專利名稱：特異性調(diào)節(jié)pokemon基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用。
技術(shù)背景POKEMON是一種新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，它能夠?qū)е缕渌掳┗虬l(fā)作，最終促 使腫瘤形成。POKEMON可以使癌細胞獲得抗老化和死亡的能力，因此被稱為癌癥 的"總開關(guān)"。非常重要的一點是細胞內(nèi)Pokemon的缺失不會對細胞的正常生長造成 影響，這就為設(shè)計低副作用的特異性抗癌藥物提供了可能。Izant和Weintraub于1984年首次提出反義技術(shù)，所謂反義技術(shù)就是根據(jù)核酸間 結(jié)合堿基互補原理，用人工合成或生物合成的特定互補的反義核酸或它們的化學(xué)修飾 物與細胞內(nèi)的核酸相互作用以抑制或封閉其表達。惡性腫瘤的發(fā)生與細胞內(nèi)某些癌基 因的激活或某些抑癌基因的失活或缺失有關(guān)。反義核酸能特異地阻斷癌基因激活后的 過度表達而不影響其他基因的正常功能，目前利用反義技術(shù)設(shè)計出與有害基因、突變 基因、非正常表達基因及其mRNA互補的反義核酸，以封閉這些基因或抑制其表達。 而反義核酸治療腫瘤的研究主要在腫瘤細胞株、荷瘤動物和腫瘤患者三個水平上進行 應(yīng)用。目前ISIS3521、 ISIS5132、 ISIS2503、 G3139、 GEM231等已進入臨床試驗階 段。天然寡核苷酸在血清中不能穩(wěn)定存在，在幾分鐘內(nèi)就會完全被降解，因此，天然 寡核苷酸不能作為反義治療的藥物。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其 應(yīng)用。本發(fā)明所提供的反義寡核苷酸是，其分子式為下述式I至式IV中之一 5， CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx3，(式I ); 5 ， CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3 ，(式II ); 5, GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3 ，(式III); 5 ， TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx 3 ，(式IV ); 其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯核苷間鍵(硫代磷酸酯鍵)；y均指磷 酸二酯核苷間鍵(磷酸二酯鍵)；A均指2'-脫氧腺苷；T均指2'-胸苷； <:均指2'-脫氧胞苷；G均指2'-脫氧鳥苷。本發(fā)明所提供的上述反義寡核苷酸的應(yīng)用，是其在制備對POKEMON基因表達 進行調(diào)節(jié)、調(diào)整或抑制的藥物，特別是治療POKEMON基因過表達所引起的疾病(如 惡性腫瘤)的藥物中的應(yīng)用。所述藥物以上述反義寡核苷酸為有效成分。所述藥物可通過經(jīng)脈或皮下給藥治療；所述藥物可通過局部給藥治療。 所述給藥治療可與放射療法結(jié)合或與化學(xué)療法結(jié)合治療疾病。 所述給藥治療的用藥劑量范圍是50 nmol/L…100nmol/L。本發(fā)明的反義寡核苷酸可特異性抑制POKEMON基因的表達；本發(fā)明的反義寡 核苷酸進行了硫代磷酸酯鍵的修飾，其在血清和細胞那的穩(wěn)定性都大大提高，并且毒 副作用很小。本發(fā)明的反義寡核苷酸可作為有效成分用于制備治療POKEMON高表 達引起的疾病的的基因治療藥物。
具體實施方式
實施例1、特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸的獲得1、 POKEMON基因二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測和反義寡核苷酸的設(shè)計 利用工作站(www.bioinfo.rpi.edu.cn/applications/mfold)對POKEMON基因(NM—015898)的mRNA的二級結(jié)構(gòu)進行了預(yù)測。針對POKEMON基因的閱讀框架， 結(jié)合其二級結(jié)構(gòu)設(shè)計了四條含有18-mer的硫代反義寡核苷酸AS1 AS4 (下述式I -式IV)。并以與人任何基因都不具有同源性的18個核苷酸序列AS5作為對照。AS1: 5， CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx3，(式I );AS2: 5， CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx3'(式II);AS3: 5，GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx3，(式III);AS4: 5， TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx3，(式IV);AS5: 5， AxTxGxTxAyGyTyCyGyTyCyTyGyCyCxTxAxGx 3 ，(式V)其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯鍵；y均指3， 5磷酸二酯鍵；A均指2'-脫氧腺苷；T均指2，-胸苷；C均指2'-脫氧胞苷；G均指2'-脫氧鳥苷。