一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑及制備方法，由冬蟲草、西洋參、鱉甲、穿山甲、石斛、虎仗、砂仁、大黃、黃芪、黃連、黃芹、佛手、金錢草、白芍、三七、桑椹子、山藥、黃精等藥物組成，分別粉碎成100~200目細(xì)粉，混合均勻即可。本發(fā)明中藥制劑由純天然藥物配制而成，處方簡單，經(jīng)藥效試驗，配伍的協(xié)同效果確切，對肝損傷有很好的治療作用，毒副作用小，臨床癥狀消失迅速，無任何毒副作用，治療周期短，治愈后不反彈，治療成本低，同時減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，患者恢復(fù)正常后，可以停藥而不易復(fù)發(fā)。
【專利說明】一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑及制備方法，是用于肝纖維化和肝硬化治療的中藥組合物，屬于中醫(yī)制藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]全世界每年有100余萬患者死于肝病，其中，1/3在中國，我國是肝病流行較嚴(yán)重的國家。病毒性肝炎引起的慢性肝損傷在我國最為常見。研究肝損傷肝纖維化的發(fā)生機(jī)理以及尋找有效的治療措施是國內(nèi)外學(xué)者共同研究的熱門課題。
[0003]肝纖維化，是由于肝細(xì)胞受到炎性損傷后，其脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物沉積、炎性浸潤細(xì)胞所分泌的各種細(xì)胞因子等刺激肝星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)大量增生沉積，纖維結(jié)締組織異常增生，降解和產(chǎn)生之間無法達(dá)到平衡，從而引起肝纖維化，肝纖維化是慢性肝病最重要的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化等進(jìn)一步發(fā)展、惡化的重要環(huán)節(jié)，此時如果病因消除并經(jīng)適當(dāng)治療，纖維化尚可被逐漸吸收，是可復(fù)性病變，抗纖維治療可阻止乃至逆轉(zhuǎn)纖維化進(jìn)程，故一直受到高度重視。肝硬化是嚴(yán)重危害人類健康的常見病之一，目前我國的發(fā)生率仍保持在較高水平.目前有很多疾病包括肝病難以根治，尤其是酒精、病毒感染等原因所致的肝纖維化乃至肝硬化，越來越多的對人類健康造成了威脅。
[0004]一般認(rèn)為肝纖維化如果發(fā)展成為肝硬化后期則是難以恢復(fù)的了。但是，在臨床上難以將兩者截然分開，因為慢性肝病由肝纖維化到肝硬化是一個連續(xù)的發(fā)展過程。近年的基礎(chǔ)和臨床研究也表明，如果能給予有效的病因治療，或能直接抑制細(xì)胞外基質(zhì)的合成和或促進(jìn)其降解，則己經(jīng)形成的肝纖維化甚至早期肝硬化也是可以逆轉(zhuǎn)的。所以在纖維化的發(fā)生的過程中或者是在肝硬化的早期階段我們渴望可以尋找到有效的藥物或者方法，對抗肝纖維化或者減輕其癥狀。在纖維化過程中，一些細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β )，血小板衍生生長因子(PDGF)，金屬基質(zhì)蛋白酶組織抑制物-Ι(--ΜΡ-Ι)等是肝纖維化的重要介質(zhì)，TGF-β升高使纖維化程度加重，--ΜΡ-1可使形成的纖維降解，如能及時調(diào)節(jié)或阻斷肝纖維化，則肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)，細(xì)胞外基質(zhì)的沉積和降解也是肝纖維化形成過程中很重要的因素。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(AKP)的含量是臨床最常用的檢測肝功能的指標(biāo)，它們的含量的高低又能反映肝損傷的程度。a-平滑肌肌動蛋白(α -SM)在成纖維細(xì)胞不表達(dá)，是肌成纖維細(xì)胞形成的標(biāo)志，也是肝損傷最顯著的特征，成纖維細(xì)胞受損傷等刺激后可以向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化從而表達(dá)大量的a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)o
