專利名稱：：齊多夫定和針對(duì)hiv聚合酶中k65r突變選擇的藥劑的強(qiáng)力組合的制作方法齊多夫定和針對(duì)HIV聚合酶中K65R突變選擇的藥劑的強(qiáng)力組合
背景技術(shù)：
：在1983年，AIDS的病因被確定為人類免疫缺陷病毒(HIV)。在1985年，報(bào)道了合成核苷3'-疊氮-3'-脫氧胸苷(AZT)抑制人類免疫缺陷病毒的復(fù)制。從那時(shí)起，就已經(jīng)證實(shí)了許多其他合成核苷能夠有效抵抗HIV，包括2',3'-雙脫氧肌苷(DDI)、2'，3'-雙脫氧胞苷(DDC)、2',3'-雙脫氧-2',3'-雙脫氫胸苷(D4T)、((1S，4R)-4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇硫酸酯(鹽)(ABC)、順式-2-羥甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3_氧硫雜環(huán)戊烷(FTC)、(-)-順式-2-羥甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3_氧硫雜環(huán)戊烷(3TC)。在利用細(xì)胞激酶對(duì)5'-三磷酸酯進(jìn)行細(xì)胞磷酸化之后，這些合成的核苷被引入到病毒DNA的生長鏈中，導(dǎo)致由于缺乏3'_羥基而發(fā)生鏈終止。它們也能夠抑制病毒酶逆轉(zhuǎn)錄酶。人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，在用抗病毒藥劑持續(xù)長時(shí)間治療后會(huì)出現(xiàn)HIV抗藥性變異體(變種，variant)?？顾幮宰畹湫偷赝ㄟ^編碼病毒復(fù)制中所使用的酶的基因突變而發(fā)生，并且在HIV的情況下，最典型的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶、或DNA聚合酶。近來，已經(jīng)證實(shí)，通過與第二種、以及或許第三種抗病毒化合物組合或交替給予該化合物能夠延長、強(qiáng)化或恢復(fù)抗HIV感染的藥劑的效力，上述抗病毒化合物誘導(dǎo)由主要藥劑(principledrug)導(dǎo)致的不同突變?？商娲?，藥劑的藥代動(dòng)力學(xué)、生物學(xué)分布或其他參數(shù)能夠通過這樣的組合或交替療法而發(fā)生改變。一般而言，組合療法通常要優(yōu)于交替療法，因?yàn)榻M合療法對(duì)病毒產(chǎn)生多重并行的壓力。許多暴露于各種藥劑治療方案的HIV患者已經(jīng)產(chǎn)生了HIV逆轉(zhuǎn)錄酶中的K65R突變形式的抗藥性。K65R突變的速率在經(jīng)歷治療的患者體內(nèi)隨時(shí)間穩(wěn)定增加，目前超過4%。這個(gè)事實(shí)與在臨床實(shí)踐中廣泛使用替諾福韋直接相關(guān)。接受含替諾福韋的三核苷治療方案的患者經(jīng)歷了與這種突變相關(guān)的高速早期病毒學(xué)失效。除替諾福韋之外，通過扎西他濱(Hivid)、雙脫氧胸苷(Videx)、司他夫定(Zerit)和阿波卡偉(Ziagen)在體外選擇K65R。K65R降低了對(duì)這些核苷類似物的感受性，但是保留了齊多夫定(Retrovir)和其他胸腺嘧TO(thymidinenucleoside)白勺盡管能夠用齊多夫定(AZT)來治療具有K65R突變的患者，但經(jīng)批準(zhǔn)的AZT口服劑量為300mg每日兩次，其與骨髓毒性有關(guān)，這種骨髓毒性被認(rèn)為繼發(fā)于齊多夫定_單磷酸酯(AZT-MP)的累積。采用粘附和融合抑制劑以及其他抗病毒藥劑對(duì)AIDS進(jìn)行治療有些許效果。目前對(duì)HIV-1感染的臨床治療包括稱之為高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(“HAART”)的三重藥劑組合。HAART典型地涉及核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非_核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、和HIV-1蛋白酶抑制劑的各種組合。在遵醫(yī)囑的患者(compliantpatient)中，HAART能有效降低死亡率并阻止HIV-1感染向AIDS發(fā)展。然而，這些多重藥劑療法并沒有消除HIV-1，并且長期治療經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致多重藥劑抗性。而且，許多這些藥劑是高度毒性的和/或需要可能會(huì)使依從性下降并限制效能的復(fù)雜劑量方案。因此，對(duì)于預(yù)防和治療HIV-1感染和AIDS，繼續(xù)需要開發(fā)其他藥劑。理想地，這些藥劑將靶向于HIV-1復(fù)制循環(huán)中的早期階段，即，抑制或防止粘附和融合。具有使患者服用選擇K65R的核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的病毒學(xué)失效最小化的組合治療劑(combinationtherapy)將是有益的。另外，對(duì)于HIV或其他逆轉(zhuǎn)錄病毒感染具有用量較小卻有效的劑量的齊多夫定或其他胸腺嘧啶核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑以使得與這些藥劑標(biāo)準(zhǔn)劑量有關(guān)的副作用最小的組合治療劑也是有益的。提供通過將在其所有儲(chǔ)存宿主(reservoir)中的病毒一同破壞來治愈HIV/AIDS的組合治療劑也是有益的。本發(fā)明提供了這樣的組合治療劑，以及采用這種治療劑的治療方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的組合治療劑，及其用于治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的方法。在一種實(shí)施方式中，該組合治療劑包括a)齊多夫定(AZT)或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑，和b)非胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑，如替諾福韋、阿波卡偉、(-)-0-D-2-氨基嘌呤二氧戊環(huán)(APD)和DAPD，其能夠針對(duì)K65R突變來選擇。在該實(shí)施方式中，為了減小副作用，AZT或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑的劑量低于常規(guī)劑量，并且仍然維持治療藥劑的有效治療水平。例如，為了使與給予AZT相關(guān)的副作用(如導(dǎo)致貧血病的骨髓毒性)最小，劑量能夠被有效降低至約100約250mg每日兩次，優(yōu)選約200mg每日兩次。采用較低(但仍然有效)劑量的AZT，能夠通過顯著降低患者體內(nèi)存在的AZT-MP含量而使被認(rèn)為是繼發(fā)于齊多夫定-單磷酸酯(AZT-MP)累積的骨髓毒性最小化，而并未顯著改變帶來抗病毒活性的齊多夫定-三磷酸酯(AZT-TP)水平。在另一種實(shí)施方式中，該組合治療劑包括齊多夫定(AZT)或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑和DAPD或APD。在該實(shí)施方式中，AZT或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑的劑量能夠與常規(guī)劑量相同或低于常規(guī)劑量。在第三種實(shí)施方式中，該組合治療劑包括至少一種腺苷抗病毒藥劑、至少一種胞苷抗病毒藥劑、至少一種鳥苷抗病毒藥劑、和至少一種胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑藥劑。在該實(shí)施方式的一個(gè)方面，該組合治療劑包括，且進(jìn)一步包括至少一種選自逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的其他藥劑，尤其是非-核苷病毒聚合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑、侵入抑制劑、粘附抑制劑、和整合酶抑制劑，如雷特格韋(raltegravir)(Isentress)或MK-0518、GS-9137(elvitegravir,GileadSciences)、GS-8374(GileadSciences)、或GSK-364735。人們認(rèn)為這種療法，尤其是在HIV感染發(fā)展的早期階段給予能夠消除患者體內(nèi)的HIV感染。即，含所有可能堿基(ACTG)的不同核苷和其他藥劑的存在使病毒調(diào)節(jié)其逆轉(zhuǎn)錄酶并對(duì)任何類型的核苷抗病毒核苷(即，腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或鳥嘌呤)產(chǎn)生抗性的能力最小化，因?yàn)槠鋵?duì)所存在的其他核苷抗病毒藥劑、和/或其他非-NRTI治療藥劑中的至少一種敏感。而且，采用不同堿基攻擊相同靶標(biāo)(如HIV聚合酶的活性部位)能夠使得所有可能生長的病毒DNA鏈發(fā)生完全和徹底的鏈終止。除了四種不同核苷之外，使用NNRTI(ACTG類似物)甚至更加有效，因?yàn)镹NRTI結(jié)合于HIV-聚合酶并通過在酶活性部位的天然核苷相互作用而導(dǎo)致酶的構(gòu)型發(fā)生改變從而阻止鏈延伸。6在任何這些實(shí)施方式中，其他治療藥劑能夠與這些藥劑，尤其是包含具有不同進(jìn)攻模式的藥劑組合使用。這樣的藥劑包括但不限于抗病毒藥劑，如細(xì)胞因子(例如，rIFNa,rIFN^,rIFNy)；兩性霉素B，其為具有抗HIV活性的脂質(zhì)-結(jié)合分子；特異性病毒誘變劑(例如，三氮唑核苷)、HIVVIF抑制劑、以及糖蛋白加工的抑制劑。在任何這些實(shí)施方式中，各種單一一種治療藥劑，如齊多夫定(ZDV、AZT)或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑和非胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑(其在第一種實(shí)施方式中針對(duì)K65R突變來選擇)能夠組合給予或交替給予。當(dāng)組合給予時(shí)，藥劑能夠以單劑量形式或多劑量形式給予。在一些實(shí)施方式中，一些抗病毒藥劑口服給予，而其他抗病毒藥劑通過注射給予，它們能夠在大致相同的時(shí)間，或在不同時(shí)間進(jìn)行給予。本發(fā)明包含兩種類型的抗病毒藥劑，或其藥用衍生物的組合，該組合是協(xié)同的，即比單獨(dú)給予任一種藥劑或僅利用一種藥劑來治療效果更好。本文中所描述的抗病毒組合提供的治療方法不僅能夠降低抗病毒活性所需的單一藥物的有效劑量，從而降低毒性，而且還能夠由于通過多重機(jī)制進(jìn)攻病毒因而提高其絕對(duì)抗病毒效應(yīng)。即，由于這樣的組合的協(xié)同作用使得當(dāng)以相同于單獨(dú)使用時(shí)的量一同使用時(shí)能夠使用更少的藥物并提高藥物的效能，因而這種組合是有益的。類似地，這種新型抗病毒組合提供了一種防止病毒對(duì)單一療法產(chǎn)生抗性的方法，由此為臨床醫(yī)師提供了一種更為有效的治療劑。本文公開的組合療法或交替療法適用于預(yù)防和治療HIV感染和其他相關(guān)病癥，如AIDS-相關(guān)癥候(AIDS-relatedcomplex,ARC)、持續(xù)性全身淋巴結(jié)病(PGL)、AIDS-相關(guān)的神經(jīng)疾病、抗HIV抗體陽性病癥和HIV-陽性病癥、卡波西氏肉瘤、血小板減少性紫癜和機(jī)會(huì)性感染。