專利名稱：作為ccr-3受體拮抗劑的取代的吡咯烷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些2，4-取代的吡咯烷衍生物，它們是CCR-3受體拮抗劑，并因此可用于治療具有由其所介導(dǎo)的疾病狀態(tài)，例如哮喘的哺乳動物。本發(fā)明還涉及包含它們的藥物組合物，制備它們的方法和它們的應(yīng)用。
組織嗜酸性粒細胞增多是許多病理疾病，例如哮喘，鼻炎，濕疹和寄生蟲感染的特征(參見Bousquet，J.等，N.Eng.J.Med.3231033-1039(1990)和Kay，A.B.和Corrigan，C.J.Br.Med.Bull.4851-64(1992))。在哮喘中，嗜酸性粒細胞累積和活化與破壞支氣管上皮和對縮肌介質(zhì)過度反應(yīng)有關(guān)。已知趨化因子如RANTES，eotaxin和MCP-3活化嗜酸性粒細胞(參見Baggiolini，M.和Dahinden，C.A.Immunol.Today.15127-133(1994)，Rot，A.M.等.J.Exp.Med.176，1489-1495(1992)和Ponath，P.D.等.J.Clin.Invest.，97卷，#3，604-612(1996))。然而，不同于也誘導(dǎo)其它白細胞類型移行的RANTES和MCP-3，eotaxin對嗜酸性粒細胞具有選擇趨化性(參見Griffith-Johnson，D.A等.Biochem.Biophy.Res.Commun.1971167(1993)和Jose，P.J.等.Biochem.Biophy.Res.Commun.207，788(1994))。通過皮內(nèi)或腹膜內(nèi)注射或氣溶膠吸入，在給藥eotaxin的部位觀察到特異性的嗜酸性粒細胞累積(參見Griffith-Johnson，D.A等.Biochem.Biophy.Res.Commun.1971167(1993)；Jose，P.J.等.J.Exp.Med.179，881-887(1994)；Rothenberg，M.E.等.J.Exp.Med.181，1211(1995)和Ponath.P.D.J.Clin.Invest.，97卷，#3，604-612(1996))。
糖皮質(zhì)激素例如地塞米松，methprednisolone和氫化可的松已用于治療很多嗜酸性粒細胞相關(guān)的疾病，包括支氣管哮喘(R.P.Schleimer等，Am.Rev.Respir.Dis.，141，559(1990))。認(rèn)為糖皮質(zhì)激素在這些疾病中抑制IL-5、IL-3介導(dǎo)的嗜酸性粒細胞存活。然而，長期使用糖皮質(zhì)激素可在患者中產(chǎn)生副作用，例如青光眼，骨質(zhì)疏松和生長遲緩(參見Hanania N.A等.，J. Allergy and Clin.Immunol.，96卷，571-579(1995)和Saha M.T.等，ActaPaediatrica，86卷，#2，138-142(1997))。因此，需要具有一種治療嗜酸性粒細胞相關(guān)的疾病、而不產(chǎn)生這些不良副作用的可供選擇的方法。
近來，鑒定了CCR-3受體是一種主要的趨化因子受體，嗜酸性粒細胞利用其來對eotaxin，RANTES和MCP-3進行應(yīng)答。當(dāng)轉(zhuǎn)染到鼠前-β淋巴瘤系中時，CCR-3結(jié)合eotaxin，RANTES和MCP-3，并在這些細胞上賦予對eotaxin，RANTES和MCP-3的應(yīng)答(參見Ponath.P.D.等.J. Exp.Med.183，2437-2448(1996))。CCR-3受體在嗜酸性粒細胞、T-細胞(Th-2亞型)嗜堿性粒細胞和肥大細胞表面上表達，并且對于eotaxin是高度選擇性的。研究表明用抗CCR-3mAb預(yù)處理嗜酸性粒細胞完全抑制嗜酸性粒細胞對eotaxin，RANTES和MCP-3的趨化性(參見Heath H.等.J.Clin.Invest.，99卷，#2，178-184(1997))。1998年8月14日提交的、申請人的共同懸而未決的美國專利申請系列號09/134,013和WO 00/31032公開了通過趨化因子例如eotaxin抑制嗜酸性粒細胞補充的CCR-3拮抗劑。因此，阻斷CCR-3受體結(jié)合RANTES，MCP-3和eotaxin的能力，從而防止嗜酸性粒細胞的募集可用于治療嗜酸性粒細胞介導(dǎo)的炎癥疾病。
本發(fā)明涉及新的吡咯烷衍生物，其能抑制eotaxin結(jié)合到CCR-3受體上，因此可用于治療患有嗜酸性粒細胞誘導(dǎo)的疾病例如哮喘的哺乳動物。
因此，在第一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，或它的藥用鹽 其中
R1是氫，C1-6烷基，酰基，雜烷基，-CONR3R4(其中R3和R4獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR5(其中R5是氫，C1-6烷基或雜烷基)或-SO2R6，R6為C1-6烷基；alk1是1-6個碳原子的亞烷基鏈；X是-NHCO-或-CONH-；Y是1-3個碳原子的亞烷基鏈或2-3個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子被一個雜原子所代替，所述雜原子選自-O-，-NRb-[其中Rb是氫，C1-6烷基，?；?，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基，或芳基C1-6烷基)]和-S(O)n-，其中n是0-2的整數(shù)；Ar1是雜芳基或苯基，其中除了Ar2基團外，雜芳基或苯基還被取代基所取代，所述取代基選自氫，鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，硝基，酰氨基，氨基磺?；突酋；被籄r2是芳基；alk2是1-6個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子任選被-CO-，-NRc-[其中Rc是氫，C1-6烷基，?；?CONR10R11(其中R10和R11獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR12(其中R12是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基)]或-S(O)n1-代替，其中n1是0-2的整數(shù)；Ar3是C3-7環(huán)烷基，芳基或雜芳基。
同樣，在上述定義的化合物中[它們在下文指的是(i)]，優(yōu)選的是下述化合物(ii)(i)的化合物，其中Y是-O-(CH2)-，-O-(CH2)2-，-O-(CHCH3)-，-NRb-(CH2)-，-NRb-(CH2)2-，-NRb-(CHCH3)-[其中Rb是氫，C1-6烷基，?；?CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基)]，-S(O)n-(CH2)-，-S(O)n-(CH2)2-或-S(O)n-(CHCH3)-，其中n是0-2的整數(shù)。(iii)(ii)的化合物，其中R1是氫，C1-6烷基，酰基，-COOR5(其中R5是C1-6烷基)或-SO2Ra，其中Ra是C1-6烷基。(iv)(iii)的化合物，其中R1是氫，C1-6烷基，酰基，或-SO2Ra，其中Ra是C1-6烷基。(v)(iv)的化合物，其中R1是氫，甲基，乙酰基，-COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3或-CO2-叔-丁基。(vi)(ii)的化合物，其中Y是-SCH2-，-OCH2-或-NHCH2-。(vii)(vi)的化合物，其中X是-CONH-。(viii)(vii)的化合物，其中Y是-SCH2-或-OCH2-。(ix)(viii)的化合物，其中Y是-OCH2-，alk1和alk2獨立是1或2個碳原子的亞烷基鏈。(x)(ii)的化合物，其中Ar1是雜芳基。(xi)(x)的化合物，其中Ar1是嘧啶-2基。(xii)(xi)的化合物，其中Y是-SCH2-或-OCH2-。(xiii)(xii)的化合物，其中Ar2是任選被一個或兩個取代基取代的芳基，所述取代基選自C1-6烷氧基，羥基或鹵素。(xiv)(xiii)的化合物，其中Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基和是在嘧啶-2-基的5-位。(xv)(xii)的化合物，其中alk2是-CH2-和Ar3是芳基。(xvi)(xv)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基。(xvii)(i)的化合物，其中Y是(a)-(CH2)-，-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CHCH3)-，-(CHCH3)-(CH2)-或-(CH2)-(CHCH3)-；或(b)-(CH2)-O-，-(CH2)2-O-，-(CHCH3)-O-，-(CH2)-NRb-，-(CH2)2-NRb-，或當(dāng)X是-CONH-時，是-(CHCH3)-NRb-[其中Rb是氫，C1-6烷基，?；?，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基]。(xviii)(xvii)的化合物，其中Ar1是雜芳基和Ar2是任選被一個或兩個取代基所取代的芳基，所述取代基選自C1-6烷氧基，羥基或鹵素。(xix)(xviii)的化合物，其中Ar1是嘧啶-2-基，和Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基和是在嘧啶-2-基的5-位。(xx)(xix)的化合物，其中X是-CONH-和R1是-COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3或-CO2-叔-丁基。(xxi)(xx)的化合物，其中Y和alk1獨立是亞甲基或亞乙基，alk2是亞甲基和Ar3是3，4-二氯苯基。
在第二方面，本發(fā)明提供了包含治療有效量的式(I)的化合物的藥物組合物或它的藥用鹽和藥用賦形劑的藥物組合物。
在第三方面，本發(fā)明提供了式I的化合物的應(yīng)用，其用于在哺乳動物中治療可通過給藥CCR-3受體拮抗劑治療的疾病，如呼吸疾病如哮喘。
在第四方面，本發(fā)明提供了制備式(I)的化合物的方法。
在第五方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物或它的藥用鹽制備包含一個或多個式I的化合物的藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療由CCR-3受體介導(dǎo)的疾病。病狀包括呼吸疾病如哮喘。
