專利名稱：治療嗜酸細胞性食管炎的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及嗜酸細胞性食管炎(E^的治療。更具體地，本發(fā)明涉及經表皮途徑治療EE的新方法。具體地，本發(fā)明的方法包括將包含組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。本發(fā)明也涉及皮膚貼片裝置和所述皮膚貼片裝置在制造用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用。
背景技術：
嗜酸細胞性食管炎(E^的特征在于食管的嗜酸性粒細胞浸潤(1)。根據(jù)美國、瑞士和澳大利亞的研究0)，ΕΕ已變得越來越普遍。例如，在費城兒童醫(yī)院(The Children' s Hospital of Philadelphia)，從 1994 年的 2 例到 2003 年的 72 例，增加了 35 倍(3)。EE的癥狀已被描述為提示胃食管反流的癥狀，所述癥狀對胃食管反流病(GERD) 藥物無響應。EE的其他癥狀包括吞咽困難，特別是在年輕成人中，以及嬰兒的成長障礙.自然史是未知的，但幾項研究提示了未經治療的疾病的可能進程。Noel等( 在年齢對主訴的回顧性研究中在最年幼的兒童(中位年齢2.0歲)中發(fā)現(xiàn)進食困難，在年齡較大的兒童(中位年齢8.1歲)中發(fā)現(xiàn)嘔吐，在青少年(中位年齢12.0歲)中發(fā)現(xiàn)腹痛，以及在成人中發(fā)現(xiàn)吞咽困難(平均年齡13. 4歲)和食物嵌塞(中位年齡16. 8歲)。這個回顧性數(shù)據(jù)的ー種可能分析是，作為未經治療的疾病的自然史，從嬰兒的進食困難到成人的狹窄和食物嵌塞，癥狀逐步進展并可能惡化。在成年人群中，Straumarm等(6)在30名成人的11年隨訪中發(fā)現(xiàn)疾病沒有緩解。EE的起因與變態(tài)反應有關。經皮膚點刺試驗反應、RAST結果或兩者確定，大多數(shù)患者具有食物和空氣變應原過敏的跡象。然而，只有少部分患者具有食物過敏反應史，這表示與經典的IgE介導的肥大細胞/嗜堿細胞活化相比有截然不同的機制。EE涉及的免疫機制尚不清楚。已經證實，IL5和嗜酸性粒細胞趨化因子增強嗜酸性粒細胞向腸粘膜的遷移。 因此，EE中免疫反應的特征在于對食品和環(huán)境變應原兩者作出反應，增加Th2相關的細胞因子產生。EE和特應性皮炎(AD)具有共同的特征，包括嗜酸性粒細胞浸潤、嗜酸性粒細胞脫顆粒和鱗狀上皮細胞增生，提示可能運行了共同的發(fā)病機制。確定EE是通過食管粘膜中出現(xiàn)高水平的嗜酸性粒細胞(> 20-M個嗜酸性粒細胞/高倍視野)，并伴隨著廣泛的上皮增生。嗜酸性粒細胞位于食管近端和遠端兩者中。此外，EE患者的食管組織表現(xiàn)出粘膜增厚以及基底層增生和乳突延長。EE伴隨著食管運動功能障礙，運動障礙的原因不清楚，但嗜酸性粒細胞活化和脫顆粒已被假定為ー個可能的原因。放射線成像和內窺鏡檢查研究已顯示許多發(fā)現(xiàn)結果，包括狹窄、粘膜環(huán)、潰瘍、白色丘疹和息肉。EE的評估包括利用皮膚點刺試驗或利用RAST尋找食物和空氣變應原致敏的擴大的變態(tài)反應評價、排除GERD、以及嗜酸性粒細胞在食管中的其他原因。最近的研究已表明， 與単獨的皮膚點刺試驗相比，利用遲發(fā)型皮膚貼片試驗評價食物蛋白致敏提高了食物變態(tài)反應的鑒定。值得注意的是，存在GERD并不排除EE或食物變態(tài)反應的診斷，這說明了食物變態(tài)反應評價在這些患者中的重要性。通過利用皮膚點刺試驗和特應性貼片試驗在EE人群中鑒定到的最常見的食物是乳、蛋、小麥、大豆和花生。EE發(fā)作中所涉及的最常見的空氣變應原是花粉和屋塵螨(HDM)。對于特應性EE患者，往往適合進行特定食物抗原禁忌試驗，如果令人不滿意或有實際困難(當患者對許多變應原致敏時)，則提倡由要素配方組成的飲食。有趣的是，已經表明，要素飲食常常改善原發(fā)性EE(變應性或非變應性亞型)患者的癥狀并降低其食管活檢標本中嗜酸性粒細胞的數(shù)量。