專利名稱：：豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說是涉及一種豬免疫球蛋白在制備預(yù)防和治療犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用。技術(shù)背景我們將具有腹瀉癥狀的疾病，統(tǒng)稱為腹瀉病，它可導(dǎo)致犬營養(yǎng)不良和生長發(fā)育出現(xiàn)障礙，嚴(yán)重時可導(dǎo)致死亡。在規(guī)模化養(yǎng)犬生產(chǎn)中，因諸多因素的影響，仔犬腹瀉的發(fā)病率高達30%，病死率達10%15%，給養(yǎng)犬生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟損失。近年來，犬的腹瀉是動物醫(yī)院臨床病例中發(fā)病率較高的常見病。臨床上各種年齡的犬均可發(fā)生，犬腹瀉常由細菌感染(如致病性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等)、病毒感染(如細小病毒、犬瘟熱病毒、冠狀病毒等)、寄生蟲感染(如弓形體等)造成。目前治療犬腹瀉的藥物主要采用抗生素，但由于本病病因復(fù)雜，且細菌耐藥性菌株的不斷出現(xiàn)造成藥物療效不確切，同時,抗生素可造成犬胃腸道菌群失調(diào)，干擾其正常的消化吸收機能。因此有必要尋求新的防治方法。豬血清含有高濃度的免疫球蛋白，包括lgG、lgA、lgE、lgM、lgD。其中LgG在免疫過程中占主導(dǎo)地位，具有抗病毒、抗外毒素等多種活性；lgA在保護腸道、呼吸道、泌尿生殖道、乳腺、五官等黏膜器官免受細菌與病毒的入侵起關(guān)鍵作用，并和lgG—起中和多種病毒粒子，對增強犬的免疫能力具有重要作用。IgM可獲分泌片段，不被消化酶破壞，可口服使用。我國每年出欄生豬約3億頭，豬血資源十分豐富。目前，多數(shù)肉聯(lián)廠的豬血大部分都排放掉了。豬血的排放，既是嚴(yán)重的浪費，又造成環(huán)境污染。豬血含豐富的功能成分，其中豬血漿免疫球蛋白具有提高機體防病、抗病能力，已經(jīng)應(yīng)用于嬰幼兒配方奶粉、斷乳嬰幼兒米粉、保健食品、生物醫(yī)藥中間體、口腔衛(wèi)生等產(chǎn)品中。將豬血源充分綜合應(yīng)用，提取免疫球蛋白，能夠克服犬血材料不易獲得、犬血制品給藥帶來的犬血源污染等問題。從豬血液中提取免疫球蛋白制成人工飼料飼喂給新生羔羊和初生仔豬，可使羔羊的死亡率由21%降到10%，仔豬的死亡率由23%降到7%，能有效防止幼畜的各種傳染性疾病，并能促進幼畜的生長發(fā)育。豬免疫球蛋白已經(jīng)作為藥物已經(jīng)應(yīng)用于治療小兒輪狀病毒感染。但是有關(guān)應(yīng)用豬免疫球蛋白預(yù)防和治療犬消化道感染性疾病還未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用。經(jīng)研究實驗證明，本發(fā)明的豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用，大大降低了犬病毒性腹瀉和細菌性腹瀉的發(fā)生率，尤其是犬輪狀病毒腹瀉等病毒性疾病，以及犬瘟熱病毒、犬細小病毒、冠狀病毒引起繼發(fā)細菌感染的對癥治療。緩解了犬病毒性腹瀉和細菌性腹瀉的癥狀，本發(fā)明不引起犬類動物血源性感染，安全性高，無抗藥性，成本低廉。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例l豬免疫球蛋白治療仔犬輪狀病毒性腸炎的研究材料和方法1.1豬免疫球蛋白的制備應(yīng)用硫酸銨沉淀法制備豬血清中的IgG，制成豬免疫球蛋白，配成含量為5.0g/L。具體方法如下豬血一飽和硫酸銨沉淀一離心一冷鹽水溶解一透析一脫鹽一DEAE纖維素層析一樣品收集一IgG鑒定。1.2試驗動物、分組和試驗方法根據(jù)臨床觀察,選擇下列經(jīng)確診為輪狀病毒性腸炎的仔犬40只，分為治療組及對照組，兩組患犬年齡、臨床表現(xiàn)及病情輕重大體一致。治療組22例，對照組18例。治療組予以豬免疫球蛋白口服，每次0.5ml/kg，每日2次。對照組予以思密達口服，每次0.010.15g/kg，每日2次。給藥后每日觀察仔犬的精神狀態(tài)、體溫、糞便形狀和色澤以及仔犬哺乳或采食情況。1.3療效判定病犬用藥34d后臨床癥狀消失,糞便成形,體溫、食欲、精神狀態(tài)正常者判為治愈；病^t用藥34d后糞便變稠，色澤正常，食欲、精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，體溫正常者判為好轉(zhuǎn)；好轉(zhuǎn)和治愈都判為有效；病犬用藥34d后仍然腹瀉，精神不振、厭食者判為無效。1.4結(jié)果豬免疫球蛋白治療犬輪狀病毒性腸炎療效觀察表l兩組治療結(jié)果比較(例，％)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>治療組22例，治愈率31.8%，有效率90.8%。對照組18例，治愈率16.7%，有效率44.4%。兩組有效率相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(尸<0.01)。