如未另外聲明，下述在說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語具有下述含義“烷基”表示1-6個碳原子的線性飽和一價烴基或3-6個碳原子的支化的飽和一價烴基，如甲基，乙基，丙基，2-丙基，正-丁基，異-丁基，叔-丁基，正-戊基，2-，3-甲基丁基，新-戊基。
如未另外定義，“亞烷基”表示1-6個碳原子的線性飽和的二價烴基或3-6個碳原子的支化的飽和的二價烴基，如亞甲基，(2-丙基)亞甲基，亞乙基，甲基亞乙基，(2-丙基)亞乙基，亞丙基，1-或2-甲基亞丙基，1-或2-乙基亞丙基，亞戊基。
“環(huán)烷基”表示3-7個環(huán)碳原子的飽和一價環(huán)烴基，如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)己基，4-甲基環(huán)己基。
“?；北硎净鶊F-C(O)R，其中R是烷基，鹵代烷基，用羧基取代的烷基，烷氧基羰基，雜環(huán)或芳氧基羰基，芳基，芳烷基，雜芳基，或雜芳烷基，如乙?；?，三氟乙?；?，-C(O)CH2CO2H，-C(O)CH2-CO2CH3，苯甲?；?，噻吩甲酰基。
“鹵素”表示氟，氯，溴或碘，優(yōu)選氟和氯。
“鹵代烷基”表示被一個或多個相同或不同的鹵素原子取代的烷基，如-CH2Cl，-CF3，-CH2CF3，-CH2CCl3。
“單烷基氨基”表示基團-NHR，其中R是烷基，如甲基氨基，乙基氨基，(1-甲基乙基)氨基。
“二烷基氨基”表示基團-NRR’，其中R和R’獨立是烷基。代表性的實例包括，但不局限于，二甲基氨基，甲基乙基氨基，二(1-甲基乙基)氨基。
“磺酰氨基”表示基團-NHSO2R，其中R是氫或烷基。代表性的實例包括，但不局限于-NH2SO2CH3。
“氨基磺?；北硎净鶊F-SO2NHR，其中R是烷基。代表性的實例包括，但不局限于-SO2NH2，-SO2NHCH3。
“烷基磺?；北硎净鶊F-SO2R，其中R是烷基。代表性的實例包括，但不局限于甲基磺?；?，乙基磺?；?。
“芳基”表示6-10環(huán)原子的一價單環(huán)或雙環(huán)芳烴。芳環(huán)可任選被一個或多個取代基，優(yōu)選1、2或3個取代基所取代，所述取代基選自烷基，鹵代烷基，烷硫基，烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，羥氨基，羥基，烷基磺?；?，磺?；被?，氨基磺酰基，NR’R”(其中R’是氫或烷基和R”是氫，烷基，酰基，烷基磺?；?和-COOR(其中R是氫或烷基)。更具體地，術(shù)語芳基包括，但不局限于苯基，1-萘基，2-萘基，和它們的衍生物如2，3-二氯苯基，3，4-二氯苯基，甲氧基苯基，2，3-二甲氧基苯基，3，4-二甲氧基苯基。
“雜芳基”表示5-10個環(huán)原子的一價單環(huán)或雙環(huán)芳族基，所述環(huán)原子包含一個、兩個或三個選自N，O或S的環(huán)雜原子，其余的環(huán)原子是C。該芳族基任選地稠合苯基和任選地被一個或兩個取代基所取代，所述取代基選自烷基，鹵代烷基，烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，單烷基氨基，二烷基氨基，羥基和-COOR(其中R是氫或烷基)。更具體地，術(shù)語雜芳基包括，但不局限于吡啶基，吡咯基，噻吩，吡唑基，噻唑基，咪唑基，嘧啶基，噻二唑基，吲哚基，咔唑基，氮雜吲哚基，苯并呋喃基，苯并咪唑基，苯并噻唑基(benzthiazolyl)，喹喔啉基，苯并三唑基，苯并異噁唑基(benzisoxazolyl)，嘌呤基，喹啉基，異喹啉基，苯并吡喃基，和它們的衍生物。
“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”表示飽和的或未飽和的、3-8個環(huán)原子的環(huán)狀基團，其中一個或兩個環(huán)原子是選自N，O或S(O)n(其中n是0-2的整數(shù))的雜原子，其余的環(huán)原子是C，其中一個或兩個C原子可任選被羰基替代。雜環(huán)可任選獨立被一個、兩個或三個取代基所取代，所述取代基選自烷基，鹵代烷基，芳基，芳烷基，雜芳基，雜芳烷基，鹵素，氰基，氨基，單烷基氨基，二烷基氨基，-COOR(其中R是氫或烷基)，或-XR(其中X是O和R是氫或烷基)。代表性的實例包括，但不局限于，四氫吡喃基，哌啶子基，哌嗪子基(piperazino)，吡咯烷子基(pyrrolidino)。
“雜烷基”表示如上述定義的烷基，其攜帶包含雜原子的取代基，所述雜原子選自N，O，S(O)n，其中n是0-2的整數(shù)。代表性的取代基包括-NRaRb，-ORa或-S(O)nRc，其中n是0-2的整數(shù)，Ra是氫，烷基，鹵代烷基，或-COR(其中R是烷基，羥基，或烷氧基)，Rb是氫和烷基和Rc是氫，烷基，氨基，單烷基氨基，或二烷基氨基。代表性的實例包括，但不局限于，2-甲氧基乙基，羥甲基，甲氧基甲基，2-羥乙基，3-羥丙基，-氨基乙基，2-二甲基氨基乙基。
“羥烷基”表示被一個或兩個羥基取代的2-6個碳原子的線性一價烴基或3-6個碳原子的支化的一價烴基，條件是，如果存在兩個羥基，它們不同時存在于同一個碳原子上。代表性的實例包括，但不局限于，2-羥基乙基，2-羥基丙基，3-羥基丙基，1-(羥基甲基)-2-甲基丙基，2-羥基丁基，3-羥基丁基，4-羥基丁基，2，3-二羥基丙基，1-(羥基甲基)-2-羥基乙基，2，3-二羥基丁基，3，4-二羥基丁基和2-(羥基甲基)-3-羥基丙基，優(yōu)選2-羥基乙基，2，3-二羥基丙基和1-(羥基甲基)-2-羥基乙基。羥基烷基是雜烷基的一個子集。
“芳烷基”(芳基烷基)表示基團-RaRb，其中Ra是亞烷基，Rb是上述定義的芳基，如芐基，苯乙基，3-(3-氯苯基)-2-甲基戊基。
“烷氧基”表示-OR，其中R是烷基，分別如上述定義，如甲氧基，乙氧基，丙氧基。
“任選”或“任選地”表示隨后描述的事件或情況可以但是不必需發(fā)生，和該描述包括該事件或情況出現(xiàn)的情況，和該事件或情況不出現(xiàn)的情況。例如，“任選被烷基一-或二-取代的雜環(huán)基”表示烷基可以但是不必需存在，并且該描述包括雜環(huán)基被烷基一-或二-取代的情形，也包括雜環(huán)基不被烷基取代的情形。
“氨基-保護基”指的是那些意圖在合成程序中保護氮原子以免進行不需要的反應(yīng)的有機基團，如芐基，芐氧基羰基(CBZ)，叔-丁氧基羰基(BOC)，三氟乙酰基。
具有相同分子式，但在性質(zhì)或它們的原子的結(jié)合順序或它們的原子在空間中的排列方面不同的化合物命名為“異構(gòu)體”。它們的原子在空間中的排列不同的異構(gòu)體命名為“立體異構(gòu)體”。彼此不互為鏡像的立體異構(gòu)體命名為“非對映異構(gòu)體”，而那些是彼此是非可疊合的鏡像的化合物命名為“對映體”。當(dāng)化合物具有不對稱中心時，例如，如果碳原子結(jié)合四個不同的基團，可能存在一對對映體?？蓪τ丑w表征為它的不對稱中心的絕對構(gòu)型，并且用Cahn和Prelog的R-和S-順序法則來描述，或用分子旋轉(zhuǎn)偏振光的平面的方式來描述，并表示為右旋或左旋(即，分別表示為(+)或(-)異構(gòu)體)。手性化合物可作為單獨的對映體或作為它們的混合物存在。包含相同比例的對映體的混合物稱為“外消旋混合物”。
本發(fā)明的化合物可具有一個或多個不對稱中心；這類化合物可因此作為單獨的(R)-或(S)-立體異構(gòu)體或作為它們的混合物來生產(chǎn)。例如，如果在式(I)化合物中的R1取代基是烷基，那么它連接的碳原子是不對稱中心，并且式(I)的化合物可作為(R)-或(S)-立體異構(gòu)體存在。如果未另外指出，在說明書和權(quán)利要求中描述或命名的具體化合物包括單獨的對映體及其外消旋的或其它方式的混合物。確定立體化學(xué)和分離立體異構(gòu)體的方法是本領(lǐng)域所熟知的(參見“Advanced Organic Chemistry”第四版第四章中的討論，J.March，John Wiley和Sons，紐約，1992)。
“藥用賦形劑”表示用于制備藥物組合物的賦形劑，其通常是安全、無毒的，并且既不是在生物學(xué)上也不是在其它方面上不良的，并且包括對于獸用以及人藥用而言可接受的賦形劑。說明書和權(quán)利要求中使用的“藥用賦形劑”包括一種和多于一種這類賦形劑。
化合物的“藥用鹽”表示可藥用的并且具有所需的母體化合物的藥物活性的鹽。這類鹽包括(1)酸式加成鹽，用無機酸如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等形成；或用有機酸形成，如乙酸，丙酸，己酸，環(huán)戊丙酸，羥基乙酸，丙酮酸，乳酸，丙二酸，琥珀酸，蘋果酸，馬來酸，富馬酸，酒石酸，檸檬酸，苯甲酸，3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，1，2-乙烷-二磺酸，2-羥基乙磺酸，苯磺酸，4-氯苯磺酸，2-萘磺酸，4-甲苯磺酸，樟腦磺酸，4-甲基二環(huán)[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸，葡庚糖酸，4，4’-亞甲基二-(3-羥基-2-ene-1-羧酸)，3-苯基丙酸，三甲基乙酸，叔丁基乙酸，月桂基硫酸，葡糖酸，谷氨酸，羥基萘甲酸，水楊酸，硬脂酸，粘康酸；或(2)當(dāng)存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子如堿金屬離子，堿土金屬離子或鋁離子代替所形成的鹽；或與有機堿如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，氨基丁三醇，N-甲基葡糖胺配合形成的鹽。
“離去基團”具有在合成有機化學(xué)中，按照慣例與之相關(guān)的含義，即能被親核試劑代替的原子或基團，并且包括鹵素，鏈烷磺酰氧基，芳基磺酰氧基，酯，或氨基，例如氯，溴，碘，甲磺酰氧基，甲苯磺酰氧基，三氟磺酰氧基，甲氧基，N，O-二甲基羥基氨基。
“前體藥物”表示當(dāng)將這類前體藥物對哺乳動物受試者給藥時，在體內(nèi)釋放依照式(I)的活性母體藥物的任何化合物。通過修飾(改性)存在于式(I)的化合物中的功能團使得在體內(nèi)所述修飾可被切除以釋放母體化合物，來制備式(I)的化合物的前體藥物。前體藥物包括這樣的式(I)的化合物，其中化合物(I)中的羥基，硫氫基或氨基結(jié)合到任何基團，所述基團在體內(nèi)可被切除以分別再生游離的羥基，氨基，或硫氫基。如未另外指出，說明書和權(quán)利要求中具體化合物的描述包括式(I)的化合物的前體藥物。前體藥物的實例包括，但不局限于，式(I)化合物中羥基官能團的酯(如乙酸酯，甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)，氨基甲酸酯(如N，N-二甲基氨基羰基)。
