本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有止咳功效的組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
急性支氣管炎，慢性支氣管炎急性發(fā)作，是臨床常見(jiàn)病，多發(fā)病。急性氣管-支氣管炎常伴隨著感冒而出現(xiàn)，一般成人每年患感冒4-6次，兒童每年患6-8次，其中咳嗽是最常見(jiàn)和痛苦的癥狀之一。而慢性支氣管炎根據(jù)我國(guó)70年代全國(guó)6千萬(wàn)人的普查，患病率為3.82％。隨著年齡增長(zhǎng)，患病率遞增，50歲以上的患病率高達(dá)15％或更多。若不能及時(shí)控制，反復(fù)遷延，由咳至喘，可以發(fā)展為慢性阻塞性肺氣腫、肺原性心臟病等，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。
在急慢性支氣管炎的治療方面，應(yīng)用抗炎藥及抗生素雖可消除呼吸道炎癥，殺滅病原體，但由于耐藥性等原因，有時(shí)療效并不理想。目前臨床上多以含有抗組胺劑和化痰劑的鎮(zhèn)咳藥治療咳嗽，這些藥物在某些情況下能夠暫時(shí)緩解癥狀，但多數(shù)情況下，長(zhǎng)期療效不佳，有些甚至可能延長(zhǎng)癥狀的持續(xù)時(shí)間。
目前應(yīng)用外治法治療咳嗽的報(bào)道也很多見(jiàn)，主要以穴位敷貼為主。很多醫(yī)家在臨床用藥有效的基礎(chǔ)上，開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，探討其作用機(jī)理。綜其所知，中醫(yī)藥治療急性支氣管炎、慢支急性發(fā)作之咳嗽具有療效確切，方法多樣，副作用少等優(yōu)勢(shì)，但目前所見(jiàn)報(bào)道，多局限于臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及專(zhuān)方專(zhuān)藥的應(yīng)用報(bào)道，由于各位學(xué)者的學(xué)術(shù)觀(guān)點(diǎn)和師承流派不同，對(duì)本病的辨證論治缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，在應(yīng)用外治法方面尚沒(méi)有成熟的經(jīng)驗(yàn)。因此，在中醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)下，采用嚴(yán)格的科研設(shè)計(jì)，對(duì)急性氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作之咳嗽進(jìn)行深入的研究，開(kāi)發(fā)應(yīng)用治療外感咳嗽的高效安全的中成藥和外用制劑，是一項(xiàng)十分重要的任務(wù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種具有止咳功效的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供該具有止咳功效的藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述具有止咳功效的藥物貼劑及其制備方法。
發(fā)明人基于“肺主皮毛”理論，提出了藥物可藉皮膚、穴位及鼻三種不同途徑入肺進(jìn)而實(shí)現(xiàn)調(diào)暢肺氣的新觀(guān)念；內(nèi)服治嗽之方經(jīng)合理加減后外用，其療效仍著；止咳巴布貼膏所用劑型給藥方便，易為廣大患者所接受。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的：
一種具有止咳功效的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成：麻黃3-7重量份，干姜5-9重量份，洋甘菊3-7重量份。
上述具有止咳功效的藥物組合物，優(yōu)選該組合物由以下重量份的組分制成：麻黃5重量份，干姜7.5重量份，洋甘菊5重量份。
上述具有止咳功效的組合物的制備方法包括以下步驟：
