專利名稱：余甘子在制備抗h1n1流感的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥單方余甘子，具體涉及余甘子在制藥中的用途。
背景技術(shù)：
流感是由流感病毒引發(fā)的ー種比普通感冒更為嚴(yán)重的急性呼吸道傳染病，其特點(diǎn)為起病急、傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高、病程長(zhǎng)。目前防治流感的最有效手段是接種流感疫苗，但由于流感病毒變異性強(qiáng)，可使現(xiàn)有疫苗失效，從而加大了防治的難度。目前，抗流感病毒的藥物研究已取得初歩成果，已有病毒唑和達(dá)菲等四種藥物在國(guó)外正式上市。但是，流感病毒發(fā)生變異，對(duì)這些藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，且大多數(shù)的西藥都可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。而天然產(chǎn)物在抗病毒方面有其獨(dú)特作用，具有阻止病毒·致細(xì)胞病變、抑制病毒復(fù)制、調(diào)節(jié)免疫功能、改善肺循環(huán)等綜合功效，特別是毒副作用相對(duì)低，不易形成耐藥性的優(yōu)點(diǎn)，所以從天然產(chǎn)物及其提取單體化合物中篩選新型抗病毒藥物具有潛在的優(yōu)勢(shì)。流行感冒屬于中醫(yī)溫病學(xué)的風(fēng)溫、春溫的范疇，流感病毒相當(dāng)于溫病學(xué)的溫邪。當(dāng)氣候突變，寒暖失常，機(jī)體腠理疏松，衛(wèi)外不顧，易為溫邪乘虛而入?！皽匦吧鲜?，首先犯肺，逆?zhèn)餍陌?，溫邪從皮毛ロ鼻而入，肺衛(wèi)首當(dāng)其沖。若失治誤治，病情發(fā)展，可傳入氣分，或熱毒熾盛病邪直入氣分，表現(xiàn)出高熱頭痛，咽痛咳嗽，周身酸痛。若進(jìn)ー步惡化，熱入營(yíng)血，出現(xiàn)熱擾心神或熱盛動(dòng)風(fēng)等危急癥候。總結(jié)流感的證候特點(diǎn)熱毒熾盛，傳變迅速，以肺系病變?yōu)橹鳌Ｖ嗅t(yī)治療流感，通過(guò)辨證辨識(shí)病因病機(jī)，根據(jù)溫病學(xué)理論，制訂治療法則和方案。病初、中期多采取辛涼解表、清熱解毒的治療原則；病后期則采用清營(yíng)涼血、壯水制火、扶正祛邪的治則，臨床在預(yù)防時(shí)則用扶正的中草藥進(jìn)行組方、用藥。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外開展了很多中醫(yī)藥抗流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究。Nagai等報(bào)道，黃芩中提取的黃酮類化合物通過(guò)抑制病毒包涵體/溶酶體膜的融合，能減少流感病毒感染小鼠的病毒復(fù)制。Utsunomiya等報(bào)道，甘草皂苷可以提高流感病毒感染小鼠生存率，延長(zhǎng)生存時(shí)間，降低肺病毒滴度；但體外實(shí)驗(yàn)表明，甘草皂苷對(duì)于病毒生存和復(fù)制無(wú)影響。李氏等報(bào)道，小兒熱速清ロ服液對(duì)流感病毒感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。Kobayashi等研究表明，銀翹散及甘草、牛蒡子提取物治療流感病毒感染小鼠，均能使生存時(shí)間延長(zhǎng)、生存率提高。Nagai等研究表明，小青龍湯可以抑制流感病毒感染小鼠的肺內(nèi)病毒復(fù)制，抑制病毒從鼻向肺傳播，増加支氣管肺泡灌冼液中IgA抗體含量。中藥新藥連花清瘟膠囊，對(duì)流感病毒甲三、副流感病毒I型、呼吸道合胞病毒、腺病毒三型和七型、單純皰疹病毒一和ニ型均顯示出一定的抑制作用；對(duì)流感病毒甲三、副流感病毒I型、呼吸道合胞病毒抑制作用強(qiáng)大；近期研究顯示其還具有一定的抗禽流感(H5N1)病毒作用。余甘子是大戟科植物油柑的果實(shí)，分布于我國(guó)的福建、廣東、廣西、云南等省及東南亞、印度等地。其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富。經(jīng)分析，發(fā)現(xiàn)含12種維生素、18種氨基酸、16種宏量和微量元素，富含鞣質(zhì)、有機(jī)酸、酚類等，果仁中還含有不飽不ロ脂肪酸。余甘子的價(jià)值不僅體現(xiàn)在營(yíng)養(yǎng)上，更重要的是還有藥用價(jià)值，它是衛(wèi)生部頒布的既是食品又是藥品的ー種果品。我國(guó)古代藥膳《異物志》、《唐本草》、《本草拾遺》及《本草綱目》中對(duì)其藥用價(jià)值均有論述?，F(xiàn)全世界有17個(gè)國(guó)家或民族在自己的傳統(tǒng)藥中使用余甘子。