另外，這些化合物或制劑能夠預(yù)防性地使用以防止或延緩屬于抗HIV抗體或HIV抗原陽性或曾經(jīng)暴露于HIV的個(gè)體臨床疾病的發(fā)展。例如，該組合物能夠預(yù)防或延緩K65R抗性HIV的發(fā)展。這種療法也能夠用于治療其他病毒感染，如HIV-2。圖1是示出了在給予AZT200mg每日兩次(灰色)或300mg每日兩次(黑色)的模擬個(gè)體(η=3,000)中，7天內(nèi)預(yù)測(cè)的AZT血漿濃度(平均值士SD)的圖表。圖2是示出了在給予AZT200mg每日兩次(灰色)或300mg每日兩次(黑色)的模擬個(gè)體(η=3，000)中，每IO6個(gè)細(xì)胞在7天內(nèi)預(yù)測(cè)的AZT-MP的細(xì)胞水平(平均值士SD)的圖表。圖3是示出了在給予AZT200mg每日兩次(灰色)或300mg每日兩次(黑色)的模擬個(gè)體(η=3，000)中，每IO6個(gè)細(xì)胞在7天內(nèi)預(yù)測(cè)的AZT-TP的細(xì)胞水平(平均值+SD)的圖表。(因?yàn)?lt;0，平均值-SD并未顯示)。圖4Α是來自給予200mg每日兩次(灰色)或300mg每日兩次(黑色)的個(gè)體的最大AZT-MP水平的三次獨(dú)立模擬的代表性直方圖(每次模擬試驗(yàn)η=3，000)。圖4Β是來自給予200mg每日兩次(灰色)或300mg每日兩次(黑色)的個(gè)體的最大AZT-TP水平的三次獨(dú)立模擬的代表性直方圖(每次模擬試驗(yàn)η=3，000)。圖5是示出了在模擬個(gè)體中所預(yù)測(cè)的AZT-TP的最大細(xì)胞濃度(平均值(·)士SD和中值(X))以劑量(mg，每日兩次)對(duì)比的圖表(每次模擬試驗(yàn)η=3，000)。圖6是示出了根據(jù)治療和天數(shù)，采用500mg每日兩次DAPD、500mg每日兩次DAPD和200mg每日兩次AZT、以及500mg每日兩次DAPD和300mg每日兩次AZT進(jìn)行治療的血紅蛋白(g/dL)從基線產(chǎn)生的平均變化的圖表。圖7是示出了根據(jù)治療和天數(shù)，采用500mg每日兩次DAPD、500mg每日兩次DAPD和200mg每日兩次AZT、以及500mg每日兩次DAPD和300mg每日兩次AZT進(jìn)行治療的MCV平均變化(飛升(femtoliter)，+/-SD)的圖表。具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及治療病毒感染(如HIV感染)的組合物和方法。以下將更詳細(xì)地描述本發(fā)明各種實(shí)施方式，參照以下非限制性定義將更好地進(jìn)行理解。定義如本文中所用的，術(shù)語抗病毒核苷藥劑是指具有抗HIV活性的抗病毒核苷。這種藥劑只要是抗HIV活性的，就能夠也是抗其他病毒感染活性的。術(shù)語“抗病毒胸腺嘧啶核苷”是指具有抗HIV活性的胸腺嘧啶類似物，包括但不限于，AZT(齊多夫定)和D4T(2',3'-雙脫氫-脫氧胸苷(司他夫定，stravudine)、以及1-W-D-二氧戊環(huán))胸腺嘧啶(DOT)或它們的前藥。術(shù)語“抗病毒鳥嘌呤核苷”是指具有抗HIV活性的鳥嘌呤類似物，包括但不限于，HBG[9-(4-羥丁基)鳥嘌呤]、洛布卡韋([lR(la，20，3a)]-9-[2，3-二(羥甲基)環(huán)丁基]鳥嘌呤)、阿波卡偉((13，41)-4-[2-氨基-6-(環(huán)丙基氨基)-911-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇硫酸酯(鹽)、G-碳環(huán)核苷的前藥和在美國專利5，994，321中公開的其他抗病毒鳥苷。術(shù)語“抗病毒胞嘧啶核苷”是指具有抗HIV活性的胞嘧啶類似物，包括但不限于，(_)-2'，3'-雙脫氧-3'_硫胞苷(3TC)及其5-氟類似物(FTC，恩曲他濱(Emtricitaine))、2'，3'-雙脫氧胞苷(DDC)、Racivir，3-D-2，，3，-雙脫氫-2，，3，-雙脫氧-5-氟胞苷(DFC、D-d4FC、RVT、右艾夫他濱(Dexelvucitabine))及其對(duì)映體L-D4FC、以及阿立他濱(apricitabine)(APC、AVX754、BCH-10618)。術(shù)語“抗病毒腺嘌呤核苷”是指具有抗HIV活性的腺嘌呤類似物，包括但不限于，2'，3'-雙脫氧-腺苷(ddAdo)、2，，3，-雙脫氧肌苷(DDI)、9-(2-磷酰基(phosphonyl)甲氧基乙基)腺嘌呤(PMEA)、9-R-2-膦酰基甲氧基丙基腺嘌呤(PMPA，替諾福韋)(K65R對(duì)PMPA具有抗性)、替諾福韋二索羅基富馬酸酯(9-[(R)_2[[二[[異丙氧基羰基)氧基]-甲氧基]-氧膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤富馬酸酯，TDF)、雙(異丙氧基甲基羰基)PMPA[雙(poc)PMPA]、GS_9148(GileadSciences)以及Balzarini，J.；DeClercq，E.Acyclicpurinenucleosidephosphonatesasretrovirusinhibitors.InJeffriesDJ,DeClercqE.,editors.Antiviralchemotherapy.NewYork，N.YJohnWiley&Sons，Inc.；1995.PP.41-45中公開的那些，其內(nèi)容結(jié)合于本文中作為參考。術(shù)語AZT與術(shù)語齊多夫定可通篇互換使用。類似地，其他抗病毒藥劑的縮寫和常用名都可通篇互換使用。如本文中所使用的，術(shù)語DAPD((2R，4R)_2_氨基_9_[(2_羥甲基)_1，3_二氧戊環(huán)-4-基]腺嘌呤)也預(yù)想包含稱為APD[(-)-0-D-2-氨基嘌呤二氧戊環(huán)]的DAPD的相關(guān)形式。DAPD的所有光學(xué)活性形式預(yù)想都屬于本文中所描述的本發(fā)明的范圍，包括光學(xué)活性形式和外消旋體形式。如本文中所使用的，術(shù)語“藥用鹽”是指在給予受者之后能夠直接或間接提供核苷抗病毒藥劑，或展示其自身活性的藥用鹽。如本文中所使用的，術(shù)語“前藥”是指AZT或非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑的5'和N-酰基化、烷基化、或磷酸化(包括單磷酸酯、二磷酸酯和三磷酸酯以及穩(wěn)定化的磷酸酯(鹽)和磷脂)衍生物。在一種實(shí)施方式中，?；鶊F(tuán)是羧酸酯，其中酯基的非羰基部分選自直鏈烷基、支鏈烷基、或環(huán)烷基；烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)；芳烷基(包括芐基)；芳氧基烷基(包括苯氧基甲基)；芳基(包括可選地被鹵素、烷基、烷基或烷氧基取代的苯基)；磺酸酯，例如烷基或芳烷基磺?；谆酋；?、三苯甲基或單甲氧基三苯甲基、取代芐基、三烷基硅烷基、或二苯基甲基硅烷基。酯中的芳基最優(yōu)選包含苯基。烷基能夠是直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的，且優(yōu)選Ci_18。如本文中所使用的，術(shù)語“抗性病毒”是指這樣的病毒，其與恒定細(xì)胞系(包括但不限于外周血液單核(PBM)細(xì)胞、或MT2或MT4細(xì)胞)中的天然病毒相比，表現(xiàn)出EC5(1的3倍、更典型地5倍或更高倍的增加。如本文中所使用的，術(shù)語“基本上純的”或“基本上以一種光學(xué)異構(gòu)體的形式”是指包括至少95%98%，或更多，優(yōu)選99%100%的核苷的單對(duì)映體的核苷組合物。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，AZT對(duì)于所披露的任何適應(yīng)癥以基本上純的形式給予。I.胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑和非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑的組合在一種實(shí)施方式中，該組合物包含胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑和非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑，其中非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑針對(duì)K65R突變來選擇。針對(duì)K65R突變選擇的代表性藥劑包括替諾福韋、和DAPD。胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑與非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑以兩種藥劑協(xié)同作用于病毒的方式組合給予或交替給予。本文中所描述的組合物和方法能夠用于治療感染了抗藥形式HIV，尤其是包含K65R突變的患者。在該實(shí)施方式中，胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑(如AZT)的劑量低于通常與副作用相關(guān)的劑量，但是仍足夠高以發(fā)揮有益的抗病毒活性。機(jī)理研究顯示，在更高劑量的AZT中所觀察到的AZT-TP次線性(sub-linear)增加可以通過胸苷酸激酶的飽和劑量來進(jìn)行解釋。因此，人們認(rèn)為，當(dāng)這種藥劑給予得太多時(shí)，產(chǎn)生這種藥劑的活性三磷酸酯形式的磷酸化酶的容量達(dá)到飽和，因而形成最大量的三磷酸酯，直至該酶可再次用于將該藥劑轉(zhuǎn)化成三磷酸酯形式。過量藥劑被轉(zhuǎn)化成單磷酸酯，進(jìn)而發(fā)生累積，而正是單磷酸酯被認(rèn)為產(chǎn)生諸如骨髓毒性之類的副作用。因此，在能夠有效遞送的藥物量與產(chǎn)生副作用的藥物量之間維持平衡是很重要的。先前的臨床研究(數(shù)據(jù)未示出)表明，AZTlOOmg每日三次產(chǎn)生顯著較低的血漿AZT和淋巴細(xì)胞AZT-MP水平，而對(duì)抗病毒活性有貢獻(xiàn)的齊多夫定-三磷酸酯(AZT-TP)的水平?jīng)]有發(fā)生顯著改變。在計(jì)算機(jī)中(insilico)實(shí)施模擬研究，利用AZT的群體藥代動(dòng)力學(xué)和細(xì)胞酶參數(shù)在虛擬受試者中優(yōu)化K65R-選擇性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑每日兩次給予的AZT劑量。這些模擬試驗(yàn)預(yù)測(cè)了，AZT200mg每日兩次產(chǎn)生與抗病毒效能相關(guān)的類似AZT-TP水平，與AZT300mg每日兩次的最大細(xì)胞水平>91%重疊，并降低了與毒性相關(guān)的AZT-MP水平，與AZT300mg每日兩次<23%重疊。這些計(jì)算機(jī)模擬發(fā)現(xiàn)的結(jié)果顯示，AZT200mg每日兩次能夠維持抗病毒效能，而產(chǎn)生較低的毒性并遞送抗K65R活性。實(shí)施例1中更詳細(xì)地描述了該研究。計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)和體內(nèi)數(shù)據(jù)證實(shí)，較低劑量的AZT(即，每日兩次，每次約100約250mg)可以是有效的，而且還能夠使有毒副產(chǎn)物(如該藥劑的單磷酸酯形式)的累積最小化。另外，胸腺嘧啶抗病毒核苷藥劑(如AZT)的組合治療劑有助于防止病毒對(duì)其他抗病毒藥劑產(chǎn)生抗性。