(1)洋甘菊、干姜加8-12倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間5-6小時(shí)，所得揮發(fā)油，提油后得到的藥液濃縮至室溫條件下相對(duì)密度1.05～1.10，加入質(zhì)量濃度為95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量80％，充分?jǐn)嚢?，靜置18小時(shí)，濾過(guò)，得濾液Ⅰ；
(2)洋甘菊、干姜提油后殘?jiān)c麻黃加總重4-8倍量質(zhì)量濃度為70％的乙醇加熱回流提取2-3小時(shí)，每次1.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ；
將濾液Ⅱ與濾液Ⅰ混合，在70～80℃，0.08-0.1Mpa條件下減壓回收乙醇至無(wú)醇味。
上述具有止咳功效的藥物組合物功能：解表清里，宣肅肺氣，化痰止咳。
主治：急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作之表寒肺熱證。癥見(jiàn)：咳嗽，氣急，咽癢，咯痰量多或伴有鼻塞、流涕、頭痛，或有惡寒發(fā)熱等表證。舌質(zhì)淡紅，苔薄白或黃，脈浮滑。所述的具有止咳功效的藥物組合物可在制備治療急性支氣管炎、慢性支氣管炎、急性發(fā)作之表寒肺熱證的藥物中應(yīng)用。
中醫(yī)學(xué)認(rèn)為風(fēng)寒郁表日久，常會(huì)因陽(yáng)郁不達(dá)而并見(jiàn)里熱；或平素肺有郁熱之人，又復(fù)感外寒(侵襲)，往往是風(fēng)寒未盡，內(nèi)熱已生，即使夏秋燥熱之季，也多因貪涼飲冷，久享風(fēng)扇、空調(diào)而起，更是風(fēng)寒尚存，熱象已重，因此，臨床上寒熱夾雜之證最較為常見(jiàn)，最終形成表寒郁閉，肺熱壅遏，肺失宣肅，痰濕(熱)內(nèi)蘊(yùn)之表寒里熱的咳嗽證候。本發(fā)明組合物正是基于這一咳嗽的臨床特點(diǎn)，在古方小青龍加石膏湯的基礎(chǔ)上，結(jié)合外治法的用藥特點(diǎn)，經(jīng)合理化裁，反復(fù)篩選及臨床驗(yàn)證形成的新處方。
方中以麻黃發(fā)散風(fēng)寒，宣肺平喘為君藥；干姜溫化痰飲，而為臣；洋甘菊芳香濃郁，既能引藥深入病所，更能矯正諸藥之味為病家所接受，為佐使藥。全方集辛溫散寒、清化痰熱、宣肺止咳為一體，具有散寒解表，宣肅肺氣，止咳化痰的功用，用于風(fēng)寒外襲、肺有郁熱、痰涎壅阻之咳嗽病癥。
上述具有止咳功效的藥物組合物，可與藥學(xué)上可接受的輔料制成制劑，所述的制劑優(yōu)選為外用制劑，該外用制劑優(yōu)選為巴布貼膏劑。
上述巴布貼膏劑的制備方法：
(1)洋甘菊、干姜加8-12倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間5-6小時(shí)，所得揮發(fā)油，提油后得到的藥液濃縮至室溫條件下相對(duì)密度1.05～1.10，加入質(zhì)量濃度為95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量80％，充分?jǐn)嚢瑁o置18小時(shí)，濾過(guò)，得濾液Ⅰ；
(2)洋甘菊、干姜提油后殘?jiān)c麻黃加總重4-8倍量質(zhì)量濃度為70％的乙醇加熱回流提取2-3小時(shí)，每次1.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ；
將濾液Ⅱ與濾液Ⅰ混合，在70～80℃，0.08-0.1Mpa條件下減壓回收乙醇至無(wú)醇味；
(3)將所得組合物溶液濃縮至80℃條件下相對(duì)密度為1.25～1.30，得稠浸膏；
(4)取適量聚丙烯酸鈉、白陶土加入甘油攪拌均勻，得混合物Ⅰ；
(5)取羧甲基纖維素鈉加入羧甲基纖維素鈉7倍量水，70℃水浴加熱，攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)取明膠加入明膠1.3倍重量的水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮、丙二醇、揮發(fā)油、少量乙醇溶解的尼泊金乙酯，攪拌均勻，趁熱涂布，切割。