在這些藥中，余甘子與35種治療功效有關(guān)(便秘，止血，消化不良，腸胃炎，止灣，健胃，眼科疾病，鎮(zhèn)咳，保肝，利尿,癌癥,腫瘤,哮喘,解熱,皮膚病，高血壓,貧血,瘧疾,膽囊疾病,黃疸,生殖系統(tǒng)疾病,婦科疾病，壞血病，鼻炎，感冒等)。通過(guò)現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)余甘子具有抗氧化、抗衰老、降脂減肥、抗癌、降血糖、抗菌和抗こ肝病毒的作用，但未見余甘子及其提取物抗流感病毒的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供余甘子的新用途，即在制藥中的應(yīng)用。具體是，提供余甘子在制備抗HlNl流感的藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的藥物是余甘子黃酮提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的常見的制劑，如，片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊。本發(fā)明所述的余甘子黃酮提取物可采用常見的從植物中分離黃酮的方法獲得，本發(fā)明人推薦的方法如下ー種余甘子黃酮提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成取余甘子原料藥，カロ入7 10倍(質(zhì)量體積倍)的水提取I 3次，濾過(guò)，收集濾液，濃縮至相當(dāng)于每毫升(ml)藥液中含余甘子原料藥0. 8 I. 2g,加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2 5，過(guò)濾；濾液過(guò)大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液的酸堿度為中性(PH=7)，再用體積濃度為70 80%的こ醇洗柱，收集こ醇洗脫液并濃縮至每毫升藥液中含余甘子原料藥0. 8 I. 2g，濃縮液用正丁醇萃取，濃縮萃取液，干燥，得粉末狀余甘子黃酮提取物。本發(fā)明所述的藥物對(duì)HlNl型流感病毒致細(xì)胞病變(CPE)具有明顯的抑制作用，在臨床上可顯著降低感染者肺指數(shù)，減輕感染者病毒性肺炎癥狀。為了公眾能更好地理解本發(fā)明的有益效果，下面將通過(guò)實(shí)施例和藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一歩闡明。附圖
說(shuō)圖I為測(cè)定總黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中，圖例為用實(shí)際檢測(cè)結(jié)果繪制的曲線，圖例——為回歸后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式例I( I )余甘子黃酮提取物的制備取余甘子藥材2000g，加入10倍量水提取3次，濾過(guò)，收集濾液，濃縮至2500ml，カロ入鹽酸液調(diào)pH至3 4，濾過(guò)；濾液過(guò)D-101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液的酸堿度為中性，再用加入體積濃度為70%的こ醇洗柱，收集こ醇洗脫液并濃縮至每毫升藥液中含余甘子原料藥lg，濃縮液用正丁醇萃取，濃縮萃取溶液，得，干燥，得粉末狀余甘子黃酮提取物。(II)余甘子黃酮提取物中總黃酮的測(cè)定
I.儀器與試劑I. I 儀器SPECTRONIC GENESYSTM 2紫外一可見光分光光度計(jì)(美國(guó)SPECTR0NIC公司)，CP225電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。I. 2試劑與樣品槲皮素對(duì)照品(廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供)，余甘果提取物(廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心提供)，亞硝酸鈉(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，硝酸鋁(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，氫氧化鈉(分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠)，こ醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，甲醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)。