即，來自大量基因型數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)表明，各種非胸腺嘧啶核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，如替諾福韋，DXG和DAPD，能夠針對(duì)感染HIV-1的個(gè)體中的K65R抗性突變來選擇。在體內(nèi)和體外實(shí)施的研究表明，含有K65R突變的病毒對(duì)齊多夫定(AZT)和其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑仍具有感受性。因此，AZT與這些作為K65R突變的“防抗藥性劑(resistancer印ellent)”的藥劑的共配制(co-formulation)提供了比單獨(dú)任一種藥劑更好的治療效果。II.胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑和DAPD的組合在另一實(shí)施方式中，該組合包括齊多夫定(AZT)或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑、和DAPD。在該實(shí)施方式中，AZT或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑的劑量能夠與常規(guī)劑量相同或低于常規(guī)劑量。正如以上關(guān)于第一種實(shí)施方式的討論，AZT與其他作為K65R突變“防抗藥性劑”的抗病毒核苷藥劑的共配制提供了比單獨(dú)任一種藥劑更好的療法。AZT和其他胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑也與該病毒DNA的各種突變有關(guān)，并因此能夠產(chǎn)生對(duì)AZT的抗性。這些突變已知為胸腺嘧啶類似物突變(TAM)。已經(jīng)在6個(gè)試驗(yàn)中在接近200位受試者中對(duì)氨多索韋(AMDX；DAPD)進(jìn)行了充分研究。AZT與DAPD具有協(xié)同作用，并阻止K65R和胸腺嘧啶類似物突變(TAM)的選擇。S卩，在給予DAPD之后，AZT使病毒產(chǎn)生K65R突變的能力降低的同時(shí)，在給予AZT之后，DAPD也會(huì)使該病毒產(chǎn)生TAM突變的能力降低。因此這兩種藥劑一起給予優(yōu)于單獨(dú)給予的任一種，因?yàn)樗鼈兠恳环N能夠有效地降低所存在的病毒突變，這些突變會(huì)使其他作為抗HIV藥劑無效或低效。另外，正如在以上討論的第一種實(shí)施方式中的情況，AZT的劑量能夠以降低AZT單磷酸酯(AZT-MP)累積的量，同時(shí)維持抗病毒作用的方式降低。因此，AZT能夠按照300mg每日兩次的常規(guī)劑量給予，其也能夠以較低劑量(即，每日兩次，每次約100約250mg)給予，也是有效的，并且還能夠使有毒副產(chǎn)物(如該藥劑的單磷酸酯)的累積最小化。臨床研究的結(jié)果如實(shí)施例2中所示，其中在10天內(nèi)，DAPD的劑量為500mg每日兩次，而AZT的劑量在一些患者中為300mg每日兩次，而在其他患者中為200mg每日兩次。在每一種情況下，隨機(jī)選擇受試者按31給予DAPD安慰劑。每日測(cè)定病毒負(fù)荷。DAPD/AZT病毒負(fù)荷下降指示協(xié)同作用，并且該組合療法是有效的且耐受性良好。盡管該研究僅限于10天，但是可以認(rèn)為，用較低劑量的AZT進(jìn)行的長期研究證實(shí)了毒性也發(fā)生降低。在該研究中，針對(duì)組合療法對(duì)血紅蛋白濃度和平均紅細(xì)胞容積(對(duì)骨髓毒性敏感性的指標(biāo))的影響進(jìn)行了測(cè)定。24位受試者參與了研究(如實(shí)施例3中所示)，采用以上討論的DAPD和AZT的劑量。隨時(shí)間進(jìn)行測(cè)定包括血紅蛋白(g/dl)和平均紅細(xì)胞容積(MCV，飛升)的血液學(xué)指數(shù)，而數(shù)據(jù)表明血紅蛋白從基線發(fā)生下降的趨勢(shì)為DAPD/AZT300彡AZT300彡DAPD/AZT200>AZT200>DAPD>安慰劑，而MCV從基線發(fā)生升高的趨勢(shì)為DAPD/AZT300>AZT300>DAPD/AZT200>AZT200>安慰劑>DAPD。在人體中的這些數(shù)據(jù)表明，較低劑量的AZT有效降低了與骨髓毒性有關(guān)的副作用的發(fā)生。III.采用腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和鳥嘌呤核苷抗病毒藥劑組合的組合療法在第三種實(shí)施方式中，給予具有以多種機(jī)制攻擊HIV的能力的組合治療劑。艮口，組合治療劑包括有效量的至少一種腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和鳥苷核苷抗病毒藥劑，以及一種或多種除NRTI之外的經(jīng)由不同機(jī)制來抑制HIV病毒負(fù)荷的其他藥劑。實(shí)例包括逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑、侵入抑制劑、粘附抑制劑、聚合酶抑制劑和整合酶抑制劑，整合酶抑制劑例如是雷特格韋(raltegravir)(Isentress)或MK-0518、GS-9137(GileadSciences)、GS-8374(GileadSciences)或GSK-364735。可以認(rèn)為這種療法，尤其是在發(fā)生HIV感染的早期階段給予時(shí)，能夠消除患者體內(nèi)HIV感染。即，不同核苷和其他藥劑的存在使該病毒調(diào)節(jié)其逆轉(zhuǎn)錄酶并對(duì)任何類型的(即，腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或鳥嘌呤)核苷抗病毒核苷產(chǎn)生抗性的能力最小化，因?yàn)槠鋵?duì)所存在的至少一種其他核苷抗病毒藥劑、和/或其他非-NRTI治療藥劑是敏感的。另外，某些藥劑的親脂特性使得其能夠穿透病毒能夠復(fù)制的某些區(qū)室(例如，大腦、睪丸、內(nèi)臟)。代表性的藥劑將在下文中更詳細(xì)地描述。粘附和融合抑制劑粘附和融合抑制劑是抗HIV藥物，其意在通過防止病毒粘附至新細(xì)胞并突破細(xì)胞膜而保護(hù)細(xì)胞免受HIV感染。這些藥物能夠預(yù)防細(xì)胞免受游離病毒(在血液中的)感染，或通過接觸感染的細(xì)胞而發(fā)生感染。這些藥劑對(duì)消化道酸(digestiveacid)是敏感的，因此通常通過將其分解而進(jìn)行遞送，這些藥物大多數(shù)通過注射或靜脈輸注給予。在下表中示出了實(shí)例侵入抑制劑(包括融合抑制劑)11在人體試驗(yàn)中的其他融合和粘附抑制劑包括AK602、AMD070、BMS-378806、HGS004、INCB947UPR0140、ScheringC、SP01A、和TAK-652。AK602是由日本熊本大學(xué)(KumamotoUniversity)研發(fā)的CCR5阻斷劑。AnorMed的AMD070阻斷CD4T-細(xì)胞上的CXCR4受體以抑制HIV融合。BMS-378806是一種粘附至gpl20的粘附抑制劑，gpl20是HIV病毒的一部分。HumanGenomeSciences的HGS004是一種單克隆抗體CCR5阻斷劑。INCB9471由IncyteCo印oration進(jìn)行銷售。Progenies的PRO140通過結(jié)合至⑶4細(xì)胞表面上的受體蛋白而阻斷融合。SamaritanPharmaceuticals的SP01A是HIV侵入抑制劑。Takeda的TAK-652阻斷與CCR5受體的結(jié)合。聚合酶抑制劑HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)的DNA聚合活性能夠通過至少三種機(jī)理上獨(dú)特類型的化合物而得到抑制。它們中的兩種是鏈終止核苷類似物(NRTI)和變構(gòu)的非-核苷RT抑制劑(NNRTI)。第三種類型包括焦磷酸酯模擬物，如膦甲酸(膦?；姿?，PFA)。這種逆轉(zhuǎn)錄酶具有第二種酶活性，核糖核酸酶H(RNaseH)活性，其定位于該酶中的第二活性位點(diǎn)。RNaseH活性能夠通過各種小分子(聚合酶抑制劑)而得到抑制。該小分子的實(shí)例包括二酮酸，其直接結(jié)合于RNaseH結(jié)構(gòu)域，或類似于PFA的化合物，其被認(rèn)為在聚合酶結(jié)構(gòu)域中發(fā)生結(jié)合。這些化合物的實(shí)例列于下表中。HIV療法核苷/核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)HIV療法非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)蛋白酶抑制劑蛋白酶抑制劑通過阻止病毒復(fù)制來治療或預(yù)防HIV感染。它們通過抑制HIV蛋白酶活性而起作用，這種酶能夠切斷最后組裝成新病毒子的新生蛋白。實(shí)例如下表中所示。HIV療法蛋白酶抑制劑(PI)HIV療法其他類型的藥劑細(xì)胞抑制劑HIV療法基于免疫的療法IV.組合或交替HIV-藥劑一般而言，在交替治療期間，順次給予有效劑量的每一種藥劑，而在組合療法中，一起給予有效劑量的兩種或多種藥劑。例如，在交替療法中，能夠在有效時(shí)間段內(nèi)以有效量給予一種或多種第一藥劑從而治療病毒感染，而隨后用一種或多種第二藥劑替代治療方案中的第一藥劑，同樣在有效時(shí)間段內(nèi)以有效量給予。劑量取決于多種因素，諸如每種藥劑的吸收、生物學(xué)分布、代謝和排泄速度等，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他因素。應(yīng)該注意到，劑量值也將隨著所緩解的病癥嚴(yán)重度而發(fā)生變化。應(yīng)該進(jìn)一步理解，對(duì)于任何特定的受試者，具體的劑量方案和時(shí)間表應(yīng)該根據(jù)個(gè)體需要和給予或監(jiān)控該組合物給藥的人員的專業(yè)判斷而隨時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。包括胸腺嘧啶核苷衍生物(如AZT)和非胸腺嘧啶核苷衍生物(如3TC)的抗HIV化合物的合適劑量范圍的實(shí)例能夠在科技文獻(xiàn)和醫(yī)師桌上手冊(cè)(PhysiciansDeskReference)中找到。本文中描述的其他化合物的合適劑量范圍的許多實(shí)例也能夠在公共文獻(xiàn)中找到或能夠采用已知的程序確定。這種劑量范圍能夠根據(jù)所需進(jìn)行修改以實(shí)現(xiàn)所需結(jié)果。在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，AZT與針對(duì)K65R突變選擇的非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑組合給予。在具體的實(shí)施方式中，AZT與替諾福韋、APD或DAPD組合給予或交替給予。V.藥物組合物經(jīng)受本文中所描述的任何疾病所導(dǎo)致的影響，尤其是HIV感染的人，可以針對(duì)本文中詳細(xì)描述的任何適應(yīng)癥或給予模式，在藥用載體或稀釋劑存在下，通過向患者給予有效量的上述組合物而得到治療?；钚晕镔|(zhì)能夠通過任何合適的途徑，例如，口服、非腸道、腸內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)注射、皮下、經(jīng)皮膚、鼻內(nèi)或局部，以液體或固體形式來給予。藥用載體或稀釋劑中包括足夠量的活性化合物從而向患者遞送治療有效量的化合物以抑制體內(nèi)病毒復(fù)制，尤其是HIV復(fù)制，而不會(huì)在所治療患者中導(dǎo)致嚴(yán)重的毒性作用。