[0005]目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚缺乏理想的治療藥物，而肝纖維化的中醫(yī)藥防治研究是我國近年來中西醫(yī)結(jié)合防治慢性肝病研究的一大熱點(diǎn)和亮點(diǎn)。多種中藥包括單味藥在體內(nèi)和體外表現(xiàn)出肝保護(hù)功能，比如、三七、黃芪、山藥、西洋參等。冬蟲夏草具有補(bǔ)虛損、益精氣。在現(xiàn)有技術(shù)中，冬蟲夏草與上述藥方?jīng)]有合用治療肝纖維化的文獻(xiàn)報道，亦沒有這些藥方的提取物與冬蟲夏草合用可以預(yù)防治療肝纖維化肝硬化的報道。
[0006]常用保肝抗肝損傷藥甘利欣有較強(qiáng)抗炎的作用和保肝、護(hù)肝降酶的療效，對于各型肝炎及各種原因引起的轉(zhuǎn)氨酶升高都有很好的療效。但會出現(xiàn)納差、惡心、嘔吐、腹脹，以及皮膚瘙癢、蕁麻疹、口干和浮腫，心腦血管系統(tǒng)有頭痛、頭暈、胸悶、心悸及血壓升高等主要不良反應(yīng)。
[0007]四氯化碳(Carbon tetrachloride , CCl4)中毒性肝損傷動物模型是一種經(jīng)典的肝纖維化造模方法，最早最廣泛地用于肝纖維化、肝硬化的實(shí)驗研究上，CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化動物模型在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)等方面與人肝纖維化相似，如二者有肝細(xì)胞壞死后的再生；實(shí)驗動物上引起的中央周圍肝壞死，纖維增生，假小葉內(nèi)以竇隙為主，最后產(chǎn)生結(jié)節(jié)性肝硬化，有時可出現(xiàn)更嚴(yán)重的結(jié)節(jié)性肝硬化，與人在慢性肝病發(fā)展為肝硬化時很相似?，F(xiàn)己廣泛用于肝纖維化發(fā)生的分子機(jī)制，血清學(xué)標(biāo)志物和組織病理的相關(guān)性以及抗纖維化物質(zhì)的藥效學(xué)評價研究中。通過CCl4造模的不同時間，可建立早期肝纖維化模型、早期可逆性的肝硬化模型、有部分可逆性的肝結(jié)節(jié)性硬化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑，用于肝纖維化及肝硬化的治療，具有很好的治療作用。
[0009]本發(fā)明提供的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0010]本發(fā)明提供的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑，其特征在于是由以下藥物按重量份數(shù)比制成的:
冬蟲草I~5，西洋參10~15，鱉甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黃10~15，黃芪6~10，黃連6~10，黃芹10~15，佛手15~20，金錢草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山藥10~15，黃精15~20。
[0011]本發(fā)明所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑，優(yōu)選配比為:
冬蟲草1，西洋參10，鱉甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黃10，黃芪6，黃連6，黃芹10，佛手15，金錢草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山藥10，黃精15。
[0012]本發(fā)明所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟:
按比例稱取藥物，分別粉碎成100-200目細(xì)粉，混合均勻即可。
[0013]【用法用量】口服；5~10克/次；3次/日；
【適應(yīng)癥】肝纖維化、肝硬化、肝損傷、肝炎等。