要素飲食的患者常常需要放置胃管，以達到足夠的熱量支持。糖皮質激素(全身或局部)也已經被使用，結果令人滿意。全身性類固醇是用于急性惡化，而局部類固醇是用于提供長期控制。在無對照的開放標簽研究中，已表明局部氟替卡松降低近端和遠端食管中嗜酸性粒細胞和⑶8+細胞的水平。然而，據(jù)報道，用局部氟替卡松治療的ー些患者有食管念珠菌病?？雌饋恚珽E需要類似于變應性哮喘那樣的長期治療。盡管EE的自然史還沒有被廣泛了解，但EE兒童的父母有長期食管狹窄史卻并不少見。事實上，在一些病例中，來自這樣的父母的食管活檢切片檢查顯示EE長期存在。因此，可能的是，慢性EE如果任其不治療， 可以發(fā)展成進行性食管瘢痕及功能障礙?；及屠滋厥彻苎?Barrett' s esophagitis)的風險、尤其是在EE和GERD同時存在的患者中的風險尚未被確定，但這肯定是值得關注的。 此外，EE患者發(fā)生其他形式的消化性疾病的風險增加，因此要保證通過內窺鏡檢查對整個胃腸道進行常規(guī)監(jiān)測。因此，EE是ー種嚴重的食管疾病，其以越來越高的頻率發(fā)生在兒童、青少年和年輕成人中。目前，它通過食物禁忌和皮質激素進行治療。盡管用皮下免疫療法(SCIT)報道了有希望的結果，但由于高水平的嚴重副作用或不良事件(AE)，這種方法不再被用于食物變態(tài)反應。目前，作者贊成ロ服途徑，即特異性 ロ服耐受誘導(SOTI)或ロ服免疫療法(OIT)，其利用逐漸增加的ロ服劑量和可變的時間表 (從1周到至少1年以上)，或舌下技術(SLIT)。這些方法是有前途的，并且它們的功效已經被證實。然而，在EE中，ロ服途徑還沒有經過試驗。此外，由于食管粘膜與變應原接觸， 它可能引起EE惡化。因此，需要安全、有效和患者耐受良好的治療EE的新方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了治療EE的新方法。更具體地，本發(fā)明首次表明，EE的有效免疫療法可以通過表皮途徑實現(xiàn)。本發(fā)明表明，施用本發(fā)明的皮膚貼片裝置可引起食管中嗜酸性粒細胞浸潤顯著減少以及EE的其他組織學形態(tài)的減少。具體地，本發(fā)明涉及治療對象的嗜酸細胞性食管炎的方法，該方法包括將包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。更具體地，本發(fā)明涉及包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在制造用于通過將所述裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于皮膚來治療對象的嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，所述物質是變應原，優(yōu)選選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨或其組合物的食物或呼吸性變應原。本發(fā)明的另ー個實施方式涉及用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎的包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含經靜電力附著于所述貼片的、干燥形式的、引起皮膚免疫反應的物質。本發(fā)明的另ー個具體實施方式
涉及上面所定義的閉合性皮膚貼片裝置在制造用于治療嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用。本發(fā)明的另ー個優(yōu)選實施方式涉及預防或降低變應性對象的嗜酸細胞性食管炎風險的方法，所述方法包括將包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。本發(fā)明也涉及降低變應性對象的食管或腸中嗜酸性粒細胞浸潤的方法，所述方法包括將包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。本發(fā)明也涉及包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨變應原的至少兩種變應原的組合，優(yōu)選干燥形式，并優(yōu)選經靜電カ附著于貼片。