“抑制量”是指活性成分的量足以發(fā)揮抑制作用，抑制作用是通過例如本文中所述測(cè)定來測(cè)量的。所有上文中提及的病癥的化合物的優(yōu)選劑量為約175mg/kg體重/天，優(yōu)選120mg/kg體重/天，更一般地為0.1約100mg/kg受者體重/天。藥用衍生物的有效劑量范圍能夠基于待遞送的母體核苷(parentnucleoside)或其他藥劑的重量進(jìn)行計(jì)算。如果衍生物自身表現(xiàn)出活性，則有效劑量能夠如上采用衍生物的重量，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他方法進(jìn)行估算。化合物以任何合適的單位劑量形式方便地進(jìn)行給予，包括但不限于每單位劑量形式含有73000mg，優(yōu)選701400mg活性成分的所述劑量形式。50lOOOmg的口服劑量通常是方便的。理想地，應(yīng)該給予活性成分以使化合物的峰值血漿濃度達(dá)到約0.0270微摩爾，優(yōu)選約0.510微摩爾。例如，這可以通過靜脈注射活性成分的0.25%溶液，可選地為鹽水溶液，或作為活性成分的推注(bolus)給予而實(shí)現(xiàn)。藥物組合物中的活性化合物濃度將取決于該藥物的吸收、分布、代謝和排泄速度，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他因素。應(yīng)該注意到，劑量值也會(huì)隨著所緩解的病癥的嚴(yán)重程度而發(fā)生變化。應(yīng)該進(jìn)一步理解，對(duì)于任何特定的受試者，具體的劑量方案應(yīng)該根據(jù)個(gè)人需要和給予或監(jiān)控組合物給藥人員的專業(yè)判斷而隨時(shí)間進(jìn)行調(diào)整，而本文中所列出的濃度范圍僅僅是示例性的，并非是為了限制權(quán)利要求所保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵤??；钚猿煞挚梢砸淮谓o予，或可以分成許多更小劑量以不同時(shí)間間隔進(jìn)行給予。給予活性化合物的優(yōu)選模式是口服給予?？诜M合物一般包含惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以包封于凝膠膠囊中或被壓縮成片劑。出于口服治療給藥的目的，該活性化合物能夠與賦形劑結(jié)合并以片劑、錠劑、或膠囊劑的形式使用。藥物相容性粘合劑，和/或佐劑物質(zhì)都能夠作為組合物的一部分被包含在內(nèi)。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等能夠含有以下任何成分，或具有類似性質(zhì)的化合物粘合劑如微晶纖維素、黃蓍樹膠或凝膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如褐藻酸、羧甲淀粉鈉(Primogel)、或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂或氫化植物油(Sterotes)；助流劑如膠體二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯、或橙味劑。當(dāng)劑量單位形式是膠囊時(shí)，除了以上類型的物質(zhì)之外，還可含有液體載體如脂肪油。另外，劑量單位形式可含有可改變劑量單位的物理形式的各種其他物質(zhì)，例如，糖、蟲膠或其他腸內(nèi)藥劑的涂層?；衔锬軌蜃鳛轸齽?、混懸液、糖漿劑、糯米紙囊劑(wafer)、口香糖等的組分進(jìn)行給予。糖漿劑除了活性化合物之外還包含作為甜味劑的乳糖和某些防腐劑、染料和著色劑以及調(diào)味劑。化合物或其藥用衍生物或藥用鹽，也能夠與其他不會(huì)損害所需作用的活性物質(zhì)混合，或與補(bǔ)充所需作用的物質(zhì)，如抗生素、抗真菌劑、抗炎劑、蛋白酶抑制劑，或其他核苷或16非-核苷抗病毒藥劑(正如上文中更為詳細(xì)討論的)混合。用于非腸道、皮內(nèi)、皮下或局部施用的溶液或混懸液能夠包括以下組分無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、固定油類、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細(xì)菌劑如芐醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或重亞硫酸鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽、或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)滲透壓的藥劑如氯化鈉或葡萄糖。可將非腸道制劑封閉于由玻璃或塑料制成的一次性注射器或多劑量藥瓶中。如果靜脈給予，優(yōu)選的載體是生理鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。脂質(zhì)體混懸液(包括采用病毒抗原的單克隆抗體靶向于被感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)也優(yōu)選作為藥用載體，它們可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如根據(jù)美國專利4，522，811所描述的方法來制備。例如，脂質(zhì)體制劑可以通過將(一種或多種)合適的脂質(zhì)(如，硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰膽堿、花生酰磷脂酰膽堿和膽固醇)溶解于隨后被蒸發(fā)掉的無機(jī)溶劑中、在容器表面上留下干的脂質(zhì)薄膜來制備?；钚曰衔锘蚱鋯瘟姿狨?、二磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水溶液隨后引入到容器中。然后，用手來旋轉(zhuǎn)振蕩容器以從容器側(cè)壁游離出脂質(zhì)物質(zhì)并使脂質(zhì)聚集體分散開，由此形成脂質(zhì)體混懸液。在一種實(shí)施方式中，組合物是包DAPD加AZT(其中AZT200mg而DAPD500mg)共配制的丸劑、片劑、或其他口服藥物遞送載體。在另一實(shí)施方式中，這種DAPD和AZT的共配制劑型可以與ATRIPLA(依法韋侖600mg/恩曲他濱(FTC)200mg/富馬酸替諾福韋二吡呋酯300mg)聯(lián)合給予。由于依法韋侖是NNRTI，替諾福韋是腺嘌呤nRTI，F(xiàn)TC是胞嘧啶nRTI，而AZT是胸腺嘧啶nRTI，且DAPD在體內(nèi)發(fā)生脫氨化而形成DXG(鳥嘌呤nRTI)，所以共配制的DAPD加AZT丸劑的組合將提供所有四種堿基(ACTG)加上能夠以不同機(jī)制與HIV發(fā)生相互作用的其他藥劑?？蒯屩苿┰谶@部分關(guān)于控釋制劑所引述的所有美國專利都以其全文結(jié)合于本文中作為參考。自/入Kulkarnietal.,in1966("Polylacticacidforsurgicalimplants,”Arch.Surg.,93839)報(bào)道了聚乳酸的合成和可生物降解性以來，生物可降解聚合物領(lǐng)域已經(jīng)得到迅速的發(fā)展。已經(jīng)報(bào)道可用作遞送器件的基質(zhì)材料的其他聚合物的實(shí)例包括聚酐、聚酯如聚乙醇酸交酯和聚乳酸-共-乙交酯(polylactide-co-glycolides)、聚氨基酸如聚賴氨酸、聚環(huán)氧乙烷的聚合物和共聚物、丙烯酸封端的聚環(huán)氧乙烷、聚酰胺、聚氨酯、聚原酸酯、聚丙烯腈和聚磷腈。參見，例如，授予Langer的美國專利第4，891，225號(hào)和第4，906，474號(hào)(聚酐)、授予Hutchinson的美國專利第4，767，628號(hào)(聚乳酸、聚乳酸乙醇酸共聚物(polylactide-co-glycolideacid))、授予和Tice等的美國專利第4，530，840號(hào)(聚乳酸、聚乙交酯、和共聚物)。還參見，授予Hubbell等的美國專利第5，626，863號(hào)，其中描述了作為組織接觸物質(zhì)和控釋載體的光可聚合的可生物降解的水凝膠(聚合并交聯(lián)的大分子聚合物的水凝膠包含具有生物可降解單體延伸或寡聚延伸的親水性寡聚物，其是封端單體或能夠聚合和交聯(lián)的寡聚物)；和Focal,Inc.提交的PCTW097/05185，其涉及用作用于藥物遞送的控釋劑和組織治療藥劑的多嵌段可生物降解水凝膠。生物來源的可降解物質(zhì)是眾所周知的，例如，交聯(lián)的白明膠。已經(jīng)使透明質(zhì)酸發(fā)生交聯(lián)并用作生物醫(yī)藥應(yīng)用的可降解溶脹聚合物(授予DeliaValle等的美國專利第4，957，744號(hào)；(1991)“Surfacemodificationofpolymericbiomaterialsforreducedthrombogenicity,”Polym.Mater.Sci.Eng.，62:731735])。目前，許多分散體系被用作，或者被開發(fā)用作物質(zhì)載體，尤其是生物活性化合物的載體。用于藥物和美容制劑的分散體系能夠歸類為混懸液或乳液。混懸液被定義為尺寸范圍為幾納米至幾百微米的固體顆粒使用混懸劑而分散于液體介質(zhì)中。固體顆粒包括微球、微膠囊和納米球。乳液被定義為一種液體在另一種液體中，通過諸如表面活性劑和脂質(zhì)的乳化劑的界面膜而被穩(wěn)定化的分散體。乳液制劑包括油包水和水包油型乳液、復(fù)合乳液、微乳液、微滴和脂質(zhì)體。如授予Haynes的美國專利第4，622，219號(hào)和第4，725，442號(hào)中所限定的，微滴是由其中油相在內(nèi)的球形脂質(zhì)層構(gòu)成的單層磷脂囊泡。脂質(zhì)體是通過將水不溶性極性脂質(zhì)與水溶液混合而制備的磷脂囊泡。通過在水中混合不溶性脂質(zhì)而導(dǎo)致的不利熵(imfavorableentropy)，產(chǎn)生磷脂與截留水溶液的同心封閉膜的高度有序的組裝結(jié)構(gòu)。授予Dunn等的美國專利第4，938，763號(hào)公開了一種原位形成植入物的方法，該方法通過使非反應(yīng)性水不溶性熱塑性聚合物溶解于生物相容性水溶性溶劑中而形成液體，將該液體置于體內(nèi)并使得溶劑消散而產(chǎn)生固體植入物。能夠經(jīng)由注射器將聚合物溶液置于體內(nèi)。該植入物能夠呈現(xiàn)其周圍腔室的形狀。在一種可替代的實(shí)施方式中，植入物由反應(yīng)性液體低聚聚合物形成，其不含溶劑并且通常通過加入固化催化劑而在合適的位置固化形成固體。許多專利都公開了能夠用于給予胸腺嘧啶核苷和非胸腺嘧啶核苷抗病毒藥劑，或它們的前藥的組合的藥物遞送系統(tǒng)。美國專利第5，749，847號(hào)公開了將核苷酸通過電穿孔遞送到有機(jī)體中的方法。美國專利第5，718，921號(hào)公開了其中包含分散在其中的聚合物和藥物的微球。美國專利第5，629，009號(hào)公開了一種用于控釋生物活性因子的遞送系統(tǒng)。美國專利第5，578，325號(hào)公開了非線性親水性疏水性多嵌段共聚物的納米顆粒和微粒。美國專利第5，545，409號(hào)公開了一種用于控釋生物活性因子的遞送系統(tǒng)。美國專利第5，494，682號(hào)公開了離子型交聯(lián)的聚合物微膠囊。授予AndrxPharmaceuticals，Inc的美國專利第5，728，402號(hào)描述了一種包含內(nèi)部相和外部相的控釋制劑，其中內(nèi)部相包括活性藥物、其鹽或前藥，與水凝膠形成劑混合；外部相包含在胃中抵御溶解作用的涂層。授予AndrxPharmaceuticals,Inc的美國專利第5，736，159號(hào)和第5，558，879號(hào)公開了一種其中原位形成通路的水溶性很低的藥物控釋制劑。