AS 1 AS4可以與POKEMON基因的mRNA形成DNA/RNA雜化雙鏈，其可以 被RNaseH酶識別、降解，從而抑制POKEMON基因的表達。2、 固相合成POKEMON基因硫代反義寡核苷酸根據(jù)上述反義寡核苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4、 AS5的分子式,用ABI391DNA 自動合成儀，按照通常的硫代寡核苷酸合成方法合成了硫代反義寡核苷酸AS1 AS5，將上述制備得到的硫代反義寡核苷酸AS1 AS5，經(jīng)HPLC純化，經(jīng)紫外分光光度計定量，具體方法為用貝克曼庫爾特(Beckmancoulter)公司的DU800紫外分光光 度計精確測定寡核苷酸的濃度，光徑10mm的比色杯中,單鏈寡核苷酸在260rnn處的 消光系數(shù)是2(^ig/ml/10D.在光徑10mm的100pl微量比色杯，加入98^1純凈水，在 260nm和280nm兩個波長處的定零,然后加入2^1寡核苷酸并混勻，在260nm和280nm 兩個波長處測溶液的光吸收，純的寡核苷酸的A260/A280的比值在1.8至2.0之間，此 時在260nm所測的OD值就是寡核苷酸的濃度0ig411)。上述硫代反義寡核苷酸 AS1 AS5可向上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司訂做按照上述AS1、 AS2、 AS3、 AS4、 AS5的分子式，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司以a位帶硫代磷酸酯鍵 的dNTP作為原料,用標準的DNA自動合成儀合成硫代反義寡核苷酸AS1 AS5。用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測寡核苷酸的純度，實驗采用的條件是緩沖溶液 為Tris(三羥甲基氨基甲烷)-硼酸一EDTA，及凝膠濃度30%的變性聚丙酰胺凝膠,通 過分子篩效應(yīng)電泳分離合成的寡核苷酸及其合成失敗的序列,采用銀染色法顯色呈現(xiàn) 分離的圖譜,該電泳分離方法可以分離僅有一個核苷酸差異的寡核苷酸序列,加上靈敏 的銀染色法顯色技術(shù),能夠有效地檢測到合成失敗的序列.結(jié)果顯色圖譜上僅有一條 顯色條帶，表明純化后的反義寡核苷酸純度均高于99%。實施例2、反義寡核苷酸對POKEMON-pEGFP融合蛋白的抑制效果實驗1、 POKEMON與pEGFP的融合質(zhì)粒的構(gòu)建從人宮頸癌HeLa細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，ATCC)中克隆得到 POKEMON的閱讀框架片斷，將其亞克隆到pEGFP-N2報告質(zhì)粒中，使其可以在哺乳 動物細胞中可以表達POKEMON-EGFP融合蛋白。1)細胞培養(yǎng)人子宮癌(Hela)細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心,ATCC number: CCL-2) 用含體積分數(shù)為10%的胎牛血清，100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素及0.2 %NaHC03 的DMEM培養(yǎng)液，在37°C、體積分數(shù)為5 %的C02條件下常規(guī)培養(yǎng)。DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養(yǎng)液非常適合于許多哺乳動物細 胞培養(yǎng)，是由無機鹽組分、氨基酸組分、維生素組分等組成，其具體配方為每L培 養(yǎng)基中含有200.00 mg CaCl2， 0.10 mg Fe(N03)3-9H20， 400.00 mgKCl， 97.67 mg MgS04， 6400.00 mg NaCl， 3700.00 mg NaHC03， 125.00 mg NaH2P04-H20,4500mg 葡 萄糖，15.00 mg酚紅(Phenol red) ， llOmg丙酮酸鈉(SodiumPyruvate) ， 84.00 mg L-精氨酸鹽酸鹽(L-Arginine-HCl) ， 63.00 mg L-胱氨酸二鹽酸鹽(L-Cystine 2HC1)， 584.00 mg L-谷氨酰胺(L-Glutamine) ， 30.00 mg甘氨酸(Glycine) ， 42.00 mg L-半胱氨酸鹽酸鹽水合物(L-Histidine HC1-H20)，105.00 L-異亮氨酸(L-Isoleucine) ， 105.00 mg L-亮氨酸(L-Leucine) ， 146.00 mg 賴氨酸鹽酸鹽(L-Lysine-HCl) ， 30.00 mgL-蛋氨酸(L-Methionine) ， 95.00 mgL-蘇氨酸(L-Threonine) ， 16.00 mgL隱色氨酸(L-Tryptophan) ， 104.00 mg L-Tyrosine 2Na 2H20， 94.00 mg L曙纈氨酸(L隱Valine) ， 4.00mg D-泛酸鈣(D-Ca pantothenate)， 4.00mg氯化膽堿(Choline Chloride) ， 4.00mg葉酸(Folic Acid) ， 7.20mg肌醇(i-Inositol)，4.00mg煙酰胺(Niacinamide)，4.00mg維生素B6(鹽酸吡多辛，Pyridoxine HC1)， 0.40mg維生素B2(核黃素，0,40)， 4.00mg鹽酸硫胺(Thiamine HC1) ， pH 值7.2-7.4。