圖1是顯示表皮治療期間小鼠血清中特異性IgE水平演變的圖。NT 致敏的未處理小鼠，EPIT 致敏的處理小鼠，C:對照小鼠。用平均值表現(xiàn)，并表示為yg.mr1 士 SD。圖2是顯示表皮治療期間小鼠血清中特異性IgG^1水平演變的圖。NT 致敏的未處理小鼠，EPIT 致敏的處理小鼠，C:對照小鼠。用平均值表現(xiàn)，并表示為yg.mnSD。圖3是顯示致敏小鼠食管的一個視野的圖。箭頭表示著色的嗜酸性粒細胞。圖4是表現(xiàn)每組(NT、EPIT和C)的嗜酸性粒細胞定量的圖。結果表示為每平方毫米嗜酸性粒細胞的平均值士 SD。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及通過表皮免疫療法治療對象的EE的方法。具體地，本發(fā)明的方法涉及治療對象的EE的方法，所述方法包括將包含組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚，所述組合物包含引起皮膚免疫反應的物質。本發(fā)明有利地表明，這樣的方法引起嗜酸性粒細胞浸潤的顯著減少，這不僅限于食管，而且還有腸的其他部分例如空腸、胃和結腸。更具體地，本發(fā)明涉及包含組合物的皮膚貼片裝置在制造用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用，所述組合物包含引起皮膚免疫反應的物質。在具體的實施方式中，所述對象遭受對食物變應原或空氣變應原的過敏性/變態(tài)反應。在特定的實施方式中，對象對數(shù)種食物變應原或/空氣變應原具有變應性。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，對象患有食物和/或呼吸性變應原的組合所引起的 EE。在具體的實施方式中，本發(fā)明的物質是EE所涉及的最常見變應原的組合。
在另ー個實施方式中，本發(fā)明涉及方法，其中數(shù)種(例如至少2、3、4種或更多)變應原通過ー個或多個貼片裝置分別、相繼或同時施用于皮膚上。本發(fā)明的另ー個目標涉及貼片，其包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨的ー種或多種變應原，優(yōu)選數(shù)種變應原的組合。在具體的實施方式中，本發(fā)明涉及包含組合物的皮膚貼片裝置，所述組合物包含引起皮膚免疫反應的物質，通過將所述裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于皮膚上以用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎。在另ー個具體實施方式
中，變應原通過靜電力保持在貼片上，其中所述貼片在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。本發(fā)明又一個實施方式在于上面所描述的閉合性貼片裝置在制造用于治療EE的組合物中的應用。本發(fā)明的另ー個具體目標涉及用于治療對象的EE的包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨變應原的一種變應原、 或優(yōu)選至少兩種變應原的組合，優(yōu)選為干燥形式，并優(yōu)選經靜電力附著于貼片。本發(fā)明的另ー個具體目標涉及包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨變應原的至少3種變應原的組合，優(yōu)選為干燥形式，并優(yōu)選經靜電カ附著于貼片。本發(fā)明的另ー個具體目標涉及包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨變應原的至少4種變應原的組合，優(yōu)選為干燥形式，并優(yōu)選經靜電カ附著于貼片。