本發(fā)明涉及植物提取技術領域，具體涉及一種清瀝草多酚及其制備方法與應用。
背景技術：
清瀝草為蕓香科植物，多分布于我國廣西及越南國境內，性味苦寒，有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡之功效，全株入藥。據(jù)《廣西地方藥材志》記載，清瀝草具有“清熱燥濕，瀉火解毒，除骨蒸清虛熱”，用于濕熱瀉痢，黃疸，帶下，熱淋，濕疹瘙癢。民間利用清瀝草水煎劑治療小兒皮膚濕疹，有較好的療效。然而，清瀝草水煎劑存在穩(wěn)定性差，不易攜帶，使用不方便等缺陷，限制了進一步應用。
濕疹，屬于比較常見的由多種內外因素引起的，瘙癢劇烈的，表皮及真皮淺層的皮膚病炎癥性反應。大量研究顯示，濕疹和特應性皮炎(ad)皮損處微生物感染因素尤其是金黃色葡萄球菌、馬拉色菌等是這些疾病激發(fā)的重要因素之一。因此，推測清瀝草治療小兒皮膚濕疹的作用機制與皮損處微生物感染有關。但是，目前，并沒有相關的科學研究報道。
技術實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術中的缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種清瀝草多酚及其制備方法與應用，以通過采用醇提的方法，制備得到的清瀝草多酚具有穩(wěn)定性高，對因微生物感染引起的濕疹治療效果好等優(yōu)點，可應用于制備預防和/或治療濕疹尤其是微生物感染引起的濕疹藥物。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術方案為：
第一方面，本發(fā)明提供了一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：s1：將清瀝草粉碎，然后過篩，收集細粉；s2：將細粉采用乙醇水溶液進行提取，然后過濾，收集濾液；s3：將濾液濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；s4：將粗多酚溶解于體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用用體積分數(shù)為50％～80％的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到清瀝草多酚。需要說明的是，本發(fā)明制備得到的清瀝草多酚為黃棕色粉末。
在本發(fā)明的進一步實施方式中，s2中，乙醇水溶液的體積分數(shù)為50％～85％，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的10～30倍；提取的溫度為50～80℃，提取的時間為60～120min。需要說明的是，在提取的過程中優(yōu)選進行不斷的攪拌。
在本發(fā)明的進一步實施方式中，s4中，粗多酚和體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液的質量比為1:10，體積分數(shù)為50％～80％的乙醇水溶液的體積為5.0～10.0bv，洗脫速率為2.0～3.0bv·h-1。需要說明的是，bv是指大孔樹脂的體積。
在本發(fā)明的進一步實施方式中，s3中，濃縮為減壓濃縮。
在本發(fā)明的進一步實施方式中，s1中，細粉的粒徑小于0.250mm。
第二方面，本發(fā)明保護根據(jù)上述制備方法制備得到的清瀝草多酚。
第三方面，本發(fā)明還保護上述清瀝草多酚在制備預防和/或治療濕疹尤其是微生物感染引起的濕疹藥物中的應用。
第四方面，本發(fā)明提供了一種包括上述清瀝草多酚的清洗劑，原料組分按重量百分比計，包括：清瀝草多酚2.0％～10.0％、甘油5.0％、山梨醇5.0％、聚氧乙烯氫化蓖麻油1.0％～2.0％、尼泊金復合酯0.2％，余量為水。
第五方面，本發(fā)明提供了包括上述清瀝草多酚的清洗劑的制備方法，包括如下步驟：將所有原料組分混合均勻，得到清洗劑。需要說明的是，本發(fā)明制備得到的清洗劑是外用清洗劑，其具有預防和/或治療濕疹尤其是微生物感染引起的濕疹的功效。
本發(fā)明還保護上述包括清瀝草多酚的清洗劑在制備預防和/或治療濕疹尤其是微生物感染引起的濕疹藥物中的應用。
本發(fā)明提供的技術方案，具有如下的有益效果：(1)本發(fā)明采用醇提的方法提取清瀝草，制備得到的清瀝草多酚穩(wěn)定性高，與水煎劑相比，清瀝草多酚對濕疹致病菌有更好的抑制活性；(2)本發(fā)明提供的清瀝草多酚和含清瀝草多酚清洗劑，對引起濕疹的典型致病菌(如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、馬拉色菌等)均有很好的抑制作用，可應用于預防和/或治療濕疹尤其是微生物感染引起的濕疹；(3)本發(fā)明提供的清瀝草多酚可以作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑學上記載的方法制成外用清洗劑，且清瀝草多酚的含量優(yōu)選為2％～10％。
本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
附圖說明
圖1為本發(fā)明實施例中的清瀝草多酚含量-時間變化曲線曲線圖。
附圖標記：
1-實施例一制備得到的清瀝草多酚；2-實施例二制備得到的清瀝草多酚；3-實施例三制備得到的清瀝草多酚；4-實施例四制備得到的清瀝草多酚；5-實施例五制備得到的清瀝草多酚；6-實施例六制備得到的清瀝草多酚。
具體實施方式
下面將結合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。以下實施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術方案，因此只是作為示例，而不能以此來限制本發(fā)明的保護范圍。
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，數(shù)據(jù)為三次重復實驗的平均值或平均值±標準差。
實施例一
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)為50％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取60min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的10倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用5.0bv的體積分數(shù)為50％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為2.0bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為83.3％，提取率為5.6％(以沒食子酸為對照品)。
實施例二
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取90min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的20倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用8.0bv的體積分數(shù)為60％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為3.0bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為86.6％，提取率為5.9％(以沒食子酸為對照品)。
