發(fā)明背景

本發(fā)明一般性涉及增強(qiáng)、改善或維持認(rèn)知健康和功能的植物提取物，更特別涉及施用含有迷迭香酸的留蘭香(Mentha spicata L.)提取物改善記憶、推理(reasoning)、注意/專注(attention/concentration)、計(jì)劃(planning)以及相關(guān)行為。

對(duì)于可改善認(rèn)知健康或功能的產(chǎn)品具有強(qiáng)烈需求，近年來盡管存在不利的經(jīng)濟(jì)壓力但是這些產(chǎn)品的市場(chǎng)持續(xù)增長(zhǎng)。這種增長(zhǎng)有一些因素是老齡人群的增長(zhǎng)，特別是在亞洲和美國(guó)。世界范圍的認(rèn)知健康產(chǎn)品成分銷售額為大約是4億5千5百萬美元。Frost和Sullivan預(yù)測(cè)在這個(gè)領(lǐng)域2016至2019年的年增長(zhǎng)率為12％。

認(rèn)知健康產(chǎn)品的主要成分目前包括磷脂酰絲氨酸(PS)、CoQ10、Ω-3(海產(chǎn)品油(marine oil)/海藻油)、胞磷膽堿、銀杏和人參。在最大的認(rèn)知健康產(chǎn)品成分中，磷脂酰絲氨酸是FDA許可授權(quán)的唯一成分。隨著支持該授予權(quán)的科學(xué)證據(jù)的增加，該成分的銷售以兩位數(shù)增長(zhǎng)。在2010年，DHA和EPA對(duì)腦功能、心臟健康和視力的健康宣言獲得歐洲EFSA的肯定評(píng)價(jià)。胞磷膽堿作為預(yù)防神經(jīng)元退化及改善記憶的成分被推廣。

迷迭香酸(RA)是在留蘭香中發(fā)現(xiàn)的主要成分之一，由于其抗氧化能力而具有重要作用(Fletcher et al.Heat stress reduces the accumulation of rosmarinic acid and the total antioxidant capacity in spearmint(Mentha spicata L).Journal of the Science of Food and Agriculture 85:2429-2436,2005)。RA，一種天然發(fā)生的酚類化合物，是咖啡酸與3,4-二羥基苯基乳酸的酯。其結(jié)構(gòu)由在兩個(gè)酚環(huán)之間的羰基、不飽和雙鍵及羧酸組成。RA示出一些生物學(xué)活性，如抗炎、抗誘變、抗細(xì)菌、抗抑郁、HIV-1抑制性、抗氧化及抗病毒性質(zhì)。這些性質(zhì)使得RA成為一種用于制藥和化妝品工業(yè)的有吸引力的成分。RA在歐洲已經(jīng)局部用作非類固醇抗炎藥物(Ritschel et al.Percutaneous absorption of rosmarinic acid in the rat.Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 11:345-352,1989)。由于其在食品工業(yè)中廣泛用作芳香劑和防腐劑，因此RA被認(rèn)為是日常攝取安全成分(Alkam et al.A natural scavenger of peroxynitrites,rosmarinic acid,protects against impairment of memory induced by Aβ25-35.Behavioural Brain Research 180:139-145,2007)。

RA的非特異性保護(hù)性質(zhì)的證據(jù)已經(jīng)在腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)。在為年老的小鼠施用RA后證實(shí)腦的改善的抗氧化活性，這導(dǎo)致腦中超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性增加，同時(shí)丙二醛(MDA)降低(Shou et al.Rosmarinic acid attenuates D-galactose induced behavior impairment in mice and its mechanism.2010,p.1723-1726)。這些數(shù)據(jù)證實(shí)RA作為抗氧化劑的非特異性保護(hù)性質(zhì)，然而，沒有先前數(shù)據(jù)證實(shí)RA在特定區(qū)域或在特定臨床結(jié)果影響腦的能力。

在體內(nèi)，三項(xiàng)研究評(píng)估了RA施用。這些研究在顱內(nèi)損傷模型或者在用于表示特定認(rèn)知疾病狀態(tài)的應(yīng)激模型中通過口服或IP施用RA(Alkam et al.A natural scavenger of peroxynitrites,rosmarinic acid,protects against impairment of memory induced by Aβ25-35.Behavioural Brain Research 180:139-145,2007；Park et al.Subchronic administration of rosmarinic acid,a natural prolyl oligopeptidase inhibitor,enhances cognitive performances.Fitoterapia 81:644-648,2010；Zhou et al.Rosmarinic acid attenuates D-galactose induced behavior impairment in mice and its mechanism.Intl Conf BMEI 4:1723-1726,2010)。盡管RA在這些模型中示出益處，但是其不是評(píng)估正常衰老性認(rèn)知改變的經(jīng)驗(yàn)證的模型。此外，仍未知這種作用機(jī)制由于抗氧化作用是否是特異性或非特異性的。目前沒有評(píng)估單獨(dú)或者通過使用留蘭香提取物補(bǔ)充RA的公開的人體研究。

學(xué)習(xí)和記憶可分為兩個(gè)主要類別：陳述性與程序性。陳述性記憶具有暫時(shí)性、空間性和聯(lián)想記憶成分。這涉及具有要求注意和警覺的意識(shí)成分的學(xué)習(xí)和記憶。在人體中，這涉及離散事件、地點(diǎn)、人和事實(shí)的習(xí)得、識(shí)別和記憶。當(dāng)陳述性記憶任務(wù)成為常規(guī)或習(xí)慣時(shí)可以形成程序性學(xué)習(xí)和記憶，在目前的動(dòng)物研究中通過壓板試驗(yàn)(lever press)測(cè)量。這涉及不具有意識(shí)成分的學(xué)習(xí)與記憶，在人體中是習(xí)慣或技能，如騎自行車。程序性任務(wù)被認(rèn)為是自海馬區(qū)起始的，而程序性任務(wù)主要與腦的尾狀核區(qū)域相聯(lián)系。

記憶缺損可發(fā)生在健康個(gè)體、老年個(gè)體，被認(rèn)為是衰老的正常結(jié)果。在老年對(duì)象中(>50歲)，Gallo等報(bào)道了自我報(bào)告記憶缺損發(fā)生率為大約20％(Gallo JJ,Morales KH,Bogner HR,Raue PG,Zee J,Bruce ML,Reynolds CF.Long term effect of depression care management on mortality in older adults:follow-up of cluster randomized clinical trial in primary care.BMJ 2013；346:f2570)。令人感興趣地，在一項(xiàng)服務(wù)年齡在65及以上的2,934個(gè)患者的17個(gè)普通醫(yī)療診所的橫向研究中，這些個(gè)體的23％在提示下自我報(bào)告記憶缺損；然而僅18％(在所述23％中)的人關(guān)于其記憶問題咨詢醫(yī)師(Waldorff FB,Rishoi S,Waldemar G.If you don’t ask(about memory),they probably won’t tell.J Fam Pract 2008；57(1):41-4.)。認(rèn)知減退通常被接受為衰老的自然結(jié)果；然而，其顯著降低生活質(zhì)量(Grossi D,Postiglione A,Schettini B,Trojano L,Barbarulo AM,Guigliano V,Ambron E,Aiello A.Autobiographical recall training in elderly adults with subjective memory complaint:a pilot study.Percept Mot Skills 2007；104(2):621-8)。據(jù)估計(jì)五百四十萬老年美國(guó)人具有無癡呆的認(rèn)知缺損，大約12％的這些個(gè)體將逐年發(fā)展為癡呆(Plassman BL,Langa KM,Fisher GG,Heeringa SG,Weir DR,Ofstedal MB,Burke JR,Hurd MD,Potter GG,Rodgers WL,Steffens DC,Mcardle JJ,Willis RJ,Wallace RB.Prevalence of cognitive impairment without dementia in the United States.Ann Intern Med2008；148(6):427-34)。盡管針對(duì)癡呆可利用許多治療方法，但是這種顯著的健康問題需要探索增加、維持與衰老相關(guān)的認(rèn)知功能或降低該認(rèn)知功能衰退的方法。

傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)長(zhǎng)期使用基于植物的療法治療許多疾病，最近在臨床實(shí)驗(yàn)中對(duì)基于植物的藥物如銀杏(Wesnes KA,Ward T,Mcginty A,Petrini O.The memory enhancing effects of a Ginkgo biloba/Panax ginseng combination in healthy middle-aged volunteers.Psychopharmacology(Berl)2000；152(4):353-61；Snitz BE,O'meara ES,Carlson MC,Arnold AM,Ives DG,Rapp SR,Saxton J,Lopez OL,Dunn LO,Sink KM,Dekosky ST.Ginkgo biloba for preventing cognitive decline in older adults:a randomized trial.JAMA 2009；302(24):2663-70)、人參(Wesnes 2008；Reay JL,Kennedy DO,Scholey AB.Single doses of Panax ginseng(G115)reduce blood glucose levels and improve cognitive performance during sustained mental activity.J Psychopharmacol 2005；19(4):357-65；Kennedy DO,Haskell CF,Robertson B,Reay J,Brewster-Maund C,Luedemann J,Maggini S,Ruf M,Zangara A,Scholey AB.Improved cognitive performance and mental fatigue following a multi-vitamin and mineral supplement with added guarana(Paullinia cupana).Appetite 2008；50(2-3):506-13)以及瓜拉那(Kennedy 2004；Haskell 2007)研究了其在健康志愿者中增強(qiáng)認(rèn)知功能的潛力。近來13個(gè)隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的綜合分析提示草藥相對(duì)于安慰劑提供了小但一致的益處，在癡呆對(duì)象中改善認(rèn)知功能與藥物干預(yù)同樣有效(May BH,Lit M,Xue CC,Yang AW,Zhang AL,Owens MD,Head R,Cobiac L,Li CG,Hugel H,Story DF.Herbal medicine for dementia:a systematic review.Phytother Res 2009；23(4):447-59)。此外，已經(jīng)進(jìn)行一些實(shí)驗(yàn)，提示攝取唇形科(薄荷)植物包括蜜蜂花(lemon balm)(Kennedy DO,Scholey AB,Tildesley NT,Perry EK,Wesnes KA.Modulation of mood and cognitive performance following acute administration of Melissa officinalis(lemon balm).Pharmacol Biochem Behav 2002；72(4):953-64)、薰衣草(Moss M,Cook J,Wesnes K,Duckett P.Aromas of rosemary and lavender essential oils differentially affect cognition and mood in healthy adults.Int J Neurosci 2003；113(1):15-38)、鼠尾草(Tildesley NT,Kennedy DO,Perry EK,Ballard CG,Savelev S,Wesnes KA,Scholey AB.Salvia lavandulaefolia(Spanish sage)enhances memory in healthy young volunteers.Pharmacol Biochem Behav 2003；75(3):669-74；Tildesley NT,Kennedy DO,Perry EK,Ballard CG,Wesnes KA,Scholey AB.Positive modulation of mood and cognitive performance following administration of acute doses of Salvia lavandulaefolia essential oil to healthy young volunteers.Physiol Behav 2005；83(5):699-709；Scholey AB,Tildesley NT,Ballard CG,Wesnes KA,Tasker A,Perry EK,Kennedy DO.An extract of Salvia(sage)with anticholinesterase properties improves memory and attention in healthy older volunteers.Psychopharmacology(Berl)2008；198(1):127-39)及迷迭香(Pengelly A,Snow J,Mills SY,Scholey A,Wesnes K,Butler LR.Short-term study on the effects of rosemary on cognitive function in an elderly population.J Med Food 2012；15(1):10-7)在健康志愿者中可以促進(jìn)認(rèn)知功能。唇形科植物精油中的化合物如薄荷酮、胡椒酮氧化物、樟腦、芳樟醇及多酚可能與廣泛報(bào)道的這些植物提取物的生物學(xué)活性相關(guān)(Mimica-Dukic N,Bozin B,Sokovic M,Mihajlovic B,Matavulj M.Antimicrobial and antioxidant activities of three Mentha species essential oils.Planta Med 2003；69(5):413-9；Hussain AI,Anwar F,Nigam PS,Ashraf M,Gilani AH.Seasonal variation in content,chemical composition and antimicrobial and cytotoxic activities of essential oils from four Mentha species.J Sci Food Agric 2010；90(11):1827-36)。然而，特異性研究留蘭香對(duì)認(rèn)知功能的作用的隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)限于少量研究，提示留蘭香調(diào)味的口香糖在健康志愿者中改善記憶；雖然這證據(jù)是相矛盾的(Baker JR,Bezance JB,Zellaby E,Aggleton JP.Chewing gum can produce context-dependent effects upon memory.Appetite 2004；43(2):207-10；Tucha O,Mecklinger L,Maier K,Hammerl M,Lange KW.Chewing gum differentially affects aspects of attention in healthy subjects.Appetite 2004；42(3):327-9；Miles C,Johnson AJ.Chewing gum and context-dependent memory effects:a reexamination.Appetite 2007；48(2):154-8；Johnson AJ,Miles C.Chewing gum and context-dependent memory:the independent roles of chewing gum and mint flavour.Br J Psychol 2008；99(Pt 2):293-306)。