2) 細胞總RNA的提取取出步驟l)培養(yǎng)得到的人子宮癌(Hela)細胞，吸去培養(yǎng)液(懸浮細胞需要離 心)，用適量PBS洗滌，加入lmlTRizol液，混勻，室溫放置5min，吸出培養(yǎng)瓶內(nèi) 的液體轉(zhuǎn)移到1.5ml無Rase酶EP管內(nèi)，每管加入0.2ml氯仿，劇烈震蕩15s，混勻， 室溫放置2-3min。在12， 000g (2-8°C)離心15min。吸取水相于另一只1.5ml的EP 管內(nèi)，加入等體積的異丙醇，室溫放置lmin。在12， 000g (2-8°C)離心10min，此 時有RNA沉淀產(chǎn)生，棄去上清，加200-50011170%乙醇洗滌后，在7500g(4。C)離 心5 min.吸掉乙醇，用小Tip吸干液體。沉淀自然干燥5-10分鐘，DEPC處理水20-30ul 加入，用槍打勻，55-6(TC水浴10分鐘讓總RNA完全溶解，測OD值得到人子宮癌 (Hela)細胞總RNA。3) RT-PCR克隆Pokemon以步驟2)得到的人子宮癌(Hela)細胞總RNA進行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系20ul， 包括Oligo(dt)l ul,人子宮癌(Hela)細胞總RNA 1 ug, DEPC水，置于7(TC5min， 然后置于冰上5min,加入DEPC水，5x緩沖液4 ul， 25mM MgCL24 ul，加入10mM dNTPl ul， RNA酶抑制劑20U和反轉(zhuǎn)錄酶1 ul,25。C5min,42X:60min，于70。C15min終 止反應(yīng)，得到cDNA。結(jié)束后以cDNA作為模版進行PCR。Pokemon基因上游引物5 '-CTTAAGCTTGCCACCATGGCCGGCGGCGTGG-3'， 下游引物5'-CATGATATCGGCGAGTCCGGCTGTGAAGTTAC-3'。 PCR反應(yīng)體系 為Pokemon上、下游引物各10umol/L,5X緩沖溶液10ul， 2mM dNTP 5 ul,甜菜堿和 DMSO各5 ul， 1 ul cDNA， 2.5U/LPrimer star聚合酶1 ul，總體系50 ul。
PCR循環(huán) 條件98。C變性10s， 70。C復(fù)性10s， 72。C延伸lmin， 40個循環(huán)。把所得PCR產(chǎn)物在70v，進行瓊脂糖電泳，30min后，膠置于紫外燈下照射，小 心把DNA片段切下轉(zhuǎn)入到1.5mlEP管內(nèi)，稱重EP管，近似確定體積。假設(shè)膠的密 度為lg/ml，于是凝膠的體積可通過如下方法的得到如凝膠薄片質(zhì)量為0.2g，則體積為0.2ml，然后加入等體積的NJ緩沖液，把混合物置于55-65'C水浴中10min.,至膠 完全溶解混合均勻。將膠溶解后轉(zhuǎn)移到膠回收柱內(nèi)，8000g離心lmin，用SPW緩沖 液重復(fù)洗滌2次，最后加入DNA洗脫液將PCR產(chǎn)物洗下，10， OOOg離心lmin。 DNA產(chǎn)量計算把抽提樣品稀釋20倍，在260nm和280nm下測OD值。DNA濃度 =八26()><50><稀釋倍數(shù)。4) POKEMON與pEGFP的融合質(zhì)粒的構(gòu)建將步驟3)得到的PCR產(chǎn)物用&oi V和/Z/"^III雙酶切，克隆進pEGFP-N2質(zhì)粒 的///"^m和I酶切位點，得到pEGFP-N2- POKEMON融合質(zhì)粒；具體方法如下 所示① 將步驟3)得到的PCR產(chǎn)物的酶切PCR產(chǎn)物的酶切為45ul體系，回收DNA 25pl(0.4嗎)，4.5 ul 10xbuffer K,(U5 ul Hindlll (15U/ pl)， 0.15 ul EcoRV(15U/ p1),15.2 ul H20， 37'C酶切3小時。② pEGFP-N2質(zhì)粒酶切和產(chǎn)物純化回收取12plpEGFP-N2質(zhì)粒，6 pllOxbuffer M， 6nlHin亂5plNaAc (3mMPH5.2) ， 150ul乙醇于-20。C10min， 10, OOOg離 心5min,棄上清，沉淀加入55plTE溶解。結(jié)束后再加入55 pl TE溶解液，8^1 10xbuffer T， 8 pl BSA， 6Sma I ， 1 pl磷酸酶(CIAP) ， 37。C酶切3小時酶切。 酶切結(jié)束后，加入等體積NJ緩沖液，8000g， lmin,再加入SPW液8000g,lmin重復(fù) 一次，最后加入DNA洗脫液，10， OOOg,lmin.最后得酶切純化產(chǎn)物。③ 酶切純化PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒pEGFP-N2的連接連接體系為40ul，2 pl pEGFP-N2 (Hindlll, Smal) ， 34plPCR純化產(chǎn)物(HindIII， EcoRV)，置于56。