所述的涂布應(yīng)保持40～50℃的溫度。
上述制備工藝中：
1.為最大限度地去粗取精，保證醇沉效果，醇沉過(guò)程中應(yīng)慢加快攪，室溫充分靜置即可，放入冷庫(kù)將增加有效成分損失，
2.回收乙醇時(shí)真空度不宜太高，控制在0.08Mpa左右，且控制溫度于70～80℃以減輕麻黃堿等易揮發(fā)成分的損失。
3.藥液需保持80℃濃縮成稠浸膏，相對(duì)密度1.25～1.30(80℃測(cè))，以控制其中的含水量，有利于制劑成型。
4.各基質(zhì)輔料溶脹混合時(shí)溫度應(yīng)保持在70℃左右，加水溶脹需嚴(yán)格控制加水量。溶脹過(guò)程應(yīng)在相對(duì)密閉容器中進(jìn)行，以減少水分的蒸發(fā)，并充分強(qiáng)力攪拌均勻。
5.揮發(fā)油與透皮吸收促進(jìn)劑氮酮等一起于涂布前加入，強(qiáng)力攪拌均勻。
6.由于巴布劑含水量較高，為保證制劑的穩(wěn)定性，加入一定的尼泊金乙酯起到防腐作用，使用時(shí)以少量乙醇溶解，于涂布前加入，攪拌均勻。
7.涂布時(shí)應(yīng)保持一定的溫度(40～50℃)，使基質(zhì)能均勻地?cái)偼坑隈驯巢牧仙稀４鋮s至室溫后，按規(guī)定規(guī)格8×12cm均勻切割。
巴布劑的基本組成通常包括粘性劑、保濕劑、賦形劑、透皮吸收促進(jìn)劑和藥物浸膏等幾部分。不同的基質(zhì)類(lèi)型及不同的規(guī)格，基質(zhì)與藥物的比例，配制程序等均影響巴布劑的成型，應(yīng)根據(jù)基質(zhì)與藥物性質(zhì)，選擇合理的制備工藝。在巴布劑的制備過(guò)程中，藥物與基質(zhì)的相容性很關(guān)鍵，藥物成分加入空白膠體后，可能會(huì)對(duì)空白膠體的性能產(chǎn)生影響，其強(qiáng)度、黏性與成膠時(shí)間都會(huì)有所差異。因此，在藥物與基質(zhì)融合的過(guò)程中，一方面要考察藥物與基質(zhì)的親和力，使藥物很好地溶解于水溶性基質(zhì)，從而保證藥物的治療效果；另一方面要保持巴布劑的粘性和良好的外觀(guān)性能。
根據(jù)文獻(xiàn)及配方需要，我們選擇了幾種基質(zhì)：聚丙烯酸鈉、明膠，羧甲基纖維素鈉，聚維酮、甘油，為解決基質(zhì)中幾種高分子材料的溶脹問(wèn)題，我們對(duì)其溶脹方式、溶脹濃度等進(jìn)行了系統(tǒng)而深入的研究，試驗(yàn)考察結(jié)果最優(yōu)選條件為：取聚丙烯酸鈉、白陶土加入甘油攪拌均勻，得混懸液Ⅰ。取羧甲基纖維素鈉加入7倍量水，70℃水浴加熱，時(shí)時(shí)攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；明膠加入1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻粘稠半透明狀，與混合物Ⅱ合并，攪拌均勻，加入混懸液Ⅰ，攪拌均勻，涂布。
再采用均勻設(shè)計(jì)法篩選基質(zhì)配比，考慮成型性：涂布后與背襯層緊密貼合，表面光滑平整，膏體均勻性：涂布后膏體厚薄均勻，無(wú)斷裂，光滑細(xì)膩；柔軟性：膏體柔軟，貼著舒適；以及最小投料的需求優(yōu)選出的基質(zhì)重量配比為聚丙烯酸鈉∶聚維酮K30∶甘油∶明膠∶羧甲基纖維素鈉∶白陶土＝1：4∶5∶2∶:0.5∶0.6。
該方以外貼法給藥，通過(guò)局部皮膚的吸收以及作用于分布在任脈上的“紫宮”、“玉堂”兩穴，有效地調(diào)節(jié)經(jīng)絡(luò)氣血運(yùn)行、疏暢肺部氣機(jī)，進(jìn)而發(fā)揮良好的止咳作用。此外，該方芳香走竄，敷貼部位近于鼻竅，從貼膏中釋放的藥物氣味可源源不斷通過(guò)鼻竅作用于肺部，發(fā)揮止咳效用。
本發(fā)明止咳巴布貼膏在研制過(guò)程中不僅積淀了豐厚的中醫(yī)傳統(tǒng)理論，同時(shí)接受了近十年的臨床實(shí)踐檢驗(yàn)，其總有效率達(dá)90％以上，顯效及痊愈率大于75％，這些研究結(jié)果是開(kāi)展該方深入研究及新藥開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1