[0014]本發(fā)明方解如下:因久罹肝疾，克伐日久，正氣必定大虧，故本方取冬蟲草，補(bǔ)虛損益精氣，先扶其正，固本培元，為君藥；配以西洋參補(bǔ)助氣血，扶正祛邪，黃芪補(bǔ)中益氣，托毒外舉，以扶正；任以虎杖，消癥散積，破瘀通經(jīng)；鱉甲，軟堅散結(jié)，平肝潛陽；穿山甲，通經(jīng)絡(luò)，活淤血，消腫痛，三七，散瘀消腫，定痛止血，以祛邪，合以金錢草，清利肝膽濕熱；白芍，養(yǎng)血柔肝，定痛止血，大黃，消痛散腫，推陳致新，活血通經(jīng)，上藥攻補(bǔ)兼施，進(jìn)退有章，輔蟲草，扶正祛邪，共為臣藥。石斛，滋陰養(yǎng)胃，砂仁，行氣調(diào)中，黃連，涼肝膽，解熱毒，黃芹，清熱燥濕，解毒，佛手，理氣和中，舒肝解郁，桑椹子，滋陰補(bǔ)血，山藥，清熱解毒，黃精，補(bǔ)中益氣，諸藥相佐以緩解肝疾日久，所致脾胃失和，血瘀肝絡(luò)之癥。
[0015]經(jīng)動物實(shí)驗證明，將本發(fā)明藥物用于四氯化碳導(dǎo)致的肝纖維化動物模型和肝硬化動物模型，能明顯改善小鼠體重和改善小鼠外周血中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(AKP)的含量和改善組織學(xué)形態(tài)的病理變化和降低細(xì)胞漿周圍的a -SMA的表達(dá)。
本發(fā)明的積極效果在于:由純天然藥物配制而成，處方簡單，經(jīng)藥效試驗，配伍的協(xié)同效果確切，對肝損傷有很好的治療作用，毒副作用小，臨床癥狀消失迅速，無任何毒副作用，治療周期短，治愈后不反彈，治療成本低，同時減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，患者恢復(fù)正常后，可以停藥而不易復(fù)發(fā)。
[0016]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1:橄欖油正常對照組。小鼠肝組織無病變，肝組織內(nèi)肝細(xì)胞胞漿豐富，無明顯脂肪變性及水變性，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞排列整齊。
[0017]圖2:肝纖維化動物模型組。肝組織受損，中央靜脈周圍，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤。肝細(xì)胞脂肪變性，部分肝細(xì)胞水樣變性，排列紊亂，纖維組織明顯增生形成大量纖維間隔，纖維間隔內(nèi)有散在炎癥細(xì)胞浸潤。
[0018]圖3:本發(fā)明藥物實(shí)施例1治療肝纖維化組?？梢姼渭?xì)胞脂肪變性不明顯，內(nèi)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。肝組織輕度改變。有少量纖維間隔。
[0019]圖4:本發(fā)明藥物實(shí)施例2治療肝纖維化組。肝細(xì)胞脂肪變性不明顯，炎癥細(xì)胞浸潤減輕，纖維間隔形成數(shù)量減少。
[0020]圖5:本發(fā)明藥物實(shí)施例3治療肝纖維化組。肝細(xì)胞脂肪變性不明顯，基本無炎癥細(xì)胞浸潤減輕，纖維間隔形成數(shù)量減少。
[0021]圖6:橄欖油正常對照組。肝細(xì)胞排列整齊，很少有a-SMA表達(dá)的陽性細(xì)胞。
[0022]圖7:肝纖維化動物模型組。在肝細(xì)胞胞漿內(nèi)和肝組織纖維間隔內(nèi)，竇周間隙，匯管區(qū)較多a-SMA表達(dá)。
[0023]圖8:本發(fā)明藥物實(shí)施例1治療肝纖維化組?？梢娭醒腱o脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數(shù)間質(zhì)細(xì)胞及匯管區(qū)周圍少數(shù)肝細(xì)胞胞漿a -SMA表達(dá)。
[0024]圖9:本發(fā)明藥物實(shí)施例2治療肝纖維化組?？梢娭醒腱o脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數(shù)間質(zhì)細(xì)胞及匯管區(qū)周圍少數(shù)肝細(xì)胞胞漿a -SMA表達(dá)。
