一種抗腫瘤肽變體及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗腫瘤活性肽變體，該蛋白變體相對(duì)于野生型具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長的效果。這些變體蛋白質(zhì)和它們的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多種腫瘤的治療。
【專利說明】一種抗腫瘤肽變體及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，本發(fā)明涉及抗腫瘤肽變體。

【背景技術(shù)】
[0002]ND100 是由 lAla、lGlu、lGly、lLeu、2Pro、IThrUTyr 組成的八肽。體外及體內(nèi)試驗(yàn)均表明ND100具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，可用來制備抗腫瘤藥物，用于治療腫瘤。
[0003]在現(xiàn)有技術(shù)中，為了提高多肽的活性，針對(duì)多肽序列進(jìn)行特異性的改變，從而尋找活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該多肽的生物活性， 申請(qǐng)人:通過大量的實(shí)驗(yàn)，針對(duì)多肽序列進(jìn)行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的變體。
[0004]發(fā)明詳述
[0005]本發(fā)明涉及的多肽，序列如下:
[0006]NC:AlaGluGlyLeuProProThrTyr ；
[0007](NCl):AlaGluGlyLeuProProThrIle ；
[0008](NC2):AlaSerGlyLeuProProThrTyr ；
[0009](NC3):AlaGluGlyLeuProSerThrTyr ；
[0010](NC4):AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr ；
[0011](NC5):AlaGlu GlyGlyLeuProProProThrTyr ；
[0012](NC6):GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr ；
[0013](NC7):AlaGlyGlyLeuProProThrTyr ；
[0014](NC8):GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr ；
[0015](NC9):AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr ；
[0016](NClO):GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr ；
[0017](NCll):GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr ；
[0018](NC12):AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr ；
[0019](NC13):AlaGlyGlyLeuProProProThrIle ；
[0020]對(duì)照I =AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr ；
[0021]對(duì)照2:AlaLeuGlyLeuProProThrTyr ；
[0022]本發(fā)明的多肽合成后，可以做成游離態(tài)形式，也可以做成陽離子鹽，如:TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。
[0023]本發(fā)明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治療。這些藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜?jiǎng)⒛z囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。

【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1:本發(fā)明多肽的人工化學(xué)合成
[0025]本發(fā)明的肽的制備采用液相合成法和活化酯逐個(gè)增長法，將本發(fā)明的肽的C端的第二個(gè)氨基酸的氨基用Boc基(叔丁氧羰?；?保護(hù)，羧基用HOSu (N-羥基琥珀酰亞胺)活化，然后在KHCO3溶液中與C端第一個(gè)氨基酸在30°C水浴，反應(yīng)2天。抽去有機(jī)溶劑，在冰浴中用2mol/LHCl調(diào)pH3~4(沉淀最多時(shí))，用乙酸乙酯抽提，飽和NaCl洗3次，無水Na2SO4干燥，抽干，無水乙醚研磨，得帶保護(hù)基的二肽。用50% TFA(三氟醋酸)處理，脫去Boc基，再與N端帶Boc保護(hù)基，C端用HOSu活化的C端的第三個(gè)氨基酸縮合，用同樣的方法逐個(gè)接上氨基酸，最后用催化氫化法脫去Glu側(cè)鏈上的保護(hù)基，用50% TFA脫去本發(fā)明肽N端的Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC進(jìn)行分離純化，可得98%純度的本發(fā)明的多肽。經(jīng)過電噴霧質(zhì)譜測定，其序列與目標(biāo)序列完全一致。
[0026]實(shí)施例2 =NDlOO的抗腫瘤活性
[0027](I)體外活性測定:
[0028]采用細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，人肝癌細(xì)胞7721、胃癌細(xì)胞MKN、肺癌細(xì)胞A549以各自常規(guī)的培養(yǎng)基，視不同情況加入10%左右的小牛血清，用T-25培養(yǎng)瓶在37°C，5%C02培養(yǎng)箱中單層培養(yǎng)。
[0029]當(dāng)細(xì)胞生長成單層后消化，用含1%小牛血清的培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，按每孔Iml接種到24孔培養(yǎng)板上，37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，加入不同劑量的本申請(qǐng)的多肽，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均設(shè)三個(gè)重復(fù)孔，對(duì)照組加入10μ I的PBS，試驗(yàn)組加入不同劑量的本申請(qǐng)的多肽，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)后，吸出培養(yǎng)液，用PBS洗，然后每孔加入200 μ I消化液消化，待細(xì)胞變圓后，加入800 μ I的PBS，在倒置顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
[0030]抑制率結(jié)果如下:
[0031]
[0032]

【權(quán)利要求】
1.一種抗腫瘤肽，其氨基酸序列為SEQ ID NO:1-14所示。
2.如權(quán)利要求1所述的腫瘤肽變體在制備抑制腫瘤藥物中的用途。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于:所述腫瘤為肝癌、胃癌或肺癌。
4.一種抗腫瘤藥物制劑，它含有權(quán)利要求2所述的腫瘤肽變體以及藥學(xué)上合適的載體 。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104130311SQ201410312285
【公開日】2014年11月5日 申請(qǐng)日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】馬海龍 申請(qǐng)人:馬海龍