本發(fā)明的另ー個具體目標涉及包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨變應原的5種或更多變應原的組合，優(yōu)選為干燥形式，并優(yōu)選經靜電カ附著于貼片。在具體的實施方式中，本發(fā)明涉及用于治療EE的閉合性皮膚貼片裝置，其包含干燥形式的變應原。本發(fā)明提供用于治療EE的新的表皮免疫療法，其包括利用包含背襯的皮膚貼片裝置通過表皮途徑將組合物(重復)給藥于所述對象，所述背襯的周緣適合與皮膚產生 ー個不透氣的封閉腔，其中所述背襯在所述腔內其面對皮膚側上攜帯了所述ー種或多種蛋白，蛋白的劑量足以在貼片裝置施用于皮膚后降低所述對象的皮膚反應性，所述組合物在貼片裝置施用于皮膚后從背襯中移下，并在此后經表皮途徑遞送至對象，所述給藥經重復后導致皮膚反應性逐步降低。在另一方面，本發(fā)明也涉及包含背襯的皮膚貼片裝置在制造用于治療對象的EE 的變應原組合物中的應用，所述背襯的周緣適合與皮膚產生ー個不透氣的封閉腔，其中背襯在所述腔內其面對皮膚側上攜帯了變應原。在ー個具體方面，在本發(fā)明中，背襯攜帶了下列變應原的蛋白提取物的組合乳、 蛋、花生、小麥、大豆。在ー個具體方面，在本發(fā)明中，背襯攜帶了乳和小麥的蛋白提取物的組合。本發(fā)明可以用于任何對象，例如動物或人類對象，并且特別是任何人類對象，包括兒童和成人。
本發(fā)明的免疫治療方法包括利用具體的貼片裝置通過表皮途徑將變應原組合物給藥于對象，導致腸中嗜酸性粒細胞浸潤減少。在本說明書中使用吋，術語“表皮途徑”表示通過將變應原施用于皮膚上而將該變應原給藥于對象。表皮途徑不需要使用針、注射器或任何其他方式來穿孔或改變表皮淺表層的完整性。在足以允許變應原滲透入表皮角質層的時間段和條件下，保持變應原與皮膚接觸。經重復和/或延長皮膚施用后，變應原可以激活皮膚的郎格漢斯細胞(Langherans cell)和樹突細胞，使它們遷移到淋巴結并激活免疫細胞。術語“治療”包括患者腸粘膜的嗜酸性粒細胞浸潤減少，從而導致EE消失。在具體的實施方式中，治療是預防性的，并旨在降低或預防對象、特別是變應性對象的EE發(fā)作或發(fā)展。這種預防性治療一般包括在EE出現(xiàn)癥狀之前或在其早期階段重復施用所述裝置。在另ー個實施方式中，治療是治療性的，并旨在降低或抑制疾病的進展或促使其消退。在優(yōu)選的實施方式中，變應原選自食物變應原和呼吸性變應原。在優(yōu)選的實施方式中，變應原組合物包含ー種或多種蛋白質。在特定的實施方式中，變應原組合物是液體形式，例如微粒的溶液或分散體。在那種情況下，通過變應原從變應原組合物的液相遷移到皮膚，從而允許變應原透入表皮角質層，來確保有效的表皮給藥。在具體的實施方式中，通過變應原擴散通過不透氣的封閉腔內例如由于出汗而形成的凝結水來確保變應原遷移出變應原組合物的液相。在另ー個實施方式中，變應原組合物是干燥的形式，特別是例如通過冷凍干燥法獲得的顆粒形式。使用具體干燥形式的蛋白質是有利的。事實上，這樣的顆粒變應原可以直接附著于裝置的背村，從而避免任何化學相互作用或任何可能干擾這些蛋白質的免疫原性的反應。此外，使用微粒允許在適當?shù)陌b中保存物質，因而不再有進行臨時制備的任何需要。在這種情況下通過這些變應原溶解在不透氣的封閉腔內所形成的凝結水中，可以確保貼片背襯上所保有的變應原的表皮給藥。變應原組合物還可以包含其他成分，例如佐劑。在實施方式中，配制本發(fā)明所用的組合物不用任何佐劑。在另ー個實施方式中，本發(fā)明所使用的變應原組合物包含佐劑或與佐劑一起施用。在本發(fā)明的情形中，佐劑是指在與特定抗原組合使用時發(fā)揮作用以激活、加快、延長或增強抗原特異性免疫響應的任何物質?？梢耘c組合物變應原組合使用的佐劑化合物包括礦物鹽，例如磷酸鈣、磷酸鋁和氫氧化鋁；免疫刺激性DNA或RNA，例如CpG寡核苷酸；蛋白質， 例如抗體或Toll樣受體結合蛋白；皂甙，例如QS21 ；細胞因子；胞壁酰ニ肽衍生物；LPS ； MPL及衍生物，包括3D-MPL ；GM-CSF (粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子)；咪喹莫特；膠體微粒；完全或不完全弗氏佐劑；Ribi佐劑或細菌毒素，例如霍亂毒素或腸毒素(LT)。