[0025]圖10:本發(fā)明藥物實(shí)施例3治療肝纖維化組?？梢娭醒腱o脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數(shù)間質(zhì)細(xì)胞及匯管區(qū)周圍少數(shù)肝細(xì)胞胞漿a -SMA表達(dá)。
[0026]圖11:橄欖油正常對照組。小鼠肝組織無病變，肝組織內(nèi)肝細(xì)胞胞漿豐富、無明顯脂肪變性及水變性，中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞排列整齊。
[0027]圖12:肝硬化動物模型組。肝組織嚴(yán)重破壞，多個中央靜脈周圍炎癥細(xì)胞浸潤，細(xì)胞點(diǎn)狀壞死。膽管周圍膽汁淤積較嚴(yán)重，固縮的核較多，點(diǎn)狀壞死多，嗜酸性形成。假小葉形成，肝組織小葉內(nèi)、小葉間有大量炎性細(xì)胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)不清，出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、部分肝細(xì)胞水樣變性，排列紊亂，
圖13:本發(fā)明藥物實(shí)施例1治療肝硬化組。肝細(xì)胞脂肪出現(xiàn)輕微變性，內(nèi)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。并逐漸恢復(fù)整齊排列。
[0028]圖14:本發(fā)明藥物實(shí)施例2治療肝硬化組?？筛渭?xì)胞脂肪出現(xiàn)輕微變性，內(nèi)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。并逐漸恢復(fù)整齊排列。
[0029]圖15:本發(fā)明藥物實(shí)施例3治療肝硬化組。肝細(xì)胞脂肪出現(xiàn)輕微變性，內(nèi)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。并逐漸恢復(fù)整齊排列。
[0030]圖16:橄欖油正常對照組。肝細(xì)胞排列較為整齊，結(jié)構(gòu)比較規(guī)整，有少量a -SMA表達(dá)的陽性細(xì)胞。
[0031]圖17:肝硬化動物模型組。肝肝組織纖維間隔和胞漿內(nèi)，竇周間隙，匯管區(qū)有大量a-SMA表達(dá)的陽性細(xì)胞。表達(dá)量增多并呈復(fù)雜的條索狀排列。在假小葉周圍有a-SMA的表達(dá)。
[0032]圖18:本發(fā)明藥物實(shí)施例1治療肝硬化組?？梢娭醒腱o脈周圍和匯管區(qū)周圍及肝細(xì)胞胞漿表達(dá)少量a -SMA。
[0033]圖19:本發(fā)明藥物實(shí)施例2治療肝硬化組?？煽梢娭醒腱o脈周圍和匯管區(qū)周圍及肝細(xì)胞胞漿表達(dá)少量a -SMA。
[0034]圖20:本發(fā)明藥物實(shí)施例3治療肝硬化組?？梢娭醒腱o脈周圍和匯管區(qū)周圍及肝細(xì)胞胞漿表達(dá)少量a -SMA。
【具體實(shí)施方式】
[0035]實(shí)施例1
稱取冬蟲草lg，西洋參IOg,鳘甲15g,穿山甲5g,石斛15g,虎仗20g,砂仁IOg,大黃IOg,黃芪6g，黃連6g，黃芹10g，佛手15g，金錢草30g，白芍20g，三七3g，桑椹子15g，山藥10g，黃精15g共18味 藥，分別粉碎成100-200目細(xì)粉，混合均勻即可。
[0036]實(shí)施例2
稱取冬蟲草3g，西洋參13g，鱉甲18g，穿山甲8g，石斛18g，虎仗20g，砂仁12g，大黃13g，黃芪Sg,黃連Sg,黃芹12g，佛手18g，金錢草28g，白芍22g，三七3g，桑椹子18g，山藥10g，黃精15g共18味藥，分別粉碎成100-200目細(xì)粉，混合均勻即可。
[0037]實(shí)施例3
稱取冬蟲草5g，西洋參15g，鱉甲20g，穿山甲10g，石斛20g，虎仗25g，砂仁15g，大黃15g,黃芪10g，黃連10g，黃芹10g，佛手15g，金錢草30g，白芍20g，三七8g，桑椹子20g，山藥15g，黃精20g共18味藥，分別粉碎成100-200目細(xì)粉，混合均勻即可。
[0038]通過以下實(shí)驗表明本發(fā)明藥物對肝損傷動物的治療效果:
實(shí)驗動物及材料:實(shí)驗用ICR雄性小鼠由吉林省吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心提供，六月齡，體重18-22克。本發(fā)明藥物中各種藥材均購自正規(guī)中藥銷售渠道，經(jīng)超微粉碎機(jī)、粉碎成粉末。分析純CCl4購自北京化學(xué)工廠。橄欖油購自山東魯花集團(tuán)有限公司。小鼠ALT酶聯(lián)免疫分析試劑盒、小鼠AST酶聯(lián)免疫分析試劑盒、小鼠AKP酶聯(lián)免疫分析試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。羧甲基纖維素鈉(CMC)購自濰坊力特復(fù)合材料有限公司，0.5%CMC為本實(shí)驗中藥復(fù)方的混懸劑,蒸懼水配制。本實(shí)驗中造模試劑是指按CC14:橄欖油=1:5比例配制。兔抗a-SMA抗體購自Epitomics公司。羊抗兔二抗及相應(yīng)S-P試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。
[0039]實(shí)驗方法:
造模方法為模型組及各藥物治療組腹腔注射CCl4造模試劑600 μ 1/kg,對照組腹腔注射等劑量橄欖油；每周造模2次，肝纖維化模型連續(xù)造模7周，肝硬化模型連續(xù)造模11周，通過病理切片檢測模型成功后，采用灌胃方式給予藥物治療。本發(fā)明藥物的各治療組劑量為:低劑量組0.75g/kg中藥復(fù)方；中劑量組1.5g/kg中藥復(fù)方；:高劑量組2.25g/kg中藥復(fù)方肝纖維化治療15天中藥復(fù)方，肝硬化治療30天，對照組給予等劑量的中藥復(fù)方混懸液(0.5%羧甲基纖維素鈉)
分別于藥物治療結(jié)束后，采集各組小鼠血清，進(jìn)行APK、ALT、AST肝功能血清學(xué)檢測；取肝組織用于常規(guī)HE染色及免疫組化染色方法進(jìn)行a-SMA檢測。
[0040]外周血清ALT測定原理及方法
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在37° C及PH7.4的條件下，作用于丙氨酸及a_酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30分鐘以后(固定時間)加入2，4- 二硝基苯肼(DNPH)鹽酸溶液，即終止反應(yīng)，同時DNPH與酮酸中羧基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比色讀取吸光度并計算酶活力。測定方法如表1。
[0041]表1:外周血清ALT測定方法
【權(quán)利要求】
1.一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑，其特征在于是由以下藥物按重量份數(shù)比制成的: 冬蟲草I~5，西洋參10~15，鱉甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黃10~15，黃芪6~10，黃連6~10，黃芹10~15，佛手15~20，金錢草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山藥10~15，黃精15~20。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑，其特征在于是由以下藥物按重量份數(shù)比制成的: 冬蟲草1，西洋參10，鱉甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黃10，黃芪6，黃連6，黃芹10，佛手15，金錢草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山藥10，黃精15。
3.根據(jù)權(quán)利 要求1或2所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟: 按比例稱取藥物，分別粉碎成100-200目細(xì)粉，混合均勻即可。
【文檔編號】A61K36/9064GK104013899SQ201410287152
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】喬萍, 陳娟, 楊念, 鄭海箏, 石卓, 張鐵嶺, 祁婧, 孫旭, 溫劍平, 溫得中, 孫冬梅 申請人:吉林大學(xué)