疾病的“治療”包括(1)預(yù)防疾病，即導(dǎo)致在哺乳動物中疾病的臨床癥狀不發(fā)展，所述哺乳動物可能易患該疾病，但還未經(jīng)歷或顯示該疾病的癥狀，(2)抑制疾病，即阻止或降低疾病或它的臨床癥狀的發(fā)展，或(3)緩解疾病，即導(dǎo)致疾病或它的臨床癥狀消退。
“治療有效量”表示當(dāng)對哺乳動物給藥以治療疾病時，化合物的量足以實現(xiàn)對疾病的這種治療?！爸委熡行Я俊睂⒁罁?jù)化合物，疾病和它的嚴(yán)重程度和將被治療的哺乳動物的年齡，體重等而改變。在本申請中使用的命名原則通?；贗CTPAC建議。吡咯烷環(huán)編號如下 本發(fā)明的化合物命名為式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是氫，alk1是-(CH2)2-，X是-CONH-，Y是-(CH2)2-和Ar1是嘧啶-2-基，Ar2是4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為N-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-3-[5-(4-甲氧基苯基)嘧啶-2-基]丙酰胺。
式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是甲基，alk1是-(CH2)2-，X是-CONH-，Y是-SCH2-和Ar1是嘧啶-2-基，Ar2是3，4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為N-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺。
式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是甲基，alk1是-(CH2)2-，X是-CONH-，Y是-OCH2-和Ar1是嘧啶-2-基，Ar2是3，4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為N-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基氧基]乙酰胺。
式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是甲基，alk1是-(CH2)2-，X是-CONH-，Y是-NHCH2-和Ar1是嘧啶-2-基，Ar2是3，4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為N-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基氨基]乙酰胺。
式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是乙?；琣lk1是-(CH2)2-，X是-CONH-，Y是-SCH2-和Ar1是嘧啶-2-基，Ar2是3，4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為N-[1-乙酰基-4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺。
式(I)的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基，alk2是-CH2-，R1是氫，alk1是-(CH2)-，X是-CONH-，Y是-CH2NH-，Ar1是嘧啶基，Ar2是4-甲氧基苯基并且是在嘧啶環(huán)的5-位，被命名為1-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基甲基]-3-(4-甲氧基苯基-嘧啶-2-基甲基]脲。
本發(fā)明的代表性的化合物如下I.式(I)的代表性的化合物
盡管在發(fā)明概述中闡明了本發(fā)明的最廣泛的定義，但一些式(I)的化合物是優(yōu)選的。(A)式(I’)表示一組優(yōu)選的式(I)化合物或它的藥用鹽 其中R1是氫，烷基，?；s烷基，-CONR3R4(其中R3和R4獨立是氫或烷基)，-COOR5(其中R5是氫，烷基或雜烷基)，或-SO2R6，其中R6是烷基；alk1是1-6個碳原子的亞烷基鏈；X是-NHCO-或-CONH-；Y是-O-(CH2)-，-O-(CH2)2-，-O-(CHCH3)-，-NRb-(CH2)-，-NRb-(CH2)2-，-NRb-(CHCH3)-[其中Rb是氫，烷基，酰基，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或烷基)，-COOR9(其中R9是氫，烷基或雜烷基)，芳基，或芳烷基)]，-S(O)n-(CH2)-，-S(O)n-(CH2)2-，或-S(O)n(CHCH3)-，其中n是0-2的整數(shù)；Ar1是雜芳基或苯基，其中除了Ar2基團外，該雜芳基或苯基還被取代基所取代，所述取代基選自氫，鹵素，烷基，烷氧基，硝基，酰氨基，氨基磺?；突酋；被?；Ar2是芳基；alk2是1-6個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子任選被-CO-，-NRc-[其中Rc是氫，烷基，?；?CONR10R11(其中R10和R11獨立是氫或烷基)，-COOR12(其中R12是氫，烷基或雜烷基)，芳基，或芳烷基)]或-S(O)n1-代替，其中n1是0-2的整數(shù)；Ar3是環(huán)烷基，芳基或雜芳基。
優(yōu)選地，R1是氫，烷基，?；?，或-SO2Ra，其中Ra是烷基。更優(yōu)選地，R1是氫，甲基，乙基，乙?；?，三氟乙酰基，-COCH2CO2H，-COCH2CO2R’，其中R’是烷基或-SO2CH3。甚至更優(yōu)選地，R1是氫，甲基，乙?；?COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3，-CO2-叔-丁基。
優(yōu)選地，alk1是1-3個碳原子的亞烷基鏈；更優(yōu)選甲基，乙基或正丙基，甚至更優(yōu)選甲基或乙基。
優(yōu)選地，X是-CONH-。
優(yōu)選地，Y是-SCH2-，-OCH2-或-NHCH2-。更優(yōu)選地，Y是-SCH2-或-OCH2-。
優(yōu)選地，Ar1是雜芳基。更優(yōu)選Ar1是吡啶基或嘧啶基。更優(yōu)選地，Ar1是吡啶-2-基或嘧啶-2-基。甚至更優(yōu)選嘧啶-2-基。
優(yōu)選地，Ar2是任選被一個或兩個取代基所取代的芳基，所述取代基選自烷氧基，羥基，或鹵素。更優(yōu)選地，Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基和在嘧啶-2-基或吡啶-2-基環(huán)的5位。
優(yōu)選地，alk2是1-3個碳原子的亞烷基，更優(yōu)選-CH2-。
優(yōu)選地，Ar3是芳基。更優(yōu)選地，Ar3是任選被1或2個鹵代基團取代的苯基。甚至更優(yōu)選地，Ar3是3，4-二氯苯基。
優(yōu)選地，X是-CONH-和Y是-SCH2-或-OCH2-。
優(yōu)選地，X是-CONH-，Y是-SCH2-或-OCH2-和Ar1是吡啶基或嘧啶基。更優(yōu)選地，Ar1是吡啶-2-基或嘧啶-2-基。甚至更優(yōu)選嘧啶-2-基。(B)式(I”)表示另一種優(yōu)選的式(I)化合物或它的藥用鹽 其中R1是氫，烷基，酰基，雜烷基，-CONR3R4(其中R3和R4獨立是氫或烷基)，-COOR5(其中R5是氫，烷基或雜烷基)，或-SO2R6，其中R6是烷基；
alk1是1-6個碳原子的亞烷基鏈；X是-NHCO-或-CONH-；Y是(i)-(CH2)-，-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CHCH3)-，-(CHCH3)-(CH2)-，或-(CH2)-(CHCH3)-；或(ii)-(CH2)-O-，-(CH2)2-O-，-(CHCH3)-O-，-(CH2)-NRb-，-(CH2)2-NRb-，或當(dāng)X是-CONH-時，是-(CHCH3)-NRb-[其中Rb是氫，烷基，?；?，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或烷基)，-COOR9(其中R9是氫，烷基或雜烷基)，芳基，或芳烷基)]；Ar1是雜芳基或苯基，其中除了Ar2基團外，雜芳基或苯基還被取代基所取代，所述取代基選自氫，鹵素，烷基，烷氧基，硝基，酰氨基，氨基磺?；突酋；被?；Ar2是芳基；alk2是1-6個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子任選被-CO-，-NRc-[其中Rc是氫，烷基，?；?CONR10R11(其中R10和R11獨立是氫或烷基)，-COOR12(其中R12是氫，烷基或雜烷基)，芳基，或芳烷基)]或-S(O)n1-代替，其中n1是0-2的整數(shù)；Ar3是環(huán)烷基，芳基或雜芳基。
優(yōu)選地，R1是氫，烷基，?；?，或-SO2Ra，其中Ra是烷基。更優(yōu)選地，R1是氫，甲基，乙基，乙?；?，三氟乙酰基，-COCH2CO2H，-COCH2CO2R’，其中R’是烷基或-SO2CH3。甚至更優(yōu)選地，R1是氫，甲基，乙酰基，-COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3，-CO2-叔-丁基。
優(yōu)選地，alk1是1-3個碳原子的亞烷基鏈；更優(yōu)選甲基，乙基或正丙基，甚至更優(yōu)選甲基或乙基。
優(yōu)選地，X是-CONH-。
優(yōu)選地，Y是-CH2-或-(CH2)2-。
優(yōu)選地，當(dāng)X是-CONH-時，Y是-(CH2)-NRb-或-(CH2)2-NRb-[其中Rb是氫，烷基，?；?，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或烷基)，-COOR9(其中R9是氫，烷基或雜烷基)，芳基，或芳烷基)]；優(yōu)選地，Ar1是雜芳基。更優(yōu)選吡啶基或嘧啶基。更優(yōu)選地，Ar1是吡啶-2-基或嘧啶-2-基。甚至更優(yōu)選嘧啶-2-基。
優(yōu)選地，Ar2是任選被一個或兩個取代基所取代的芳基，所述取代基選自烷氧基，羥基，或鹵素。更優(yōu)選地，Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基和在嘧啶-2-基或吡啶-2-基環(huán)的5位。
優(yōu)選地，alk2是1-3個碳原子的亞烷基，更優(yōu)選或-CH2-或-(CH2)2-。
優(yōu)選地，Ar3是芳基。更優(yōu)選地，Ar3是任選被1或2個鹵代基團取代的苯基。甚至更優(yōu)選地，Ar3是3，4-二氯苯基。
優(yōu)選地，X是-CONH-和Y是-(CH2)2-。
優(yōu)選地，X是-CONH-和Y是-(CH2)2-NH-或-CH2-NH-。