實施例三
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)80％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取120min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的30倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用10.0bv的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為2.5bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為85.2％，提取率為7.6％(以沒食子酸為對照品)。
實施例四
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)為50％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取120min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的10倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用5.0bv的體積分數(shù)為80％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為2.0bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為86.4％，提取率為6.8％(以沒食子酸為對照品)。
實施例五
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)為60％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取90min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的20倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再7.0bv的體積分數(shù)為60％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為2.5bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為86.9％，提取率為6.5％(以沒食子酸為對照品)。
實施例六
本實施例提供一種清瀝草多酚的制備方法，包括如下步驟：
s1：將清瀝草粉碎，然后過60目篩，收集粒徑小于0.250mm的細粉；
s2：采用體積分數(shù)為80％的乙醇水溶液為提取液，將細粉于50水浴提取60min，然后過濾，收集濾液；其中，乙醇水溶液的質量是細粉的質量的30倍；
s3：將濾液減壓濃縮，直至乙醇揮發(fā)完全，得到粗多酚；
s4：將粗多酚溶解于10倍體積的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液中，然后上樣于hpd-100型大孔樹脂柱，再用10.0bv的體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液洗脫，洗脫速率為3.0bv·h-1，收集洗脫液；
s5：將洗脫液減壓濃縮至干，得到黃棕色粉末，即為清瀝草多酚。
以測定多酚含量的福林酚比色法測得：多酚質量分數(shù)為89.5％，提取率為7.4％(以沒食子酸為對照品)。
實施例七
本實施例提供一種包括實施例六制備得到的清瀝草多酚的清洗劑，原料組分按重量百分比計，包括：
清瀝草多酚2.0％、甘油5.0％、山梨醇5.0％、聚氧乙烯氫化蓖麻油1.0％、尼泊金復合酯0.2％，余量為去離子水。
制備方法包括步驟：將所有原料組分混合均勻，得到所述清洗劑。
實施例八
本實施例提供一種包括實施例六制備得到的清瀝草多酚的清洗劑，原料組分按重量百分比計，包括：
清瀝草多酚5.0％、甘油5.0％、山梨醇5.0％、聚氧乙烯氫化蓖麻油1.5％、尼泊金復合酯0.2％，余量為去離子水。
制備方法包括步驟：將所有原料組分混合均勻，得到所述清洗劑。
實施例九
本實施例提供一種包括實施例六制備得到的清瀝草多酚的清洗劑，原料組分按重量百分比計，包括：
清瀝草多酚7.0％、甘油5.0％、山梨醇5.0％、聚氧乙烯氫化蓖麻油1.5％、尼泊金復合酯0.2％，余量為去離子水。
制備方法包括步驟：將所有原料組分混合均勻，得到所述清洗劑。
實施例十
本實施例提供一種包括實施例六制備得到的清瀝草多酚的清洗劑，原料組分按重量百分比計，包括：
清瀝草多酚10.0％、甘油5.0％、山梨醇5.0％、聚氧乙烯氫化蓖麻油2.0％、尼泊金復合酯0.2％，余量為去離子水。
制備方法包括步驟：將所有原料組分混合均勻，得到所述清洗劑。
將本發(fā)明實施例一至實施例六制備得到的清瀝草多酚，在溫度40±2℃、相對濕度75％±5％的條件下，放置6個月，每隔1個月取樣檢測多酚含量一次，多酚含量變化如圖1所示。從圖中可以看出，經(jīng)高溫穩(wěn)定性考察，多酚含量下降均在5％以內，屬于可控范圍，說明制備的多酚穩(wěn)定性良好，制備方法可行。
將本發(fā)明實施例一至實施例六制備得到的清瀝草多酚、實施例七至實施例十一制備得到的包括清瀝草多酚的清洗劑進行抑菌實驗。
實驗方法：選擇引起濕疹和皮炎的代表性細菌金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、馬拉色菌，通過對倍稀釋法測定抑制細菌的最低濃度(mic值)。
實驗結果：測定得到的結果如下表1所示。從表中可以看出，制備得到的清瀝草多酚及清洗劑對引起濕疹和皮炎常見菌：金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、馬拉色菌等具有顯著的抑制作用，可用于因微生物感染引起的濕疹的治療，與清瀝草水煎物、醇提物相比較，具有更強的活性。
表1對典型細菌、真菌的的最低抑制濃度(mg.ml-1)
需要注意的是，除非另有說明，本申請使用的技術術語或者科學術語應當為本發(fā)明所屬領域技術人員所理解的通常意義。除非另外具體說明，否則在這些實施例中闡述的部件和步驟的相對步驟、數(shù)字表達式和數(shù)值并不限制本發(fā)明的范圍。在這里示出和描述的所有示例中，除非另有規(guī)定，任何具體值應被解釋為僅僅是示例性的，而不是作為限制，因此，示例性實施例的其他示例可以具有不同的值。
在本發(fā)明的描述中，需要理解的是，術語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。在本發(fā)明的描述中，“多個”的含義是兩個以上，除非另有明確具體的限定。
最后應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發(fā)明各實施例技術方案的范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍當中。