本發(fā)明方法中所使用的皮膚貼片裝置優(yōu)選包含背村，所述背襯的周緣適合與皮膚產生不透氣的封閉腔。該背襯在所述腔內其面對皮膚側上攜帯了用于降低皮膚反應性的組合物。優(yōu)選地，背襯的周緣具有粘性并形成氣密性連接，從而與皮膚產生不透氣的封閉腔。在具體的實施方式中，組合物變應原通過靜電力和/或范德華力保持在背襯上。 在組合物變應原是固體或干燥形式(例如微粒)的情況下，這個實施方式特別適合，盡管它也可以間接地用于變應原是液體形式的情況。在本發(fā)明的情形中，術語“靜電力”通常是指涉及電荷的任何非共價力。術語“范德華力”是指背襯表面和固體變應原之間產生的非共價力，并可以是3種類型永久偶極力、 誘導偶極カ和倫敦范德華力。靜電カ和范德華力可以分別或一起發(fā)揮作用。在這方面，在優(yōu)選的實施方式中，貼片裝置包含靜電性背村。在本文中使用吋，“靜電性背村”這個表述是指由能夠通過例如摩擦、加熱或電離積累靜電電荷和/或產生范德華カ并保存這種電荷的材料所制成的任何背襯。靜電性背襯典型地包括帶有空間電荷的表面，空間電荷可以均勻或不均勻地分散。根據(jù)構成所述背襯的材料和用于產生電荷的方法， 出現(xiàn)在背襯表面的一側或另一側的電荷可以是正的或負的。在所有情況下，分布在背襯表面上的正或負電荷對傳導性或非傳導性材料產生吸引力，從而允許保持變應原。微粒也可以是電離的，從而在微粒和背襯之間產生相同類型的靜電吸引力。適合于提供靜電性背襯的材料的實例是玻璃或選自纖維素塑料(CA、CP)、聚乙烯 (PE)、聚乙烯對苯ニ甲酸酯(PET)、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酷、聚丙烯酸特別是聚(甲基丙烯酸甲酷)(PMMA)和含氟聚合物(例如PTFE)的聚合物。上述名單絕不是限制性的。背襯的背面可以用標簽覆蓋，標簽可以在施用前掲去。這個標簽可以使，例如，在背襯至少部分半透明時將組合物變應原保存在黑暗中。通過因存在水分而存在的薄薄的水膜，可以提高或降低表面和粒子之間的カ的強度。通常，貼片是在干燥的地方制造并保存。水分應低到足以允許保存活性成分。水分比率可以進行調節(jié)，以達到最大的粘附力。如上所述，在變應原是干燥形式例如微粒形式的情況下，使用靜電性背襯是特別有利的。此外，微粒大小可以由專業(yè)人員進行調整，以改善靜電カ和/或范德華カ的效率，從而將微粒保持在支持物上。在特定的實施方式中，貼片包括聚合物或金屬涂層的聚合物背村，并且組合物變應原微粒基本上依靠范德華カ保持在背襯上。優(yōu)選地，為了通過范德華カ將微粒保持在支持物上，微粒的平均尺寸為小于60微米。在另ー個實施方式中，變應原利用背襯上的粘性涂層保持在背襯上。背襯可以用粘性材料完全覆蓋或僅部分覆蓋。可以使用不同的閉合性背村，例如鋁涂層的聚乙烯或PET膜，或具有粘性層(丙烯酸、有機硅等)的PE、PVC或PET 泡沫。顆粒形式的物質可以利用噴霧干燥過程、例如國際專利申請No. WO 2009/095591 中所描述的電噴霧過程負載在背襯上。電噴霧裝置利用高電壓將液體分散成細小的氣溶膠。接著，溶解在溶劑中的變應原霧化在貼片背襯上，溶劑在背襯上蒸發(fā)，留下微粒形式的變應原。根據(jù)所需要的蒸發(fā)時間，溶劑可以是例如水或乙醇。專業(yè)人員可以選擇其他溶剤。 將物質施加在貼片背襯上的這種類型的過程允許納米大小和単一大小的微粒并且粒子在背襯上規(guī)律均勻地重新分配。這種技術適合于任何類型的貼片例如具有背襯的貼片，所述背襯包含絕緣聚合物、摻雜的聚合物或覆蓋了傳導層的聚合物。優(yōu)選地，背襯包含傳導性材料。在另ー個實施方式中，背襯的周緣覆蓋了干燥的親水性聚合物，親水性聚合物通過與潤濕的皮膚接觸能夠形成粘性水凝膠膜(如國際專利申請No. WO 2009/050403中所描述的)。在這個實施方式中，皮膚必須在施用貼片前被潤濕。當水凝膠接觸到潤濕的皮膚，聚合物微粒吸收液體并變成具有粘性，從而在貼片施用于皮膚時形成不透氣的封閉腔。這種水凝膠的實例包括聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物。在另ー個具體實施方式