實施例2豬免疫球蛋白防治仔犬腹瀉的試驗研究1材料與方法1.1豬免疫球蛋白的制備收集健康屠宰豬的血液，應(yīng)用辛酸-硫酸銨沉淀法結(jié)合少量陰離子交換劑，純化了正常豬血清中的IgG，制成豬免疫球蛋白，并且對提取的IgG用聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法進行純度鑒定，可得到單一條帶。用Folim-2酚方法測定免疫球蛋白制劑的蛋白濃度為4.84mg/m1。痢菌凈:江西東鄉(xiāng)獸藥有限公司產(chǎn)品；氯霉素:石家莊制藥廠產(chǎn)品；恩諾沙星:廣東海康獸藥廠產(chǎn)品。1.2試驗動物、分組和試驗方法1.2.1試驗犬的詞養(yǎng)管理所有供試仔犬隨其母犬在相同條件的分娩舍飼養(yǎng)或水泥地面平養(yǎng)，每周常規(guī)消毒l次。1.2.2治療試驗根據(jù)臨床觀察，選擇下列具有腹瀉癥狀的仔犬110日齡的52頭，1140日齡的90頭。將不同日齡的仔犬按發(fā)病時間、癥狀、窩別、體重、性別，對等原則隨機分成A、B、C、D共4組。A組仔犬按3mL/頭口服豬免疫球蛋白，24h內(nèi)未見好轉(zhuǎn)的重復(fù)口服l次;B、C、D組仔犬按推薦劑量分別給予痢菌凈、氯霉素、恩諾沙星，每日用藥2次。給藥后每日觀察仔犬的精神狀態(tài),體溫,糞便形狀和色澤以及仔犬哺乳或采食情況。1.3療效判定病犬用藥34d后臨床癥狀消失，糞便成形,體溫、食欲、精神狀態(tài)正常者判為治愈；病犬用藥34d后糞便變稠，色澤正常，食欲、精神狀態(tài)好轉(zhuǎn),體溫正常者判為好轉(zhuǎn);好轉(zhuǎn)和治愈都判為有效；病犬用藥34d后仍然腹瀉，精神不振、厭食者判為無效。1.4數(shù)據(jù)處理對試驗組和對照組各項數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗，并分析經(jīng)濟效益。2試驗結(jié)果2.1治療試驗由表2可見，豬免疫球蛋白對1-10日齡仔犬腹瀉在48h內(nèi)的治療的總有效率達到100%，顯著高于痢菌凈、氯霉素和恩諾沙星治療組；由表3可見，豬免疫球蛋白對11-40日齡仔犬腹瀉在120h內(nèi)的治療的總有效率達到92.3%，顯著高于痢菌凈、氯霉素和恩諾沙星治療組；不同發(fā)病日齡的仔犬間比較，日齡越小，治療效果越好；在用藥后48h絕大部分仔犬病情得到控制，隨著病犬年齡的增大，病程相應(yīng)延長，但就整個病程而言，豬免疫球蛋白的療效均明顯好于其它幾種抗感染藥物。表2豬免疫球蛋白對l-10日齡仔犬腹瀉在48h內(nèi)的治療效果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表3豬免疫球蛋白治療l1-40日齡仔犬腹瀉在120h內(nèi)的治療效果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>通過給1-40日齡仔犬口服豬免疫球蛋白治療腹瀉，顯著高于臨床常用的痢菌凈、氯霉素和恩諾沙星治療組；對發(fā)病年齡較早的仔犬治療效果較好。造成仔犬腹瀉的原因很多，特別是繼發(fā)于某些烈性傳染病時，仍須配合相應(yīng)的防治措施才能收到良好效果。另試驗還表明對早期斷奶仔犬給予含豬免疫球蛋白，可預(yù)防消化道感染及可能發(fā)生的生長遲緩，仔犬的主動免疫在25日齡后才產(chǎn)生效果，此前的免疫力主要來源于初乳中的Ig。因此,新生仔犬口服豬免疫球蛋白對提高其體內(nèi)非特異性抗體水平，增強其抗病性無疑是有利的，降低仔犬的腹瀉發(fā)生率。本發(fā)明的豬免疫球蛋白除直接應(yīng)用于治療犬輪狀病毒感染之外，其在臨床上的應(yīng)用范圍廣泛，作為一種全新的免疫療法，同時適用于病毒和細菌感染以及各類免疫性疾病中的治療，其抗病毒抗菌譜廣泛(金黃色葡萄球菌、腸桿菌、鏈球菌等)及RNA，DNA各類病毒(犬瘟熱病毒、犬狂犬病病毒、犬傳染性肝炎病毒等)。同時免疫求蛋白口服液與其他抗生素類使用產(chǎn)生級聯(lián)放大效應(yīng)，可以有效縮短病程，提高療效及治愈率。制備豬免疫球蛋白用的原料是豬血清，來源廣泛，且提純方法簡便。易在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。豬免疫球蛋白作為預(yù)防或治療藥物效果較好，重復(fù)用藥次數(shù)減少；同時,使用豬免疫球蛋白不會產(chǎn)生耐藥性，可長期應(yīng)用。權(quán)利要求1.一種豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用。經(jīng)研究實驗證明，本發(fā)明的豬免疫球蛋白在制備防治犬消化道感染性疾病藥物的應(yīng)用，大大降低了犬病毒性腹瀉和細菌性腹瀉的發(fā)生率，尤其是犬輪狀病毒腹瀉等病毒性疾病，以及犬瘟熱病毒、犬細小病毒、冠狀病毒引起繼發(fā)細菌感染的對癥治療。緩解了犬病毒性腹瀉和細菌性腹瀉的癥狀，本發(fā)明不引起犬類動物血源性感染，安全性高，無抗藥性，成本低廉。文檔編號A61P1/12GK101249263SQ200810052739公開日2008年8月27日申請日期2008年4月15日優(yōu)先權(quán)日2008年4月15日發(fā)明者古長慶申請人:天津生機集團股份有限公司