C水浴4min,冰上5min.再加入2 T4連接緩沖液，1 pl 50mM ATP， 0.5 pl T4連接酶，16。C連結(jié) 過夜。④ 感受態(tài)細胞的制備及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化取過夜JM109菌液800ul， 3000g離心 5min,棄上清，加入50nl新鮮LB培養(yǎng)基，用槍吹打均勻，然后加入2^1質(zhì)粒液(lUg^il)和2pl的CaCl2，冰上放置30min， 42。C水浴熱休克60-120s，結(jié)束后，放 置于冰上2-3min，加入lmlLB液，然后再搖床上搖45min,結(jié)束后，在3000g離心 5min，除去部分上清液，剩余大約100pl左右液體，加入12nlAMP，滴加平板上進 行涂布，正向平板放置30min,然后倒置平板7-8小時。⑤ 挑克隆并小提陽性克隆細胞在20個LB平板底部標上1， 2， 3， 4....20。取 20只中型離心管，每管加入1.5ML含有(60jig/mL)卡那霉素的LB培養(yǎng)基，用已 經(jīng)滅菌的牙簽分別挑取上述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后長出的不同菌落在標有數(shù)字的平板上劃 線(必須一一對應(yīng))，劃線后的牙簽放置于中型的離心管內(nèi)(也必須是管號和平樣板上的數(shù)字一一對應(yīng))，劃線后的培養(yǎng)皿37'C過夜或放置10小時，中型離心管搖床上 過夜(37°C)或者把搖床上培養(yǎng)過夜的液體轉(zhuǎn)移到新的小離心管內(nèi)，在3000g離心 6min，棄上清液體，沉淀提取質(zhì)粒，用5amHI酶切鑒定，篩選連接正確的質(zhì)粒。將 5amH I酶切鑒定正確的質(zhì)粒進行測序結(jié)果表明，我們己經(jīng)克隆得到POKEMON閱讀 框架序列,并正確地裝進pEGFP-N2質(zhì)粒中，將測序表明正確的含有POKEMON片段的 重組質(zhì)粒命名為pEGFP-N2-POKEMON。 pEGFP-N2-POKEMON在細胞中，可表達 Pokemon-GFP融合蛋白。2、反義寡核苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4對POKEMON-GFP融合蛋白的抑制效果以脂質(zhì)體Lipofectamine2000 (Invitrogen)作為轉(zhuǎn)染試劑,將反義寡核苷酸AS1 (式I ) 、 AS2 (式n) 、 AS3 (式in) 、 AS4 (式IV)和對照寡核苷酸 AS5( ATGTAGTCGTCTGCCTAG )(濃度均為40nmol/L)與融合質(zhì)粒pEGFP--N2-POKEMON共轉(zhuǎn)染猴腎成纖維COS-7細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，ATCC number: CRL-1651) ， 24h檢測熒光強度。具體方法如下所述1) pEGFP-NrPOKEMON質(zhì)粒和反義核苷酸共轉(zhuǎn)染取指數(shù)生長期的COS-7細胞，于37t:,包含有10%胎牛血清，青霉素100mg/ml 和鏈霉素100mg/ml的DMEM培養(yǎng)基，5% C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞轉(zhuǎn)染前一天， 細胞用胰酶消化并用無抗生素的培養(yǎng)基懸浮，以每孔"105個COS-7細胞的密度鋪 入24孔板內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)24小時后，將實施例1制備的反義核苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4禾P AS5 分別以終濃度均為40nmol/L加入50^1無雙抗的優(yōu)化培養(yǎng)基(Opti-MEM I Reduced-Serum Medium, GIBCO / BRL公司產(chǎn)品)中混勻靜止5min得到濃度均為 40nmol/L的AS1、AS2、AS3、AS4和AS5溶液,同時取2.5|xl脂質(zhì)體Lipofectamine-2000 加入另外一個含有48.5|il無雙抗的優(yōu)化培養(yǎng)基(Opti-MEM I Reduced-Serum Medium, GIBCO / BRL公司產(chǎn)品)中混勻靜止5min，結(jié)束后將上述配制的稀釋后的 脂質(zhì)體分別與反義苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4或AS5溶液等體積混合，分別同時補 加0.4昭的pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒，然后分別將混和液按照100^1 /孔的量加入到 上述鋪入COS-7細胞的24孔板內(nèi)，以AS5與pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細 胞做對照組，檢測上述實驗組和對照組培養(yǎng)24h后的熒光強度。上述步驟l)的處理和步驟2)的處理的實驗結(jié)果如圖l所示，其中，