中，液體組合物變應原保持在貼片的支持物上的吸附性材料儲存庫中。組合物可存在于變應原溶液中或變應原的分散液中，例如甘油中。吸附性材料可以由例如醋酸纖維素制成。根據(jù)組成材料，背襯可能是剛性的或柔性的，可可以是或可以不是親水性的，并可以是或可以不是半透明的。在玻璃的情況下，通過將一片塑料與上述玻璃粘合，支持物可以被制成抗破裂的。在一個實施方式中，貼片的背襯包含透明區(qū)域，允許直接觀察和控制炎癥反應，而不必要移開貼片。適合的透明材料包括聚乙烯膜、聚酯(聚對苯ニ甲酸乙ニ酷)膜、聚碳酸酷和各種透明或半透明的生物相容性膜或材料。在具體的實施方式中，背襯中攜帶變應原的部分不與皮膚直接接觸。在這個實施方式中，由背襯、背襯的周緣和皮膚所限定的腔的高度是0. Imm至1mm。本發(fā)明的方法典型地包括，如上所公開，將本發(fā)明的裝置重復施用于對象，導致對象的皮膚反應性逐步降低。變應原確切的劑量以及施用的次數(shù)和接觸的持續(xù)時間可以由專業(yè)技術人員根據(jù)對象、變應原制劑的性質、所使用的貼片裝置的類型等進行調整。每個貼片上組合物變應原的量典型地是0. 1 μ g/cm2至1000 μ g/cm2貼片表面，優(yōu)選20 μ g/cm2至500 μ g/cm2貼片表面，更優(yōu)選20至200 μ g/cm2貼片表面。貼片表面在Icm2 至IOcm2的范圍，優(yōu)選在Icm2至5cm2的范圍。對于施用，貼片裝置可以不用任何預處理直接施用于皮膚，優(yōu)選身體無毛發(fā)的部位。或者，皮膚可以在裝置施用前進行處理，以在與貼片裝置接觸的部位破壞角質層、去除毛發(fā)或僅僅引起皮膚的水化。如實驗部分中所公開的，本發(fā)明的方法引起對象腸粘膜中嗜酸性粒細胞逐步減少。本發(fā)明也涉及上面所描述的皮膚貼片裝置在制造用于預防或治療對象的EE的組合物中的應用。給出下面的實施例是用于說明目的，而不是作為限制。 實施例方法研究設計EPIT治療嗜酸細胞性食管炎(E^的可行性和功效在對花生致敏的小鼠模型中進行評價。在致敏階段后，動物被分成2組未治療組(NT組)和治療組，治療組利用進ー步描述的(EPIT)的表皮遞送系統(tǒng)，每周一次通過表皮進行治療，總時程為8周。對照組(C) 也由未致敏的動物組成。在實驗開始和結束吋，血液被采樣用于分析，并且在花生變應原ロ 服激惹后作組織學分析。動物和蛋白提取物購自查爾斯河實驗室(Charles River Laboratories)(法國)的四周齡雌性BALB/c小鼠(n = 30)被花生蛋白致敏。利用BALB/c小鼠作為對花生蛋白致敏的鼠模型描述在Adel-Patient等，2005中。這種模型在激惹后應重現(xiàn)在變應性人類中所觀察到的良好的IgE特異性和癥狀。所有實驗均根據(jù)歐洲共同體動物管理條例執(zhí)行，并具有法國獸醫(yī)服務許可92-305。所使用的花生蛋白提取物(PP^購自Greer實驗室(美國)。致敏方案在第1、6、12、18、24、30天，通過胃內管飼法，20只BALB/c小鼠接受Img混有10 μ g 霍亂毒素(CT)的均質PPE。在第43天，從眼窩后靜脈叢收集血清，離心，并將樣品保存在-20°C直至進ー步分析。未接觸免疫原的小鼠在同一天取血(η = 10)。通過上面所定義的生物學參數(shù)監(jiān)測致敏。處理方案EPIT在8周時間內如下所述每周執(zhí)行一次小鼠用氯胺酮和甲苯噻嗪進行腹膜內麻酔，并用電動剪毛器和脫毛膏去毛。第2 天，帶有背襯的皮膚貼片裝置被置于小鼠的背上，并用繃帶保持48小吋，所述背襯包含由含100μ g PPE的溶液所形成的水凝膠，所述背襯的周緣適合與小鼠皮膚產生不透氣的封閉腔。EPIT期間每2周抽取血液樣本，以及在處理結束時(D98)抽取血液樣本，以測定血