授予AndrxPharmaceuticals,Inc的美國專利第5，567，441號(hào)公開了每日一次的控釋制劑。美國專利第5，508，040號(hào)公開了一種多粒子搏動(dòng)藥物遞送系統(tǒng)。美國專利第5，472，708號(hào)公開了一種基于搏動(dòng)粒子的藥物遞送系統(tǒng)。美國專利第5，458，888號(hào)描述了一種控釋片劑制劑，其能夠采用含有內(nèi)部含藥相和包含重均分子量為3，00010，000的聚乙二醇聚合物的外部相的摻混物制成。美國專利第5，419，917號(hào)公開了基于使用能夠使藥物從水凝膠中基本上零_量級(jí)的釋放速率的有效量的藥用可離子化化合物，以改變藥物從水凝膠中釋放的速率的方法。美國專利第5，458，888號(hào)公開了一種控釋片劑制劑。授予ElanCorporation,pic的美國專利第5，641，745號(hào)公開了一種控釋藥物制劑，其在可生物降解的聚合物中包含活性藥物而形成微球或納米球。這種可生物降解的聚合物合適地是聚-D，L-乳酸或聚-D，L-乳酸和聚-D，L-乳酸-共-乙交酯的摻混物。授予ElanCorporationplc的美國專利第5，616，345號(hào)描述了一種每日給予一次的控制吸收制劑，其包括與有機(jī)酸有關(guān)的活性化合物，和包被該核并含有絕大部分藥用成膜的水不溶性合成聚合物和少部分藥用成膜水溶性合成聚合物的多層膜。美國專利第5，641，515號(hào)公開了一種基于可生物降解納米粒子的控釋制劑。美國專利第5，637，320號(hào)公開了一種每日給予一次的控制吸收的制劑。美國專利第5，580，580號(hào)和第5，540，938號(hào)涉及用于治療神經(jīng)性疾病的制劑及其用途。美國專利第5，533，995號(hào)涉及采用受控藥物遞送的被動(dòng)透皮器件。美國專利第5，505，962號(hào)描述了一種控釋藥物制劑。前藥制劑如下文詳細(xì)描述的，AZT或本文中描述的用于與AZT或其相關(guān)化合物組合或交替治療的任何核苷或其他化合物，能夠作為?；八幓蚝塑账崆八庍M(jìn)行給予。本文中描述的任何核苷或含有羥基或胺官能團(tuán)的其他化合物，都能夠作為核苷酸前藥給予以增加活性、生物利用度、穩(wěn)定性或改變核苷的性質(zhì)。許多核苷前藥配體都是已知的。一般而言，該化合物的羥基或這種核苷的單、二或三磷酸酯的烷基化、?；蚱渌H脂改性，都會(huì)使核苷的穩(wěn)定性增加。能夠取代磷酸酯部分或羥基上的一個(gè)或多個(gè)氫的取代基的實(shí)例是烷基、芳基、類固醇、碳水化合物，包括糖、1，2_二?；视秃痛?。許多這些實(shí)例都描述于文獻(xiàn)R.Jones和N.Bischofberger，AntiviralResearch，27(1995)117。任何這些物質(zhì)都能夠與所公開的核苷或其他化合物組合以實(shí)現(xiàn)所需的效果?；钚院塑栈蚱渌u基化合物也能夠作為醚脂質(zhì)(并且尤其是核苷的5'-醚脂質(zhì))提供，正如在以下參考文獻(xiàn)中所公開的Kucera、L.S.、N.Iyer、E.Leake、A.Raben、ModestE.K.、D.L.ff.、禾口C.Piantadosi.1990."Novelmembrane-interactiveetherlipidanalogsthatinhibitinfectiousHIV—1productionandinducedefectivevirusformation."AIDSRes.Hum.Retroviruses.6491501；Piantadosi,C.>J.MarascoC.J.、S.L.Morris-Natschke、K.L.Meyer>F.Gumus,J.R.Surles、K.S.Ishaq、L.S.Kucera、N.Iyer,C.A.Wallen、S.Piantadosi、禾口E.J.Modest.1991."Synthesisandevaluationofnoveletherlipidnucleosideconjugatesforanti—HIVactivity.“J.Med.Chem.34:1408.1414；Hosteller,K.Y.、D.D.Richrnan>D.A.Carson>L.M.Stuhmiller>G.M.T.vanffijk>禾口H.vandenBosch.1992."Greatlyenhancedinhibitionofhumanimmunodeficiencytype1replicationinCEMandHT4—6Ccellsby3'-deoxythymidinediphosphatedimyristoylglycerol,alipidprodrugof3'-deoxythymidine."Antimicrob.AgentsChemother.36:2025.2029；Hostetler,K.Y.、L.M.Stuhmiller、H.B.Lenting、H.vandenBosch、禾口D.D.Richman,1990."Synthesisandantiretroviralactivityofphospholipidanalogsofazidothymidineandotherantiviralnucleosides."J.Biol.Chem.265:61127。公開了能夠共價(jià)結(jié)合至核苷或其他含羥基或胺的化合物，優(yōu)選在核苷或親脂制劑的5'-0H位的合適的親脂取代基的美國專利的非限制性實(shí)例包括，美國專利第5，149，794號(hào)(1992年9月22日，Yatvin等)；美國專利第5，194，654號(hào)(1993年3月16日，Hostetler等，美國專利第5，223，263號(hào)(1993年6月29日，Hostetler等)；美國專利5，256，641號(hào)(1993年10月26日，Yatvin等)；美國專利第5，411，947號(hào)(1995年5月2日，Hostetler等)；美國專利第5，463，092號(hào)(1995年10月31日，Hostetler等)；美國專利第5，543，389號(hào)(1996年8月6日，Yatvin等)；美國專利第5，543，390號(hào)(1996年8月6日，Yatvin等)；美國專利第5，543，391號(hào)(1996年8月6日，Yatvin等)；和美國專利第5，554，728號(hào)(1996年9月10日；Basava等)。公開了能夠連接至本發(fā)明的核苷的親脂取代基、或親脂制劑的外國專利申請(qǐng)包括W089/02733、W090/00555、W091/16920、W091/18914、W093/00910、W094/26273、W096/15132、EP0350287、EP93917054.4和W091/19721。核苷前藥的非限制性實(shí)例描述于下述參考文獻(xiàn)中Ho，D.H.W.(1973)“Distributionofkinaseanddeaminaseof1^-D-arabinofuranosylcytosineintissuesofmanandmuse.“CancerRes.33,28162820；Holy,A.(1993)Isopolarphosphorous-modifiednucleotideanalogues，"In:DeClercq(Ed.),AdvancesinAntiviralDrugDesign，Vol.I，JAIPress，pp.179231；Hong，C.I.，Nechaev，A.，禾口West，C.R.(1979a)"Synthesisandantitumoractivityof1^-D-arabino-furanosylcytosineconjugatesofCortisolandcortisone.“Biochem.Biophys.Rs.Commun.88，12231229；Hong,C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.禾口West，C.R.(1980)”Nucleosideconjugatesaspotentialantitumoragents.3.Synthesisandantitumoractivityof1-(^-D-arabinofuranosyl)cytosineconjugatesofcorticosteroidsandselectedlipophilicalcohols.“J.MeD.Chem.28，171177；Hosteller，K.Y.，Stuhmiller，LM.，Lentin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(shí)際上治愈感染的患者。然而，即使在受到抗性病毒感染的情況下，該組合治療劑也應(yīng)該是對(duì)于所有的已知抗性病毒株都有效的，因?yàn)樵谶@種組合治療劑中至少存在一種能夠抑制這種病毒的藥劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠有效地理解這些療法的給予，以及副作用和/或抗性病毒株的產(chǎn)生，而無需進(jìn)行過度實(shí)驗(yàn)。參照以下非限制性實(shí)施例將能夠更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例1計(jì)算機(jī)模擬研究以確定最佳AZT劑量范圍目前對(duì)于治療人類免疫缺陷病毒(HIV-I)感染的一線(firstline)高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)將兩種核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)連同蛋白酶抑制劑(PI)或非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)(12,13,40)結(jié)合在一起。這些藥物組合顯著地降低了發(fā)達(dá)國家(7)中由于HIV-I感染而導(dǎo)致的死亡率和發(fā)病率?，F(xiàn)有的療法不能根除HIV-I感染是因?yàn)椴《炯捌錆撛谛再|(zhì)的區(qū)室化(compartmentalization)(58，59)。因此，慢性療法保持了對(duì)可預(yù)期未來的照料標(biāo)準(zhǔn)。盡管選擇了HAART方案能夠使交叉抗性部分最小化，并由此延遲了抗性病毒的出現(xiàn)，但所有的方案最終還是失敗的，這主要是由于缺乏對(duì)嚴(yán)密方案的堅(jiān)持、毒性的延遲和/或出現(xiàn)抗藥性HIV-I株(48)，使得開發(fā)延遲、阻止或削弱已經(jīng)證實(shí)發(fā)生突變的感染個(gè)體對(duì)二線治療抗性的發(fā)生的方案成為一項(xiàng)緊要任務(wù)。普通抗性突變(包括胸腺嘧啶類似物突變(TAM)、K65R突變和M184V突變)的出現(xiàn)需要連續(xù)關(guān)注HIV-INRTI藥物開發(fā)的原理性設(shè)計(jì)(57)。來自大的基因型數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)表明，K65R突變的發(fā)生率從1998年的0.8%增加至2003年的3.8%，這假定是由于替諾福韋在臨床實(shí)踐中的使用增加所致(55)。這種突變?cè)贖IV-I逆轉(zhuǎn)錄酶基因中產(chǎn)生了從賴氨酸向精氨酸的單個(gè)氨基酸位移，這導(dǎo)致了對(duì)各種NRTI，包括替諾福韋和阿波卡偉(ABC)(65)的中度抗性。伴隨中度抗性的K65R體外選擇，也已經(jīng)對(duì)于其他非胸腺嘧啶NRTI，包括扎西他濱、雙脫氧胸苷、阿德福韋和拉米夫定(3TC)、β-2',3'-雙脫氫-2',3'_雙脫氧-5-氟胞苷((14卩0和0-0-(21，410-1，3-二氧戊環(huán)鳥苷(DXG)得到了證實(shí)(31，66)。