專利名稱：一種植物提取物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天物產(chǎn)物中提取的多糖的用途，確切講涉及從蕨麻中提 取的多糖的用途。
技術(shù)背景植物提取物因其具有的多種生物活性而受到人們的關(guān)注與重視，如主要來 源于植物、動(dòng)物、菌類等的多糖，具有廣泛的生物活性，已引起醫(yī)學(xué)界的廣泛 興趣。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到多糖與蛋白質(zhì)、核酸 一樣，是涉及生命活動(dòng)本質(zhì)的三類生物大分子之一。對(duì)于多糖，醫(yī)藥界的興 趣尤為濃厚，至今已報(bào)道了一百多種中藥多糖，這些多糖人多具有免疫調(diào)節(jié)、 抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、延緩衰老、抗感染等多種生理活性，有的已被用 于肝炎、腫瘤、心血管疾病的治療和康復(fù)。當(dāng)前國內(nèi)對(duì)多糖的研究方興未艾， 總的趨勢正如國外科學(xué)家預(yù)言的那樣，今后數(shù)十年將是"多糖時(shí)代"。蕨麻是青藏高原特有的藥材，屬薔薇科植物鵝絨委陵菜i^e油7/fl朋"n'w" 丄.，其藥用部位為根，資源較為豐富。它即可以作為藥物用來治病強(qiáng)身,又可以 作為食品以充饑食用，是當(dāng)?shù)貥O具開發(fā)前景的藥材。蕨麻性平，味甘，健脾益胃，生津止渴，益氣補(bǔ)血，止咳利痰，利濕，亦 有滋補(bǔ)之效；主治脾虛腹瀉，病后貧血,營養(yǎng)不良等癥,是藏醫(yī)的常用藥材。民間宜 長期作為營養(yǎng)保健品與藥品應(yīng)用?！吨腥A藏本草》中記載其塊根中含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、鞣質(zhì)、黃酮、甾醇、膽堿、甜菜堿、組氨酸等成分?；?晶著"西藏人參果對(duì)小鼠抗疲勞及抗缺氧能力的影響"(《營養(yǎng)學(xué)報(bào)》2003， 25(2):218-219) —文中披露，蕨麻具有較好的補(bǔ)益作用，對(duì)小鼠抗疲勞和抗缺氧能力 有一定增強(qiáng)作用，還有很強(qiáng)的抗應(yīng)激作用。根據(jù)有關(guān)的文獻(xiàn)披露，蕨麻塊根中有豐富的多糖。在李靈芝，張麗，龔海 英，等著的"蕨麻醇提取物的抗缺氧與抗氧化研究"(中國食品衛(wèi)生雜志，2005， 17(4):306-308)、陳炅然，胡庭俊，程富勝，等著的"蕨麻多糖的免疫藥理實(shí)驗(yàn)研 究"《獸藥與飼料添加劑》2005， 1Q(5):1-2.)和胡庭俊，陳炅然，程富勝，等著的"蕨麻多糖對(duì)小鼠血清中三種細(xì)胞因子水平的影響"(《中國獸醫(yī)科技》2005，35(8):653-656 )公開了蕨麻活性成分之 一 的蕨麻多糖(Pofe""〃a araeW"a丄. Polysaccharide, PAP)為，具有提高人體免疫功能、抗疲勞、耐缺氧和止瀉抑菌的 作用。病毒性肝炎是我國的常見病及多發(fā)病，由HBV、 HCV感染后導(dǎo)致的慢性肝炎、 肝炎后肝硬化及肝癌，對(duì)人民健康危害性極大。目前多采用保肝加抗病毒的方 法進(jìn)行治療，尚無理想的治療方法。0前的西藥治療費(fèi)用高，毒副作用大，而 天然藥物及其制劑在治療病毒性肝炎方面顯示出了良好的療效，是一種有效的 治療手段，并且占據(jù)著治療的主要地位。在長期以來，尤其是上世紀(jì)70年代之 后，應(yīng)用中醫(yī)中藥治療慢性乙肝的研究逐年呈上升趨勢，且取得了良好的療效。 其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在藥物不僅能夠明顯改善患者癥狀及生活質(zhì)量，而且能通過多靶點(diǎn) 作用發(fā)揮其保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗纖維化及抗病毒的作用，而且中藥基本上無毒 副反應(yīng)，醫(yī)療成本相對(duì)較低。 發(fā)明內(nèi)容木發(fā)明提供蕨麻多糖的一種新的用途，即將蕨麻多糖用于制備治療肝臟損 傷或者制備保肝的藥物，以及用蕨麻多糖制備保肝的營養(yǎng)品。根據(jù)本發(fā)明相關(guān)研究表明，蕨麻多糖可以明顯降低急性肝損小鼠血清中的 ALT (丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)、AST (天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)值，對(duì)急性肝損傷 有治療作用、對(duì)病毒、化學(xué)品、酒精等各種原因引起的肝損傷有一定的治療作 用和保肝作用。更具體講，本發(fā)明所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用是指蕨麻 多糖在制備治療急性肝損傷藥物的應(yīng)用，如如蕨麻多糖在制備治療各型肝炎引起的肝損傷藥物的應(yīng)用；或者，蕨麻多 糖在制備治療酒精引起的肝損傷藥物的應(yīng)用；或者蕨麻多糖在制備治療化學(xué)性 肝損傷藥物的應(yīng)用。以上所述的應(yīng)用蕨麻多糖所制備的藥物的劑型可以是膠囊、微囊、脂體質(zhì)、 顆粒劑、片劑、口服液、分散片中的任一種，也可以是注射液。此外，蕨麻多糖還可用于制備保肝的藥物，或者制備保肝的保健品。