清學反應。變應原食物激惹和食管取樣處理結束吋，小鼠在連續(xù)3天內只喂花生仁。接著，重新引入標準食物，并且小鼠在連續(xù)3天內通過胃內給藥接受了 50mg花生粉。然后，殺死小鼠，取出食管并固定在10% 中性福爾馬林緩沖液中，用石蠟包埋并切成5μπι的切片。制備切片，并用Hemalim Eosin Safran組織學分析(食管中的嗜酸性粒細胞)^fe^^Otfi ECVP (European College of Veterinary Pathologists, H^yjfl^E 病理學家學院)認證的解剖病理學家進行盲法分析。每張切片首先做描述性判斷，然后對 6個代表性視野的嗜酸性粒細胞進行定量。結果表示為嗜酸性粒細胞/mm2組織面積。特異性施IrGU IgG2a的定量在免疫治療前和期間，從眼窩后靜脈叢收集血液樣本，血漿保存在-30°C直至進ー 步分析。利用FDA 2001指南驗證過的定量ELISA被用于特異性IgE、IgGl和IgG^。簡言之，微量滴定板用作用濃度為10yg/ml的PPE進行包被。100 μ 1的各血清連續(xù)稀釋液被分配到每個孔中，并在4°C孵育M小吋。堿性磷酸酶標記的抗-小鼠IgGl或IgG^1抗體 (krotec，英格蘭)被用作示蹤劑。試劑(pNPP) (Sigma，法國)被用作酶底物。與在相同的條件下使用與示蹤劑互補的杭-小鼠IgE、IgG或IgG^1抗體(krotec，英格蘭)代替花生蛋白包被的固相來執(zhí)行總IgE、IgGl或IgG^1分析所獲得的濃度-響應曲線進行比較，來定量特異性IgE、IgGl和IgG^i。小鼠免疫球蛋白標準品從Serotec獲得。統(tǒng)計學分析Graph Pad軟件(圣地亞哥，美國)被用于統(tǒng)計學分析。處理小鼠與對照小鼠比較吋，血清學數(shù)據(jù)利用方差分析(ANOVA)和Durmett檢驗進行分析，或者，在所有組互相比較吋，利用方差分析和Tukey檢驗。對于嗜酸性粒細胞計數(shù)，數(shù)據(jù)表示為平均值士SD。比較不同組小鼠的統(tǒng)計學顯著性是利用t檢驗進行確定。結果血清學反應IgE和IgGl 花生致敏的具體特征在于在第43天產生特異性IgE，如圖1所示。 EPIT 后，與 NT 組(0. 166士0. 01 μ g/ml)相比，EP 組(0. 139士0. 01 μ g/ml)的特異性 IgE 顯著降低(P<0.05)。此外，在免疫治療期間，沒有觀察到特異性IgGl的改變(數(shù)據(jù)未顯示)°IgG2a =EPIT 8周后處理小鼠(圖2)與NT小鼠(圖2)相比，特異性IgG^i顯著增加，分別為 14. 96士0. 60 對 4. 73士 1. 75 μ g/ml (P < 0. 05)。為了證實從Th2主導型到TH2/Thl均衡型的免疫偏離，對每組的IgGl/IgGh比進行評估。僅EP組的IgGl/IgGh比降低(從0. 036至0. 006)而NT組不降低(從0. 038至 0. 041)，這表明Thl型增加以獲得更均衡的Th2/Thl型。組織學分析嗜酸件粒細胞定量嗜酸細胞性食管炎在致敏的NT小鼠中產生，如圖3所示，在圖中可以觀察到大量的嗜酸性粒細胞。致敏NT小鼠的嗜酸性粒細胞浸潤(136 士 32個嗜酸性粒細胞/mm2)顯著高于對照小鼠(7 士 3個嗜酸性粒細胞/mm2) (P < 0. 01)(圖4)。表皮處理將嗜酸性粒細胞的數(shù)量顯著降低至平均值50士 12個嗜酸性粒細胞/ mm2 (P < 0. 05)(圖 4)。結論引起從Th2主導型到Th2/Thl再平衡型的免疫偏離的表皮處理看起來在對花生致敏的小鼠臨床前模型中可有效預防嗜酸細胞性食管炎。參考文獻1. Furuta GT, Liacouras CA, Collins MH %= . Gastroenterology 2007 ；133 1342-1363。2.Cherian S, Smith NM, Forbes DA. Arch Dis Child 2006 ；91 :1000_1004。