對(duì)在目前先導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中提議的留蘭香提取物進(jìn)行了功效研究以評(píng)估其在加速衰老的SAMP8小鼠模型中改善學(xué)習(xí)和記憶的潛力(美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?3/962,609，2013年8月8日申請(qǐng)，在此并入?yún)⒖?。給SAMP8小鼠施用留蘭香提取物或載體對(duì)照。此外，50％SAMP8回交品系作為對(duì)照，其也接受載體。在治療90天后，將小鼠在3個(gè)行為測(cè)驗(yàn)中檢測(cè)，包括T-迷宮電擊足底逃避實(shí)驗(yàn)(T-maze foot shock avoidance)、物體識(shí)別和壓板實(shí)驗(yàn)。留蘭香提取物在T-迷宮中改善習(xí)得(在16和32mg活性成分/kg體重)和保持(在所有劑量)。此外，具有迷迭香酸的留蘭香在16和32mg/kg體重改善物體識(shí)別。小鼠的16和32mg活性成分/kg體重的劑量相應(yīng)于人體91-180mg迷迭香酸或者含有大約15％活性成分的600-1200mg留蘭香提取物的等價(jià)劑量。結(jié)果表明來自留蘭香的提取物對(duì)于在SAMP8小鼠中隨著年齡發(fā)生的學(xué)習(xí)和記憶缺陷具有有益作用。

根據(jù)OECD和FDA Redbook 2000指導(dǎo)，在Vanta Biosciences(Chennai,India)對(duì)目前人體臨床先導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中使用的留蘭香提取物進(jìn)行了安全性研究(含有15.4％[w/w]迷迭香酸的留蘭香提取物)。進(jìn)行的研究包括Ames細(xì)菌回復(fù)突變測(cè)定、染色體畸變誘導(dǎo)測(cè)定，及14天和90天口服管飼毒性研究。通過Ames細(xì)菌回復(fù)突變測(cè)定測(cè)量，基因毒性檢測(cè)結(jié)果證實(shí)留蘭香提取物在直至5000μg/平板的濃度無誘變性。此外，留蘭香提取物在直至5000μg/ml的劑量水平未證實(shí)染色體畸變誘導(dǎo)潛力(未致染色體畸變)。

為雄性和雌性Sprague Dawley大鼠每日經(jīng)口服施用14天劑量直至600mg迷迭香酸/kg體重/天的留蘭香提取物是良好耐受的。檢測(cè)到無實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目誘導(dǎo)的副作用。發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)條件下關(guān)于實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的“無觀測(cè)到的副作用水平(NOAEL)”為3896.1mg/kg體重/天的留蘭香提取物。后續(xù)為雄性和雌性Sprague Dawley大鼠通過口服施用90天直至1948mg迷迭香酸/kg體重/天的劑量的留蘭香提取物的90天研究是良好耐受的。發(fā)現(xiàn)在使用的實(shí)驗(yàn)條件和劑量下關(guān)于實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的“未觀測(cè)到副作用水平(NOAEL)”為300mg迷迭香酸/kg體重/天(相應(yīng)于1948.2mg/kg體重/天的留蘭香提取物)。利用100-倍安全因子，這相應(yīng)于19.48mg留蘭香提取物/kg體重/天的等價(jià)劑量或者對(duì)于70kg體重的人而言為1364mg的留蘭香提取物劑量，這高于在目前研究中建議的劑量。

目前，留蘭香在飲料和糖果中廣泛用作添加劑，且在美國(guó)作為天然調(diào)味品/香味劑、精油或天然提取物已經(jīng)通常被認(rèn)為是安全的(FDA 2012a.通常被認(rèn)為是安全的物質(zhì)：精油、油樹脂(無溶劑)及天然提取物(包括蒸餾物).12CRF182.20；FDA 2012b.通常為認(rèn)為是安全的物質(zhì)：香料及其它天然調(diào)味品和香味劑.12CRF182.10)。然而，當(dāng)以高于典型作為香味劑或調(diào)味品攝取的劑量攝取時(shí)，留蘭香在人體中的安全性和耐受性尚未評(píng)估。因此，這項(xiàng)先導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的目的是評(píng)估攝取900mg留蘭香提取物的安全性和耐受性，以及在自我報(bào)告記憶缺損的健康男性和女性中對(duì)認(rèn)知功能的作用。

發(fā)明概述

本發(fā)明包括施用含有迷迭香酸的植物提取物以改善記憶、推理、注意/專注、計(jì)劃和認(rèn)知相關(guān)行為(即集中注意、警覺、探究、動(dòng)機(jī)等)。具有迷迭香酸的留蘭香提取物示出在自我報(bào)告記憶缺損(急性或慢性)的人中改善記憶、推理、注意/專注和計(jì)劃行為。

氧化損傷被認(rèn)為是衰老過程的標(biāo)志之一。在與衰老相關(guān)的認(rèn)知缺損中存在的神經(jīng)元功能障礙被認(rèn)為大部分是由于氧化應(yīng)激所致。在認(rèn)知障礙如阿爾茲海默病中存在線粒體結(jié)構(gòu)和功能損傷，提示滲透細(xì)胞和線粒體的抗氧化劑將提供針對(duì)氧化應(yīng)激的最大保護(hù)作用。目前的研究設(shè)計(jì)為檢測(cè)一種新的專利的基于抗氧化劑成分的迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)化的留蘭香提取物在自我報(bào)告記憶缺損人體中是否可以改善。

留蘭香提取物標(biāo)準(zhǔn)化為含有15％迷迭香酸(最小13％)。將此提取物以兩個(gè)450mg膠囊形式給每個(gè)對(duì)象施用以提供900mg/天留蘭香提取物(135mg迷迭香酸)。在本申請(qǐng)中使用的留蘭香提取物可商購(gòu)自Kemin Industries,Inc.(Des Moines,Iowa)及包含在商業(yè)產(chǎn)品FORTRA^TM Dry和Neumentix^TM Phenolic Complex K110-42中。在第0天施用前及在施用后2小時(shí)和4小時(shí)(急性評(píng)估)以及實(shí)驗(yàn)最后一天即第30天施用前和施用后2小時(shí)和4小時(shí)(慢性評(píng)估)評(píng)估對(duì)象?；卮鹬饔^整體改善問卷，對(duì)象報(bào)告在30天后主觀改善。對(duì)于三個(gè)可能的組任一組的分析，在30天期間平均個(gè)體或復(fù)合胃腸耐受性評(píng)分無顯著差異。

使用多種認(rèn)可的記憶、推理、注意/專注和計(jì)劃的測(cè)試評(píng)估對(duì)象?；诩毙栽u(píng)估，對(duì)象組，調(diào)整意向治療和符合方案的(both modified intent to treat and per protocol)二者均示出在推理、注意和計(jì)劃方面顯著改善(p<0.1)，基于慢性評(píng)估，調(diào)整意向治療和符合方案的二者均示出記憶、推理、專注和計(jì)劃的顯著改善(p<0.1)。

目前的結(jié)果表明留蘭香提取物(迷迭香酸)在人體中對(duì)于記憶、推理、注意/專注和計(jì)劃具有有益作用，無副作用。

附圖簡(jiǎn)述

圖1表示用于獲得報(bào)告數(shù)據(jù)的非盲(open-label)臨床實(shí)驗(yàn)略圖。

圖2是留蘭香提取物補(bǔ)充在基線和30天結(jié)束時(shí)認(rèn)知功能評(píng)分圖表。

發(fā)明描述

本發(fā)明研究設(shè)計(jì)為檢測(cè)留蘭香提取物(具有RA)在自我報(bào)告記憶缺損的人類對(duì)象中是否可以改善記憶、推理、注意/專注和計(jì)劃。監(jiān)測(cè)不利事件并在研究結(jié)束時(shí)進(jìn)行血液分析。

并入美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2/050,523(2014年9月15日申請(qǐng))、13/962,609(2013年8月13日申請(qǐng))、13/367,863(2012年2月7日申請(qǐng))及13/367,888(2012年2月2日申請(qǐng))的全部?jī)?nèi)容作參考。

定義

如在本申請(qǐng)中所用，如下術(shù)語(yǔ)具有所示含義：

認(rèn)知健康：認(rèn)知健康是指總體腦、組織和血液供應(yīng)的健康以及其在各種條件下適當(dāng)發(fā)揮功能的能力。良好的認(rèn)知健康對(duì)于腦以最佳表現(xiàn)進(jìn)行所有意識(shí)過程是至關(guān)重要的；這些過程統(tǒng)稱為認(rèn)知，包括但不限于學(xué)習(xí)、直覺、判斷、語(yǔ)言、注意、警覺、集中注意(focus)和記憶(長(zhǎng)期和短期記憶)。由于衰老、疾病和/或其它認(rèn)知損害導(dǎo)致的不良認(rèn)知健康降低腦適當(dāng)發(fā)揮功能的能力，導(dǎo)致認(rèn)知功能和性能顯著衰退。

認(rèn)知功能：包含的神經(jīng)學(xué)或符號(hào)運(yùn)算的任何精神或智力過程，包括但不限于溝通、知覺、理解、推理、記憶、思考、意識(shí)、集中注意、注意、警覺、動(dòng)機(jī)、下結(jié)論、執(zhí)行功能、產(chǎn)生意象及判斷能力。在動(dòng)物模型系統(tǒng)中，認(rèn)知功能可以本領(lǐng)域已知的各種常規(guī)方式測(cè)量，包括使用Morris水迷宮(MWM)、Barnes環(huán)形迷宮、高架放射臂迷宮、T-迷宮或者任何動(dòng)物使用空間信息的其它迷宮。本領(lǐng)域已知的其它檢測(cè)也可用于評(píng)定認(rèn)知功能，如新物體識(shí)別和氣味識(shí)別任務(wù)。