優(yōu)選地，X是-CONH-，Y是-(CH2)2-和Ar1是吡啶基或嘧啶基。更優(yōu)選地，Ar1是吡啶-2-基或嘧啶-2-基。甚至更優(yōu)選嘧啶-2-基。
本發(fā)明的化合物可通過許多本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備。優(yōu)選的方法包括，但不局限于，下面描述的一般的合成程序。
在制備這些化合物中使用的起始物質(zhì)和試劑可獲自商業(yè)供應(yīng)商如Aldrich Chemical Co.，(Milwaukee，威斯康星州，美國)，Bachem(Torrance，加利福尼亞，美國)，Emka-Chemie，或Sigma(St.Louis，Missouri，美國)，Maybridge(DistRyan Scientific，P.O.Box 6496，Columbia，SC 92960)，Bionet Research Ltd.，(Cornwall PL32 9QZ，英國)，Menai Organics Ltd.，(Gwynedd，N.Wales，英國)，Butt Park Ltd.，(Dist.Interchim，MontluconCedex，法國)或遵循在下述參考文獻中闡明的程序，用那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法來制備，所述參考文獻例如Fieser and Fieser′s Reagents forOrganic Synthesis，1-17卷(John Wiley和Sons，1991)；Rodd’s Chemistry ofCarbon Compounds，1-5卷和增補本(Elsevier Science Publishers，1989)，Organic Reactions，1-40卷(John Wiley和Sons，1991)，March’s AdvancedOrganic Chemistry，(John Wiley和Sons，1992)，和Larock’s ComprehensiveOrganic Transformations(VCH Publishers Inc.，1989)。這些路線僅是舉例說明用于合成本發(fā)明化合物的一些方法，并且可對這些路線進行各種改進，并且這些改進對于已經(jīng)參閱了本說明書的公開內(nèi)容的本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說是可以想起和理解的。
如果需要，利用常規(guī)技術(shù)分離并純化反應(yīng)的起始物質(zhì)和中間體，所述常規(guī)技術(shù)包括，但不局限于，過濾，蒸餾，結(jié)晶，層析等?？衫贸Ｒ?guī)的方法包括物理常數(shù)和光譜數(shù)據(jù)來表征這類物質(zhì)。
可如在下述路線I中所舉例說明的那樣來制備式(I)的化合物，其中X是-CONH-，alk1是-CH2-，其余的基團如前文所定義，并且吡咯烷環(huán)的C2和C4碳原子的立體化學(xué)是(2S，4R)。路線I 用二-叔丁基二碳酸酯處理乙基(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯1得到乙基(S)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯2。在惰性有機溶劑如二氯甲烷，氯仿，醚中，在存在有機胺如三乙胺和二甲基氨基吡啶的條件下，在室溫下進行該反應(yīng)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員公認(rèn)可使用其它合適的氮保護基如芐氧基羰基。
用式Ar3-alk2-LG的芳烷基鹵化物/雜芳烷基鹵化物處理2，得到4-取代的乙基(S)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯3，在所述式Ar3-alk2-LG中，Ar3和alk2如前所定義，LG是合適的離去基團如鹵素，甲苯磺酸酯，甲磺酸酯，三氟甲磺酸酯。在存在強堿如LiHDMS的條件下，在醚溶液如四氫呋喃，乙醚中，進行該反應(yīng)。最初在約-78℃下實施該反應(yīng)，然后加熱至環(huán)境溫度。式Ar3-alk2-LG的芳烷基鹵化物/雜芳烷基鹵化物可商購，或可用本領(lǐng)域熟練的方法來制備。例如，芐基氯，3，4-二氯芐基溴和3-氯芐基氯是可商購的。其余的可通過用鹵化劑如PBr3POCl3處理可商購的醇來制備，所述醇例如芐醇，2-苯基乙醇，3-苯基丙醇。備選地，用本領(lǐng)域熟知的方法可將醇轉(zhuǎn)變成甲磺酸酯，甲苯磺酸酯和三氟甲磺酸酯衍生物，并且在上述反應(yīng)中，醇可代替烷基鹵化物來使用。
在醚溶液如四氫呋喃中，用合適的還原劑例如硼烷，在約40℃下還原化合物3中的酯和酰氨基團，得到相應(yīng)的式4的(2S，4R)-4-(芳烷基或雜芳烷基)-2-羥甲基-1-叔丁氧基羰基吡咯烷。用本領(lǐng)域中熟知的方法將4中的羥基轉(zhuǎn)變成合適的離去基團例如甲磺酸酯，甲苯磺酸酯。在存在堿例如三乙胺，吡啶的條件下，在惰性溶劑例如二氯甲烷中，分別用甲磺酰氯或?qū)?甲苯磺酰氯處理4來實施該反應(yīng)。
用疊氮離子取代化合物5中的甲磺酸酯/甲苯磺酸酯基團，然后還原得到的式6(2S，4R)-4-(芳烷基或雜芳烷基)-2-疊氮甲基-1-叔丁氧基羰基吡咯烷中的疊氮基，可得到式7的(2S，4R)-4-(芳烷基或雜芳烷基)-2-氨甲基-1-叔丁氧基羰基吡咯烷?；谠跇O性有機溶劑例如二甲基甲酰胺中將5與疊氮化鈉加熱來實現(xiàn)甲磺酸酯基團的取代。
在催化氫化反應(yīng)條件下，利用合適的催化劑例如氧化鉑，將6中的疊氮基還原成氨基。在乙酸乙酯中，在大氣壓和環(huán)境溫度下實施該反應(yīng)。
然后，通過用式8的酸處理7，將化合物7轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物，在式8中，Ar1，Ar2和Y如前所定義，在式(I)的化合物中，X是-CONH-。在存在偶聯(lián)劑如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、二乙基氮雜碳二亞胺(DEAD)的條件下，和任選存在催化劑如1-羥基苯并三唑水合物的條件下，實施該反應(yīng)。在溶劑例如二氯甲烷、四氫呋喃中，在環(huán)境溫度下實施該反應(yīng)。備選地，通過將8轉(zhuǎn)變成酸性鹵化物例如酸性氯化物，然后在存在堿例如三乙胺、吡啶的條件下與7反應(yīng)來進行偶聯(lián)反應(yīng)。
式8的酸可商購，或它們可用本領(lǐng)域中熟知的方法來制備。例如，2-(5-甲基-2-苯基唑-4-基)乙酸，2-(3-甲基-2-N-苯基吡唑-4-基)乙酸，2-(2-吡嗪-2-基噻唑-4-基)乙酸，2-[2-(吡啶-2-基)-6-三氟甲基嘧啶-4-基硫烷基]乙酸，2-[6-(4-氯苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酸，2-(3-苯基吡唑-1-基)乙酸和2-甲基-2-(4-噻吩甲酰(thiophenoylphenyl))-乙酸可商購。
其它的可用本領(lǐng)域中熟知的方法來制備。例如，通過向2-(4-甲氧基苯基)trimethinium高氯酸鹽(3.3g，9.8mmol)[參見Jutz，C.；Kirchlechner，R.；Seidel，H.Chem.Ber.102，2301，(1969)]和4-脒基丁酸一HCl(1.5g，9.8mmol)[參見McElvain，S.M.；Schroeder，J.P.J.Am.Chem.Soc.，71，40，(1949)]在無水純乙醇(40ml)的混懸液中加入乙醇鈉溶液(在乙醇中21％重量/體積，10ml，30mmol，3當(dāng)量)，并在回流下加熱該反應(yīng)混合物12小時來制備3-[4-(4-甲氧基苯基)嘧啶-2-基]丙酸。濃縮混懸液，用水稀釋，并用醚洗滌。然后用檸檬酸(10g)將含水相酸化。過濾沉淀，用水和醚洗滌，并在高真空下干燥以產(chǎn)生3-[4-(4-甲氧基苯基)-嘧啶-2-基]丙酸。
如下制備3-[5-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基]-丙酸以這樣的速率，即溫度升高不超過5℃，在N2條件下，緩慢加入氯氧化磷(83ml，0.79mol)，以冷卻、干燥二甲基甲酰胺(100ml)。添加完成后，以一份的形式加入4-硝基苯乙酸(48g，0.26mol)，并將反應(yīng)混合物加熱至85℃超過1小時。冷卻反應(yīng)混合物，然后傾倒到冰上。加入固體高氯酸鈉一水合物(37g，0.26mol)以促使產(chǎn)物作為高氯酸鹽的形式沉淀。過濾固體，然后用冷水，甲醇和醚洗滌，得到2-(4-硝基苯基)trimethinium高氯酸鹽。
向2-(4-硝基苯基)trimethinium高氯酸鹽(20.8g，60mmol)和4-脒基丙酸一鹽酸鹽(9.1g，60mmol)在乙醇(300ml)的混懸液中以一份的形式加入乙醇鈉溶液(在乙醇中，21％重量/體積，60ml，180mmol，3當(dāng)量)。在室溫下過夜加熱該混懸液。過濾得到的混懸液，用乙醇、冷HCl、水和醚洗滌，然后在高真空下干燥，以提供3-[5-(4-硝基苯基)嘧啶-2-基]-丙酸，其可在標(biāo)準(zhǔn)催化氫化條件下(即在環(huán)境壓力下，在甲醇溶劑中利用Pd/C催化劑)被氫化，以產(chǎn)生3-[5-(4-氨基苯基)嘧啶-2-基]丙酸。
通過向2-(4-甲氧基苯基)trimethinium高氯酸鹽(1.1g，3.4mmol)和胍基乙酸(0.48g，4.0mmol，1.2當(dāng)量)在脫水乙醇(20ml)的混懸液中加入乙醇鈉的乙醇溶液(2.7M，3.8ml，10mmol，2.9當(dāng)量)來制備2-[5-(4-甲氧基苯基)嘧啶-2-基氨基]-乙酸(150mg)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后在回流溫度下攪拌3小時。冷卻后，過濾鈉鹽，并濾餅溶解在20ml水中，然后用1M鹽酸酸化。用乙酸乙酯萃取含水層，并用鹽水洗滌合并的有機相，用硫酸鈉干燥。真空下去除溶劑提供了含約1∶1區(qū)域異構(gòu)體(regioisomer)混合物的固體。使用反相色譜分離這兩組分給出2-[5-(4-甲氧基苯基)嘧啶-2-基氨基]-乙酸和區(qū)域異構(gòu)體。
通過使5-溴-2-氯嘧啶(如在PCT申請公開號WO 00/31032中所描述的那樣來制備，其公開內(nèi)容完全引入于本發(fā)明)與甘醇酸甲酯反應(yīng)以提供5-溴嘧啶-2-基氧基乙酸甲酯來制備2-(5-苯基嘧啶-2-基氧基)乙酸和它的衍生物。在WO 00/31032的實施例8，步驟5描述的反應(yīng)條件下，將5-溴嘧啶-2-基氧基乙酸甲酯與苯基硼酸的偶聯(lián)，然后進行酯基團的堿水解，提供了2-(5-苯基嘧啶-2-基氧基)乙酸。
