本發(fā)明涉及骨化二醇（Calcifediol）作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1（IDO1）的新用途及其在制備治療IDO1介導(dǎo)的疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：吲哚胺2,3-雙加氧酶-1[EC1.13.11.17]（IDO1）是一種在細(xì)胞內(nèi)、單體的含血紅素蛋白質(zhì)，催化l-色氨酸(Trp)分解代謝成犬尿氨酸途徑的第一步。IDO1代謝產(chǎn)物，N-甲酰犬尿氨酸（N-formylkynurenine），進(jìn)一步代謝成其它生物活性分子。IDO1在多個(gè)組織有表達(dá)，包括肺、小腸、胎盤、脾臟及中樞神經(jīng)。IDO1在許多細(xì)胞類型中可由炎性細(xì)胞因子（如干擾素γ、大腸桿菌內(nèi)毒素和腫瘤壞死因子-α等）刺激引起表達(dá)。IDO1也在宿主抗原提呈細(xì)胞(APC)、單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。IDO1已作為免疫抑制和耐受性的一種重要機(jī)制，在自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)中起到重要作用。IDO1通過消耗局部Trp的濃度，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的形成。通過這些機(jī)制，IDO提供反饋控制的免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，如果IDO在卵巢癌、結(jié)直腸癌及其他腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，則腫瘤病人預(yù)后較差，因而它可起到腫瘤治療的預(yù)測(cè)作用。IDO1作為靶點(diǎn)也可以在多種腫瘤中起作用。例如，在卵巢癌、大腸癌和子宮內(nèi)膜腫瘤中，IDO1表達(dá)水平升高。在臨床前的模型中，IDO1通過抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。在這些模型中，小分子抑制劑IDO1可以恢復(fù)腫瘤免疫排斥現(xiàn)象和提高常用化療藥物的活性。這些數(shù)據(jù)支持IDO1抑制劑作為新型抗癌藥物，可與現(xiàn)有療法結(jié)合。除了治療癌癥，IDO1抑制劑對(duì)其他疾病，如膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病、白內(nèi)障也起到作用。這些發(fā)現(xiàn)促使對(duì)IDO抑制劑藥物的開發(fā)興趣，特別是癌癥免疫治療。最廣泛研究的IDO抑制劑是1-甲基-色氨酸。最近的實(shí)驗(yàn)證明，1-甲基-色氨酸可與大量的臨床相關(guān)的化療藥物聯(lián)合使用，起到協(xié)同作用。1-甲基-色氨酸與環(huán)磷酰胺、順鉑、阿霉素或紫杉醇的組合可以治愈neu誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌模型。目前，國(guó)際市場(chǎng)上有幾類IDO1抑制劑在臨床實(shí)驗(yàn)，如新型IDO1抑制劑INCB024360由Incyte公司開發(fā)治療晚期惡性腫瘤。然而，IDO1抑制劑總體上數(shù)量仍較少，并且實(shí)驗(yàn)室或臨床效果仍有待提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明一方面涉及骨化二醇或其藥學(xué)上可接受的鹽作為一種吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑（IDO1）的用途。本發(fā)明另一方面提供骨化二醇或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療IDO1介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。在一些實(shí)施方式中，所述IDO1介導(dǎo)的疾病是指IDO1表達(dá)上調(diào)的疾病，包括但不限于，腫瘤、膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內(nèi)障。在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤選自在卵巢癌、結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜腫瘤。在一些實(shí)施方式中，所述疾病不包括腫瘤。骨化二醇的結(jié)構(gòu)式如下式所示，現(xiàn)有文獻(xiàn)顯示其是人體內(nèi)的維生素D3的活性代謝物，具有治療骨質(zhì)疏松的作用（CN103898004A）。骨化二醇可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)方法制得，一種示例性的制備方法參見Babot,EstebanD.etal,FromChemCatChem,7(2),283-290;2015。本發(fā)明預(yù)期骨化二醇的“藥學(xué)上可接受的鹽”也具有相同的活性。通常，該鹽例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)堿或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在兩者的混合物中制備。通常，非水性介質(zhì)如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，和有機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)鹽如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和鋰鹽；以及有機(jī)堿如乙二胺、乙醇胺、N,N-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿性氨基酸鹽。本發(fā)明證實(shí)了骨化二醇對(duì)于吲哚胺2,3-雙加氧酶-1的抑制作用，對(duì)IDO1在疾病發(fā)生發(fā)展中的促進(jìn)作用進(jìn)行阻礙和/或破壞，從而為治療IDO1介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。具體實(shí)施方式本發(fā)明現(xiàn)將結(jié)合以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡釋，需要說明的是，這些實(shí)驗(yàn)例不應(yīng)解釋為對(duì)本發(fā)明的限制。犬尿氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（200μL）：20μL的0.5M磷酸鉀緩沖液(pH6.5)，終濃度為50mM；20μL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20mM；4μL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10μM；4μL的5mg/ml過氧化氫酶，終濃度為100μg/ml；132μL的dd-H2O；20μL的犬尿氨酸溶液，終濃度分別為0,1,5,7.5,10,25,50,75及100mM。2.加入40μL的1MNaOH溶液后，離心培養(yǎng)基(11,500rpm,4°C,15min)。3.將200μL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測(cè)定熒光強(qiáng)度(λex360nm,λem480nm)。蛋白質(zhì)定量通過BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)IDO1含量。在λmax570nm處測(cè)定溶液吸收值，隨后以牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線（0-2mg/ml）檢查，以獲得蛋白質(zhì)濃度?；钚詫?shí)驗(yàn)1.標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基（200μL）：20μL的0.5M磷酸鉀緩沖液(pH6.5)，終濃度為50mM；20μL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20mM；4μL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為100μg/ml；20μL的2mM左旋色氨酸，終濃度為200μM；112μL的dd-H2O；20μL的IDO1，終濃度為0至10μg/ml。2.對(duì)照：以20μL的dd-H2O替代IDO1。3.加入40μL的1MNaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲?；虬彼崴鉃槿虬彼?。隨后離心培養(yǎng)基(11,500rpm,4°C,15min)。4.將200μL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測(cè)定熒光強(qiáng)度(λex360nm,λem480nm)。抑制試驗(yàn)1.標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基（200μL）：20μL的0.5M磷酸鉀緩沖液(pH6.5)，終濃度為50mM；20μL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20mM；4μL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10μM；4μL的5mg/ml過氧化氫酶，終濃度為100μg/ml；112μL的dd-H2O；10μL的4mM左旋色氨酸，終濃度為200μM；20μL的5μg/mlIDO1和10μl在DMSO中的抑制劑（1-甲基-L-色氨酸）溶液，終濃度分別為0,0.1,0.5和1mM。2.對(duì)照（i）：以10μL的dd-H2O替代L-色氨酸。3.對(duì)照（ii）：以30μL的dd-H2O替代L-色氨酸和IDO1。4.加入40μL的1MNaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲酰基犬尿氨酸水解為犬尿氨酸。隨后離心培養(yǎng)基(11,500rpm,4°C,15min)。5.將200μL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測(cè)定熒光強(qiáng)度(λex360nm,λem480nm)。6.以公式(100-(A/Bx100))計(jì)算抑制率，其中A表示存在抑制劑時(shí)IDO1的活性，B表示不存在抑制劑時(shí)IDO1的活性。結(jié)果見表1。表1.骨化二醇的抑制作用化合物名稱IC50(uM)HillslopeRsquare骨化二醇0.6576-1.0920.9373當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3