在采用將替諾福韋和兩種NRTI、ABC和3TC組合的HAART方案治療的HIV-I感染個(gè)體中已經(jīng)報(bào)道了K65R和早期病毒學(xué)失效的出現(xiàn)率增加。相反，證實(shí)了用胸腺嘧啶NRTI、齊多夫定(AZT)治療的個(gè)體具有K65R突變降低從而獲得更好結(jié)果的趨勢(shì)(25，39，49)。而且，機(jī)理研究證實(shí)，K65R突變?nèi)员３謱?duì)胸腺嘧啶NRTI，包括AZT和司他夫定(d4T)(6,21,30,31,46)的感受性。因此，當(dāng)將AZT與針對(duì)K65R突變選擇的NRTI組合時(shí)，其具有作為K65R突變的“防抗藥性”劑的潛力。如果AZT與HAART治療方案中所含的其他NRTI競爭對(duì)酶磷酸化作用進(jìn)行限速，那么就未必需要加入AZT。然而，用于對(duì)AZT的磷酸化步驟進(jìn)行限速的酶不同于替諾福韋、阿波卡偉和DXG(2，3，14，16-19，22，32，41，44，61)。AZT是第一種進(jìn)行臨測(cè)試抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物，開始時(shí)是作為單一治療藥物，后來作為HAART方案的一種組分(7，11，20)，其已經(jīng)在2005年9月由美國食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)成為通用制劑。像其他NRTI—樣，AZT經(jīng)歷三個(gè)胞內(nèi)磷酸化步驟而形成活性三磷酸酯(AZT-TP)。AZT-TP抑制野生型HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶，IC50值為約0.035uM(52)。AZT的單劑量血漿藥代動(dòng)力學(xué)已經(jīng)在HIV-1感染個(gè)體中在靜脈內(nèi)和口服給予后進(jìn)行了充分的描述，而AZT的系統(tǒng)清除(C1)和分布體積(Vss)范圍分別為1.11.51/(kg.hr)和1.31.41/kg(l，14,26,67)。AZT治療受限于其在骨髓細(xì)胞中的毒副作用，這種毒副作用會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)貧血和中性粒細(xì)胞部分劑量依賴性(10，53，60)。AZT的細(xì)胞毒性與AZT-MP水平有關(guān)(63)。盡管AZT的批準(zhǔn)口服劑量為300mg每日兩次。但是Barry等的研究(5)表明，當(dāng)以此劑量給藥時(shí)胸苷激酶可以是過飽和的，因?yàn)闇p少的AZTlOOmg每日三次的總劑量也產(chǎn)生了類似的細(xì)胞AZT-TP水平，并且AZT血漿濃度和AZT-MP胞內(nèi)水平顯著降低。這個(gè)結(jié)果與機(jī)理研究是一致的，機(jī)理研究已經(jīng)證實(shí)AZT-MP向AZT-DP的轉(zhuǎn)化易于飽和(22)。因此，如果AZT的胞外濃度超過某個(gè)值，那么即使不進(jìn)一步增加AZT-DP和AZT-TP，AZT-MP也會(huì)繼續(xù)升高，這就介導(dǎo)了抗病毒效應(yīng)。RFSPharma,LLC已經(jīng)開發(fā)了DXG、氨多索韋((-)-3-D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊環(huán)；AMDX;DAPD)(8,19)的鳥苷核苷前藥，其主要用于HIV-1感染的二線治療。到目前為止，已經(jīng)有超過180個(gè)個(gè)體在美國研究中的新藥申請(qǐng)(IND)下實(shí)施的6個(gè)不同的階段1和階段2試驗(yàn)(27，38)中接受了DAPD。DXG的可能優(yōu)點(diǎn)包括在體外對(duì)M184V/I菌株的敏感性增加，并對(duì)在先前的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療期間選擇出的TAM具有活性，以及69SS雙插入(28，29，41)。DXG與幾種NRTI(包括AZT、3TC和奈韋拉平)具有協(xié)同效應(yīng)(28)。利用HIV-1在含有MT-2細(xì)胞的培養(yǎng)基中進(jìn)行的體外研究表明，對(duì)與K65R處的突變有關(guān)的DXG的抗性發(fā)作緩慢(23，47，66)。體外研究表明，在第25周針對(duì)K70K/R突變的混合物選擇僅有AZT，而在第20周針對(duì)K65R和L74V的混合物選擇僅有DAPD。然而，當(dāng)DAPD和AZT組合培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)過28周沒有檢測(cè)到藥物抗性突變(51)。因此，AZT與DAPD的共配制制劑對(duì)于延緩HIV-1感染個(gè)體由于K65R突變而產(chǎn)生藥物抗性是合乎需要的。本研究的目的是開發(fā)一種組合群體PK參數(shù)和HIV-1感染個(gè)體中細(xì)胞酶水平的群體統(tǒng)計(jì)的群體藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)(PK/PD)模型，以確定Barry等人(5)的發(fā)現(xiàn)是否從機(jī)理上得到了支持，并開發(fā)出AZT對(duì)于與DAPD和其他NRTI共配制的劑量方案，這要考慮到胸苷酸激酶可能會(huì)飽和，并同時(shí)降低與AZT-MP相關(guān)的毒性并維持與AZT-TP相關(guān)的效力。AZT600mg每天(qd)的研究比標(biāo)準(zhǔn)的300mg每日兩次方案產(chǎn)生了較慢的發(fā)作和不顯著的病毒消耗，這可能是由在600mg劑量時(shí)的細(xì)胞磷酸化的酶飽和作用和AZT-TP的相對(duì)較短的細(xì)胞半衰期所致。因此，可以利用該模型來幫助選擇降低的AZT每日兩次劑量，其可以適用于與針對(duì)K65R突變選擇的藥劑共配制。材料和方法AZT的群體藥代動(dòng)力學(xué)假設(shè)AZT的分布(disposition)遵循Zhou等(67)的2_區(qū)室開放群體藥代動(dòng)力學(xué)模型。由于缺乏吸收階段的數(shù)據(jù)，該研究沒有模擬吸收分布曲線，并假設(shè)假零級(jí)吸收動(dòng)力學(xué)，其中快速吸收者(41.7%的個(gè)體)在0.25h內(nèi)吸收AZT，而慢速吸收者(58.3%)在1.57h內(nèi)吸收AZT。群體特性和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)總結(jié)于表1中。用于由表1中的群體變量產(chǎn)生實(shí)際2-區(qū)室參數(shù)的方程獲自文獻(xiàn)Zhou，etaL.(67)。簡而言之，在穩(wěn)態(tài)下的分布體積(Vss)(L)=464+9.83X(體重-70)Xe(cl-Eta0XVss-Eta0/cl-Eta0)(方程1)，其中Cl_EtaO和Vss_EtaO分別是系統(tǒng)清除率和Vss的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化值變量。術(shù)語Cl_Eta0XVss_Eta0/Cl_Eta0分別表示自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化的C1和Vss的變量之比。如果年齡<30歲，則Cl(l/hr)=127+0.93X(體重-70)Xe(cl-Eta0)，否貝lJ，Cl(l/hr)=127+0.93X(體重-70)+6.52X(年齡-25)Xe(CLEta0))(方程2)。中心區(qū)室的體積(V。)=0.374XVSS(方程3)，而外周組織區(qū)室的體積(V2)=VSS_V。(方程4)。用于模擬在表觀輸注期間血漿中的AZT濃度的方程是CP=[(D/TI.F)/ViO^-a)(a-3)/a](e-at-l)+[(D.F/TD/ViO^D(a-W/Me-M-l)，其在灌輸之后變成Cp=[(D.F/TI)丨\(K21_a)(a-3)/a](e_a..(t_TI))]+[(D.F/TI)丨\(K21_3)(a-日)/日](e_e(t_TI))(方程5)(64)。在這些方程中D是給予AZT的劑量，F(xiàn)是吸收的AZT分?jǐn)?shù)。F并不是直接已知的，因?yàn)闊o法獲得靜脈注射劑量，但是可以間接結(jié)合至參數(shù)V/F和C1/F之中。TI是血漿中AZT“輸注”的表觀持續(xù)時(shí)間，0和a是血漿中最后一個(gè)和倒數(shù)第二個(gè)指數(shù)衰減速率的速率常數(shù)，而K12和K21是描述AZT從區(qū)室1分配進(jìn)出區(qū)室2的一級(jí)速率常數(shù)。AZT禾PAZT核苷H在體內(nèi)活仆,的夕卜Ml血液亥(PBM)細(xì)朐,中的細(xì)朐,質(zhì)累積AZT的血漿和細(xì)胞質(zhì)濃度由于存在于淋巴細(xì)胞細(xì)胞膜上的平衡核苷運(yùn)載體的作用而假設(shè)達(dá)到快速平衡，并通過方程5進(jìn)行描述(4，50)。AZT的初始胞內(nèi)磷酸化步驟是由胸腺嘧啶激酶(TK)催化的。AZT-MP的單磷酸化作用的最可能的酶是，其主要位于S-相中細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。然而，線粒體激酶11(2也顯示出在培養(yǎng)的并不表達(dá)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中活化AZT，但是活化程度較低(2，3，16，17，22，44)。AZTvs.T^的Km(最大代謝速率50%時(shí)的濃度)為0.6yM(17，22)。在活化的PBM細(xì)胞中，采用酶動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)計(jì)算AZT-MP磷酸化的最大速率(V_,TK1)為每小時(shí)O.Seymol/L(35)。既然AZT至AZT-MP的初始磷酸化步驟與劑量保持近似線性(5，22)，則在個(gè)體之間假設(shè)V_,TK1為恒定。胸苷酸激酶催化隨后的AZT-雙磷酸化(AZT-DP)的磷酸化作用，并且速率受限于Km=12iiMvsAZT-MP且Vmax,AZT_p=0.3%Vmaxvs胸腺嘧啶-MP(36)。AZT-MP的較低與在AZT-MP結(jié)合至胸苷酸激酶中的位阻有關(guān)(37)。采用先前發(fā)表的從以前未接受過AZT治療的HIV-1感染的個(gè)體的酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定結(jié)果來計(jì)算在活化的PBM細(xì)胞中磷酸化至AZT-MP和AZT-DP(分別為V.^^和V_,ThyiJ的最大速率。V_,ThyniK的分布遵循與中值每小時(shí)0.13umol/1和對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化值0.89的SD的對(duì)數(shù)線性分布?？紤]到活化⑶4+PBM細(xì)胞的比例，文獻(xiàn)Jacobsson，etal.，(36)的pmoldTDP的Vmax值被轉(zhuǎn)換成umolAZT-DP/h，因?yàn)槭羌?xì)胞周期依賴性的而AZT在活化的細(xì)胞中的磷酸化程度比在靜止細(xì)胞中大得多。該計(jì)算過程假設(shè)體積為0.21u1/106，對(duì)應(yīng)于蛋白含量0.12mg(3，33)?；罨疉ZT-TP的最終磷酸化步驟通過核苷雙磷酸鹽激酶催化并且在生理?xiàng)l件下沒有速率限制。AZT-TP至AZT-DP(Ktp,dp)、AZT-DP至AZT-MP(KDP,MP)和AZT-MP至AZT(KMP)的去磷酸化作用的速率類似于體內(nèi)情況(0.281T1)(62)。