本實(shí)施例生產(chǎn)的具有止咳功效的巴布貼膏，按以下重量份的原料及輔料制成：
麻黃5份，干姜7.5份，洋甘菊5份。
該巴布貼膏的制備按照以下步驟進(jìn)行：
(1)洋甘菊、干姜加10倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間5小時(shí)。所得揮發(fā)油另器保存，備用。提油后藥液濃縮至相對(duì)密度1.05～1.10(室溫測(cè))(1.5g生藥/ml)，加入95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量至80％，充分?jǐn)嚢?，靜置18小時(shí)，濾過(guò)，得濾液Ⅰ，備用。
(2)洋甘菊、干姜提油后殘?jiān)c麻黃加總重6倍量70％乙醇回流提取2小時(shí)，濾過(guò)；再加4倍量70％乙醇回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ，加入濾液Ⅰ，減壓(0.08Mpa，70～80℃)回收乙醇至無(wú)醇味。
(3)將步驟(2)所得組合物溶液濃縮至相對(duì)密度為1.25～1.30(80℃測(cè))，得稠浸膏，備用。
(4)取聚丙烯酸鈉1份、白陶土0.6份加入甘油5份攪拌均勻，得混合物Ⅰ。
(5)取羧甲基纖維素鈉0.5份加入7倍量水，70℃水浴加熱，時(shí)時(shí)攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30 4份，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)明膠2份加入1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏2份，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮0.6份、丙二醇0.6份、揮發(fā)油0.01份、尼泊金乙酯0.02份(少量乙醇溶解)，攪拌均勻，趁熱涂布，切割，包裝。涂布時(shí)保持40～50℃的溫度。
實(shí)施例2
本實(shí)施例生產(chǎn)的具有止咳功效的巴布貼膏，按以下重量份的原料及輔料制成：
麻黃7份，干姜5份，洋甘菊3份。
該巴布貼膏的制備按照以下步驟進(jìn)行：
(1)洋甘菊、干姜加8倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間6小時(shí)。所得揮發(fā)油另器保存，備用。提油后藥液濃縮至相對(duì)密度1.05～1.10(室溫測(cè))(1.5g生藥/ml)，加入95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量至80％，充分?jǐn)嚢瑁o置18小時(shí)，濾過(guò)，得濾液Ⅰ，備用。
(2)洋甘菊、干姜提油后殘?jiān)c麻黃加總重8倍量70％乙醇回流提取3小時(shí)，濾過(guò)；再加6倍量70％乙醇回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ，加入濾液Ⅰ，減壓(0.08Mpa，70～80℃)回收乙醇至無(wú)醇味。
(3)將步驟(2)所得組合物溶液濃縮至相對(duì)密度為1.25～1.30(80℃測(cè))，得稠浸膏，備用。
(4)取聚丙烯酸鈉1份、白陶土0.6份加入甘油5份攪拌均勻，得混合物Ⅰ。
(5)取羧甲基纖維素鈉0.5份加入7倍量水，70℃水浴加熱，不斷攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30 4份，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)明膠2份加入明膠1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏2份，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮0.6份、丙二醇0.6份、揮發(fā)油0.01份、尼泊金乙酯0.02份(少量乙醇溶解)，攪拌均勻，趁熱涂布，切割，包裝。涂布時(shí)保持40～50℃的溫度。