執(zhí)行功能：調(diào)節(jié)、控制和處理其它認(rèn)知過程的認(rèn)知過程，如計(jì)劃、工作記憶、注意、問題解決、語(yǔ)言推理、數(shù)學(xué)能力、抑制、心理靈活性、任務(wù)轉(zhuǎn)換、起始、靈活性、視覺注意、算術(shù)技能、對(duì)新的及改變的環(huán)境的適應(yīng)性以及行為監(jiān)視。

學(xué)習(xí)：獲得知識(shí)或技能的行為、過程或經(jīng)驗(yàn)，特別是通過經(jīng)驗(yàn)或條件的心理或行為修正。

記憶：得自貯存在個(gè)人意識(shí)中的過去的學(xué)習(xí)或經(jīng)驗(yàn)的信息集合。一個(gè)信息片段，如經(jīng)驗(yàn)的意識(shí)圖像，貯存在記憶中。記住過去的經(jīng)驗(yàn)或?qū)W習(xí)的信息的能力，包括高級(jí)的意識(shí)過程如學(xué)習(xí)、保留、回憶和識(shí)別以及得自在一些不同的腦部區(qū)域包括海馬中神經(jīng)元之間的化學(xué)改變。包括：(1)陳述學(xué)習(xí)或記憶，這是指可以自覺地回憶如事實(shí)或知識(shí)，(2)工作記憶，這是指主動(dòng)操縱可操縱的意識(shí)中的多個(gè)瞬時(shí)信息片段，(3)參考記憶，這是指得自先前的(最近或遙遠(yuǎn)的)經(jīng)驗(yàn)的信息，(4)識(shí)別記憶，這是識(shí)別先前遇到的事件、物體或人的能力，及(5)聯(lián)想記憶，這是學(xué)習(xí)和記住不相關(guān)項(xiàng)目之間關(guān)系的能力。這些記憶均具有即時(shí)、短期和長(zhǎng)期成分。即時(shí)記憶僅持續(xù)幾秒鐘。短期記憶貯存已經(jīng)最低限度加工的信息，且只可持續(xù)幾分鐘，如記住電話號(hào)碼只夠使用其的時(shí)間長(zhǎng)度。只有當(dāng)重復(fù)使用該信息促進(jìn)神經(jīng)化學(xué)改變使其保留時(shí)，短期記憶被轉(zhuǎn)移至長(zhǎng)期記憶，其可持續(xù)多年。

治療有效量：本發(fā)明的化合物或其組合物或衍生物當(dāng)給對(duì)象施用時(shí)具有指定治療作用的量。通過施用一次劑量不必需發(fā)生全部治療作用，可以只在施用一系列劑量之后發(fā)生。因此，治療有效量可以在一或多次施用中施用。為對(duì)象所需的精確的有效量依賴于例如對(duì)象的大小、健康和年齡、認(rèn)知缺損的性質(zhì)和程度，以及選擇用于施用的治療劑或治療劑組合，以及施用模式。技術(shù)人員可通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)易于確定指定情境的有效量。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種如本文所述的唇形科植物提取物如RA以每日一次頻率或者一日多次如每日2、3或4次施用。

治療：嘗試改變被治療的個(gè)體、動(dòng)物或細(xì)胞的自然進(jìn)程的臨床干預(yù)，可以預(yù)防性或者在臨床病理學(xué)進(jìn)程期間進(jìn)行。希望的作用包括預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)，減輕癥狀，或者減小疾病的任何直接或間接的病理學(xué)結(jié)果，降低疾病進(jìn)展速度，改善或緩和疾病狀態(tài)，以及緩解或改善預(yù)后。條件或?qū)ο笫侵覆扇〔襟E以獲得有益的或希望的結(jié)果，包括臨床結(jié)果。有益的或希望的臨床結(jié)果包括但不限于增強(qiáng)、改善或維持認(rèn)知健康和/或功能，減輕或改善與輕度認(rèn)知損傷或年齡相關(guān)認(rèn)知損傷相關(guān)的一或多個(gè)癥狀，延緩或減慢這種損傷，減輕、緩和或穩(wěn)定這種損傷，及其它有益結(jié)果，如在年齡相關(guān)認(rèn)知損傷或處于該危險(xiǎn)中的對(duì)象中改善認(rèn)知功能或者降低認(rèn)知功能衰退速度。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些術(shù)語(yǔ)包括預(yù)防或治療認(rèn)知障礙如閱讀障礙、失用癥、注意力缺陷多動(dòng)癥、注意力缺陷自閉癥、阿爾茲海默病、帕金森癥或者中風(fēng)，或者其它執(zhí)行功能障礙。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，迷迭香酸的劑量范圍是9mg/天至7,000mg/天及在這個(gè)限度之間的所有數(shù)值，包括例如(沒有限制或例外)10、10.4、13.2、21.7、33.6、48.9、137.7、433.2、913.2、1254.6、3555.3、5021.3和6990.9mg/天。換句話說，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，劑量可以采用任何值“abcd”mg/天，其中a選自數(shù)字0、1、2、3、4、5、6和7，b、c和d單獨(dú)地選自數(shù)字0、1、2、3、4、5、6、7、8和9，除外的是如果a、b和c均是0，d不能低于9。

在本文中使用的范圍的情況下，僅描述范圍的終點(diǎn)以避免冗長(zhǎng)描述及描述在此范圍內(nèi)包含的每個(gè)和全部數(shù)值?？梢赃x擇在列舉的終點(diǎn)之間的任何合適的中間值和范圍。例如，如果引用范圍在0.1-1.0之間，包括所有中間值(例如0.2、0.3.6.3、0.815等)及所有中間范圍(例如0.2-0.5、0.54-0.913等)。

實(shí)施例1

氧化損傷被認(rèn)為是衰老過程的標(biāo)志之一[Harman D(2002)Alzheimer’s disease:role of aging in pathogenesis.Ann N Y Acad Sci.959,384-395]。與衰老相關(guān)的疾病如阿爾茲海默病中存在的神經(jīng)元功能障礙被認(rèn)為大部分是氧化應(yīng)激所致[Markesbery WR(1997)Oxidative stress hypothesis in Alzheimer’s disease.Free Radic Biol Med.23,134-147；Polidori MC,Griffiths HR,Mariani E,Mecocci P(2007)Hallmarks of protein oxidative damage in neurodegenerative diseases:focus on Alzheimer’s disease.Amino Acids.32,553-559]。在阿爾茲海默病中存在線粒體的結(jié)構(gòu)和功能的雙重?fù)p傷提示易于滲透細(xì)胞和線粒體的抗氧化劑將提供針對(duì)氧化應(yīng)激最大的保護(hù)作用[Skulachev VP,Anisimov VN,Antonenko YN,Bakeeva LE,Chernyak BV,Erichev VP,Filendo OF,Kalinia NI,Kapelko VI,Kolosova NG,Kopin BP,Korshunova GA,Lichinitser MR,Obukhova LA,Pasyukova EG,Pisarenko OI,Roginsky VA,Ruuge EK,Senin II,Severina II,Skulachev MV,Spivak IM,Tashlitsky VN,Tkachuk VA,Vyssokikh MY,Yaguzhinsky LS,Zorov DB(2009)An attempt to prevent senescence:a mitochondrial approach.Biochim Biophys Acta.1787,437-461；Suh JH,Shigeno ET,Morrow JD,Cox B,Rocha AE,Frei B,Hagen TM(2001)Oxidative stress in the aging rat heart is reversed by dietary supplementation with(R)-(alpha)-lipoic acid.FASEB J.15,700-706]。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)迷迭香酸(RA)針對(duì)氧化應(yīng)激具有神經(jīng)保護(hù)性和預(yù)防性作用[Fadel O,El Kirat K,Morandat S(2011)The natural antioxidant rosmarinic acid spontaneously penetrates membranes to inhibit lipid peroxidantion in situ.Biochim Biophys Acta 1808,2973-2980；Fallarini S,Miglio G,Paoletti T,Minassi A,Amoruso A,Bardelli C,Brunelleschi S,Lombardi G(2009)Clovamide and rosmarinic acid induce neuroprotective effects in invitro models of neuronal death.Br J Pharmacol 157,1072-1084。針對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥的保護(hù)作用于衰老疾病中改善的記憶相關(guān)[Farr,et al.,2012]。迷迭香酸改善了Morris水迷宮空間任務(wù)中的記憶[Park DH,Park SJ,Kim JM,Jung WY,Ryu JH(2010)Subchronic administration of rosmarinic acid,a natural prolyl oligopeptidase inhibitor,enhances cognitive performance.Fitoterapia 81,644-648]。

記憶分為兩種主要類別，陳述性記憶(或外顯記憶)和程序性記憶(或內(nèi)隱記憶)。陳述性記憶進(jìn)一步分為語(yǔ)義記憶(事實(shí)或含義)和情景記憶(特定經(jīng)歷)。語(yǔ)義記憶通常得自情景記憶。陳述性記憶被認(rèn)為是由海馬編碼的，而程序性記憶被認(rèn)為是由紋狀體內(nèi)的尾狀核結(jié)構(gòu)編碼的。程序性記憶或內(nèi)隱記憶來自學(xué)習(xí)應(yīng)答與獎(jiǎng)勵(lì)之間的關(guān)聯(lián)。程序性記憶通常以陳述性記憶開始直至其成為根深蒂固或習(xí)慣。

材料和方法

對(duì)象

在治療開始時(shí)，實(shí)驗(yàn)對(duì)象是11個(gè)自我報(bào)告記憶缺損的50-70歲男性和女性。合格的參與者是73％女性和27％男性，平均年齡和體重指數(shù)(BMI)分別為58.7歲和27.4kg/m²。在Biofortis Clinical Research,Addison,IL進(jìn)行這些研究。

研究設(shè)計(jì)