隨后，將BOC基團去保護，提供了式(I)的化合物，在該化合物中，R1是氫。在酸性水解反應(yīng)條件下進行去保護。合適的酸是三氟乙酸，鹽酸。
然后，用本領(lǐng)域中熟知的方法，將其中R1是氫的式(I)的化合物轉(zhuǎn)變成其中R1不是氫的其它式(I)的化合物。
在存在非親核堿例如三乙胺、吡啶的條件下，在合適的有機溶劑如二氯甲烷、四氫呋喃中，用通式R’C(O)Hal的?；u化物或通式R’SO2Hal的磺?；u化物處理其中R1是氫的式(I)的化合物，以提供其中R1是?；蚧酋；南鄳?yīng)的式(I)的化合物。酰基鹵化物例如乙酰氯，丙酰氯，三氟乙酰氯和一甲氧基丙二酰氯可商購?；酋；u化物例如甲磺酰氯是可商購的。
在本領(lǐng)域中熟知的條件下，通過烷氧基的脫烷基化，可將具有烷氧基取代基，例如在Ar1或Ar3基團上具有烷氧基取代基的式(I)的化合物轉(zhuǎn)變成具有羥基的相應(yīng)的式(I)的化合物。類似地，在標(biāo)準(zhǔn)催化氫化反應(yīng)條件下，可將具有硝基取代基，例如在Ar1或Ar3基團上具有硝基取代基的式(I)的化合物轉(zhuǎn)變成具有氨基的相應(yīng)的式(I)的化合物。
另外，利用(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯1作為起始物質(zhì)，提供了在吡咯烷環(huán)具有(2R，4S)立體化學(xué)的式(I)的化合物。
可如在下述路線II中所舉例說明和描述的那樣來制備式(I)的化合物，在所述化合物中，X是-CONH-，alk1是-(CH2)2-，其它基團如前文所定義，并且在吡咯烷環(huán)的C2和C4碳原子上的立體化學(xué)是(2S，4R)。路線II 通過首先將式5的化合物轉(zhuǎn)變成式10的氰基衍生物，可從式5的化合物來制備式(I)的化合物，在式(I)的化合物中，X是-CONH-，alk2是-(CH2)2-，其它基團如前所定義，所述轉(zhuǎn)變是通過使式5的化合物與氰化鈉或鉀在70-90℃的二甲基亞砜中反應(yīng)來實現(xiàn)。然后用合適的還原劑例如乙硼烷在四氫呋喃中還原氰基，提供了式11的氨乙基衍生物。然后如上述路線I所述，將化合物11轉(zhuǎn)變成X是-CONH-的式(I)的化合物。同樣，用(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯作為起始物質(zhì)提供了在吡咯烷環(huán)具有(2R，4S)立體化學(xué)的式(I)的化合物。在路線II中，叔丁氧基羰基可以是其它合適的氮保護基，如芐氧基羰基。
可如在下述路線III中所舉例說明和描述的那樣來制備式(I)的化合物，在所述化合物中，X是-CONH-，R1是烷基，alk1是-(CH2)-，其它基團如前所定義，并且吡咯烷環(huán)的C2和C4碳原子的立體化學(xué)是(2S，4S)或(2S，4R)。路線III 在存在強堿例如氫化鈉的條件下，上述化合物3中叔丁氧基羰基的去除提供了式12的化合物。叔丁氧基羰基可以是其它合適的氮保護基，如芐氧基羰基。用式R1LG的烷基鹵化物烷基化12提供了式13a和13b的非對映體的混合物，在式R1LG中，LG是氯，溴和碘。如果需要，可如下述實施例4所述通過柱層析分離非對映體。在室溫下，用氨在甲醇中處理13a或13b，分別提供了相應(yīng)的式14a或14b的2-酰氨基-5-氧代吡咯烷衍生物。
式14a或14b中2-酰氨基的還原分別提供了式15a或15b的相應(yīng)的2-氨甲基吡咯烷衍生物，其隨后如在上述路線I中所詳細描述的那樣轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物。通過將14a或14b與乙硼烷在四氫呋喃中加熱來進行酰氨基的還原。
用(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯作為起始物質(zhì)，獲得了作為產(chǎn)物的15a和15b的對映體。
備選地，如Esquerra，J.，等，Tetrahedron，49，8665(1993)中所述，在存在氰化鉀的條件下，可通過在二甲基甲酰胺中加熱化合物3來制備式(I)的化合物，在式(I)的化合物中，吡咯烷環(huán)具有(2S，4S)立體化學(xué)，即在吡咯烷環(huán)的C-2和C-4位的基團彼此是順式。該反應(yīng)導(dǎo)致在3中C-4碳的外消旋化，從而提供式3的化合物，其中，-CO2Et和-alk2-Ar3基團彼此是順式或反式的。這些非對映體可被分離，并且如前所述，隨后轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物。
可如在下述路線IV中所舉例說明和描述的那樣來制備式(I)的化合物，在所述化合物中，X是-CONH-，R1是甲基或另外的烷基，alk1是-(CH2)2-，其它基團如前所定義，并且在吡咯烷環(huán)的C2和C4碳原子的立體化學(xué)是(2S，4R)。路線IV 將化合物3與過量的乙硼烷在四氫呋喃中延長加熱，然后與鹽酸在甲醇中加熱，提供了式16的N-甲基-2-羥甲基吡咯烷衍生物。然后如上述路線II所述，將化合物16轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物，其中，X是-CONH-，alk1是-(CH2)2-，其余基團如前所定義，并且吡咯烷環(huán)的立體化學(xué)是(2S，4R)。在路線II中，叔丁氧基羰基可以是其它合適的氮保護基，例如芐氧基羰基。
本發(fā)明的化合物是CCR-3受體拮抗劑，并且通過CCR-3趨化因子例如RANTES，eotaxin，MCP-2，MCP-3和MCP-4抑制嗜酸性粒細胞募集(recruitment)。本發(fā)明的化合物和包含它們的組合物用于治療嗜酸性粒細胞誘導(dǎo)的疾病，例如炎性或過敏性疾病，并且包括呼吸過敏性疾病如哮喘，過敏性鼻炎，超敏性肺疾病，超敏性肺炎，嗜酸性(eosinophilic)肺炎(如慢性嗜酸性肺炎)；炎性腸疾病(如局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)；和牛皮癬和炎性皮膚病如皮炎和濕疹。
另外，近來已發(fā)現(xiàn)，CCR-3受體在獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的發(fā)病機理中起作用。因此，本發(fā)明的化合物和包含它們的組合物也用于治療AIDS。
通過體外試驗，例如在實施例9、10和11中更詳細描述的配體結(jié)合和趨化性試驗測量本發(fā)明化合物的CCR-3拮抗活性。如在實施例12中更詳細描述那樣，在Balb/c小鼠模型中，在卵白蛋白誘導(dǎo)的哮喘中分析體內(nèi)活性。
通常，通過任何適于試劑的可接受的給藥方式來給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物，所述方式發(fā)揮相似的效用。本發(fā)明化合物即活性成分的實際的量取決于許多因素，例如將被治療的疾病的嚴(yán)重程度，受試者的年齡和相對健康狀態(tài)，使用化合物的效力，給藥的路線和形式，和其它因素。
式(I)化合物的治療有效量可以為每天約0.01-20mg/kg受者體重；優(yōu)選約0.1-10mg/kg/天。因此，對于向70kg的人給藥，劑量范圍最優(yōu)選為約7mg-0.7g/天。
通常，通過下述任何一種途徑，以藥物組合物的形式給藥本發(fā)明的化合物口服給藥，吸入(如鼻內(nèi)或口服吸入)給藥或腸胃外(如肌肉，靜脈內(nèi)或皮下)給藥。優(yōu)選的給藥方式是利用方便的日劑量方案的口服給藥，所述日劑量方案可依照疾病的程度而調(diào)整。組合物可采取片劑，丸劑，膠囊，半固體，粉末，緩釋制劑，溶液，混懸液，脂質(zhì)體，酏劑或任何其它合適組合物的形式。另一種給藥本發(fā)明化合物的優(yōu)選方式是吸入。這是一種將治療劑直接遞送到呼吸道來治療疾病的有效方式，所述疾病例如哮喘和其它類似或相關(guān)的呼吸道疾病(參見美國專利5,607,915)。
制劑的選擇取決于各種因素，例如藥物給藥的方式和藥物生物利用度。對于通過吸入遞送，可將化合物配制成液體溶液或混懸液，氣溶膠噴射劑或干燥粉末，和裝入到合適的分散器中來給藥。存在三種類型的藥物吸入裝置一霧化器吸入器，定量吸入器(MDI)和干粉吸入器(DPI)。霧化器裝置產(chǎn)生一股高速空氣，其將治療劑(其以液體形式配制)作為薄霧來噴霧，所述薄霧被帶入到患者的呼吸道。MDI裝置典型地具有用壓縮氣體包裝的制劑。啟動時，裝置通過壓縮氣體釋放精確量的治療劑，從而提供了一種給藥固定量藥劑的可靠方法。DPI裝置以自由流動粉末的形式給藥治療劑，在用該裝置呼吸時，所述自由流動粉末可被分散到患者的吸入空氣流中。為了獲得自由流動粉末，將治療劑與賦形劑例如乳糖一起配制。精確量的治療劑以膠囊形式保存，并且隨著每次啟動被施用于患者。
近來，基于通過增加表面積即減小顆粒大小可增加生物藥效率的原則，已開發(fā)了特別適于顯示不良生物利用度的藥物的藥物制劑。例如，美國專利號4,107,288描述了具有大小在10-1,000nm的顆粒的藥物制劑，其中活性物質(zhì)位于交聯(lián)的大分子基質(zhì)上。美國專利號5,145,684描述了藥物制劑的生產(chǎn)，其中在存在表面改性劑的條件下，將藥物研磨成納米顆粒(400nm的平均粒子大小)，然后分散于液體介質(zhì)中，以提供顯示明顯地高的生物利用度的藥物制劑。
通常，組合物由式(I)的化合物和至少一種藥用賦形劑組成?？山邮艿馁x形劑是無毒的，輔助給藥，并且對式(I)的化合物的治療益處無負(fù)面影響。這種本領(lǐng)域的技術(shù)人員通?？衫玫馁x形劑可以是任何固體，液體，半固體賦形劑或如果是氣溶膠組合物，可以是氣體賦形劑。
固體藥物賦形劑包括淀粉，纖維素，滑石，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明膠，麥芽，水稻，面粉，白堊，硅膠，硬脂酸鎂，硬脂酸鈉，甘油單硬脂酰酯，氯化鈉，脫脂奶粉等。液體和半固體賦形劑可選自甘油，丙二醇，水，乙醇和各種油包括那些石油，動物、植物或合成來源的油如花生油，豆油，礦物油，芝麻油等。優(yōu)選的液體載體，特別適于可注射溶液的載體包括水，鹽水，含水葡萄糖，和乙二醇。
可使用壓縮氣體以氣溶膠形式來分散本發(fā)明的化合物。適于此用途的惰性氣體是氮氣，二氧化碳等。