將實(shí)施例1制備得到的貼膏劑進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)如下：
實(shí)驗(yàn)一鎮(zhèn)咳作用試驗(yàn)
1.動(dòng)物：小鼠，雌雄各半，體重18～22g,。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實(shí)施例1方法制備得到)(0.210cm2/20g)。
1.氨水致小鼠咳嗽試驗(yàn)
1.1.分組：小鼠隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組(基質(zhì))，咳必清組(0.013g/kg)、止咳巴布貼膏組(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)三個(gè)劑量組。
1.2.實(shí)驗(yàn)方法：取小鼠隨機(jī)分組，對(duì)照組和貼膏組按組別外貼給藥，每日1次，連續(xù)3天，咳必清組灌胃給藥，各組最后1天給藥后1h，將小鼠置于實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)，向?qū)嶒?yàn)箱內(nèi)噴入25～28％氨水20s，記錄自噴霧起5min內(nèi)小鼠潛伏期和咳嗽次數(shù)。
1.3結(jié)果：止咳巴布貼膏組和陽(yáng)性藥咳必清均能明顯減少氨水致小鼠5min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，與模型對(duì)照組比較差異均有顯著性(P<0.05或P<0.01，見(jiàn)表1)。
表1.止咳巴布貼膏對(duì)氨水噴霧所致小鼠咳嗽的影響
注：與模型組相比較，*P<0.05；**P<0.01
因此，止咳巴布貼膏組能減少氨水致小鼠咳嗽模型的咳嗽次數(shù)，對(duì)咳嗽潛伏期各給藥組均有延長(zhǎng)作用，與模型組比較差異有顯著性。提示該貼膏具有良好的止咳作用。
實(shí)驗(yàn)二化痰作用試驗(yàn)
1.動(dòng)物：小鼠，雌雄各半，體重18～22g。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實(shí)施例1方法制備得到)。
方法與結(jié)果
1.對(duì)小鼠氣管酚紅排痰量的影響：
1.1.分組：小鼠隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組(等容積生理鹽水)，氯化銨組(1.0g/kg)、止咳巴布貼膏組(1.78g/kg)。
1.2.實(shí)驗(yàn)方法：取小鼠隨機(jī)分組，空白對(duì)照組和貼膏組按組別外貼給藥，每日1次，連續(xù)5天，陽(yáng)性氯化銨組灌胃給藥。第5天給藥后1h，腹腔注射5％酚紅(0.1ml/10g體重)，30min后處死小鼠。剪下小鼠自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，振搖，再加入0.1ml1mol/LNaOH，用754分光光度儀(上海)在波長(zhǎng)550nm條件下測(cè)OD值。根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出每鼠的氣管酚紅排出量[1]。
1.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：止咳巴布貼膏組能明顯增加小鼠氣管酚紅排出量，與對(duì)照組比較差異均有顯著性(P<0.05或P<0.01)(見(jiàn)表2)。
表2.止咳巴布貼膏對(duì)小鼠氣管酚紅排痰量的影響
注：與空白對(duì)照組比較*P<0.05；**P<0.01
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，止咳巴布貼膏能增加毛細(xì)管吸取氣管分泌物的液柱長(zhǎng)度。因此提示我們止咳巴布貼膏具有化痰作用，對(duì)改善癥狀有一定的幫助。
實(shí)驗(yàn)三止咳巴布貼膏抗炎作用的試驗(yàn)
