專利名稱：一種用于降低血清膽固醇的益生菌制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種益生菌制劑，具體地說，涉及一種用于改善腸道微生態(tài)平衡，降低 人或動(dòng)物血清膽固醇的益生菌制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
已有的益生菌的研究也只限于對(duì)單個(gè)菌種的研究，沒有針對(duì)益生菌群相互促進(jìn)、 共生，協(xié)調(diào)促進(jìn)改善降低人或動(dòng)物血清膽固醇的研究，也沒有協(xié)調(diào)促進(jìn)降低人或動(dòng)物血清 膽固醇的益生菌群制劑、飼料添加劑及工藝。
膽固醇是人體內(nèi)重要的固醇類物質(zhì)。但是，圍繞著膽固醇與人體健康的關(guān)系，在 世界范圍內(nèi)食品學(xué)界和食品工業(yè)界一直存在很大的爭議自上世紀(jì)30年代國外研究者得出 “血管壁增厚即動(dòng)脈粥樣硬化癥是不正常膽固醇代謝的結(jié)果”這一結(jié)論以來，已有越來越 多的試驗(yàn)和研究表明膽固醇與高脂血癥、冠心病等心血管疾病間的關(guān)系，對(duì)此，有人描述為 "one to two”規(guī)律，即降低的血清膽固醇可隨之減少2%患冠心病的危險(xiǎn)性。盡管存在 著降血脂化學(xué)藥物，但其可使轉(zhuǎn)氨酶增高等不良反應(yīng)使人們致力于探索和研究新的安全有 效的調(diào)脂藥物，以嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌為代表的微生態(tài)制劑得到了廣泛青睞。益生菌作 為“有生命的綠色藥品”，已被越來越多的研究證明具有優(yōu)效、安全、符合生態(tài)的諸多優(yōu)點(diǎn)， 被越來越多的應(yīng)用于人類疾病的各個(gè)領(lǐng)域。
目前我國有近1/3的成年人的血脂偏高，高脂血癥現(xiàn)在已成為人類健康的第一隱 形殺手，因此治療高血脂是擺在醫(yī)學(xué)界的首要課題。為了更好的了解益生菌是否具有體內(nèi) 降解膽固醇的功能高脂動(dòng)物模型在益生乳酸菌降膽固醇功能性實(shí)驗(yàn)研究中得到越來越廣 泛的應(yīng)用。高脂高膽固醇飼料可以誘發(fā)動(dòng)物脂代謝紊亂，血脂水平發(fā)生變化血清膽固醇 (TC)和肝臟膽固醇含量升高，降血清功能性實(shí)驗(yàn)通常做法是飼喂高脂高膽固醇飼料建造高 脂實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型后飼喂實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)樣品，通過測定動(dòng)物血清脂類含量的變化來確定實(shí)驗(yàn) 樣品對(duì)動(dòng)物血脂的影響效果。
益生菌降膽固醇的研究現(xiàn)狀，近年來國內(nèi)外的學(xué)者在益生菌降膽固醇方面做了大 量的研究。Akalin等應(yīng)用小鼠作為模型，給小鼠飼喂含有嗜酸乳桿菌的酸奶和鮮奶，并研 究了嗜酸乳桿菌對(duì)小鼠血清中TC、TG和LDL的影響，發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌可以降低小鼠血清中 這些脂蛋白的含量。肖琳琳從西藏傳統(tǒng)發(fā)酵乳中分離篩選得到一株在液體培養(yǎng)基中降膽 固醇達(dá)到51. 8%的干酪乳桿菌(LactcAacil Ius casei)，用這株干酪乳桿菌制備的菌懸 液灌胃高脂模型小鼠14d后，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中膽固醇和甘油三指濃度較對(duì)照組顯著 降低(P <0.01)，同時(shí)HDL-膽固醇濃度有所增加，動(dòng)脈硬化指數(shù)低于對(duì)照組的水平。據(jù)報(bào) 道，某些微生物能在以膽固醇為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長，通過降解膽固醇來獲得碳源和 能量，并且有些微生物可以將膽固醇吸附在自身的細(xì)胞膜上，進(jìn)而同化膽固醇為細(xì)胞膜的 組成成分。能夠降解膽固醇的微生物種類很多，目前報(bào)道的主要有諾卡氏菌屬(Noccardia eythropoli s ；N. rhodochrous)、鏈毒菌屬(Streptomyces Iividans ；S. hygroscopicus)、 紅球菌屬(Rhodococcuse、equi ；R. erythropoli s)短桿菌屬(Brevibacterium)、棒狀桿菌屬(Corynebacrerium spp)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacter s implex)、假單胞菌屬 尹(Pseudomonas fluorescens)等。這些菌株都可產(chǎn)生較高活性的膽固醇氧化酶或 膽鹽水解酶。有的可產(chǎn)生較高活性的胞內(nèi)酶，如諾卡氏菌屬(Noccardiaeythropolis ； N. rhodochrous)；還有的可產(chǎn)生較高活性的胞外酶，如鏈霉菌屬(s. Iividans)和短桿菌屬 (B. steroIicum)等。