對于腸胃外或口服遞送的藥物的脂質(zhì)體制劑，將藥物和類脂類溶解在合適的有機溶劑如叔丁醇，環(huán)己烷(1％乙醇)中。凍干(lypholize)溶液，并將類脂混合物懸浮于含水緩沖劑中以形成脂質(zhì)體。如果需要，通過超聲處理減小脂質(zhì)體的尺寸(參見Frank Szoka，Jr.和DemetriosPapahadjopoulos，“Comparative Properties and Methods of Preparation ofLipid Vesicles(Liposomes)”，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，9467-508(1980)，和D.D.Lasic，“Novel Applications of Liposomes”，Trendsds in Biotech.，16467-608，(1998))。
其它合適的藥物賦形劑和它們的制劑描述于E.W.Martin編輯的Remington’s Pharmaceutical Sciences(馬克出版社(Mack PublishingCompany)，第18版，1990)。
制劑中化合物的含量可在本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員使用的全部范圍內(nèi)改變。典型地，在重量百分比(重量％)的基礎(chǔ)上，基于總制劑，制劑包含約0.01-99.99重量％的式(I)的化合物，剩余部分是一種或多種合適的藥物賦形劑。優(yōu)選地，化合物以約1-80重量％的含量存在。實施例8描述了包含式(I)化合物的代表性的藥物制劑。
除了代替用(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯以外，如上述實施例1和2所述進行，提供了N-(2R，4S)-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺鹽酸鹽。
除了用5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫代丙酸代替5-(3，4-二甲氧基苯基)-嘧啶-2-基硫代乙酸以外，如實施例1和2所述進行，提供了N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-3-[5-(3，4-二甲氧基苯基)-嘧啶-2-基]丙酰胺鹽酸鹽。
除了用5-(苯基)嘧啶-2-基硫代乙酸代替5-(3，4-二甲氧基-苯基)-嘧啶-2-基硫代乙酸以外，如實施例1和2所述進行，提供了N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺鹽酸鹽。
除了用5-(苯基)嘧啶-2-基乙酸代替5-(3，4-二甲氧基-苯基)嘧啶-2-基硫代乙酸和用(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(S)-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯以外，如實施例1和2所述進行，提供了N-(2R，4S)-[4-(3，4-二氯芐基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽。
向異構(gòu)體(2R，4R)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯(910mg，2.76mmol)中加入30ml 2.0M NH3的甲醇溶液。室溫下攪拌反應(yīng)混合物120小時。濃縮反應(yīng)混合物以提供白色固體。在醚中懸浮固體并濾出，以提供異構(gòu)體(2R，4R)-5-氨基羰基-4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷酮(659mg，2.19mmol)[MS301]。步驟4向(2R，4R)-5-氨基羰基-4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮(620mg，2.06mmol)中加入1.0M BH3/THF(14.4ml，14.4mmol)，并將混合物在70℃加熱3.5小時，在20℃攪拌15小時，然后濃縮。向濃縮的反應(yīng)混合物中緩慢加入甲醇，然后加入7ml 6N HCl。然后在55℃攪拌該混合物1小時，冷卻至室溫，用水稀釋，用1N含水NaOH堿化，并且產(chǎn)品萃取到EtOAc中。通過濃縮含水層并用EtOAc洗滌得到的固體獲得額外的產(chǎn)品。用MgSO4干燥合并的有機層，過濾，并濃縮，提供(2R，4R)-2-氨基甲基-4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(353mg，1.29mmol)。步驟5向(2R，4R)-2-氨甲基-4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-吡咯烷(如實施例4.4所述制備)(40mg，0.15mmol)的CH2Cl2溶液中加入5-苯基嘧啶-2-基硫代乙酸(40mg，0.16mmol)，EDCI(36mg，0.19mmol)和HOBT(2mg，0.015mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時，然后用EtOAc稀釋，用含水NaHCO3洗滌。用MgSO4干燥有機層，過濾，并濃縮?？焖賹游?95％CH2Cl2/5％MeOH)提供了N-(2R，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基甲基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺鹽酸鹽(47mg，0.098mmol)，質(zhì)譜502(MH+)。
除了用(2S，4R)-3-(3，4-二氯芐基)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯代替(2R，4S)-3-(3，4-二氯芐基)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯以外，如上述實施例3，步驟1所述進行，然后如上述實施例3步驟2所述進行甲基化，層析后提供了(2S，4S)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯。然后如上述實施例3所述步驟3-5，將(2S，4S)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯轉(zhuǎn)變成N-(2S，4S)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基甲基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺。實施例4N-(2R，4S)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基甲基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺的合成 步驟1室溫下攪拌(2R，4S)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯(如上述實施例3所述制備)(216mg，0.65mmol)在MeOH中含2.0M NH3(10ml，20mmol)的溶液96小時。然后濃縮反應(yīng)混合物至干燥，以提供(2R，4S)-5-氨基羰基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮(196mg，0.65mmol)。步驟2向(2R，4S)-5-氨基羰基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基-2-吡咯烷酮(196mg，0.65mmol)中加入1.0M BH3的THF溶液(5ml，5mmol)。在70℃下攪拌反應(yīng)混合物3.5小時，然后在真空中濃縮。緩慢加入甲醇，然后加入5ml 6NHCl，并在70℃加熱反應(yīng)混合物1小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用1 NNaOH堿化，并且產(chǎn)品萃取到EtOAc中。將含水層濃縮至干燥，并用EtOAc洗滌得到的固體。用MgSO4干燥合并的萃取物，過濾并濃縮。快速層析(95％CH2Cl2/4％MeOH/1％NH4OH)提供了(2R，4S)-2-氨基甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(117mg，0.43mmol)。步驟3向(2R，4S)-2-氨甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(24mg，0.088mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入5-苯基嘧啶-2-基硫代乙酸(24mg，0.097mmol)，EDCI(21mg，0.11mmol)和HOBT(1mg，0.009mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時，然后用EtOAc稀釋，用NaHCO3洗滌。用MgSO4干燥有機層，過濾并濃縮，以提供N-(2R，4S)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基甲基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺(30mg，0.06mmol)，質(zhì)譜502(MH+)。