1.動(dòng)物：KM小鼠，雌雄各半，體重18～22g。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實(shí)施例1方法制備得到)
方法與結(jié)果
1.止咳巴布貼膏對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響
1.1分組：在實(shí)驗(yàn)室中將小鼠飼養(yǎng)一天以適應(yīng)環(huán)境，然后分籠飼養(yǎng)，隨機(jī)分為以下3組：模型對(duì)照組(基質(zhì))，陽(yáng)性藥消炎痛組(0.01625g/kg)，止咳巴布貼膏組(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)三個(gè)劑量組。
1.2方法：陽(yáng)性藥灌胃給藥，對(duì)照組和貼膏組外貼給藥，灌胃容積均為0.2ml/10g，每日一次，連續(xù)5天。第5天于給藥1h后，將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，每鼠0.08ml，左耳作對(duì)照。1h后處死動(dòng)物，用9mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱(chēng)重。根據(jù)公式計(jì)算小鼠耳廓腫脹率[1]。
腫脹率(100％)＝(右耳重－左耳重)/左耳重×100％[2]
腫脹抑制率％＝(對(duì)照組腫脹率－給藥組腫脹率)/對(duì)照組腫脹率×100％
1.3結(jié)果：止咳巴布貼組和陽(yáng)性藥消炎痛組有明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用，與模型組比較差異都有顯著性(見(jiàn)表3)。
表3.止咳巴布貼膏對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹率的影響
注：與模型組相比較，*P<0.05；**P<0.01。
止咳巴布貼膏組對(duì)小鼠急性炎癥模型均有不同程度的拮抗作用，可以對(duì)抗炎癥早期毛細(xì)血管通透性增加、炎性物質(zhì)滲出及組織水腫，提示該藥對(duì)急性炎癥可能有防治作用。
實(shí)驗(yàn)四止咳巴布貼膏對(duì)免疫功能影響的試驗(yàn)
1.動(dòng)物：清潔級(jí)ICR小鼠，雌雄各半，體重18～22g,
2.藥物：止咳巴布貼膏(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)。
3.溶菌酶檢測(cè)：溶菌酶試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20040113。
溶菌酶含量測(cè)定：
小鼠隨機(jī)分為3組，空白對(duì)照組(基質(zhì))、陽(yáng)性藥左旋咪唑組(0.033g/kg)、止咳巴布貼膏組(0.210cm2/20g)、三個(gè)劑量組。
方法：空白和陽(yáng)性組小鼠灌胃給藥,貼膏組按上述劑量剪相應(yīng)大小的膏藥貼膏給藥，連續(xù)6天。第6天給藥4h后小鼠球后靜脈叢取血，離心析出血清，按溶菌酶試劑盒方法測(cè)定溶菌酶含量:空白管(0.2ml蒸餾水+2ml應(yīng)用菌液)；標(biāo)準(zhǔn)管(0.2ml標(biāo)準(zhǔn)液+2ml應(yīng)用菌液)；測(cè)定管(0.2ml血清+2ml應(yīng)用菌液)。各管混勻,37℃準(zhǔn)確水溶15min,立即取出置于0℃以下的冰水浴中3min,逐管取出,倒入1cm光徑的比色皿,530nm處以蒸餾水調(diào)透光度100比色,測(cè)定各管透光度T15,按以下公式計(jì)算溶菌酶含量:
溶菌酶含量＝(測(cè)定管透光度UT15-空白管透光度OT15)/(標(biāo)準(zhǔn)管透光度ST15-空白管透光度OT15)×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(100ug/ml)
結(jié)果：止咳巴布貼膏組和陽(yáng)性藥物組均能提高正常小鼠血清溶菌酶含量，與對(duì)照組比較差異有顯著性(見(jiàn)表4)。