圖l為蕨麻多糖提取工藝流程示意。圖2為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖3為受試小鼠正常對(duì)照組的肝組織染色病理切片照片。圖4為受試小鼠用0.1MCCU豆油 100 ml/kg，建立肝損傷模型對(duì)照組的肝組織染色病理切片照片。圖5為受試小 鼠使用聯(lián)苯雙酯的陽性對(duì)照組的肝組織染色病理切片照片。圖6為受試小鼠使 用蕨麻多糖200 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。圖7為受試小鼠使用蕨麻 多糖400 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。圖8為受試小鼠使用蕨麻多糖 800 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。
具體實(shí)施方式
以下提供本發(fā)明提取蕨麻多糖的具體做法和相關(guān)試驗(yàn)，其中所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明種小鼠，60只，體重18 22g，每組10只，雌雄各半。 由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。所用藥品及試劑分別為 蕨麻產(chǎn)地甘肅甘南。CC14 :上海華東化工學(xué)院宏達(dá)化工(批號(hào)20050621);苯酚山東萊陽雙雙化工有限公司(批號(hào)20051205)聯(lián)苯雙酯浙江萬邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn) (批號(hào)20050704); ALT測試盒，購于四川省邁克科技有限責(zé)任公司(批號(hào) 2400032); AST測試盒，按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程配制[5。 主要儀器UV-722G紫外可見分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)；D-37520型低溫離心機(jī) (德國Kendro公司)；MA110型分析天平(上海第二分析儀器廠)TLD-40B型 離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；KEWEI電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn) 儀器設(shè)備廠)；KDM型控溫電熱套(山東鄄城華魯儀器公司)；MS 2型旋渦混 勻器(廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以EXCEL2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)各計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理，所 有數(shù)據(jù)均以i.士S表示。(一)蕨麻多糖的提取稱取千燥蕨麻，搗碎，加約8倍量的水，置電爐上煎煮1.5h后，將水溶液 過濾，重復(fù)3次，將3次所得濾液合并，置蒸發(fā)皿中蒸發(fā)濃縮至l: 1。將濃縮液置燒杯中，加5倍量95%的乙醇，低溫靜置過夜。將沉淀物置離心管中離心 (3000 r/min,10 min)，棄上清液，再依次分別加入無水乙醇、丙酮、乙醚充分洗 滌后離心(3000 r/min,10 min)，棄上清液。將所得沉淀物置平皿中，待乙醚揮發(fā) 完后所得灰色粉末即為蕨麻粗多糖，稱重。得率為2.66%。工藝過程參見附圖1，以及"藏藥蕨麻中多糖的含量測定研究"一文，參見楊樺；賈旭；易紅等《中草藥》,2001, 32(01) ,29-31。(二) 蕨麻多糖含量測定 采用苯酚一濃硫酸法測定蕨麻多糖的含量。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.16、 0.20、 0.24、 0.28、 0.32、 0.36、 0.40mL，分置于10mL容量瓶中，加蒸 餾水稀釋至刻度混勻。分別精密吸取2.0mL于lOmL帶塞試管中，另取2.0mL 蒸餾水作空白對(duì)照。各管再加入1.0mL苯酚溶液，混勻，迅速加入濃H2S045.0 mL，混勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，取出置冷水中冷卻后,于490 nm 處測定吸光度。