除了用(2S，4R)-3-(3，4-二氯芐基)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯(如上述實施例3所述制備)代替(2R，4S)-3-(3，4-二氯芐基)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯以外，如實施例4所述進行，提供N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基甲基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺。實施例5N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺的合成 步驟1向(2S，4R)-3-(3，4-二氯芐基)-1-叔丁氧基羰基-2-吡咯烷酮-5-羧酸乙酯(如上述實施例2所述制備)(1g，2.4mmol)中加入1.0M BH3/THF(36ml，36mmol)，并在70℃攪拌反應(yīng)混合物50小時，然后濃縮。向反應(yīng)混合物中緩慢加入MeOH，然后加入36ml 1.0M HCl的醚溶液，接著在70℃加熱1小時。然后濃縮該混合物，用EtOAc稀釋，然后用含水NaHCO3洗滌。用MgSO4干燥有機層，過濾并濃縮。快速層析(95％CH2Cl2/4％MeOH/1％NH4OH)提供了(2S，4R)-2-羥甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(216mg，0.79mmol)。步驟2向(2S，4R)-2-羥甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(212mg，0.77mmol)的CH2Cl2(10ml)室溫溶液中加入三乙胺(0.161ml，1.16mmol)，然后加入甲磺酰氯(0.072ml，0.93mmol)。3.5小時后，用EtOAc稀釋反應(yīng)混合物，并用含水NaHCO3洗滌兩次。用MgSO4干燥有機層，過濾并濃縮，以提供(2S，4R)-3-(3，4-二氯-芐基)-2(甲磺?；趸谆?-1-甲基吡咯烷(211mg，0.6mmol)。步驟3向(2S，4R)-3-(3，4-二氯芐基)-2(甲磺?；趸谆?-1-甲基吡咯烷(211mg，0.6mmol)的DMSO溶液中加入氰化鈉(176mg，3.6mmol)，并在70℃加熱混合物21小時。用EtOAc稀釋反應(yīng)混合物，并用含水NaHCO3洗滌三次。用MgSO4干燥有機層，過濾并濃縮?？焖賹游?60％EtOAc/40％己烷)提供了(2S，4R)-2-氰甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(104mg，0.37mmol)。步驟4向(2S，4R)-2-氰甲基-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(793mg，2.8mmol)的THF(50ml)溶液中加入1.0M BH3/THF(19.6ml，19.6mmol)。在70℃加熱反應(yīng)混合物4小時，然后濃縮。向濃縮物中緩慢加入MeOH，然后加入10ml 6N HCl，然后在70℃加熱混合物1小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用1N NaOH堿化，并用EtOAc萃取。將包含產(chǎn)品的含水層濃縮至干燥。將得到的固體與EtOAc一起研制，并通過過濾去除固體。濃縮EtOAc萃取物以提供(2S，4R)-2-(2-氨基乙基)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(425mg，1.5mmol)。步驟5向(2S，4R)-2-(2-氨乙基)-3-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷(50mg，0.17mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入5-苯基嘧啶-2-基硫代乙酸(47mg，0.19mmol)，EDCI(42mg，0.22mmol)和HOBT(2.3mg，0.017mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物72小時，然后用EtOAc稀釋，并用含水NaHCO3洗滌兩次。用MgSO4干燥有機層，過濾并濃縮?？焖賹游?95％CH2Cl2/4％MeOH/1％NH4OH)提供N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-甲基吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺(60mg，0.12mmol)，質(zhì)譜516(MH+)。
除了用乙酰氯代替一甲氧基丙二酰基氯化物以外，如上述實施例6所述進行，提供了N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-(乙?；?吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺。
除了用甲磺酰氯代替一甲氧基丙二?；然镆酝?，如上述實施例6所述進行，提供了N-(2S，4R)[4-(3，4-二氯芐基)-1-(甲磺?；?吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺。
向N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-(甲氧基羰基-甲基羰基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]-乙酰胺(依照上述實施例6制備)(40mg，0.06mmol)的CH3OH溶液中加入0.3ml新鮮制備的1N LiOH含水溶液。在氮氣氣氛下，于20℃攪拌溶液16小時，然后將它傾倒入水中，然后用稀的含水H2SO4酸化該混合物，并用EtOAc萃取。然后干燥并蒸發(fā)有機層，提供了33mg白色非晶形泡沫狀的N-(2S，4R)-[4-(3，4-二氯芐基)-1-(羧甲基羰基)吡咯烷-2-基乙基]-2-[5-(3，4-二甲氧基苯基)嘧啶-2-基硫烷基]乙酰胺(0.05mmol)，質(zhì)譜647(MH+)。實施例8制劑實施例以下為包含式(I)化合物的代表性的藥物制劑。
片劑緊密混合下述成分，并壓制成單刻痕的片劑。成分量/片劑，mg本發(fā)明的化合物 400玉米淀粉50交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 25乳糖120硬脂酸鎂5膠囊劑緊密混合下述成分，并裝入到硬殼明膠膠囊中。成分量/膠囊，mg本發(fā)明的化合物 200噴霧-干燥的乳糖 148硬脂酸鎂2
混懸劑混合下述成分以形成適于口服給藥的混懸劑。成分 用量本發(fā)明的化合物 1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g羥苯甲酸甲酯 0.15g對羥苯甲酸丙酯 0.05g粒狀糖 25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g矯味劑 0.035ml著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100ml可注射制劑混合下述成分以形成可注射制劑。成分 用量本發(fā)明的化合物0.2g乙酸鈉緩沖溶液，0.4M 2.0mlHCl(1N)或NaOH(1N) 適量至合適的pH水(蒸餾的，無菌) 適量至20ml脂質(zhì)體制劑混合下述成分以形成脂質(zhì)體制劑。成分 用量本發(fā)明的化合物 10mgL-α-磷脂酰膽堿150mg叔丁醇 4ml
凍干樣品，并過夜凍干。用1ml 0.9％的鹽水溶液再構(gòu)樣品。通過超聲處理可減少脂質(zhì)體大小。
在Costar 96-孔聚丙烯圓底培養(yǎng)板上進行試驗。將測試化合物溶解在DMSO中，然后用結(jié)合緩沖液(50mM HEPES，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.5％牛血清白蛋白(BSA)，0.02％疊氮化鈉，pH 7.24)稀釋，使得最終的DMSO濃度為2％。將25μl的測試溶液或僅具有DMSO的緩沖液(對照樣品)加到每個孔中，然后加入25μl125I-eotaxin(100 pmol)(NEX314，NewEngland Nuclear，波士頓，馬薩諸塞州)和含于25μl結(jié)合緩沖液中的1.5×105的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染的細胞。最終的反應(yīng)體積為75μl。
室溫下孵育反應(yīng)混合物1小時后，通過將反應(yīng)混合物經(jīng)聚氮丙啶處理的Packard Unifilter GF/C濾板(Packard，芝加哥，II.)過濾而終止反應(yīng)。用含10mm HEPES和0.5M氯化鈉(pH 7.2)的冰冷的洗滌緩沖液洗滌濾器四次，并在65℃干燥約10分鐘。加入25μl/孔的Microscint-20TM閃爍流體(Packard)，并通過利用Packard TopCountTM檢測保留在濾器上的反射性。
在該試驗中，本發(fā)明的化合物是有活性的。
本發(fā)明的式I中化合物的IC50值(將結(jié)合到CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染的細胞的125I-eotaxin減少約50％所需的測試化合物的濃度)為0.02-200μM之間。某些具體化合物的活性示于下表。
實施例10Eotaxin介導(dǎo)的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染子細胞的趨化性的抑制—體外試驗利用描述于Ponath，P.D.等.，J.Clin.Invest.97604-612(1996)的方法，稍作修改，通過測量eotaxin介導(dǎo)的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染子細胞的趨化性的抑制，來測定本發(fā)明化合物的CCR-3拮抗活性。在24-孔趨化性培養(yǎng)板(Costar Corp.，Cambridge MA)中進行試驗。CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染子細胞在包含RPMI 1640，10％HycloneTM胎牛血清，55mM 2-巰基乙醇和遺傳霉素(0.8mg/ml)的培養(yǎng)基中生長。在試驗前18-24小時，用終濃度為5mM/1×106細胞/ml的正丁酸處理轉(zhuǎn)染的細胞，分離轉(zhuǎn)染子細胞，并以1×107細胞/ml的量重懸于具有5％牛血清白蛋白、包含等份的RPMI 1640和培養(yǎng)基199(M199)的分析培養(yǎng)基中。
將以1mg/ml的懸浮于磷酸鹽緩沖的鹽水中的人eotaxin加入到下隔室中，終濃度為100nM。將具有3微米孔徑大小的轉(zhuǎn)運孔培養(yǎng)內(nèi)眼板(Transwell culture inserts)(Costar Corp.，Cambridge MA)插入到每個孔中，并將L1.2細胞(1×106)加入到上隔室中，終體積為100μl。向上隔室和下隔室中均加入測試化合物的DMSO溶液，使得終DMSO體積為0.5％。設(shè)立兩組對照進行分析。陽性對照在上隔室中包含不具有測試化合物的細胞，在下隔室中僅包含eotaxin。陰性對照在上隔室中包含不具有測試化合物的細胞，在下隔室中即不包含eotaxin也不包含測試化合物。將培養(yǎng)板置于37℃孵育。4小時后，從隔室中去除內(nèi)眼板(insert)，并通過從下隔室中吸出500μl細胞懸浮液至1.2ml Cluster管(Costar)中，并在FACS上計數(shù)30秒，來計數(shù)移到下隔室中的細胞。
本發(fā)明的代表性的化合物的IC50值(將eotaxin介導(dǎo)的CCR-3 L1.2轉(zhuǎn)染細胞的趨化性減少約50％所需的測試化合物的濃度)為0.006-1.1μM之間。
利用流式細胞儀計數(shù)遷移到下隔室中的細胞。將來自下隔室的500μl細胞懸浮液置于管中，并通過30秒的給定時間獲得結(jié)果來獲得相對細胞數(shù)。