表4.止咳巴布貼膏對(duì)小鼠血清溶菌酶含量的影響
止咳巴布貼膏給藥組可提高血清溶菌酶含量，與模型組比較差異有顯著性。
實(shí)驗(yàn)五止咳巴布貼膏的解熱作用實(shí)驗(yàn)
動(dòng)物：SD.大鼠，雄性，體重180～200g。藥物：止咳巴布貼膏(中劑量組0.2343g生藥/cm2(1.04cm2/100g，1.23g生藥/kg)
方法與結(jié)果
1.分組：大鼠隨機(jī)分為3組：模型對(duì)照組(貼膏基質(zhì)1.8cm2/100g)，撲熱息痛組(0.09g/kg)，中(1.04cm2/100g)三個(gè)劑量組。
2.實(shí)驗(yàn)方法
鼠于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境適應(yīng)一周，每日用溫度計(jì)從肛門(mén)測(cè)體溫1次，連續(xù)3次選取標(biāo)準(zhǔn)差<±0.3的動(dòng)物供實(shí)驗(yàn)用。將所有實(shí)驗(yàn)大鼠背部皮下注入15％酵母懸液5ml/kg，于致熱后5～6h后測(cè)體溫，將體溫升高≧0.8℃的大鼠隨機(jī)分為5組，分別給藥；陰性對(duì)照組貼基質(zhì)于胸部，陽(yáng)性對(duì)照組給以撲熱息痛0.09g/kg，受試藥物組分別貼上膏藥(胸部)止咳巴布貼膏中(1.04cm2/100g)后，每隔1h測(cè)試大鼠肛門(mén)溫度1次，共6次，將致熱后體溫減去基礎(chǔ)體溫，作為體溫凈增值。
表5.止咳巴布貼膏對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱模型肛溫凈增值的影響
注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05；**P<0.01
貼膏組與模型組相比,肛溫升高比模型組緩慢,有抑制升溫的趨勢(shì)。
實(shí)驗(yàn)六皮膚刺激性試驗(yàn)
一次給藥的皮膚刺激性試驗(yàn)：
新西蘭白兔3只，雌雄不拘，于給受試物前24h將動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛用8％的硫化鈉脫掉(脫毛面積約150cm2)，分為四個(gè)區(qū)：完整皮膚給藥區(qū)、破損皮膚給藥區(qū)、完整皮膚對(duì)照區(qū)、破損皮膚對(duì)照區(qū)，每區(qū)均為體表面積的4％，各區(qū)之間留有適當(dāng)距離。破損皮膚用消毒的7#注射針頭作井字劃痕(局部以酒精消毒)，以滲血為度。次日將受試藥止咳巴布貼膏和基質(zhì)剪成4.5×6.0cm大中小，分別貼于相應(yīng)區(qū)皮膚，然后以二層紗布覆蓋，膠布固定，分籠飼養(yǎng)。24h后揭去藥膏，以溫水洗去殘留受試藥止咳巴布貼膏(0.26g生藥/cm2) 和賦形劑，觀(guān)察1h、24h、48h、72h涂抹部位的皮膚有無(wú)紅斑和水腫等，以及上述變化的恢復(fù)情況和時(shí)間。
多次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)：新西蘭白兔3只，雌雄不拘，動(dòng)物背部脫毛、分區(qū)、受損皮膚制備、給藥量、固定方法及結(jié)果觀(guān)察方法等均同一次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)，僅給藥次數(shù)改為每日換貼1次止咳巴布貼膏(0.26g生藥/cm2)，連續(xù)7天。
結(jié)果一次外貼受試藥后在觀(guān)察的時(shí)間內(nèi)完整皮膚未見(jiàn)紅斑和水腫發(fā)生，破損皮膚有2只家兔在去除藥膏1h局部有輕微紅腫，24h紅腫完全消失，表明該貼膏無(wú)明顯刺激性。連續(xù)7天涂抺受試藥后在觀(guān)察的時(shí)間完整皮膚未見(jiàn)紅斑和水腫發(fā)生；破損皮膚在給藥次日多數(shù)家兔皮膚破損處有輕微紅腫，但第三天紅腫均消失，部分可見(jiàn)破損處皮膚結(jié)痂。
因此，止咳巴布貼膏一次給藥和連續(xù)7天給藥對(duì)家兔完整皮膚無(wú)刺激性，一次給藥和連續(xù)7天給藥對(duì)家兔破損皮膚亦未見(jiàn)明顯刺激性。