一種抗血栓形成藥物組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抗血栓形成活性確切的螺甾烷型薯蕷皂苷類成分的藥物組合物及其制備方法，在制備工藝中采用生物酶轉(zhuǎn)化的方法，將藥材中的呋甾烷型皂苷轉(zhuǎn)化為螺甾烷型皂苷，提高了藥效成分的收率和純度，簡化了后續(xù)的純化步驟，反應(yīng)條件溫和，收率高，產(chǎn)物穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)，可用于制備抗血栓形成藥物。
【專利說明】一種抗血栓形成藥物組合物及其制備方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種新的抗血栓形成藥物組合物及其制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002]血小板聚集和血栓形成是缺血性心腦損傷的重要原因，抗血栓治療有助于減少心腦血管不良事件的發(fā)生。大量藥理研究發(fā)現(xiàn)，留體皂苷類成分具有抗血小板聚集，降低血月旨，增加冠脈血流量等多種心腦血管活性。
[0003]薯蕷科植物中含有豐富的留體皂苷類成分，至今已從中分離得到30多種留體皂苷元，根據(jù)母核結(jié)構(gòu)中F環(huán)結(jié)構(gòu)的不同，分為呋留烷型和螺留烷型兩大類結(jié)構(gòu)。薯蕷科植物中常作為藥用原料來源的穿龍薯蕷、黃山藥等藥材所含留體皂苷類成分均以呋留烷型結(jié)構(gòu)為主，一般是在藥材貯存或提取加工過程中部分呋留烷型皂苷轉(zhuǎn)化為螺留烷型。目前市售的黃山藥或薯蕷總皂苷提取物制劑中主要成分是呋留烷型留體皂苷[李克明，陳玉武，張永文.地奧心血康中薯蕷皂苷及偽原薯蕷皂苷的分離與鑒定，中國藥房，2007，18 (30)，2339-2341]。發(fā)明專利CN1754541A、CN101035548A公開了一種來源于黃山藥、穿龍薯蕷的甾體皂苷藥物組合物，其組成也是以呋留烷型皂苷為主。
[0004]我們對穿龍薯蕷中主要皂苷類成分進(jìn)行分離，以在體動物血栓形成模型評價(jià)了不同結(jié)構(gòu)類型成分抗血栓形成活性的差異，發(fā)現(xiàn)螺留烷型留體皂苷有明顯的抗血栓的形成作用，強(qiáng)度與對照藥阿司匹林相當(dāng)，而呋留烷類成分未顯示相關(guān)活性。相應(yīng)地，以螺留烷型皂苷為主的提取組分抗血栓活性明顯強(qiáng)于主含呋留烷型皂苷的原生皂苷提取組分。說明大量無效成分的存在是造成現(xiàn)有留體總皂苷提取物制劑臨床低效的主要原因。
[0005]目前制備留體總皂苷通常采用藥材提取液經(jīng)大孔吸附樹脂純化的方法。由于呋甾烷型皂苷水溶性好，與極性相近雜質(zhì)分離困難，工藝路線復(fù)雜，生產(chǎn)可行性差，而且產(chǎn)品中主要成分為呋留烷型皂苷，活性成分含量低而且不穩(wěn)定。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供一種抗血栓形成活性確切的螺留烷型薯蕷皂苷類成分的藥物組合物及其制備方法，其優(yōu)勢在于制備工藝中采用生物酶轉(zhuǎn)化的方法，在提取過程中將藥材所含呋甾烷型留體皂苷轉(zhuǎn)化為活性螺留烷型皂苷，進(jìn)而利用螺留烷型皂苷的溶解惰性簡化了分離純化工藝，大幅提高了藥效成分的收率和純度，降低了生產(chǎn)成本。與現(xiàn)有市售品種不同，本方法制備的留體皂苷提取組分主要含活性的螺留烷型皂苷，有望提高臨床療效。
[0007]本發(fā)明提供一種具有抗血栓形成活性的藥物組合物，其中薯蕷皂苷和纖細(xì)皂苷總重量百分比為50— 99%，優(yōu)選為85— 99%，兩個(gè)成分重量比為1:10 — 30:1 (W:W)，優(yōu)選為1:1 — 10:1 (Wiff)0
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述藥物組合物的制備方法，所述制備方法包括下述步驟:
[0009]a.配制水解酶水溶液，將穿龍薯蕷藥材浸潤，在30_45°C下放置24_72hr ;所述水解酶選自植物提取用酶、纖維素酶、淀粉酶、糖化酶、β-葡萄糖苷酶中的一種或數(shù)種酶的混合物，所述水解酶水溶液中酶的濃度為0.5 — 10% (g/100ml)；
[0010]b.浸潤后的藥材以含水低級醇加熱回流提取，提取液濃縮至無醇，加入適量水稀釋，放置，待析出沉淀，濾得沉淀，以水洗滌，干燥，得類白色粉末。所述含水低級醇中低級醇的濃度為50-95% (V/V);所述低級醇選自碳數(shù)為I 一 3的一元醇；
[0011]c.以低級醇或含水低級醇對所得類白色粉末進(jìn)行重結(jié)晶，得終產(chǎn)物，所述低級醇選自碳數(shù)為I 一 5的一兀醇。
[0012]上述制備工藝步驟a中，所述用于水解的酶優(yōu)選纖維素酶、β -葡萄糖苷酶，或這兩種酶分別與植物提取用酶組成的混合酶。
[0013]上述制備工藝步驟b中，所述提取用含水低級醇，其中低級醇選自甲醇、乙醇，優(yōu)選乙醇。
[0014]上述制備工藝步驟c中，所述重結(jié)晶用低級醇選自甲醇、乙醇，含水低級醇中低級醇濃度為70 — 95% (V/V)。
[0015]本發(fā)明提供的抗血栓形成藥物組合物制備工藝采用生物酶水解法，采用浸潤的方法，將藥材中的呋留烷型皂苷轉(zhuǎn)化為螺留烷型皂苷，簡化了后續(xù)的純化步驟，反應(yīng)條件溫和、收率高，產(chǎn)物穩(wěn)定，制備過程無需使用毒害有機(jī)溶劑或強(qiáng)酸堿性試劑而環(huán)保，具有很強(qiáng)的工業(yè)生產(chǎn)可實(shí)施性。