2 方法 2. I余甘子黃酮提取物樣品處理稱取步驟(I )所得到的余甘子黃酮提取物lOOmg，精密稱定，置IOOml容量瓶中，60%こ醇50ml，超聲溶解，放冷，定容，待用。2. 2可見分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2. 2. I對(duì)照品溶液的配備精密稱取120°C干燥恒重的槲皮素對(duì)照品O. 05013g，用體積分?jǐn)?shù)60%微熱こ醇定容至IOOmL,搖勻，即得質(zhì)量濃度為O. 5013mg / mL的應(yīng)用母液。2. 2. 2質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%NaN02溶液的配制稱取亞硝酸鈉5g，置IOOml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。2. 2. 3質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%A1 (NO3) 3溶液的配制稱取硝酸鋁10g，置IOOml容量瓶中，
加蒸餾水定容至刻度搖勻，即得。2. 2. 4ImoI/LNaOH溶液的配制稱取氫氧化鈉顆粒4g，置IOOml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度搖勻，即得。2. 2. 5こ醇(60%)溶液的配制移取63mlこ醇(95%)置IOOml容量瓶中，加蒸餾水
定容至刻度，搖勻，即得。2. 2. 6こ醇(30%)溶液的配制移取32mlこ醇(95%)置IOOml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得。2. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2. 3. I精密移取槲皮素對(duì)照品母液0，1,2,3,4,5ml分別于6只IOml容量瓶中，各加體積分?jǐn)?shù)60%こ醇至5ml，然后再各自加質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%NaN02溶液0. 3ml，搖勻，放置6min。加質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%A1 (N03) 3溶液0. 3ml,搖勻，放置6min。加Imol/LNaOH溶液4ml,加水
0.4ml，搖勻，放置10 — 15min。每管不同質(zhì)量濃度的槲皮素對(duì)照品總體積均為10ml。于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定光譜吸收比，結(jié)果見表I。表I對(duì)照品槲皮素與吸光度
權(quán)利要求
1.余甘子在制備抗HlNl流感的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是余甘子黃酮提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是片劑、膠囊、滴丸或軟膠囊。
4.一種權(quán)利要求2或3所述的余甘子黃酮提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成 取余甘子原料藥，加入7 10倍的水提取I 3次，濾過(guò)，收集濾液，濃縮至相當(dāng)于每毫升藥液中含余甘子原料藥0. 8 I. 2g，加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2 5，過(guò)濾；濾液過(guò)大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液的酸堿度為中性，再用體積濃度為70 80%的こ醇洗柱，收集こ醇洗脫液并濃縮至每毫升藥液中含余甘子原料藥0. 8 I. 2g，濃縮液用正丁醇萃取，濃縮萃取液，干燥，得粉末狀余甘子黃酮提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及余甘子在制藥中的用途，具體涉及余甘子在制備抗H1N1流感的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的抗H1N1流感的藥物是余甘子黃酮提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的制劑。本發(fā)明所述的藥物對(duì)H1N1型流感病毒致細(xì)胞病變(CPE)具有明顯的抑制作用，在臨床上可顯著降低感染者肺指數(shù)，減輕感染者病毒性肺炎癥狀。
文檔編號(hào)A61P31/16GK102836200SQ20121032811
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月6日
發(fā)明者許仕杰, 李耿, 賴小平, 姚海燕 申請(qǐng)人:廣東松山湖臻德生物醫(yī)藥科技有限公司