本發(fā)明的化合物在本試驗中是有活性的。
在本試驗中，本發(fā)明的化合物是有活性的。在本試驗中，本發(fā)明化合物的ID50為30-50mgs/kg之間。
為了清楚和理解的目的，用舉例說明和實施例的方法已詳細地描述了前述發(fā)明。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員明顯的是，在后附權(quán)利要求的范圍內(nèi)，可對本發(fā)明進行改變和修改。因此，可以理解，上述描述是意圖舉例說明而不是限制本發(fā)明。因此，本發(fā)明的范圍將不由上述描述所決定，而是由后附的權(quán)利要求，以及這類權(quán)利要求所授權(quán)的全部范圍的等價物所決定。
如同每個單獨的專利，專利申請或出版物被單獨地如此引用的那樣，為了所有的目的，在本申請中引用的所有的專利，專利申請和出版物全文通過參考引入本文。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物，或它的藥用鹽 其中R1是氫，C1-6烷基，?；?，雜烷基，-CONR3R4(其中R3和R4獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR5(其中R5是氫，C1-6烷基或雜烷基)或-SO2R6，其中R6為C1-6烷基；alk1是1-6個碳原子的亞烷基鏈；X是-NHCO-或-CONH-；Y是1-3個碳原子的亞烷基鏈或2-3個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子被一個雜原子所代替，所述雜原子選自-O-，-NRb-[其中Rb是氫，C1-6烷基，?；?CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基，或芳基C1-6烷基]和-S(O)n-，其中n是0-2的整數(shù)；Ar1是雜芳基或苯基，其中除了Ar2基團外，雜芳基或苯基還被基團所取代，所述基團選自氫，鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，硝基，酰氨基，氨基磺?；突酋；被籄r2是芳基；alk2是1-6個碳原子的亞烷基鏈，其中一個碳原子任選被-CO-，-NRc-[其中Rc是氫，C1-6烷基，?；?CONR10R11(其中R10和R11獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR12(其中R12是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基)]或-S(O)n1-代替，其中n1是0-2的整數(shù)；Ar3是C3-7環(huán)烷基，芳基或雜芳基。
2.依照權(quán)利要求1的化合物，其中Y是-O-(CH2)-，-O-(CH2)2-，-O-(CHCH3)-，-NRb-(CH2)-，-NRb-(CH2)2-，-NRb-(CHCH3)-[其中Rb是氫，C1-6烷基，酰基，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基)]，-S(O)n-(CH2)-，-S(O)n-(CH2)2-或-S(O)n-(CHCH3)-，其中n是0-2的整數(shù)。
3.依照權(quán)利要求2的化合物，其中R1是氫，C1-6烷基，?；?，-COOR5(其中R5是C1-6烷基)或-SO2Ra，其中Ra是C1-6烷基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1是氫，C1-6烷基，?；?SO2Ra，其中Ra是C1-6烷基。
5.依照權(quán)利要求4的化合物，其中R1是氫，甲基，乙酰基，-COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3或-CO2-叔-丁基。
6.依照權(quán)利要求2的化合物，其中Y是-SCH2-，-OCH2-或-NHCH2-。
7.依照權(quán)利要求6的化合物，其中X是-CONH-。
8.依照權(quán)利要求7的化合物，其中Y是-SCH2-或-OCH2-。
9.依照權(quán)利要求8的化合物，其中Y是-OCH2-，alk1和alk2獨立是1或2個碳原子的亞烷基鏈。
10.依照權(quán)利要求2的化合物，其中Ar1是雜芳基。
11.依照權(quán)利要求10的化合物，其中Ar1是嘧啶-2-基。
12.依照權(quán)利要求11的化合物，其中Y是-SCH2-或-OCH2-。
13.依照權(quán)利要求12的化合物，其中Ar2是任選被一個或兩個取代基所取代的芳基，所述取代基選自C1-6烷氧基，羥基或鹵素。
14.依照權(quán)利要求13的化合物，其中Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基，并且位于嘧啶-2-基的5位。
15.依照權(quán)利要求12的化合物，其中alk2是-CH2-和Ar3是芳基。
16.依照權(quán)利要求15的化合物，其中Ar3是3，4-二氯苯基。
17.依照權(quán)利要求1的化合物，其中Y是(i)-(CH2)-，-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CHCH3)-，-(CHCH3)-(CH2)-或-(CH2)-(CHCH3)-；或(ii)-(CH2)-O-，-(CH2)2-O-，-(CHCH3)-O-，-(CH2)-NRb-，-(CH2)2-NRb-，或當(dāng)X是-CONH-時，是-(CHCH3)-NRb-[其中Rb是氫，C1-6烷基，?；?，-CONR7R8(其中R7和R8獨立是氫或C1-6烷基)，-COOR9(其中R9是氫，C1-6烷基或雜烷基)，芳基或芳基C1-6烷基)]。
18.依照權(quán)利要求17的化合物，其中Ar1是雜芳基和Ar2是任選被一個或兩個取代基所取代的芳基，所述取代基選自C1-6烷氧基，羥基或鹵素。
19.依照權(quán)利要求18的化合物，其中Ar1是嘧啶-2-基，和Ar2是苯基或3，4-二甲氧基苯基，并且在嘧啶-2-基的5位。
20.依照權(quán)利要求19的化合物，其中X是-CONH-和R1是-COCH2CO2H，-COCH2CO2CH3或-CO2-叔丁基。
21.依照權(quán)利要求20的化合物，其中Y和alk1獨立是亞甲基，或亞乙基，alk2是亞甲基和Ar3是3，4-二氯苯基。
22.式(II)的中間體 其中R11是氫或C1-6烷氧基；R12是C1-6烷氧基；R13是氫或C1-6烷基。
23.依照權(quán)利要求22的中間體，其中R11和R12是C1-6烷氧基。
24.依照權(quán)利要求23的中間體，其中R11和R12是甲氧基，并且在苯環(huán)的3和4位。
25.一種制備式(I)的化合物的方法，其包含(i)將具有式7的化合物 其中Pro是保護基，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義；與式8的化合物相偶聯(lián)，Ar1-Ar2-Y-CO2H8其中Ar1，Ar2和Y如權(quán)利要求1所定義。(ii)去除保護基，以提供式(Ib)的化合物 其中R1是氫，和Ar1，Ar2，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義；和(iii)轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物，其中R1是?；蚧酋；?，其具有通式R1C(O)Hal的酰基鹵或通式R1SO2Hal的磺酰鹵，其中Hal是鹵素。
26.一種制備式(I)的化合物的方法，其包含(i)還原具有式10的化合物的氰基 其中Pro是保護基，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義；(ii)與式8的化合物相偶聯(lián)Ar1-Ar2-Y-CO2H8其中Ar1，Ar2和Y如權(quán)利要求1所定義；(iii)去除保護基，以提供式(Ic)的化合物 其中R1是氫，和Ar1，Ar2，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義，和(iv)轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物，其中R1是?；蚧酋；?，其具有?；uR1C(O)Hal或磺酰鹵R1SO2Hal，其中Hal是鹵素。
27.一種制備式(I)的化合物的方法，其包含(i)將具有式15a或15b的化合物 或 其中R1是烷基，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義，與式8的化合物相偶聯(lián)，Ar1-Ar2-Y-CO2H8其中Ar1，Ar2和Y如權(quán)利要求1所定義，以提供式(Ia)和(Ib)的化合物 其中R1是烷基，Ar1，Ar2，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義。
28.一種制備式(I)的化合物的方法，其包含(i)甲磺?；哂惺?6的化合物， 其中R1是烷基，alk2和Ar3如權(quán)利要求1所定義；(ii)轉(zhuǎn)變成氰化物，然后還原，和(iii)與式8的化合物相偶聯(lián)Ar1-Ar2-Y-CO2H8其中Ar1，Ar2和Y如權(quán)利要求1所定義，以提供式(Ic)的化合物 其中R1是烷基，Ar1，Ar2，alk2，Ar3和Y如權(quán)利要求1所定義。
29.一種藥物組合物，其包含治療有效量的依照權(quán)利要求1-21的任一項的化合物和藥用賦形劑。
30.依照權(quán)利要求1-21的任一項的化合物，其用于治療疾病。
31.依照權(quán)利要求30的化合物，其中所述疾病可以通過給藥一種CCR-3受體拮抗劑來治療。
32.依照權(quán)利要求31的化合物，其中所述疾病是哮喘。
33.依照權(quán)利要求1-21的任一項的化合物在制備包含一種或多種式I化合物的藥物中的應(yīng)用，該藥物用于治療可通過給藥CCR-3受體拮抗劑來治療的疾病。
34.本說明書描述的本發(fā)明，其特別涉及新的化合物，中間體，應(yīng)用和方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及某些式(I)的2，4－取代的吡咯烷衍生物，其中R
文檔編號C07D239/38GK1481379SQ01820878
公開日2004年3月10日 申請日期2001年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月19日
發(fā)明者丹尼斯·約翰·凱爾泰斯, 米歇爾·加勒特·勒佩爾, 加勒特 勒佩爾, 丹尼斯 約翰 凱爾泰斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司