益生菌的研究與應(yīng)用，在日本、法國、俄羅斯、德國等國家較受到重視，而且具有專 業(yè)化和系統(tǒng)性的研究。就目前的研究與應(yīng)用水平而言，日本處于較領(lǐng)先的地位。早在上一 世紀(jì)30年代初時(shí)，日本的京都帝國大學(xué)微生物教研室的代田稔博士就已成功地分離出來 自于腸道的乳酸桿菌，這種有益菌在經(jīng)過強(qiáng)化培養(yǎng)后，使之能活著到達(dá)腸內(nèi)生存。而這種后 來被人們稱之為益力多菌的乳酸桿菌，目前已被廣泛地運(yùn)用在日本的食品、飲品、醫(yī)學(xué)等領(lǐng) 域。其中在乳制品上的運(yùn)用成績十分驚人，據(jù)國外有關(guān)公司調(diào)查，日本在2000/2001年由益 生菌所生產(chǎn)的乳制品，其總產(chǎn)值就已達(dá)22億美元。而今的益力多，在日本已無人不曉，利用 這種益生菌制作的乳制品成功地打入了國際奶品飲料市場，目前已攻下了 25個(gè)國家的城 池，甚至在這些國家建造了 18家加工廠，使目前全球每天至少2500萬人在飲用這種產(chǎn)品。 2005年整個(gè)歐洲市場益生菌原料的市場規(guī)模估計(jì)約為0. 35億歐元，到2010年能夠達(dá)到 1.2億歐元。益生菌市場的產(chǎn)值估計(jì)為25億歐元。目前市場上大約有1000多種不同的益 生菌產(chǎn)品。歐洲最主要的4類益生菌產(chǎn)品為1)傳統(tǒng)的發(fā)酵乳制品，例如酸奶。2)益生菌 飲料產(chǎn)品?；脻饪s的凍干的以膠囊、片劑或粉劑銷售的益生菌產(chǎn)品。4)新型的益生菌產(chǎn)品 形式，是益生菌在培養(yǎng)基或腸道內(nèi)代謝的產(chǎn)物。其中，法國含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌產(chǎn)品 已經(jīng)增長了 300%，占總?cè)殇N售量的4%。
國外益生菌開發(fā)日益深入，在發(fā)酵乳中添加益生菌，可以大大提高發(fā)酵乳的營養(yǎng) 功效。除了改善對(duì)乳成分的消化吸收外，還能促進(jìn)腸道對(duì)礦物質(zhì)的吸收和利用。這一研究 成果激發(fā)了益生菌食品熱。
益生菌在我國的研究與利用，起步較遲?；A(chǔ)研究和開發(fā)利用，與發(fā)達(dá)國相比，尚 差一定的距離。隨著人們生活水平的提高以及對(duì)自身保健功能的需求，益生菌的應(yīng)用逐漸 受到了重視，它已被人們科學(xué)地運(yùn)用到食品工業(yè)生產(chǎn)中，特別是在乳制品和一些功能性的 食品中已廣為運(yùn)用。目前我國已大量使用雙歧桿菌和乳桿菌這些有益菌生產(chǎn)營養(yǎng)、可口兼 有保健功能的酸牛奶。
據(jù)衛(wèi)生部網(wǎng)站消息，衛(wèi)生部辦公廳2010年4月近日印發(fā)《可用于食品的菌種名單》 的通知，根據(jù)《食品安全法》及其實(shí)施條例的有關(guān)規(guī)定，衛(wèi)生部組織制定了《可用于食品的菌 種名單》。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是針對(duì)以上不足，提供一種能夠降低人體或動(dòng)物血清膽固醇 的益生菌制劑及其制備方法。
為解決以上問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種用于降低血清膽固醇的益生菌制 劑，其特征在于所述益生菌制劑包括以下體積配比的成分
屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10_30份。
作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)
所述益生菌制劑包括以下體積配比的成分
屎腸球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
所述制備方法包括以下步驟
(1)屎腸球菌發(fā)酵液的制備將屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白胨、0. 5-1 %的酵母浸 膏、0. 1-0. 5 %的Nei2HPO4和0. 1-0. 5% KH2PO4，余量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發(fā)酵后，得到屎腸球菌發(fā)酵液；