經(jīng)過計(jì)算得回歸方程為y = 0.042x- 0.6836 R = 0.9906，參見 圖2。精密稱取蕨麻多糖約4 mg于100 ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精 密吸取l.Oml置試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下方法測定吸光度，根據(jù)回歸方 程計(jì)算，得蕨麻粗多糖含量為66.3 %。(三) 蕨麻多糖對(duì)CCl4致小鼠肝損傷保護(hù)作用昆明種小鼠60只，雄雌各半，按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為6組，每組10只， 分組及給藥如下生理鹽水0.10/oCCU豆油滿ml/kg 聯(lián)苯雙酯200 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg 800 mg/kg正常對(duì)照組 模型對(duì)照組 陽性對(duì)照組 PAP低劑量組 PAP中劑量組 PAP高劑量組 注以上PAP指蕨麻多糖。 受試小鼠在給藥前和給藥后均稱重。其中第一組 第二組 第三組 第四組 第五組 第六組陽性對(duì)照組、受試藥各組小鼠均灌胃(ig)給予相應(yīng)的藥物，1日1次，其余各組小鼠均用同等體積生理鹽水灌胃，1日1次，每次100ml/kg。給藥7天，末次給藥1 h后除正常組給予溶媒外， 其余組均灌胃ig0.1%CCl4100ml/kg，造成急性肝損，禁食,自由飲水。造模24h 后摘眼球取血,全血4"冰箱靜置lh，低溫離心，分離血清(4°C， 4000r/min,10 min)。試劑盒測定血清中ALT (谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST (天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶) 水平。摘取小鼠肝臟及脾臟，并稱重。取小鼠左葉肝臟，10%福爾馬林固定，石 蠟包埋切片，HE染色后用圖象分析儀對(duì)肝臟的形態(tài)進(jìn)行觀察并拍攝病理圖片。 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組小鼠的血清ALT、 AST活性明顯高于正常組，與正 常組相比，差異有顯著性(尸< 0.05)，表明造模成功。陽性組對(duì)照組血清中的ALT、 AST活性明顯低丁模型對(duì)照組，與模型組相比，差異有顯著性(P〈0.05)，說明 實(shí)驗(yàn)方法是可靠的。PAP200、 400、 800mg/kg劑量組均可明顯降低急性肝損小 鼠血清中的ALT、 AST值，與模型組相比，差異有顯著性(尸<0.01)，且有劑量依 賴性，呈負(fù)相關(guān)，藥物劑量越大，小鼠血清中ALT、 AST的活性越低。PAP各劑 量組還均可明顯降低小鼠體重，與模型組相比，差異有顯著性(P0.05)。 PAP各 劑量組的脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)與模型組相比，沒有明顯降低，差異無顯著性(尸 〉0.05)。結(jié)果見下表。蕨麻多糖對(duì)小鼠血清ALT、 AST的影響 (n=10)組別實(shí)驗(yàn)前 實(shí)驗(yàn)后(g/ioog)肝臟系數(shù)ALTAST(g/100g)(UI/L)CUI/L)0德±0扁13.768±3.558b119.939±63.323b0.053±0.003263.740土68.678205.436±38.9110.056±0.00762.909±65.777b147.742±44.478a0.046±0.016206.583±31.336a149.406±54.743a0.052±0.00479.558±52.103b143.357:t58.17 4a0.052±0.00452.151±66.604b117.921±65.727b正常對(duì)照組 模型對(duì)照組 陽性對(duì)照組PAP低劑呈組PAP中劑量組PAP高劑量 組18.5±0.7 18.6±0.8 18.5士0.8 19.0±].322.8±U 22.1±0.9 22.2±2.2 20.4±1.7a0.006±0.0010.005±0細(xì)注:與模型對(duì)照組比，3:尸<0.05， b: / <0.01。肝臟中的轉(zhuǎn)氨酶ALT、 AST活性是肝細(xì)胞損害的敏感指標(biāo)，是診斷肝膽系 統(tǒng)疾病中應(yīng)用最廣泛的酶。肝損傷較輕時(shí)僅使細(xì)胞膜通透性增加，胞漿內(nèi)ALT 釋放入血；肝細(xì)胞受損嚴(yán)重時(shí)，線粒體內(nèi)AST才釋放入血。給予CCU后，小鼠 肝細(xì)胞明顯受損，大量的ALT、 AST釋放入血，弓I起血清中的ALT、 AST升高。