在平衡時(shí)，AZT-DP和TP的濃度是類似的。因此，AZT-DP轉(zhuǎn)化成AZT-TP(Kdp,tp)的轉(zhuǎn)化速率也假定為0.281^。對(duì)于描述AZT的細(xì)胞磷酸化作用和去磷酸化作用的速率常數(shù)的假設(shè)分布包含于表2中。AZT-MP、AZT-DP和AZT-TP的細(xì)胞質(zhì)累積采用以下微分方程進(jìn)行模擬d(AZT-MP)/dt=Cp.Vmax,TK1/(Cp+Km,TK1)+AZT-DP.KDP,^-AZT-MP.KMP(方程6)。d(AZT-DP)/dt=AZT-MP.Vmax,ThmK/(AZT_MP+Km,M)+AZT-TP.Ktp,dp-AZT_DP.Ktp,dp(方程7)。d(AZT-TP)/dt=AZT-DP.KDP,tp-AZT_TP.Ktp,dp(方程8)，其中，d(AZT-MP)/dt、d(AZT-DP)/dt和d(AZT-TP)/dt分別等于細(xì)胞內(nèi)AZT-MP、AZT-DP和AZT-TP的變化速率。計(jì)算機(jī)樽擬蒙特卡羅(MonteCarlo)群體藥代動(dòng)力學(xué)和病毒動(dòng)力學(xué)模擬采用TrialSimulator版本2.1.2,2001(PharsightCorp.，MountainView，CA)來實(shí)施，該模擬程序?qū)τ跀?shù)值積分利用5th階龍格-庫塔算法(rimga-cuttaalgorithm)。該程序能夠連同方程中輸入的每一參數(shù)的概率分布來定制微分方程。每一理論性個(gè)體的藥代動(dòng)力學(xué)分布曲線都能夠分別從表1和2中所含的分布總結(jié)中通過隨機(jī)選擇每一個(gè)體的協(xié)變量(年齡、體重)和PK參數(shù)(例如，VSS、C121、快速或慢速吸收者等)以及細(xì)胞磷酸化常數(shù)(例如，對(duì)于胸腺嘧啶和胸苷酸激酶的Vmax和Km的值和對(duì)于AZT-MP，-DP和-TP的下降速率常數(shù))而建立。隨后，每一個(gè)體的參數(shù)用于模擬AZT200和300mg每日兩次劑量的血漿濃度vs.時(shí)間的分布曲線。AZT的血漿濃度vs.時(shí)間分布曲線隨后用于驅(qū)動(dòng)模擬對(duì)于每一劑量方案的AZT-MP、AZT-DP和AZT-TPvs.時(shí)間的累積的微分方程系統(tǒng)。下一個(gè)體隨后對(duì)于總共3000個(gè)個(gè)體進(jìn)行模擬。最終模擬的結(jié)果采用嵌在TrialSimulator軟件中S-插件計(jì)算機(jī)程序中的常規(guī)程序(版本6.0專業(yè)版，InsightfulCorp.，西雅圖，WA，1988)來進(jìn)行分析?？偨Y(jié)AZT血漿濃度和AZT-MP和AZT-TP的細(xì)胞質(zhì)水平，以獲得相對(duì)時(shí)間的平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差。對(duì)3000個(gè)個(gè)體中的每一個(gè)都實(shí)施3次模擬，以評(píng)價(jià)輸出結(jié)果的可重現(xiàn)性。結(jié)果模擬的200mg每日兩次劑量預(yù)測(cè)血漿濃度隨劑量呈線性增加(圖1)。類似地，在活化的PBM細(xì)胞中AZT-MP的細(xì)胞質(zhì)濃度預(yù)測(cè)隨劑量呈線性增加(圖2)。然而，AZT-TP(平均值士SD)(圖3)的范圍對(duì)于AZT200和300mg每日兩次劑量存在相當(dāng)大的重疊，這與接近于AZT200mg每日兩次的劑量下AZT磷酸化作用的過飽和作用是一致的。(未示出AZT-TP的平均值士SD曲線，因?yàn)橹?lt;0)。遵從3000個(gè)個(gè)體的3次獨(dú)立模擬的每一個(gè)直方圖，以比較AZT-MP和AZT-TP的最大細(xì)胞質(zhì)濃度。最大AZT-MP和AZT-TP的代表性直方圖分別顯示于圖4A和圖4B中。按照200vs300mg每日兩次劑量(>91%，3次獨(dú)立模擬的平均值士SD:91.78%士0.25%)在AZT-TP直方圖之間存在相當(dāng)大的重疊，而在相同劑量(<23%，3次獨(dú)立模擬的平均值士SD21.93%士0.52%)下AZT-MP直方圖之間觀察到低程度的重疊。通過用AZT100mg、150mg、200mg和300mg每日兩次(圖5)的模擬預(yù)測(cè)的最大AZT-TP水平的比較表明，與IOOmg至200mg每日兩次相比，200mg和300mg每日兩次劑量間的劑量響應(yīng)曲線的斜率下降，這表明對(duì)于AZT-MP底物的胸苷酸激酶的飽和。平均值(·)和中值(χ)的相對(duì)位置指示最大值的偏態(tài)分布。對(duì)于IOOmg每日兩次劑量的數(shù)據(jù)分析表明，該劑量并不適當(dāng)，因?yàn)?gt;50%的觀察結(jié)果(N=3000個(gè)模擬個(gè)體)的最大AZT-TP細(xì)胞質(zhì)濃度<0.043pmol/106細(xì)胞(EC5tl)。討論藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)模型模擬是以可用的形式強(qiáng)化所有可用的藥物信息的有用工具，而且它們能夠在制藥行業(yè)中設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)以獲得有益輔助，因?yàn)樗鼈兡軌蛟趯?shí)施實(shí)際研究之前就在計(jì)算機(jī)中詳細(xì)分析劑量方案(9，15，42，43，45)。Rosario等人在2006年利用臨床試驗(yàn)?zāi)M而簡化了CCR5受體阻斷劑馬拉維若的階段2a開發(fā)(54)。該模擬的目的是結(jié)合先前報(bào)道的群體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，連同以前未接受過AZT治療的HIV-I感染個(gè)體的AZT代謝的細(xì)胞酶動(dòng)力學(xué)的均值和方差估計(jì)一起，來預(yù)測(cè)3000個(gè)理論個(gè)體的活化CD4+淋巴細(xì)胞中AZT核苷酸相對(duì)劑量方案的累積作用。CD4+淋巴細(xì)胞是HIV-I感染的顯性底物，可以是對(duì)于K65R突變病毒選擇的關(guān)鍵位點(diǎn)。而且，預(yù)測(cè)活化的CD4+PBM細(xì)胞中AZT-TP水平適用于之后將其引入到病毒PK-PD模型中，該模型與病毒消耗概況與時(shí)間和AZT劑量相關(guān)(34)。利用模型中所有已知的藥物代謝因子是合乎需要的。然而，在計(jì)算機(jī)中的預(yù)測(cè)取決于模型結(jié)構(gòu)，以及參數(shù)估計(jì)和其相關(guān)的方差結(jié)構(gòu)。參數(shù)分布來自于不同的研究，以致于不能參數(shù)協(xié)變量之間的統(tǒng)計(jì)相關(guān)性進(jìn)行分析。因此，對(duì)所預(yù)測(cè)的參數(shù)中總的方差或許估計(jì)過高。與方差參數(shù)相關(guān)的誤差彼此復(fù)合或中和也是可能的。AZT300mg每日兩次劑量的預(yù)測(cè)血漿濃度與所報(bào)道的值一致(3)，這暗示了群體藥代動(dòng)力學(xué)模擬是合理的。AZT的血漿濃度和AZT-MP的細(xì)胞質(zhì)濃度都與毒性有關(guān)，并且預(yù)測(cè)它們都隨著在200mg至300mg每日兩次劑量范圍內(nèi)呈線性增加(圖1和圖2)。在200mg和300mg每日兩次劑量之間，模擬的AZT-TP水平存在相當(dāng)大的重疊，其負(fù)責(zé)病毒RT的抑制作用(圖3)。AZT-MP(圖4A)和AZT-TP(圖4B)的最大預(yù)測(cè)細(xì)胞質(zhì)濃度的重疊程度表明，在AZT-MP的最大細(xì)胞質(zhì)濃度中<23%的重疊，而在AZT-TP水平中>91%的重疊(圖4B)。這些計(jì)算機(jī)模擬中發(fā)現(xiàn)的結(jié)果表明，AZT劑量能夠降低三分之一，從300mg每日兩次劑量降低至200mg每日兩次劑量，以減少毒性并維持足夠的AZT-TP水平。因此，AZT200mg每日兩次劑量可能是共配制的最佳劑量，其既維持了抗病毒效力，同時(shí)又產(chǎn)生較低的毒性，這在文獻(xiàn)Barry，etal.,(5)中的研究中得到了佐證。然而，在對(duì)感染個(gè)體中AZT磷酸化作用的臨床研究中，典型地測(cè)定PBM細(xì)胞中AZT的核苷酸水平并不包括對(duì)每一個(gè)體的PBM細(xì)胞的細(xì)胞周期分析。這導(dǎo)致AZT向AZT-MP的初始磷酸化作用的胸腺嘧啶激酶1，并且導(dǎo)致向AZT-DP轉(zhuǎn)化的胸苷酸激酶的細(xì)胞容量都是細(xì)胞周期依賴性的，并且據(jù)報(bào)道，模擬的PBM細(xì)胞累積的AZT核苷酸的濃度比靜止細(xì)胞高60150倍(36，62)。而且，劃分PBM細(xì)胞的比例在個(gè)體之間也是不同的(36)。因此，這些模擬結(jié)果不可以當(dāng)作是在活化和未活化細(xì)胞兩種的群體中所觀察到的AZT核苷酸水平的直接測(cè)定結(jié)果。替諾福韋、DXG和卡巴韋(阿波卡偉的活性代謝產(chǎn)物)的細(xì)胞三磷酸酯半衰期分別為:>60h、9.5t^P1224h(57)。因此，替諾福韋每日給予一次，而DAPD和阿波卡偉每日給予兩次。AZT-TP的磷酸化作用在高血漿AZT濃度下是可飽和的，而AZT-TP的細(xì)胞半衰期為34h。這為600mg每日一次的AZT方案比標(biāo)準(zhǔn)300mg每日兩次的AZT方案產(chǎn)生較慢發(fā)作和較不顯著的病毒消耗的觀察結(jié)果提供了機(jī)理支持(56)。因此，盡管向替諾福韋的方案中加入AZT是有益的，但是與AZT的共配制將會(huì)導(dǎo)致較低效的AZT響應(yīng)。然而，AZT可以是與每日給予兩次的NRTI在最佳劑量下共配制的候選藥物之一，如DAPD、DXG或阿波卡偉的前藥。基于這些計(jì)算機(jī)模擬結(jié)果，在24個(gè)接受AZT200mg或300mg每日兩次與DAPD500mg每日兩次組合劑量的HIV-1感染受試者中，完成由RFSPharma,LLC發(fā)起的漸進(jìn)的藥代動(dòng)力學(xué)第2階段臨床研究。該研究將提供關(guān)于單獨(dú)藥物和組合藥物的抗病毒效應(yīng)的信息，以及探討與DAPD的藥理學(xué)相互作用。所產(chǎn)生的臨床數(shù)據(jù)對(duì)于在關(guān)鍵的第3階段研究中定位DAPD是很重要的。而且，使用與其相關(guān)毒性(尤其是骨髓毒性)無關(guān)的較低劑量AZT會(huì)在未來的HAART組合中受益，尤其是會(huì)在與針對(duì)K65R突變選擇的藥物一起使用時(shí)受益。表表1.口服AZT(分子量267.24)的PK，在0.25或1.57h內(nèi)是零級(jí)輸入(67)。1穩(wěn)態(tài)體積(Vss)和清除率(C1)值ln(x)的方差比值2C121表示區(qū)室之間清除率值3輸入(input)近似為采用改變恒定輸入的假零級(jí)輸注表2.AZT細(xì)胞代謝的群體酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。的中值和SDln(x)值，考慮到活化(劃分)CD4+細(xì)胞的比例，由在9個(gè)以前未接受過AZT治療的HIV-1感染個(gè)體的PBM細(xì)胞中的測(cè)定值來計(jì)算(36)。將以pmol單位的形成dTDP/min/mg細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)換成PmolAZT-DP/L/h。