非盲研究包括一項(xiàng)電話篩選(TS；附件1–參考在美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/933,583中描述的那些附件，所述專利在此以其全部?jī)?nèi)容并入?yún)⒖?；一項(xiàng)篩選訪問(訪問1a/b；第-7天)；一項(xiàng)基線訪問(訪問2；第0天)；及一項(xiàng)測(cè)試訪問(訪問3；第30天)。所有臨床訪問均具有±3天窗口期。在TS(附件1)，給予紙質(zhì)記憶障礙調(diào)查問卷(MAC-Q；Crook 1992；附件3)以評(píng)估自我報(bào)告記憶缺損。合格的對(duì)象(MAC-Q評(píng)分≥25；Dunbar 2007)進(jìn)入臨床(訪問1a，第-7天)，空腹(在開始抽血前10-14小時(shí)，僅飲水)，提供知情同意書并給予紙質(zhì)簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(MMSE；Folstein 1975,Mitrushina 1991)。合格對(duì)象(MMSE評(píng)分≥24；Dunbar 2007)繼續(xù)進(jìn)行訪問1b(第-7天)，經(jīng)歷其余的篩選訪問程序，包括評(píng)估用藥史、納入和排除標(biāo)準(zhǔn)、之前和現(xiàn)有的藥物/補(bǔ)劑使用情況、身高、體重及生命體征。如果對(duì)象正常服用降壓藥，該藥物應(yīng)在抽血之前在診所服用。在施用降壓藥之后至少30分鐘評(píng)估生命體征。在早晨收集空腹(10-14小時(shí)，僅飲水)血樣，進(jìn)行化學(xué)、血液學(xué)和脂質(zhì)分析，樣品備份以進(jìn)行可能的進(jìn)一步非遺傳性代謝指征分析。小于60歲的女性對(duì)象在臨床進(jìn)行尿妊娠檢測(cè)。對(duì)象進(jìn)行至少兩次計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試組合，每次～1小時(shí)，間隔≥1小時(shí)，以進(jìn)行訓(xùn)練。允許最多四次測(cè)試組合，以在基線訪問(訪問2，第0天；附件5)時(shí)在第一次計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試之前保證對(duì)象熟悉測(cè)試程序及保證最佳性能水平(Owen 2010；附件5和6；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/933,583圖2-4)。提供書面研究說明[在每次測(cè)試訪問之前和期間(訪問2和3；第0和30天)遵守禁食(10-14小時(shí)，僅飲水)；避免劇烈身體運(yùn)動(dòng)(24小時(shí))，避免攝取酒精飲料(24小時(shí))，避免咖啡因攝取(10-14小時(shí))和使用煙草(1小時(shí))，及維持習(xí)慣飲食(包括攝取咖啡因和酒精)、身體活動(dòng)模式、睡眠時(shí)間以及服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑]。此外，如果對(duì)象正常服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑，建議對(duì)象保持在每次測(cè)試訪問(訪問2和3；第0和30天)之前的晚上一致服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑。在離開診所之前要求對(duì)象按期進(jìn)行訪問2(第0天)。

11個(gè)合格對(duì)象登記為900mg留蘭香提取物組，隨后給予紙質(zhì)胃腸道(GI)耐受性問卷(附件8)及第一次計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試t＝-1.0小時(shí)±5分鐘，其中t＝0小時(shí)是研究產(chǎn)品攝取時(shí)間。在t＝0小時(shí)，給對(duì)象施用所述研究產(chǎn)品，隨后立即給予標(biāo)準(zhǔn)早餐食物。對(duì)象在15分鐘內(nèi)攝入全部食物。在訪問3(第30天)重復(fù)這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)早餐食物/量(即提供在第0天訪問2的早餐的精確食物/量)。在完成標(biāo)準(zhǔn)早餐食物之后，為對(duì)象提供標(biāo)準(zhǔn)量的水。在整個(gè)測(cè)試訪問期間允許對(duì)象任意飲水，除了正在進(jìn)行計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試時(shí)。記錄實(shí)際的水?dāng)z入量。

結(jié)果變量主要結(jié)果變量

聯(lián)合主要結(jié)果變量是估計(jì)從基線(訪問2，第0天)至治療結(jié)束時(shí)(訪問3，第30天)得自胃腸道(GI)耐受性問卷的胃腸道(GI)耐受性合成分?jǐn)?shù)的變化(惡心，脹氣/腹脹，胃腸脹氣，GI痙攣，便秘，及腹瀉/稀便)及評(píng)估在治療結(jié)束時(shí)(訪問3，第30天)獲得的整體SGI合成分?jǐn)?shù)(主觀認(rèn)知評(píng)估)。

次要結(jié)果變量

次要結(jié)果變量包括：(a)個(gè)體GI耐受性問卷評(píng)分從基線至治療結(jié)束(第30天)時(shí)的變化(惡心，脹氣/腹脹，胃腸脹氣，GI痙攣，及腹瀉/稀便)；及(b)急性(從t＝-1至t＝2.25和4.0小時(shí)的差異)和(c)慢性(從訪問2第0天至訪問3第30天的差異)認(rèn)知功能個(gè)體測(cè)試得分變化[原始和表現(xiàn)(performance)(百分率)評(píng)級(jí)]，使用可公開獲得的計(jì)算機(jī)認(rèn)知評(píng)估工具，由Medical Research Council Cognition and Brain Sciences Unit設(shè)計(jì)和驗(yàn)證(Owen 2010；cambridgebrainsciences.com)，包括記憶：數(shù)字廣度和成對(duì)關(guān)聯(lián)，推理：Double Trouble and Odd One Out，注意/專注(旋轉(zhuǎn)和多邊形)和計(jì)劃(空間搜索和空間滑塊)。在治療結(jié)束時(shí)獲取個(gè)體關(guān)于記憶、注意和思考速度的SGI評(píng)分(訪問3，第30天)。

安全性和耐受性測(cè)量

安全性和耐受性通過評(píng)估治療-突發(fā)性不利事件(AE)、體重、生命體征和臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)改變而評(píng)定。

分析

在數(shù)據(jù)庫(kù)鎖定之前產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)劃并許可。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均使用針對(duì)Windows的SAS進(jìn)行(Cary,NC)。安全性人群包括登記進(jìn)入研究并攝入至少一劑研究產(chǎn)品的所有對(duì)象。修改的意向治療(MITT)人群包含安全性人群中包含的所有對(duì)象，其提供在治療期間的至少一次治療期結(jié)果數(shù)據(jù)點(diǎn)。此外，符合方案(PP)群體由MITT群的子集組成。由于如下原因?qū)?duì)象從PP群中排除：違反可影響反應(yīng)評(píng)估的納入或排除標(biāo)準(zhǔn)；不遵守方案的對(duì)象，包括但不限于失約、攝入低于80％或高于120％的研究產(chǎn)品，在任何測(cè)試訪問(訪問2和3，第0天和30天)時(shí)總體上不能攝入研究產(chǎn)品，及在研究期間使用被禁止的藥物或認(rèn)為改變結(jié)果變量的任何產(chǎn)品。

除非特別指出，所有的顯著性測(cè)試均在α<0.1，雙側(cè)進(jìn)行。使用配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)，根據(jù)情況檢驗(yàn)所述變化是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目的是獲得在研究終點(diǎn)關(guān)于平均數(shù)/中位數(shù)和變異性信息。

安全性通過由對(duì)象在全部治療期臨床訪問報(bào)告的AE以及生命體征測(cè)量、實(shí)驗(yàn)室數(shù)值及體重的變化而評(píng)定。AE由世界衛(wèi)生組織(WHO)詞典編碼。估算缺失數(shù)據(jù)及僅將觀測(cè)到的數(shù)據(jù)包含在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中。

樣本大小.

11個(gè)對(duì)象樣本登記在本研究中。

研究設(shè)計(jì)和程序

本研究設(shè)計(jì)的示意圖在圖1中示出。

這項(xiàng)非盲研究包括一項(xiàng)電話篩選(TS；附件1)；一項(xiàng)篩選訪問(訪問1a/b；第-7天)；一項(xiàng)基線訪問(訪問2；第0天)；及一項(xiàng)測(cè)試訪問(訪問3；第30天)。所有臨床訪問均有±3天窗口期。在TS，給予紙質(zhì)記憶障礙調(diào)查問卷(MAC-Q；Crook 1992；附件3)以評(píng)估自我報(bào)告記憶缺損。合格的對(duì)象(MAC-Q評(píng)分≥25；Dunbar 2007)進(jìn)入臨床(訪問1a，第-7天)，空腹(在開始抽血前10-14小時(shí)，僅飲水)，提供知情同意書并給予紙質(zhì)簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(MMSE；Folstein 1975,Mitrushina 1991)。合格對(duì)象(MMSE評(píng)分≥24；Dunbar 2007)繼續(xù)進(jìn)行訪問1b(第-7天)，經(jīng)歷剩余的篩選訪問程序，包括評(píng)估用藥史、納入和排除標(biāo)準(zhǔn)、之前和目前的藥物/補(bǔ)劑使用情況、身高、體重和生命體征。如果對(duì)象正常服用降壓藥，在抽血之前應(yīng)在診所服用該藥。生命體征在施用降壓藥后至少30分鐘評(píng)估。在早晨收集空腹(10-14小時(shí)，僅飲水)血樣進(jìn)行化學(xué)、血液學(xué)和脂質(zhì)分析，樣品備份貯存以進(jìn)行可能的進(jìn)一步分析非遺傳性代謝指征。小于60歲的女性對(duì)象在臨床進(jìn)行尿妊娠檢測(cè)。對(duì)象進(jìn)行至少兩次實(shí)踐計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試組合，每次～1小時(shí)，間隔≥1小時(shí)，以進(jìn)行訓(xùn)練。允許進(jìn)行最多四次測(cè)試組合，以保證對(duì)象熟悉測(cè)試程序及在基線訪問(訪問2，第0天；附件5)時(shí)在第一次計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試(Owen 2010)之前保證最佳性能水平。提供書面研究說明書[在每次測(cè)試訪問之前和期間(訪問2和3；第0和30天)遵守禁食(10-14小時(shí)，僅飲水)；避免劇烈身體運(yùn)動(dòng)(24小時(shí))，避免攝取酒精飲料(24小時(shí))，避免咖啡因攝取(10-14小時(shí))和使用煙草(1小時(shí))，及維持習(xí)慣飲食(包括攝取咖啡因和酒精)、身體活動(dòng)模式、睡眠時(shí)間以及服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑]。如果對(duì)象的夜間平均睡眠時(shí)間存在大于±2小時(shí)的偏差(根據(jù)篩選訪問報(bào)告)，測(cè)試訪問可改期。此外，如果對(duì)象正常服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑，建議對(duì)象保持在每次測(cè)試訪問(訪問2和3；第0和30天)之前的晚上一致服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑。在離開診所之前，要求對(duì)象按期進(jìn)行訪問2(第0天)。

在訪問2(第0±3天)，合格對(duì)象空腹到達(dá)診所(10-14小時(shí)，僅飲水，固定時(shí)間為06:00-09:30期間的t＝-1.25小時(shí)時(shí)間點(diǎn)。在臨床訪問程序之后(即評(píng)估納入和排除標(biāo)準(zhǔn)、相伴的藥物/補(bǔ)劑使用情況、體重和生命指征)，詢問對(duì)象遵守前述研究說明書的情況。評(píng)估不利事件(AE)，詢問睡眠時(shí)間，以評(píng)估對(duì)象的夜間平均睡眠時(shí)間是否具有超過±2小時(shí)偏差，根據(jù)篩選訪問報(bào)告(訪問1b；第-7天)。如果在訪問2(第0天)之前那天對(duì)象沒有100％遵守研究說明書，建議對(duì)象需要適當(dāng)遵守剩余的測(cè)試訪問及測(cè)試訪問可以改期。如果對(duì)象在早晨正常服用降壓藥，在生命體征檢測(cè)之前30分鐘在臨床服用該藥物。合格對(duì)象登記為900mg留蘭香提取物組，隨后給予紙質(zhì)胃腸道(GI)耐受性問卷(附件8)及在t＝-1.0小時(shí)±5分鐘進(jìn)行第一次計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試(附件5)，其中t＝0小時(shí)是攝入研究產(chǎn)品的時(shí)間。在t＝0小時(shí)，給對(duì)象施用研究產(chǎn)品，隨后立即給予標(biāo)準(zhǔn)早餐食物(附件7)。對(duì)象在15分鐘內(nèi)攝入全部食物。在訪問3(第30天)重復(fù)該標(biāo)準(zhǔn)早餐食物/量(即提供在訪問2第0天早餐的精確食物/量。在完成標(biāo)準(zhǔn)早餐食物攝入后，為對(duì)象提供標(biāo)準(zhǔn)量的水。允許對(duì)象在整個(gè)測(cè)試訪問期間隨意飲水，除了當(dāng)在進(jìn)行計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試時(shí)。記錄實(shí)際的水?dāng)z入量。