試驗(yàn)結(jié)果表明蕨麻多糖對(duì)CC14誘發(fā)的肝損傷小鼠血清中的ALT、 AST活性的升高具有明顯的降低作用，其作用機(jī)理可能是蕨麻多糖通過穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，抑制脂質(zhì)過氧化過程，維持細(xì)胞膜的完整性，從而使ALT、 AST溢出減少，降 低血清中ALT、 AST的活性，進(jìn)而發(fā)揮保肝作用。從各受試小鼠肝組織病理切片可見，參見附圖3至附圖8，正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，中央靜脈周圍及匯管區(qū)淋巴未見炎性細(xì)胞浸潤。模型組中肝小葉結(jié)構(gòu)存在，中央靜脈周圍肝細(xì)胞氣球樣變、灶性嗜酸性變，匯管區(qū)及中央靜脈周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤，表明肝臟已發(fā)生病變，產(chǎn)生了肝損傷；聯(lián)苯雙酯組(陽性對(duì)照)肝小葉結(jié)構(gòu)存在，中央靜脈周圍少量淋巴細(xì)胞浸潤，未見其它異常改變；PAP200 mg/kg組，肝小葉結(jié)構(gòu)存在，中央靜脈周圍淋巴細(xì)胞明顯減少，未見其它異常改變，表明肝損傷開始好轉(zhuǎn)；PAP 400 mg/kg組，肝小葉結(jié)構(gòu)存在，中央靜脈周圍灶性淋巴細(xì)胞浸潤，未見其它異常改變，肝細(xì)胞接近正常；PAP800mg/kg組，肝小葉結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)清晰，中央靜脈周圍及匯管區(qū)未見炎性細(xì)胞浸潤，表明肝細(xì)胞基本正常；另外，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所陳炅然等人完成的"蕨麻 多糖免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)理研究與臨床應(yīng)用"項(xiàng)目中，以小鼠、兔、雞為試驗(yàn) 對(duì)象，進(jìn)行了蕨麻多糖的毒性試驗(yàn)，證明蕨麻多糖無毒副作用。以上實(shí)驗(yàn)表明蕨麻多糖可以對(duì)肝臟進(jìn)行有效保護(hù)，且無毒副作用，安全有 效，可用于制備治療肝臟損傷藥物和制備保肝藥物，也可用于制備保護(hù)肝臟的 保健品。
權(quán)利要求
1. 蕨麻多糖用于制備治療肝臟損傷藥物的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求l所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用，其特征是 蕨麻多糖在制備治療急性肝損傷藥物的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求l所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用，其特征是 蕨麻多糖在制備治療各型肝炎引起的肝損傷藥物的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求l所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用，其特征是 蕨麻多糖在制備治療酒精引起的肝損傷藥物的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求l所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用，其特征是 蕨麻多糖在制備治療化學(xué)性肝損傷藥物的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1_5所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用所制備的 藥物，其特征是其制劑為膠囊、微囊、脂體質(zhì)、顆粒劑、片劑、口服液、分散 片中的任一種。
7. 權(quán)利要求1—5所述的蕨麻多糖在制備治療肝損傷藥物的應(yīng)用所制備的 藥物，其特征是其制劑為注射液。
8. 蕨麻多糖用于制備保肝的藥物。
9. 蕨麻多糖用于制備保肝的保健品。
全文摘要
本發(fā)明公開從蕨麻中提取的多糖的用途，即將蕨麻多糖用于制備治療肝臟損傷或者制備保肝的藥物，以及用蕨麻多糖制備保肝的營養(yǎng)品。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101269086SQ200810099430
公開日2008年9月24日 申請日期2008年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月9日
發(fā)明者李小麗, 武新安, 閔光寧, 閔光濤 申請人:蘭州大學(xué)