(2)鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液的制備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培 養(yǎng)基中，培養(yǎng)基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白胨、0. 5-1%的酵母浸 膏，余量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到鼠李糖乳桿菌 發(fā)酵液；
(3)嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白胨、0. 5-1%的酵母浸膏，余 量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到嗜酸乳桿菌發(fā)酵液；
(4)將屎腸球菌發(fā)酵液、鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液和嗜酸乳桿菌發(fā)酵液按照以上比例 混合，得到降低血清膽固醇的益生菌制劑。
本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，具有以下優(yōu)點(diǎn)乳酸菌降膽固醇機(jī)制有多種方式，對(duì) 3-羥基-3-甲基戊二酰COA還酶的抑制作用，該酶是膽固醇體內(nèi)生物合成的限速酶；通過 膽鹽水解酶的作用，將部小腸內(nèi)的膽鹽水解，水解后的膽鹽能與食物中的膽固醇發(fā)生共沉 淀作用，從而促進(jìn)食源中的膽固醇向糞便中轉(zhuǎn)移；3.菌體對(duì)膽固醇的同化作用，直接分解 膽固醇。屎腸球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌三種菌分別在人或動(dòng)物的不同腸段上定植，其降 膽固醇的作用機(jī)制也不同，將三種菌組合起來可以發(fā)揮他們在各自腸段以不同機(jī)制共同發(fā) 揮作用，優(yōu)勢互補(bǔ)。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例，一種用于降低血清膽固醇的益生菌制劑，包括以下體積配比的成分屎腸 球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
益生菌制劑的制備方法，其特征在于所述制備方法包括以下步驟
(1)屎腸球菌發(fā)酵液的制備將屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白胨、0. 5-1 %的酵母浸 膏、0. 1-0. 5 %的Nei2HPO4和0. 1-0. 5% KH2PO4，余量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發(fā)酵后，得到屎腸球菌發(fā)酵液；
(2)鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液的制備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培 養(yǎng)基中，培養(yǎng)基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白胨、0. 5-1 %的酵母浸 膏，余量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到鼠李糖乳桿菌 發(fā)酵液；
(3)嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白胨、0. 5-1%的酵母浸膏，余5量為作為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到嗜酸乳桿菌發(fā)酵液；
(4)將屎腸球菌發(fā)酵液、鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液和嗜酸乳桿菌發(fā)酵液按照以上比例 混合，得到降低血清膽固醇的益生菌制劑。