在t＝2.25和4.0小時(shí)±5分鐘，其中t＝0小時(shí)是攝入研究產(chǎn)品時(shí)間，給予計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試(Owen 2010；附件5和6)。在t＝4小時(shí)±5分鐘認(rèn)知功能測(cè)試后，評(píng)估AE，及提供書面研究說明書[在隨后的訪問之前和期間(訪問3；第30天)遵守禁食(10-14小時(shí)，僅飲水)；避免劇烈身體運(yùn)動(dòng)(24小時(shí))，避免攝取酒精飲料(24小時(shí))，避免咖啡因攝取(10-14小時(shí))和使用煙草(1小時(shí))，及維持習(xí)慣飲食(包括攝取咖啡因和酒精)、身體活動(dòng)模式、睡眠時(shí)間以及服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑]。如果對(duì)象夜間平均睡眠時(shí)間有高于±2小時(shí)的偏差，測(cè)試訪問改期。此外，如果對(duì)象在訪問2(第0天)之前服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑，建議對(duì)象在訪問3(第30天)前夜間保持一致服用。

為對(duì)象分發(fā)具有說明書的研究產(chǎn)品瓶(從其中給予早晨服用劑量)，在早餐時(shí)服用兩粒膠囊/天直至下一次訪問(訪問3，第30天)。也指導(dǎo)對(duì)象在每日研究日記(附件11)中記錄研究產(chǎn)品攝入和睡眠時(shí)間，并提供一藥丸盒以幫助每天遵守執(zhí)行。此外，提醒對(duì)象在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間每周通過電話聯(lián)系以保證遵守研究產(chǎn)品、研究說明書，及評(píng)估每日行為習(xí)慣的任何AE和/或改變(即藥物/補(bǔ)劑、飲食、睡眠，和/或鍛煉)。如果在隨后測(cè)試訪問的3天內(nèi)錯(cuò)過服用研究產(chǎn)品劑量，則改期進(jìn)行測(cè)試訪問。

在訪問3(第30±3天)，對(duì)象在06:00-09:30時(shí)間到達(dá)診所。在t＝-1.25小時(shí)±5分鐘收集空腹(10-14小時(shí)，僅飲水)血樣，以進(jìn)行化學(xué)、血液學(xué)和脂質(zhì)分析。如果對(duì)象在早晨正常服用藥物，該藥物在生命體征測(cè)量之前30分鐘在診所服用。進(jìn)行臨床訪問程序(即評(píng)估納入和排除標(biāo)準(zhǔn)、相伴藥物/補(bǔ)劑使用情況、體重和生命體征)，詢問對(duì)象的研究說明書遵守情況及評(píng)估AE。收集研究產(chǎn)品和研究日記(附件11)，并確定遵守情況。在t＝-1.0小時(shí)±5分鐘給予紙質(zhì)GI耐受性問卷、紙質(zhì)對(duì)象整體改善問卷(SGI；Dunbar 2011,Lieberman 2013；附件8和9)及計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試(Owen 2011；附件5和6)，其中t＝0是研究產(chǎn)品攝入時(shí)間。在t＝0小時(shí)，給對(duì)象施用指定的研究產(chǎn)品，隨后立即給予標(biāo)準(zhǔn)早餐食物(提供在訪問2第0天的食物/量)。對(duì)象在15分鐘內(nèi)攝入全部食物，包括研究產(chǎn)品。在訪問3(第30天)的研究產(chǎn)品和標(biāo)準(zhǔn)早餐食物是在訪問2(第0天)確定的t＝0小時(shí)的±30分鐘內(nèi)給予。在t＝2.25和4.0小時(shí)±5分鐘，其中t＝0小時(shí)是研究產(chǎn)品攝入時(shí)間，進(jìn)行計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試(Owen 2010；附件5和6)。在完成標(biāo)準(zhǔn)早餐食物后為對(duì)象提供標(biāo)準(zhǔn)量的水。允許對(duì)象在整個(gè)測(cè)試訪問期間隨意飲水，除了正在進(jìn)行計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試時(shí)。記錄實(shí)際水?dāng)z入量。在t＝4.0小時(shí)±5分鐘認(rèn)知測(cè)試之后，評(píng)估AE。

研究樣本

每個(gè)對(duì)象均需要符合在基線所有如下納入標(biāo)準(zhǔn)及無一排除標(biāo)準(zhǔn)以參與這項(xiàng)研究。

納入標(biāo)準(zhǔn)

1.對(duì)象是男性或女性，年齡為50-70歲，包括50和70歲；

2.對(duì)象符合基于MAC-Q(評(píng)分≥25；Crook 1992)自我報(bào)告記憶缺損的標(biāo)準(zhǔn)；

3.在訪問1b(第-7天)時(shí)對(duì)象體重指數(shù)(BMI)為18.5-35.0kg/m²，包括端點(diǎn)；

4.對(duì)象具有至少高中畢業(yè)或同等學(xué)歷；

5.在研究期間對(duì)象愿意保持習(xí)慣飲食(包括咖啡因和酒精)和身體活動(dòng)模式，除了在每次測(cè)試(訪問2和3，第0和30天)之前24小時(shí)；

6.對(duì)象無阻止其實(shí)現(xiàn)研究要求的健康問題，由研究人員基于病史和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果判斷；

7.在測(cè)試訪問之前至少1小時(shí)及整個(gè)期間[訪問2和3(第0和30天)直至7小時(shí)]對(duì)象愿意舒適地戒除煙草制品；

8.對(duì)象愿意在測(cè)試訪問時(shí)(訪問2和3；第0和30天)及在整個(gè)研究期間在家每天吃早餐；

9.對(duì)象在所有臨床訪問(訪問1b、2和3；第-7、0和30天)之前(10-14小時(shí))及整個(gè)期間愿意且能舒適地戒除咖啡因；

10.對(duì)象在所有臨床訪問(訪問1b、2和3；第-7、0和30天)之前24小時(shí)愿意戒除攝入酒精及避免劇烈身體運(yùn)動(dòng)；

11.對(duì)象由研究人員基于病史判斷處于一般良好健康狀況；

12.對(duì)象理解研究程序并在提供的知情同意書上簽字以參與研究，及授權(quán)研究人員發(fā)布相關(guān)受保護(hù)的健康信息。

排除標(biāo)準(zhǔn)

1.對(duì)象具有臨床意義的異常實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，包括但不限于在訪問1b(第-7天)時(shí)肌酐≥1.5mg/dL及ALT或AST≥1.5×正常高水平。臨床相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果基于研究人員判斷作為AE。勸告對(duì)象由其初級(jí)保健醫(yī)生隨訪；

2.對(duì)象不能理解和/或完全進(jìn)行實(shí)際測(cè)試；

3.對(duì)象在訪問1b(第-7天；Folstein 1995；Mitrushina 1991,Dunbar 2007)的MMSE評(píng)分≤23；

4.對(duì)象經(jīng)歷精神錯(cuò)亂、思維混亂或者其它意識(shí)紊亂的跡象；

5.對(duì)象在訪問1b(第-7天)之前2年具有經(jīng)診斷的抑郁癥；

6.對(duì)象具有可以產(chǎn)生認(rèn)知退化的任何神經(jīng)病學(xué)疾病，包括但不限于阿爾茲海默病、帕金森癥、中風(fēng)、顱內(nèi)出血、局部腦損傷包括腫瘤，以及正常壓力腦積水；

7.對(duì)象具有任何感染性或炎癥性腦病病史，包括病毒、真菌或梅毒病原性腦病；

8.對(duì)象具有反復(fù)輕微腦損傷(例如在拳擊中)或者單一損傷導(dǎo)致意識(shí)不清1小時(shí)或以上時(shí)間的病史；

9.對(duì)象在研究期間具有預(yù)約住院治療計(jì)劃(例如預(yù)約整容手術(shù)；

10.對(duì)象具有不可控的高血壓(收縮壓≥160mm Hg或者舒張壓≥100mm Hg，根據(jù)在訪問1b(第-7天)時(shí)測(cè)量的平均血壓限定)。對(duì)于其血壓超過在訪問1b時(shí)的任一截止點(diǎn)的對(duì)象允許在訪問2(第0天)之前單獨(dú)一天進(jìn)行重新檢測(cè)，由研究人員判斷進(jìn)行；

11.對(duì)象具有臨床相關(guān)心臟、腎、肝、內(nèi)分泌(包括糖尿病)、肺、膽囊、胃腸、胰腺或者神經(jīng)學(xué)疾病的病史或存在這些疾?。?/p>

12.對(duì)象在前兩年具有癌癥病史或存在癌癥，除了非黑素瘤皮膚癌；

13.在任何臨床訪問時(shí)對(duì)象具有活動(dòng)性感染或者感染跡象/癥狀。臨床訪問改期進(jìn)行，允許對(duì)象無任何類型全身性感染的癥狀至少5天；

14.對(duì)象近期使用抗生素(在任何臨床訪問時(shí)的5天內(nèi))；

15.對(duì)象是重度煙民，根據(jù)在訪問1b(第-7天)之前3個(gè)月內(nèi)吸煙史>1包/天限定；

16.在訪問1b(第-7天)的2周內(nèi)對(duì)象是重度咖啡因飲料消費(fèi)者(得自含有咖啡因產(chǎn)品的>400mg咖啡因/天)；

17.在每次測(cè)試訪問(訪問2和3；第0和30天)之前那天對(duì)象不一致地使用睡眠輔助產(chǎn)品。如果發(fā)生這種情況，改期進(jìn)行測(cè)試訪問；

18.對(duì)象具有睡眠障礙(例如睡眠呼吸暫停)或者在晚上睡眠時(shí)間不規(guī)律的職業(yè)(例如三班倒班的工人)；

19.對(duì)象在測(cè)試訪問2和3(第0和30天)之前一夜與其正常睡眠時(shí)間具有±2小時(shí)偏差。發(fā)生這種情況應(yīng)改期測(cè)試訪問(個(gè)人通訊:Patrick O'Connor,University of Georgia,and Kevin Maki,Biofortis)；

20.對(duì)象對(duì)所述研究產(chǎn)品或提供的標(biāo)準(zhǔn)飲食的任何成分已知過敏或具有敏感性；

21.對(duì)象在訪問1b(第-7天)的4周內(nèi)及整個(gè)研究期間具有精神藥物(包括抗抑郁藥和鎮(zhèn)定劑)使用史；

22.在訪問1b(第-7天)的2周內(nèi)及整個(gè)研究期間使用抗氧化劑或具有影響認(rèn)知功能的潛力的其它補(bǔ)劑；

23.對(duì)象具有近期(訪問1b第-7天的12個(gè)月內(nèi))濫用酒精或?yàn)E用藥物歷史或強(qiáng)烈可能性。酒精濫用定義為>14次飲酒/周(1次飲酒＝12盎司啤酒，5盎司葡萄酒，或者1¹/₂盎司蒸餾酒)。