[0016]本發(fā)明同時(shí)提供所述藥物組合物在抗血栓形成藥物制備中的應(yīng)用。
[0017]穿龍薯蕷留體皂苷類成分以及提取組分抗血栓形成作用:
[0018]1.材料:
[0019]1.1 試劑:
[0020]肝素鈉:天津市化學(xué)試劑批發(fā)部經(jīng)銷，批號:891125。
[0021]氯化鈉:天津市塘沽化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。
[0022]羧甲基纖維素鈉:天津市福晨化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號:20050407。
[0023]吐溫80:天津市精細(xì)化學(xué)品有限公司產(chǎn)品，批號:920311。
[0024]1.2 藥物
[0025]薯蕷皂苷類化合物以及提取組分由TY606課題組提供。
[0026]阿司匹林:為組內(nèi)留樣。配制方法為300mg+10d吐溫+l%CMCNa至30ml。
[0027]1.3 動物
[0028]Wistar大鼠，雄性，體重240?300g，由本院動物室繁殖飼養(yǎng)。
[0029]1.4 儀器
[0030]BS124S型電子天平:北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。
[0031]HZS-D水浴震蕩器:哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品。
[0032]2.方法:
[0033]將250?300g大鼠麻醉(戍巴比妥鈉，54mg/kg，ip)仰臥位固定，分離右頸總動脈和左頸外靜脈。在聚四氟乙烯管的中段放入一根長6cm的絲線。以肝素生理鹽水溶液(50u/ml)充滿聚四氟乙烯管。當(dāng)聚四氟乙烯管的一端插入左頸外靜脈后，由聚四氟乙烯管準(zhǔn)確地注入50u/kg的肝素抗凝，然后再將聚四氟乙烯管的另一端插入右頸總動脈。打開動脈夾，血液從右頸總動脈流至聚四氟乙烯管內(nèi)，返回左頸外靜脈。開放血流15min后中斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重量即得血栓濕重。
[0034]將受試樣品每3個(gè)分為一組，每個(gè)受試樣品做3只動物的試驗(yàn)，每日做一個(gè)模型和一個(gè)陽性藥阿司匹林。
[0035]給藥方式:口服給藥100mg/kg,連續(xù)給藥3次,末次給藥后I小時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。
[0036]表1.薯蕷皂苷類成分對大鼠動靜脈旁路血栓形成模型的抗血栓形成作用

【權(quán)利要求】
1.一種抗血栓形成藥物組合物，其特征在于，所述組合物中薯蕷皂苷和纖細(xì)皂苷總重量百分比為50— 99% ;薯蕷皂苷和纖細(xì)皂苷重量比為1:10 — 30:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗血栓形成藥物組合物，其特征在于所述組合物中薯蕷皂苷與纖細(xì)皂苷總重量百分比為85— 99%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗血栓形成藥物組合物，其特征在于所述組合物中薯蕷皂苷與纖細(xì)皂苷重量比為1:1 一 10:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述抗血栓形成藥物組合物，其特征在于所述組合物是按照以下工藝步驟制備: a.配制水解酶水溶液，將穿龍薯蕷藥材浸潤，在30-45°C下放置24-72h； b.浸潤后的藥材以含水低級醇加熱回流提取，提取液濃縮，加水稀釋，放置，析出沉淀，濾得沉淀，以水洗滌，干燥，得類白色粉末；所述低級醇選自碳數(shù)為I 一 3的一元醇； c.以低級醇或含水低級醇對所得類白色粉末進(jìn)行重結(jié)晶，得終產(chǎn)物；所述低級醇選自碳數(shù)為I 一 5的一兀醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a水解酶選自:植物提取用酶、纖維素酶、淀粉酶、糖化酶、葡萄糖苷酶中的一種或多種酶的混合物；優(yōu)選為纖維素酶、β -葡萄糖苷酶，或這兩種酶分別與植物提取用酶組成的混合酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a水解酶水溶液中酶的濃度為10ml水中含水解酶的量為0.5 — 1go
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b中提取用低級醇選自甲醇、乙醇、丙醇；優(yōu)選乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b中提取用含水低級醇的濃度為體積分?jǐn)?shù)50-95%的醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述步驟c重結(jié)晶用低級醇選自甲醇、乙醇；含水低級醇濃度為體積分?jǐn)?shù)70 - 95%的醇。
10.權(quán)利要求1一 3任一項(xiàng)所述藥物組合物在抗血栓形成藥物制備中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P7/02GK104173360SQ201310200294
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月27日
【發(fā)明者】趙娜夏, 韓英梅, 夏廣萍, 張士俊 申請人:天津藥物研究院