在對(duì)屎腸球菌降膽固醇作用研究中，從142份健康兒童糞便中分離出一株具有在 體外降解膽固醇作用的菌株，經(jīng)中科院微生物研究所鑒定為屎腸球菌。通過藥效學(xué)研究證 明與飼以高脂飼料的對(duì)照組大鼠相比，在實(shí)驗(yàn)的第14J8天分別測定大鼠血清TC濃度低與 對(duì)照組，并有顯著性差異(P < 0. 05)。通過計(jì)算顯示高中劑量組HDL/TC比值高與對(duì)照組、 動(dòng)脈硬化指數(shù)低與對(duì)照組并有顯著性差異(P < 0. 05)。(見表1、表2、表3、表4)。根據(jù) 《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的判定標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)為屎腸球菌具有調(diào)節(jié)大鼠血脂 的作用。通過人體實(shí)驗(yàn)證明本菌具有同樣的作用(見表幻。藥理學(xué)研究證明本菌無毒、無 害、安全。是人體內(nèi)一種具有調(diào)節(jié)膽固醇代謝作用的正常生理性細(xì)菌。生產(chǎn)工藝研究表明， 屎腸球菌DM891U9菌株經(jīng)篩選、馴化后，采用發(fā)酵、濃縮、冷凍干燥等工藝可制成穩(wěn)定的微 生態(tài)調(diào)節(jié)劑。
表1 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠體重變化(g，M士 SD，η = 10)
權(quán)利要求
1.一種用于降低血清膽固醇的益生菌制劑，其特征在于所述益生菌制劑包括以下體 積配比的成分屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10-30份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于降低血清膽固醇的益生菌制劑，其特征在于所述益 生菌制劑包括以下體積配比的成分屎腸球菌20份、鼠李糖乳桿菌20份和嗜酸乳桿菌20份。
3.如權(quán)利要求1或2所述用于降低血清膽固醇益生菌制劑的制備方法，其特征在于 所述制備方法包括以下步驟(1)屎腸球菌發(fā)酵液的制備將屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)基含有重量比為-3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白胨、0. 5-1%的酵母浸膏、 0. 1-0. 5 %的Na2HPO4和0. 1-0. 5 % KH2PO4,余量為作為溶劑的水，接種量為0. 3 %，在 320C _38°C下厭氧發(fā)酵后，得到屎腸球菌發(fā)酵液；(2)鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液的制備鼠李糖乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的培養(yǎng)基 中，培養(yǎng)基含有重量比為1 % -3 %的葡萄糖、0. 5-1. 5 %的蛋白胨、0. 5-1 %的酵母浸膏，余 量為作為溶劑的水，接種量為0.3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到鼠李糖乳桿菌發(fā)酵 液；(3)嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的養(yǎng)基中，培 養(yǎng)基含有重量比為1 % -3%的葡萄糖、0. 5-1. 5%的蛋白胨、0. 5-1 %的酵母浸膏，余量為作 為溶劑的水，接種量為0. 3%，在32°C _36°C下厭氧發(fā)酵后，得到嗜酸乳桿菌發(fā)酵液；(4)將屎腸球菌發(fā)酵液、鼠李糖乳桿菌發(fā)酵液和嗜酸乳桿菌發(fā)酵液按照以上比例混合， 得到降低血清膽固醇的益生菌制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于降低血清膽固醇的益生菌制劑，包括屎腸球菌10-30份、鼠李糖乳桿菌10-30份和嗜酸乳桿菌10-30份。優(yōu)點(diǎn)是1.對(duì)3-羥基-3-甲基戊二酰COA還酶的抑制作用，該酶是膽固醇體內(nèi)生物合成的限速酶；2.通過膽鹽水解酶的作用，將部小腸內(nèi)的膽鹽水解，水解后的膽鹽能與食物中的膽固醇發(fā)生共沉淀作用，從而促進(jìn)食源中的膽固醇向糞便中轉(zhuǎn)移；3.菌體對(duì)膽固醇的同化作用，直接分解膽固醇。屎鏈球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌三種菌分別在人或動(dòng)物的不同腸段上定植，其降膽固醇的作用機(jī)制也不同，將三種菌組合起來可以發(fā)揮他們在各自腸段以不同機(jī)制共同發(fā)揮作用，優(yōu)勢互補(bǔ)。
文檔編號(hào)A61K35/74GK102028713SQ201010590788
公開日2011年4月27日 申請日期2010年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月12日
發(fā)明者夏學(xué)德, 孟祥宜, 曲嫣紅, 袁杰利 申請人:夏學(xué)德, 曲嫣紅