24.對(duì)象是妊娠女性、計(jì)劃在研究期間妊娠、哺乳期，或者可能分娩及在研究期間不愿意使用醫(yī)學(xué)許可的避孕形式。避孕方法必須記錄在源文件中；

25.對(duì)象在篩選訪問(訪問1a，第-7天)之前30天內(nèi)或者5個(gè)消除半衰期(無論哪個(gè)更長(zhǎng))已經(jīng)暴露于尚未注冊(cè)的藥物；

26.個(gè)體具有研究人員認(rèn)為干擾其提供知情同意、遵守研究方案的能力的病癥，這些病癥可以擾亂研究結(jié)果或者置對(duì)象于不合理危險(xiǎn)之中。

排除的藥物和產(chǎn)品

治療精神疾病的藥物在訪問1b(第-7天)的4周內(nèi)不被允許(附件2)。此外，在訪問1b(第-7天)的2周內(nèi)及在整個(gè)研究期間排除使用具有影響認(rèn)知功能的潛力的抗氧化劑或其它補(bǔ)劑?？股刂委熜枰谌魏闻R床訪問(訪問1b、2和3；第-7、0和30天)之前至少5天內(nèi)完成。對(duì)象也被指示在任何臨床訪問(訪問1a/1b、2和3；第-7、0、30天)之前10-14小時(shí)及在每次臨床訪問期間避免咖啡因和含有咖啡因的產(chǎn)品。此外，建議對(duì)象在任何測(cè)試訪問(訪問2和3；第0和30天)之前及期間避免酒精(24小時(shí))、劇烈身體運(yùn)動(dòng)(24小時(shí))和使用煙草(1小時(shí))。

“根據(jù)需要”服用的藥物在任何臨床訪問(訪問1b至3；第-7天至30天)的早上不服藥。對(duì)象正常在早上服用的任何必需的藥物在診所在研究人員面前根據(jù)研究人員的判斷及如下關(guān)于降壓藥的指導(dǎo)而服用：

·訪問1b(第-7天)：如果對(duì)象正常服用降壓藥，該藥物在診所在抽取血液進(jìn)行化學(xué)、血液學(xué)和脂質(zhì)分析之前服用。生命體征在給予藥物后至少30分鐘評(píng)定。

·訪問2和3(第0天和30天)：如果對(duì)象正常在早上服藥，該藥物在生命體征測(cè)量之前30分鐘在診所服用。如果當(dāng)評(píng)定生命體征時(shí)對(duì)象血壓升高，在服用降壓藥后大約30分鐘重復(fù)測(cè)量血壓。監(jiān)測(cè)服藥時(shí)間。

研究產(chǎn)品

描述

每天900毫克(900mg/d)專利留蘭香提取物(2個(gè)450mg膠囊)標(biāo)準(zhǔn)化為含有67.5mg迷迭香酸/膠囊。

第一次和最后一次施用研究產(chǎn)品在臨床在訪問2和3(第0天和30天)與標(biāo)準(zhǔn)早餐一起給予。剩余的研究產(chǎn)品(兩個(gè)膠囊)在家自己服用。關(guān)于研究產(chǎn)品的信息可見于附件10。

研究產(chǎn)品的貯存和分發(fā)/使用

將研究產(chǎn)品貯存在鎖閉的干燥的安全位置(59-86°F)。研究產(chǎn)品僅根據(jù)這個(gè)方案及在研究人員的監(jiān)督下使用。在研究完結(jié)時(shí)，所有未使用的研究產(chǎn)品返給贊助者。

對(duì)象在訪問2(第0天)接受80個(gè)膠囊。這將為對(duì)象提供足夠的研究產(chǎn)品以允許靈活按計(jì)劃進(jìn)行后續(xù)的臨床訪問。要求對(duì)象在訪問3(第30天)返回所有未使用的研究產(chǎn)品。

臨床測(cè)量

實(shí)驗(yàn)室測(cè)量

所有臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)量的程序均在Elmhurst Memorial Hospital Laboratory(Elmhurst,IL)及其它實(shí)驗(yàn)室供應(yīng)商的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)中詳細(xì)描述。正常的參考范圍在實(shí)驗(yàn)室說明書中提供。

進(jìn)行如下分析作為空腹(10-14小時(shí))化學(xué)分析的一部分：葡萄糖、鈉、鉀、氯化物、CO₂、BUN、肌酐、鈣、滲透性、AST、ALT、堿性磷酸酶、總膽紅素、總蛋白、白蛋白(附件4)。將樣品備份冷凍貯存以進(jìn)行可能的隨后非遺傳性標(biāo)志物的分析。

進(jìn)行如下分析作為空腹(10-14小時(shí))血液學(xué)測(cè)量的一部分：WBC、分化WBC、RBC、血紅蛋白、血細(xì)胞比容和血小板計(jì)數(shù)。

分析空腹(10-14小時(shí))脂質(zhì)(TC、LDL-C、HDL-C、非-HDL-C和TG)，根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心及國(guó)家心、肺及血液學(xué)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)化程序進(jìn)行。LDL-C及濃度(mg/dL)根據(jù)如下Friedewald等式(Friedewald 1972)計(jì)算：

LDL-C＝TC–HDL-C–TG/5

由于當(dāng)TG濃度高于400mg/dL時(shí)這個(gè)等式是無效的，因此在這些情況下無LDL-C值計(jì)算。將樣品冷凍備份貯存以進(jìn)行可能的后續(xù)非遺傳性標(biāo)志的分析。

臨床相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果根據(jù)研究人員的判斷作為AE。

臨床訪問

臨床訪問評(píng)估包括身高(僅訪問1b)、體重、相伴使用的藥物/補(bǔ)劑，及在適當(dāng)情況中評(píng)估納入/排除標(biāo)準(zhǔn)。臨床訪問具有±3天窗口期。

標(biāo)準(zhǔn)化生命體征測(cè)量包括靜息血壓和脈搏，每次測(cè)量均使用自動(dòng)血壓測(cè)量裝置使用同一上臂測(cè)量。在對(duì)象坐下至少5分鐘后獲得血壓。要求對(duì)象在測(cè)量前60分鐘期間避免吸煙。使用合適大小的袖帶(袖帶內(nèi)氣囊必須環(huán)繞≥80％上臂)測(cè)量?jī)纱问湛s壓和舒張壓，間隔至少1分鐘。記錄兩次測(cè)量結(jié)果。如果在篩選訪問(訪問1b,第-7天)時(shí)發(fā)生血壓升高，允許在另一天再檢測(cè)。使用自動(dòng)血壓測(cè)量裝置測(cè)量?jī)纱涡穆省?/p>

篩選記憶問卷

在電話篩選期間(訪問1a第-7天的2周內(nèi))，給予對(duì)象紙質(zhì)MAC-Q，設(shè)計(jì)6-點(diǎn)問題以評(píng)定自我報(bào)告記憶缺損(排除評(píng)分≤24的對(duì)象；附件3；Crook 1992,Dunbar 2007)。合格對(duì)象繼續(xù)進(jìn)行訪問1a(第-7天)，提供知情同意書，隨后給予紙質(zhì)MMSE(訪問1a；第-7天；Folstein 1975,Mitrushina1991)。

MMSE是簡(jiǎn)單的30-點(diǎn)問卷測(cè)試，用于篩選認(rèn)知缺損。該問卷將篩選排除具有癡呆的個(gè)體(排除評(píng)分≤23；Dunbar 2007)。該問卷花費(fèi)大約10分鐘用算術(shù)、記憶和方向領(lǐng)域支配和測(cè)量認(rèn)知功能。

研究說明/問詢

在每次臨床訪問結(jié)束時(shí)提供書面研究說明[在每次臨床訪問(訪問1a、2和3；第-7、0和30天)之前及期間遵守空腹(10-14小時(shí)，僅飲水)；避免劇烈身體運(yùn)動(dòng)(24小時(shí))、避免攝入酒精飲料(24小時(shí))、避免咖啡因攝入(10-14小時(shí))和煙草使用(1小時(shí))，維持習(xí)慣飲食(包括攝取咖啡因和酒精)、身體運(yùn)動(dòng)模式、睡眠時(shí)間和攝入睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑]為隨后的臨床訪問做準(zhǔn)備。如果夜間對(duì)象平均睡眠時(shí)間具有超過±2小時(shí)偏差(根據(jù)篩選訪問報(bào)告)，改期進(jìn)行測(cè)試訪問。此外，如果對(duì)象在訪問2(第0天)前夜服用睡眠輔助藥物/補(bǔ)劑，建議對(duì)象在訪問3(第30天)保持一致服用。在每周一次電話聯(lián)系回顧該研究說明書。

不利事件評(píng)定

AE評(píng)定在基線和最終測(cè)試訪問(訪問2和3；第0天和30天)開始時(shí)進(jìn)行，及在t＝4.0小時(shí)完成最終認(rèn)知測(cè)試后在這些訪問結(jié)束時(shí)評(píng)定。在每周一次的電話聯(lián)系中評(píng)定AE。使用開放式問題詢問發(fā)生的AE。在訪問2和3(第0天和30天)開始時(shí)，研究人員詢問關(guān)于任何重大改變/生活壓力事件。在重大生活改變/壓力情況中(例如家族成員死亡)，如果根據(jù)研究人員的見解可能影響認(rèn)知功能，則訪問可以改期進(jìn)行。

認(rèn)知測(cè)試熟悉

每期實(shí)踐測(cè)試費(fèi)時(shí)大約1小時(shí)，每個(gè)間隔≥1小時(shí)。實(shí)踐測(cè)試是為訓(xùn)練目的，以使得每個(gè)對(duì)象熟悉測(cè)試程序。

認(rèn)知測(cè)試

Cambridge Brain Sciences計(jì)算機(jī)測(cè)試是可公開獲得的認(rèn)知評(píng)估工具，由Medical Research Council and Brain Sciences Unit認(rèn)證(Cambridge,UK；Owen 2010)。認(rèn)知測(cè)試包括在t＝-1.0、2.25和4.0小時(shí)±5分鐘評(píng)定記憶(數(shù)字廣度和成對(duì)關(guān)聯(lián))，推理(Double Trouble and Odd One Out)，注意/專注(旋轉(zhuǎn)和多邊形)及計(jì)劃(空間搜索和空間滑塊；附件5和6)，共三次認(rèn)知測(cè)試組合，其中t＝0小時(shí)是研究產(chǎn)品攝入時(shí)間。每次測(cè)試給予和測(cè)試訪問，對(duì)象在相同房間內(nèi)檢測(cè)。測(cè)試及測(cè)試訪問期間的環(huán)境條件如燈光、供熱和噪音盡可能保持一致。

