(chǎn)物的安全和功效。

4、隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活品質(zhì)的提升，人們對(duì)煥顏亮膚的需求日益增加，尤其是對(duì)美白、控油等功效型產(chǎn)品的需求。目前市面具有美白效果的護(hù)膚品多通過添加具有美白功效的化學(xué)合成物質(zhì)來實(shí)現(xiàn)，如氫醌，熊果苷，曲酸和bht(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)等，但此類化合物使用過程中常伴隨著皮膚刺激性、細(xì)胞毒性等問題。而一些控油手段也是通過刷酸實(shí)現(xiàn)，對(duì)護(hù)理手段要求嚴(yán)格，并且會(huì)因刷酸導(dǎo)致皮膚屏障受損。因此，化妝品的安全性日益受到重視，來源于植物中的天然美白、控油成分因其較低的副作用而愈受關(guān)注。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種具有美白控油功效的藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液的制備方法。與未經(jīng)處理提取的藜麥提取液相比通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲取藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液中的藜麥活性成分來源更穩(wěn)定，且更容易被皮膚吸收利用，刺激性更低等優(yōu)勢(shì)。

2、本發(fā)明提供了一種具有美白控油功效的藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液的制備方法，包括以下制備步驟：

3、1)選取成熟籽粒飽滿的藜麥種子，用流動(dòng)的水清洗干凈，在無菌環(huán)境下，先用乙醇消毒，此步驟為除去種子表面灰塵與雜菌。

4、2)將1)消毒后的種子用無菌水沖洗，再用次氯酸鈉(naclo)處理，最后再次用無菌水沖，此步驟為了獲取無菌種子。

5、3)無菌條件下，將消毒過的種子整齊地?cái)[在滅過菌的培養(yǎng)皿中，25℃、16h/8h光照周期下培養(yǎng)，此步驟為獲得無菌苗備用。

6、4)將獲取的無菌苗進(jìn)行剪碎處理，獲取藜麥外植體。

7、5)將4)獲得的外植體，分別平鋪于入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在25℃、16h/8h光照周期下培養(yǎng)，獲得藜麥愈傷組織，并進(jìn)行粉碎得到藜麥愈傷組織粉末。

8、6)取-80℃冰箱中凍藏的二裂酵母，在mrs固體平板上用接種環(huán)劃線接種純化，37℃厭氧培養(yǎng)，挑取單菌落轉(zhuǎn)移至5ml新的液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧生長(zhǎng)24h，再以接種4vol％傳代至新的液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)24h，連續(xù)活化數(shù)次此步驟為獲取高活性菌株。

9、7)取上述菌液與5)獲得的藜麥愈傷組織粉末分散于mrs液體培養(yǎng)基中，37℃下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，獲取發(fā)酵濾液。

10、優(yōu)選地，步驟1)所述酒精為60％-75％的濃度，例如可以是60％、65％、70％、75％等。

11、優(yōu)選地，步驟2)所述次氯酸鈉(naclo)為6％-12％的濃度，例如可以是6％、8％、10％、12％等。

12、任選地，步驟3)所述培養(yǎng)基可以是ms培養(yǎng)基，或者是2張無菌濾紙，然后倒入無菌水浸濕濾紙。

13、優(yōu)選地，步驟3)所述無菌苗為4-8天的幼苗，例如可以是第4天、5天、6天、7天、8天等。

14、優(yōu)選地，步驟4)所述植物組培外植體包括子葉外植體、胚軸外植體以及種胚外植體。

15、優(yōu)選地，步驟4)所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基加2,4-d濃度為0.4-2.0mg/l，例如可以是0.4mg/l、0.8mg/l、1.2mg/l、1.6mg/l、2.0mg/l等。

16、優(yōu)選地，步驟4)所述愈傷組織為20-40天的愈傷組織塊，例如可以是20天、25天、30天、35天、40天等。

17、優(yōu)選地，步驟5)粉末選取凍干研磨的方式或者烘干粉碎的方式獲取，凍干的時(shí)間為10-15h，例如可以是10h、11h、12h、13h、14h、15h等，烘干的溫度為40-60℃，例如可以是40℃、45℃、50℃、55℃、60℃等。

18、優(yōu)選地，步驟6)37℃厭氧培養(yǎng)時(shí)間為36-48h，例如可以是36h、40h、44h、48h等。

19、優(yōu)選地，步驟6)連續(xù)活化次數(shù)為3-5次，例如可以是3次、4次、5次。

20、優(yōu)選地，步驟7)所述二裂酵母的接種為5-10vol％，例如可以是5vol％、6vol％、7vol％、8vol％、9vol％、10vol％等。

21、優(yōu)選地，藜麥愈傷組織粉末分散于培養(yǎng)基，藜麥的濃度為12-30g/l，例如可以是12g/l、14g/l、16g/l、18g/l、20g/l、22g/l、24g/l、26g/l、28g/l、30g/l等。

22、待發(fā)酵結(jié)束后過濾去除藜麥組織渣，任選地再破碎菌體，離心取上清液，通過過濾除菌，即得所述藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液。

23、上述方法制得的藜麥愈傷組織發(fā)濾液可以應(yīng)用在化妝品中。

24、相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：

25、(1)本發(fā)明將藜麥進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)，相比于藜麥種子提取液等，大大縮短植物生長(zhǎng)周期，能在更短的時(shí)間獲得更高的活性成分，并且整個(gè)愈傷組織生長(zhǎng)過程均在人工氣候室內(nèi)，對(duì)其生長(zhǎng)環(huán)境控制更精確，避免了因藜麥?zhǔn)芊N植地等氣候影響，導(dǎo)致活性物成分不穩(wěn)定，從而降低功效的問題，提高了原材料的穩(wěn)定性。

26、(2)本發(fā)明意外發(fā)現(xiàn)藜麥愈傷組織結(jié)合發(fā)酵途徑得到的組織濾液功效與常規(guī)植物提取方式獲取的濾液相比，其美白控油功效更強(qiáng)，推測(cè)可能是藜麥愈傷組織在二裂酵母的發(fā)酵作用下，能將很多不易吸收的大分子物質(zhì)降解為更易吸收的小分子物質(zhì)，從而提升了原料的美白、控油功效。

27、(3)本發(fā)明制得的藜麥愈傷組織發(fā)酵濾液對(duì)皮膚具有很好的美白、控油功效，相對(duì)于傳統(tǒng)美白、控油成分更加安全無毒害，對(duì)皮膚無刺激，皮膚吸收利用度高，具有廣闊的應(yīng)用前景。