圖1中A為對 照(AS5)與pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，B為ASl與pEGFP-N2-POKEMON 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，C為AS2與pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，D為AS3與pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，E為AS4與pEGFP-N2-POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 結(jié)果。結(jié)果表明，在COS-7細胞內(nèi)，共轉(zhuǎn)染pEGFP-N2-POKEMON和ASl、 AS2、 AS3 或AS4反義核苷酸。通過熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)四種的反義核苷酸對Pokemon的抑制 存在顯著差異。從圖1中可看到AS2 (圖1中C)和AS4 (圖1中E)熒光強度弱于AS1 (圖1中B)和AS3 (圖1中D)的熒光強度，這說明AS2和AS4抑制效率比AS1和AS3 的抑制效率高。使用Image-proplusv5.02對熒光強度進行分析計算，AS2和AS4對 pEGFP-N2-POKEMON表達的POKEMON-GFP融合蛋白的抑制效率分別是74%和 78%，同樣說明，AS2和AS4對POKEMON-GFP融合蛋白的抑制效率比ASl和AS3的 抑制效率高，并且AS4抑制效率最高，結(jié)果表明AS4可以作為治療Pokemon表達引發(fā) 的疾病的藥物，如癌癥等。
權(quán)利要求
1、一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸，其分子式為下述式I至式IV中之一5’CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx 3’(式I)；5’CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3’(式II)；5’GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3’(式III)；5’TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx 3’(式IV)；其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯核苷間鍵；y均指磷酸二酯核苷間鍵；A均指2’-脫氧腺苷；T均指胸苷；C均指2’-脫氧胞苷；G均指2’-脫氧鳥苷。
2、 權(quán)利要求l所述的反義寡核苷酸在制備對POKEMON基因表達進行調(diào)節(jié)、調(diào)整 或抑制藥物中的應(yīng)用。
3、 權(quán)利要求1所述的反義寡核苷酸在制備治療POKEMON基因過表達所引起的疾 病的藥物中的的應(yīng)用。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物是以權(quán)利要求l所 述的反義寡核苷酸為有效成分。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物通過經(jīng)脈或皮下給藥治療。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物通過局部給藥治療。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述給藥治療與放射療法結(jié)合。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述給藥治療與化學(xué)療法結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用。該反義寡核苷酸，為下述化學(xué)式所示物質(zhì)之一CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx；CxGxCxTxGxAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx；GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx；TxTxCxAxGxGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx；TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx。x指硫代磷酸酯核苷間鍵。本發(fā)明的反義寡核苷酸可作為用于制備治療POKEMON高表達引起的疾病的的基因治療藥物。
文檔編號A61K48/00GK101275135SQ20081008905
公開日2008年10月1日 申請日期2008年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月20日
發(fā)明者楠 張, 蔣宇揚, 謝振華 申請人:清華大學(xué)深圳研究生院