研究產(chǎn)品/標(biāo)準(zhǔn)早餐給予

在測(cè)試當(dāng)天(訪問2和3；第0天和30天)，合格的對(duì)象空腹(10-14小時(shí))在06:00-09:30時(shí)間到達(dá)診所。在臨床訪問程序和認(rèn)知功能測(cè)試/問卷調(diào)查之后，在t＝0小時(shí)給予對(duì)象其指定的研究產(chǎn)品，隨后立即給予標(biāo)準(zhǔn)早餐食物。對(duì)象在15分鐘內(nèi)攝入全部食物，包括研究產(chǎn)品。在訪問3(第30天)的研究產(chǎn)品和標(biāo)準(zhǔn)早餐食物在訪問2(第0天)確定的t＝0小時(shí)時(shí)間的±30分鐘內(nèi)給予，菜單是重復(fù)的(即訪問3的精確食物/量是第0天的早餐)。在標(biāo)準(zhǔn)早餐食物之后，為對(duì)象提供標(biāo)準(zhǔn)量的水。允許對(duì)象在整個(gè)測(cè)試訪問期間隨意飲水，除了當(dāng)進(jìn)行計(jì)算機(jī)認(rèn)知測(cè)試時(shí)。記錄實(shí)際水?dāng)z入量。

研究日記

對(duì)象完成每日的研究日記以記錄睡眠時(shí)間和研究產(chǎn)品攝入(在訪問2第0天直至研究結(jié)束；附件11)。

胃腸道耐受性問卷

在訪問2和3(第0天和第30天；Maki 2008)在攝入標(biāo)準(zhǔn)早餐食物/研究產(chǎn)品之前給予紙質(zhì)GI耐受性問卷。對(duì)象回答問題以評(píng)定選擇的GI癥狀的存在及嚴(yán)重度，包括脹氣/腹脹、惡心、胃腸脹氣、腹瀉/稀便、便秘和GI痙攣。

對(duì)象整體改善問卷

在訪問3(第30天；附件9)在t＝-1.0小時(shí)±5分鐘給予對(duì)象紙質(zhì)SGI問卷(Dunbar 2011,Lieberman 2013)，其中t＝0小時(shí)是研究產(chǎn)品攝入時(shí)間。要求對(duì)象回答與記憶、注意和思考速度相關(guān)的整體改善的問題。

分發(fā)研究產(chǎn)品

為對(duì)象分發(fā)研究產(chǎn)品(從中給予早上劑量)與說明書，在30天治療期每天與早餐一起服用兩粒膠囊。在訪問2(第0天；附件11)為對(duì)象分發(fā)每日研究日記。指示對(duì)象記錄研究產(chǎn)品攝入情況。為每個(gè)對(duì)象提供藥丸盒以幫助每日遵守方案。

電話聯(lián)系

在實(shí)驗(yàn)期間每周一次與對(duì)象電話聯(lián)系，以保證遵守研究產(chǎn)品、研究說明，及評(píng)定每日行為習(xí)慣中的任何AE和/或改變(即藥物/補(bǔ)劑、飲食、睡眠和/或運(yùn)動(dòng))。電話聯(lián)系的文件記錄在對(duì)象源文件和個(gè)案報(bào)告形式中(CRF)。

測(cè)試當(dāng)天時(shí)間表

數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果分析

除非特別指出，所有測(cè)試的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義均在α<0.1、雙側(cè)進(jìn)行。

在所有時(shí)間點(diǎn)和所有變化(在檢驗(yàn)當(dāng)天和期間)的數(shù)值進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)。使用配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)，根據(jù)情況檢驗(yàn)所述變化是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，這是先導(dǎo)性研究，應(yīng)理解這個(gè)檢驗(yàn)功效對(duì)于統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)是不足夠的。目的是獲得關(guān)于在研究終點(diǎn)的平均數(shù)/中位數(shù)和變異性的信息。

安全性和耐受性分析

安全性和耐受性通過在所有治療期臨床訪問時(shí)對(duì)象報(bào)告的AE以及生命體征測(cè)量、實(shí)驗(yàn)室數(shù)值和體重變化來評(píng)定。AE由世界衛(wèi)生組織(WHO)詞典編碼。缺失數(shù)據(jù)不估算及僅將觀測(cè)到的數(shù)據(jù)包含在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中。

結(jié)果

總之，在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中篩選20個(gè)參與者，11個(gè)對(duì)象符合納入標(biāo)準(zhǔn)且無一符合排除標(biāo)準(zhǔn)。在研究中登記的11個(gè)對(duì)象中，一個(gè)對(duì)象在基線測(cè)試訪問后由于不能理解認(rèn)知功能測(cè)試而撤回同意書，從PP樣本中除去。第二個(gè)對(duì)象由于134％攝入研究產(chǎn)品而從PP樣本中除去。一個(gè)不利事件-背痛-在治療期間報(bào)告，編碼為與研究產(chǎn)品攝入無關(guān)。

探索性結(jié)果分析中包含的MITT樣本(N＝11)和對(duì)象子集(n＝5)的基線特征包括在表2中。

表2：總體和子集樣本中對(duì)象的基線特征

樣本包含27％男性和73％女性，平均年齡和BMI分別為58.7±1.6歲和27.4±1.0kg/m²。對(duì)于MITT和子集樣本，研究產(chǎn)品攝入平均整體順從性分別為103.2±1.6％和98.3±1.0％。在MITT樣本中符合MAC-Q和MMSE的平均得分分別為29.7±1.0％和28.9±0.4％。

得自評(píng)估在30天治療期GI癥狀的存在與嚴(yán)重度的變化的GI耐受性問卷的平均得分在表3中示出。

表3：在基線、治療結(jié)束時(shí)的胃腸道耐受性問卷得分及應(yīng)答留蘭香補(bǔ)劑自基線的變化¹

縮寫：EOT，治療結(jié)束；SEM，平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤差。

¹GI耐受性問卷合成分?jǐn)?shù)是根據(jù)每個(gè)測(cè)試條件以每個(gè)參數(shù)的評(píng)級(jí)總和計(jì)算，編碼為：-2＝低于平時(shí)；-1＝略低于平時(shí)；0＝未經(jīng)歷/平時(shí)，1＝略高于平時(shí)，2＝遠(yuǎn)高于平時(shí)。

²基線是指在第0天給藥前數(shù)值。

³治療結(jié)束(EOT)是指在第30天給藥前數(shù)值。

⁴P-值是從配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)中在基線與治療結(jié)束之間計(jì)算。

⁵合成分?jǐn)?shù)是高于或等于0的所有評(píng)級(jí)的總和。

留蘭香提取物的攝入不顯著改變?cè)诨€與治療結(jié)束之間的個(gè)體GI癥狀(便秘、痙攣、胃腸脹氣、脹氣/腹脹、稀便和惡心)(對(duì)于所有對(duì)比P＝1.000)。此外，GI耐受性合成分?jǐn)?shù)在基線與治療結(jié)束之間不顯著改變(P＝1.000)。在三個(gè)認(rèn)知領(lǐng)域(記憶、注意和思考速度)評(píng)定從基線的變化的SGI問卷的平均得分在表4中示出。

表4：在治療結(jié)束時(shí)應(yīng)答留蘭香補(bǔ)劑的對(duì)象認(rèn)知問卷整體印象量表得分¹

縮寫：SEM，平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤差。

¹在30天治療結(jié)束時(shí)給予對(duì)象認(rèn)知問卷整體印象量表(SGI)，要求對(duì)象對(duì)比其目前狀況與納入研究之前的狀況。得分編碼為：1＝非常多的改善，2＝較多改善，3＝最低程度改善，4＝無變化，5＝最低程度惡化，6＝較多惡化，7＝非常多的惡化。

²P-值從Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)中計(jì)算，檢驗(yàn)在治療結(jié)束時(shí)與4(無變化；n＝10)的差異。

在留蘭香提取物治療30天后SGI問卷的平均合成分?jǐn)?shù)略微改善(3.5±0.3，得分4表示“無變化”；P＝0.063)。在PP樣本中平均合成分?jǐn)?shù)中的差異不再顯著(與得分4相比)(P＝0.125)。在SGI問卷中個(gè)體評(píng)級(jí)中無顯著差異。

關(guān)于在基線和治療結(jié)束時(shí)生命體征、空腹脂蛋白脂質(zhì)的平均數(shù)和中位數(shù)及自基線的改變?cè)诒?中示出。

表5：在基線、治療結(jié)束時(shí)的生命體征和空腹脂蛋白脂質(zhì)及應(yīng)答留蘭香補(bǔ)劑的自基線的變化

縮寫：bpm，每分鐘心跳；DBP，舒張壓；HDL-C，高密度脂蛋白膽固醇；LDL，低密度脂蛋白膽固醇；SBP，收縮壓；TC，總膽固醇。

¹基線是指在第0天的給藥前數(shù)值。

²治療結(jié)束(EOT)是指在第30天給藥前數(shù)值。

³P-值是在基線與治療結(jié)束之間從配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)計(jì)算。

在30天治療期MITT樣本中脂質(zhì)參數(shù)無顯著差異是明顯的。在治療期間PP樣本中LDL膽固醇增高是明顯的(8.9±4.4mg/dL，基線＝137.0mg/dL；P＝0.079)。在30天治療期心率略微增加(3.65±1.8bpm；P＝0.077)；然而，在PP樣本中這種變化不再顯著(P＝0.155)。在PP樣本中在30天治療期間體重增加僅為0.6±0.3kg(P＝0.062；基線＝77.0±3.2kg)。在基線和治療結(jié)束時(shí)的血液化學(xué)和血液學(xué)數(shù)值及自基線的變化在表6和7中示出。

表6：在基線、治療結(jié)束時(shí)的絕對(duì)化學(xué)分析數(shù)值及應(yīng)答留蘭香補(bǔ)劑自基線的變化

縮寫：ALP，堿性磷酸酶；ALT，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；AST，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶；BUN，血尿素氮；EOT，治療結(jié)束。

¹基線是指在第0天給藥前數(shù)值(N＝11)。

²治療結(jié)束(EOT)是指在第30天給藥前數(shù)值(n＝10)。

³P-值是在基線與治療結(jié)束之間從配對(duì)t-檢驗(yàn)或者Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)計(jì)算。

表7：在基線、治療結(jié)束時(shí)的絕對(duì)血液學(xué)分析數(shù)值及應(yīng)答留蘭香補(bǔ)劑自基線的變化

縮寫：EOT，治療結(jié)束；MCH，平均血球血紅蛋白；MCV，平均血細(xì)胞體積；RBC，紅細(xì)胞；WBC，白細(xì)胞。

¹基線是指在第0天給藥前數(shù)值(N＝11)。

²治療結(jié)束(EOT)是指在第30天給藥前數(shù)值(n＝10)。

³P-值是在基線與治療結(jié)束之間從配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)計(jì)算。

來自血液化學(xué)分析的數(shù)值表明在基線與治療結(jié)束之間鈣(-0.15±0.04mg/dL，P＝0.068)、陰離子間隙(-0.9±0.4mmol/L；P＝0.007)和總蛋白(-0.2±0.1g/dL；P＝0.055)降低。在30天的治療期對(duì)于全血血液學(xué)分析數(shù)值顯然無顯著差異。