3. Liacouras CA, Spergel JM, Rucheili E 等.Clin Gastroenterol Hepatol 2005 ；3 :1198-1206o4. Spergel, Jonathan M, Brown-ffhitehorn 等.J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2009 ；48 :30_36。5. Noel RJ，Putnam PE, Rothenberg ME. N Engl J Med 2004 ；351 :940-941。6. Straumann A, Spichtin HP, Grize L 等.Gastroenterology 2003 ；125 1660-1669。7. Rothenberg M.J Clin allergy Immunol 2004;113:11-28。
權利要求
1.包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在制造用于通過將所述裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于皮膚上來治療對象的嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用。
2.權利要求1的應用，其中所述皮膚貼片裝置施用于皮膚引起對象的食管和腸中嗜酸性粒細胞浸潤減少。
3.權利要求1或2的應用，其中所述對象遭受對ー種或多種食物變應原和/或空氣變應原的變態(tài)反應。
4.權利要求1至3中任一項的應用，其中所述物質是變應原，優(yōu)選是食物或呼吸性變應原或其組合。
5.權利要求4的應用，其中所述變應原選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨。
6.權利要求1至5中任一項的應用，其中ー種以上變應原通過ー個或多個貼片裝置分別、相繼或同時被施用于皮膚上。
7.上述權利要求中任一項的應用，其中所述物質是干燥的形式。
8.上述權利要求中任一項的應用，其中所述方法包括重復施用所述皮膚貼片裝置。
9.上述權利要求中任一項的應用，其中所述組合物還包含藥學上可接受的載體。
10.皮膚貼片裝置，其包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物，所述裝置用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎。
11.權利要求10的貼片裝置，其中所述貼片裝置是包含組合物的閉合性貼片裝置，所述組合物包含經靜電力附著于貼片的、干燥形式的、引起皮膚反應的物質。
12.權利要求11的貼片，其包含選自乳，蛋、小麥、大豆、花生、花粉和屋塵螨的ー種或多種變應原。
13.預防或降低變應性對象的嗜酸細胞性食管炎風險的方法，所述方法包括將包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于所述對象的皮膚。
14.降低變應性對象的食管或腸中嗜酸性粒細胞浸潤的方法，所述方法包括將包含含有引起皮膚免疫反應的物質的組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于所述對象的皮膚。
15.包含組合物的閉合性皮膚貼片裝置，所述組合物包含選自乳、蛋、小麥、大豆、花生、 花粉和屋塵螨變應原的至少兩種變應原的組合，所述變應原優(yōu)選為干燥形式并優(yōu)選經靜電力附著于所述貼片。
全文摘要
本發(fā)明涉及EE的治療。更具體地，本發(fā)明涉及經表皮途徑治療EE的新方法。具體地，本發(fā)明的方法包括將包含組合物的皮膚貼片裝置在允許所述組合物與皮膚之間接觸的條件下施用于對象的皮膚。本發(fā)明也涉及皮膚貼片裝置和所述皮膚貼片裝置在制造用于治療對象的嗜酸細胞性食管炎的組合物中的應用。
文檔編號A61K39/00GK102596237SQ201080048257
公開日2012年7月18日 申請日期2010年9月6日 優(yōu)先權日2009年9月7日
發(fā)明者盧西·蒙杜萊特, 皮埃爾-亨利·本哈穆 申請人:Dbv技術公司