實(shí)施例2感染的HIV受試者的隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照研究中，氨多索韋和齊多夫定之間的協(xié)同作用背景已經(jīng)在接近200個(gè)受試者中在6次試驗(yàn)中對(duì)氨多索韋(AMDX；DAPD)進(jìn)行了充分研究。在人類淋巴細(xì)胞中，齊多夫定(AZT)與DAPD具有協(xié)同作用，并阻止K65R突變和胸腺嘧啶類似物突變(TAM)的選擇。在計(jì)算機(jī)模擬中，可以通過減少AZT單磷酸酯(AZT-MP)累積而降低較低劑量AZT的毒性，同時(shí)維持抗病毒效果。研究的目的是為了在感染HIV的受試者中在使用和不使用AZT減小劑量(即200mg每日兩次，和批準(zhǔn)的劑量，300mg每日兩次)時(shí)的DAPD病毒學(xué)響應(yīng)。方法HIVRNA病毒負(fù)荷(VL)彡5，000拷貝/mL的受試者參與實(shí)驗(yàn)并在10天內(nèi)隨機(jī)地給予111的DAPD500mg每日兩次DAPD500mg+AZT300mg每日兩次DAPD500mg+AZT200mg每日兩次。在每一分組中，對(duì)受試者按照31隨機(jī)給予DAPD安慰劑，每日測(cè)定VL。結(jié)果24個(gè)受試者[男性54%;白人100%;年齡中位數(shù)33歲(范圍2152)，中值VL4.51og10]參與實(shí)驗(yàn)。第10天DAPD/AZTVL降低在超過了加和結(jié)果(additive)，這表明具有協(xié)同作用。在單獨(dú)給予DAPD和AZT時(shí)，VL下降并沒有顯著差異。DAPD/AZT降低了對(duì)于DAPD所觀察到的VL可變性。治療的突發(fā)不良事件是輕度到中度，而且是短暫的。*與DAPD相比，p≤0.05。結(jié)論DAPD和DAPD/AZT都是有效的且耐受性很好。這種原理論證型研究表明，采用DAPD/AZT(200mg或300mg)長期治療應(yīng)該導(dǎo)致會(huì)協(xié)同的抗病毒活性，而采用AZT200mg的進(jìn)一步研究可證實(shí)毒性降低。實(shí)施例3關(guān)于DAPD/AZT組合治療和平均活細(xì)胞體積(MCV)的影響的劑量研究24位受試者參與實(shí)驗(yàn)[安慰劑(n=2)，AZT200mg(n=2)，AZT300mg(n=2)，DAPD500mg(n=6)，DAPD/AZT200mg(n=6)，禾口DAPD/AZT300mg(n=6)]并治療10天時(shí)間。在接受治療的前1天和接受治療的第5天、第10天和第20天，在篩分時(shí)測(cè)定包括血紅蛋白(g/dl)和平均紅細(xì)胞容積(MCV，飛升(fL))的血液指數(shù)。在第10天和第20天觀察到接受DAPD/AZT200的一位受試者發(fā)生血紅蛋白第1級(jí)降低，并在基線處和所有其他取樣點(diǎn)處觀察到小紅細(xì)胞癥(microcytosis)。在第20天時(shí)觀察到接受DAPD/AZT300的一位受試者的MCV升高(97飛升(fL)，正常值為86士6)。在第20天時(shí)，從基線產(chǎn)生的血紅蛋白降低的趨勢(shì)為DAPD/AZT300彡AZT300彡DAPD/AZT200>AZT200>DAPD>安慰劑(結(jié)果如圖6所示)，而從基線產(chǎn)生的MCV升高趨勢(shì)為DAPD/AZT300>AZT300>DAPD/AZT200>AZT200>安慰劑>DAPD(結(jié)果如圖7所示)。參考文獻(xiàn)1.Acosta，E.P.，LM.Page，andC.V.Fletcher.1996.Clinicalpharmacokineticsofzidovudine.Anupdate.ClinPharmacokinet30:251-62.2.Arner,E.S.，T.Spasokoukotskaja,andS.Eriksson.1992.Selectiveassaysforthymidinekinase1and2anddeoxycytidinekinaseandtheiractivitiesinextractsfromhumancellsandtissues.BiochemBiophysResCommun188:712—8.3.Arner，E.S.，A.Valentin,andS.Eriksson.1992.Thymidineand3'-azido-3'-deoxythymidinemetabolisminhumanperipheralbloodlymphocytesandmonocyte-derivedmacrophages.Astudyofbothanabolicandcatabolicpathways.JBiolChem26710968-75.4.Balimane，P.V.，andP.J.Sinko.1999.Involvementofmultipletransportersintheoralabsorptionofnucleosideanalogues.AdvDrugDelivRev39183-209.5.Barry,M.G.，S.H.Khoo，G.J.Veal,P.G.Hoggard，S.E.Gibbons，E.G.Wilkins，0.Williams,A.M.Breckenridge,andD.J.Back.1996.Theeffectofzidovudinedoseontheformationofintracellularphosphorylatedmetabolites.Aids10:1361-7.6.Bazmi，H.Z.，J.L.Hammond，S.C.Cavalcanti，C.K.Chu，R.F.Schinazi，andJ.W.Mellors.2000.Invitroselectionofmutationsinthehumanimmunodeficiencyvirustype1reversetranscriptasethatdecreasesusceptibilityto(_)-beta-D-dioxolane-guanosineandsuppressresistanceto3'-azido-3'-deoxythymidine.AntimicrobAgentsChemother441783-8.7.Carpenter，C.C.，D.A.Cooper，M.A.Fischl，J.M.Gatell，B.G.Gazzard,S.M.Hammer,M.S.Hirsch，D.M.Jacobsen，D.A.Katzenstein，J.S.Montaner，D.D.Richman，M.S.Saag，M.Schechter，R.T.Schooley，M.A.Thompson，S.Vella，P.G.Yeni，andP.A.Volberding.2000.Antiretroviraltherapyinadults:updatedrecommendationsofthelnternationalAIDSSociety-USAPanel.JAMA283:381-90.8.Chen，H.，R.F.Schinazi,P.Rajagopalan，Z.Gao，C.K.Chu,H.M.McClure，andF.D.Boudinot.1999.Pharmacokineticsof(-)-beta-D-dioxolaneguanineandprodrug(-)-beta-D-2,6-diaminopurinedioxolaneinratsandmonkeys.AIDSResHumRetroviruses151625-30.9.Chien,J.Y.，S.Friedrich,M.A.Heathman,D.P.deAlwis,andV.Sinha.2005.Pharmacokinetics/Pharmacodynamicsandthestagesofdrugdevelopment:roleofmodelingandsimulation.AAPSJ7:E544_59.10.Collier，A.C.，S.Bozzette,R.W.Coombs，D.M.Causey,D.A.Schoenfeld，S.A.Spector，C.B.Pettinelli，G.Davies，D.D.Richman，J.M.Leedom，andetal.1990.Apilotstudyoflow-dosezidovudineinhumanimmunodeficiencyvirusinfection.NEnglJMed323:1015_21.11.Darbyshire,J.，M.Foulkes,R.Peto，W.Duncan,A.Babiker,R.Collins,M.Hughes,T.Peto,andA.Walker.2000.Immediateversusdeferredzidovudine(AZT)inasymptomaticormildlysympto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錄病毒藥劑的所述劑量為約lOOmg至約250mg每日兩次。28.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合治療劑，其中，所述胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑的所述劑量為約200mg每日兩次。28.一種用于治療人類HIV感染的方法，包含向需要治療的患者組合給予或交替給予有效量的a)腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和鳥嘌呤的核苷抗病毒藥劑至少各一種，和b)選自由逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑、侵入抑制劑、粘附抑制劑、聚合酶抑制劑、和整合酶抑制劑組成的組中的至少一種其他抗病毒藥劑。29.—種口服劑量形式，基本上由約200mgAZT、約500mgDAPD、和藥用賦形劑組成。30.一種組合治療劑，包含a)基本上由約200mgAZT、約500mgDAPD、和藥用賦形劑組成的口服劑量形式，和b)基本上由約600mg依法韋侖，約200mg恩曲他濱、約300mg富馬酸替諾福韋二吡呋酯、和藥用賦形劑組成的口服劑量形式。全文摘要本發(fā)明提供了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的組合治療劑，及其在治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染中的使用方法。在一種實(shí)施方式中，該組合治療劑包含針對(duì)K65R突變選擇的非胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑，如替諾福韋-DF、阿波卡偉、APD和DAPD，以及相對(duì)低劑量的齊多夫定(AZT)或其他胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑。胸腺嘧啶核苷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥劑延緩K65R突變的產(chǎn)生，并且以低劑量不易產(chǎn)生副作用。在另一種實(shí)施方式中，該組合治療劑包含DAPD和AZT。DAPD延緩TAM發(fā)展，而AZT延緩K65R突變的產(chǎn)生。在第三種實(shí)施方式中，該組合治療劑包括腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、和鳥嘌呤的核苷抗病毒藥劑，進(jìn)一步與至少一種經(jīng)由與核苷類似物作用機(jī)制不相同的其他抗病毒藥劑組合。這種組合治療劑具有消除感染HIV的患者體內(nèi)存在的HIV的潛能。文檔編號(hào)A61K31/505GK101878032SQ200880118160公開日2010年11月3日申請(qǐng)日期2008年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年10月2日發(fā)明者雷蒙德·F·斯基納齊申請(qǐng)人:埃默里大學(xué)