來自基線和治療結(jié)束時(shí)的認(rèn)知功能任務(wù)的平均分在圖2中示出。來自推理1、注意/專注2和計(jì)劃2認(rèn)知功能任務(wù)的得分在基線與治療結(jié)束之間顯著改善，在給藥前(t＝-1小時(shí))評(píng)定時(shí)分別為6.4±4.2(P＝0.023)、22.9±5.3(P＝0.001)和11.3±5.9(P＝0.088)點(diǎn)。在PP樣本中計(jì)劃2任務(wù)得分中的變化不再顯著(P＝0.169)。來自認(rèn)知功能任務(wù)的所有其它得分在基線和治療結(jié)束之間無顯著差異。

在基線與治療測(cè)試訪問結(jié)束期間給予的急性及急性-慢性(acute-on-chronic)給予后認(rèn)知功能任務(wù)的平均分和中位數(shù)得分在表8中示出。

表8：在急性留蘭香給予測(cè)試后在基線的認(rèn)知功能得分及在急性-慢性給予測(cè)試后在30天留蘭香補(bǔ)劑結(jié)束時(shí)的認(rèn)知功能得分

縮寫：EOT，治療結(jié)束。

¹P-值在給藥前(t＝-1小時(shí))與給藥后2.25小時(shí)原始得分之間從配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)計(jì)算。

²P-值在給藥前(t＝-1小時(shí))與給藥后4小時(shí)原始得分之間從配對(duì)t-檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)計(jì)算。

在基線測(cè)試訪問時(shí)，注意/專注1任務(wù)的平均分在給藥前與給藥后時(shí)間點(diǎn)(2.25和4小時(shí))分別增加19.0±8.2點(diǎn)(P＝0.042)和29.1±6.6點(diǎn)(P＝0.001)。相似地，在基線測(cè)試訪問時(shí)，注意/專注2任務(wù)的平均分在給藥前與給藥后時(shí)間點(diǎn)(2.25和4小時(shí))評(píng)定分別增加16.8±6.4點(diǎn)(P＝0.025)和21.8±5.3點(diǎn)(P＝0.002)。在基線測(cè)試訪問時(shí)，在給藥后4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)相對(duì)于給藥前評(píng)定的計(jì)劃2任務(wù)的平均分也顯著增高至11.7±3.2(P＝0.004)。在基線測(cè)試訪問時(shí)，在PP樣本中推理1任務(wù)的平均分在給藥前和給藥后評(píng)定(2.25和4小時(shí))之間僅分別增加3.4±1.7點(diǎn)(P＝0.082)和4.9±2.0點(diǎn)(P＝0.041)。這些認(rèn)知功能的急性改善在急性-慢性給予測(cè)試之后不明顯。然而，急性-慢性效果在給藥后4小時(shí)評(píng)定推理1任務(wù)中是顯著的，得分相對(duì)于給藥前評(píng)定改善4.40±2.1點(diǎn)(P＝0.070)。這種差異在PP樣本中不再顯著(P＝0.115)。

討論：

在這個(gè)非盲先導(dǎo)性實(shí)驗(yàn)中，每天攝入900mg/天的留蘭香提取物共30天是良好耐受的。盡管在LDL膽固醇、陰離子間隙、鈣、總蛋白、心率和體重方面具有顯著差異，但是這些范圍在正常生物可變性范圍內(nèi)且可能不具有臨床意義。對(duì)象認(rèn)知功能的適度改善在補(bǔ)充30天后是明顯的。這個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示留蘭香提取物補(bǔ)劑可以改善認(rèn)知功能，包括在慢性補(bǔ)充時(shí)改善推理、注意/專注及計(jì)劃，及急性改善注意/專注和計(jì)劃。

據(jù)我們所知，先前沒有公開的研究已經(jīng)評(píng)估在超出典型作為添加劑、調(diào)味劑或芳香劑攝取的劑量的劑量水平的留蘭香提取物在人體中的安全性和耐受性。然而，一些研究已經(jīng)評(píng)估了留蘭香在動(dòng)物模型中的毒性。特別地，在Akodogan等的研究中，大鼠(n＝12/組)隨意攝入留蘭香茶(20和40g/L)或者載體水共30天(Akdogan M,Kilinc I,Oncu M,Karaoz E and Delibas N.Investigation of biochemical and histopathological effects of Mentha piperita L.and Mentha spicata L.on kidney tissue in rats.Human and Experimental Toxicology.2003；22:213-219)。在攝入留蘭香茶之后，這兩個(gè)劑量水平相對(duì)于對(duì)照的血漿尿素和肌酐濃度顯著增高(P<0.003)。相似地，利用相同研究設(shè)計(jì)在大鼠中進(jìn)行的二次研究也報(bào)道在這兩個(gè)劑量水平肝臟酶天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的活性相對(duì)于對(duì)照顯著增加(P<0.016)(Akdogan M,Ozguner M,Aydin G and Gokalp O.Investigation of biochemical and histopathological effects of Mentha piperita Labiatae and Mentha spicata Labiatae on liver tissue in rats.Human and Experimental Toxicology.2004；23:21-28)。在這些研究中，估計(jì)留蘭香攝入量為每天2.2g/kg體重(20g/L)和4.4g/kg體重(40g/L)，大概是在70kg人體中25-50g/天的劑量(Reagan-Shaw S,Nihal M and Ahmad N.Dose translation from animal to human studies revisited.FASEB J.2008；22:659-661)。盡管這些動(dòng)物研究中留蘭香估計(jì)的攝入水平比本發(fā)明研究中攝入量高3倍，但是這些發(fā)現(xiàn)未證實(shí)。

關(guān)于留蘭香及其對(duì)認(rèn)知功能的作用存在沖突和有限證據(jù)。在隨機(jī)的對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，健康年輕參與者(平均年齡＝24.6歲；n＝25/組)分為三個(gè)治療組之一：咀嚼無糖留蘭香口香糖、模擬咀嚼口香糖或者避免咀嚼(對(duì)照)(Wilkinson L,Scholey A and Wesnes K.Chewing gum selectively improves aspects of memory in healthy volunteers.Appetite.2002；38:235-236)。在給予認(rèn)知功能任務(wù)的計(jì)算機(jī)測(cè)試組合期間實(shí)施這些條件。結(jié)果示出咀嚼留蘭香口香糖相對(duì)于對(duì)照組改善對(duì)象的記憶(P<0.05)，但是未提示在注意/專注方面的任何差異。在二次研究中，健康年輕參與者(平均年齡＝22.9歲；n＝20-23/組)隨機(jī)分為四個(gè)治療條件之一：咀嚼留蘭香口香糖、咀嚼無味口香糖、模擬咀嚼口香糖，或者無咀嚼(對(duì)照)(Tucha O,Mecklinger L,Maier K,Hammerl M and Lange KW.Chewing gum differentially affects aspects of attention in healthy subjects.Appetite.2004；42:327-329)。這些條件也在認(rèn)知功能任務(wù)的計(jì)算機(jī)測(cè)試組合期間實(shí)施。與第一次研究的結(jié)果相反，相對(duì)于對(duì)照，咀嚼留蘭香口香糖未改善記憶，但是改善了持久注意/專注(P<0.01)。從這些研究中未確定記憶及注意/專注的改善是否是留蘭香或者咀嚼作用的結(jié)果。進(jìn)一步地，鑒于缺少一致的劑量水平、給藥時(shí)間、人群和使用的認(rèn)知功能評(píng)定工具，難以解釋這些結(jié)果。記憶任務(wù)中特定的急性改善在本發(fā)明研究中未鑒別，但是在注意/專注任務(wù)中使用留蘭香補(bǔ)劑可見急性改善是顯著的。

總之，留蘭香提取物在自我報(bào)告記憶缺損的年老對(duì)象(50-70歲)中是良好耐受的，且可以急性和慢性正面影響認(rèn)知功能。

前文描述和圖表包含本發(fā)明的舉例的實(shí)施方案。本文描述的前述實(shí)施方案和方法基于本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力、經(jīng)驗(yàn)和偏好可以改變。僅以一定順序列出的方法步驟對(duì)所述方法的步驟順序無任何限制。前文描述和圖表僅是解釋和舉例說明本發(fā)明，本發(fā)明不限于此，本發(fā)明限于權(quán)利要求書所述。本領(lǐng)域技術(shù)人員在不偏離本發(fā)明范圍基礎(chǔ)上可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改和變化。

權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)

1.一種增強(qiáng)、改善或維持哺乳動(dòng)物的認(rèn)知健康和/或功能的方法，包括口服施用有效量的唇形科(Lamiaceae)薄荷屬(Mentha)植物的提取物，并且其中主要活性成分是迷迭香酸和植物多酚。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物選自人和陪伴動(dòng)物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述提取物的所述有效量在0.1-100mg/kg/天之間。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述提取物包含重量百分比為最少8％的迷迭香酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中認(rèn)知健康和/或認(rèn)知功能是指記憶、推理、注意/專注和計(jì)劃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述植物選自羅勒、薄荷、鼠尾草、香薄荷、馬郁蘭、牛至、百里香、薰衣草、留蘭香和迷迭香。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，用于預(yù)防或治療認(rèn)知疾病如閱讀障礙、失用癥、注意力缺陷多動(dòng)癥、注意力缺陷自閉癥、阿爾茨海默病、帕金森病或中風(fēng)，或者其它執(zhí)行功能障礙。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，用于預(yù)防或治療與正常衰老相關(guān)的認(rèn)知障礙或缺陷。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，用于維持在壓力條件下的正常認(rèn)知功能，所述壓力條件如在選自時(shí)差、時(shí)區(qū)改變、妊娠、藥物治療、日常工作變化和輪班條件下發(fā)生的生物周期節(jié)律破壞。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，用于維持在壓力條件下的正常認(rèn)知功能，所述壓力條件如在選自時(shí)區(qū)改變、妊娠、藥物治療、日常工作改變和輪班條件下發(fā)生的生物周期節(jié)律破壞。

11.一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的認(rèn)知健康和/或功能衰退的方法，包括口服施用有效量的唇形科薄荷屬植物的提取物，并且其中主要活性成分是迷迭香酸和植物多酚。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述提取物施用給人類對(duì)象，所述人類對(duì)象示出認(rèn)知功能改善，所述改善使用計(jì)算機(jī)認(rèn)知評(píng)估工具通過旋轉(zhuǎn)和/或多邊形評(píng)估注意/專注的評(píng)估而測(cè)量。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述提取物在至少30天的時(shí)間每日一次施用給人類對(duì)象，所述人類對(duì)象示出通過如下至少一種評(píng)估而測(cè)量的認(rèn)知功能改善：對(duì)認(rèn)知功能問卷的主觀反應(yīng)，通過數(shù)字廣度和/或成對(duì)關(guān)聯(lián)評(píng)估記憶的計(jì)算機(jī)認(rèn)知功能評(píng)估工具，通過Double Trouble和/或Odd One Out評(píng)估推理的計(jì)算機(jī)認(rèn)知功能評(píng)估工具，通過旋轉(zhuǎn)和/或多邊形評(píng)估注意/專注的計(jì)算機(jī)認(rèn)知功能評(píng)估工具，以及通過空間搜索和/或空間滑塊評(píng)估計(jì)劃的計(jì)算機(jī)認(rèn)知功能評(píng)估工具。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述植物是留蘭香(Mentha spicata)，其在干重基礎(chǔ)上包含重量百分比高于8％的迷迭香酸和重量百分比高于20％的總多酚。