專利名稱：皮下給予免疫球蛋白和透明質(zhì)酸酶的組合和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了配制為皮下給予的含有免疫球蛋白(IG)成分和可溶性透明質(zhì)酸酶 成分的組合、組合物以及試劑盒。這種產(chǎn)品可用于治療IG可治療的疾病或者病癥的方法 中。本發(fā)明還提供了皮下給予免疫球蛋白的方法，從而其給藥方案與用于治療相同的IG可 治療的疾病或者病癥的通過靜脈內(nèi)給予相同劑量的方案基本相同。背景靜脈內(nèi)(IV)給予免疫球蛋白(IVIG)是免疫缺陷患者的主要治療方法。盡管最初 的IVIG制備物導(dǎo)致嚴(yán)重副作用，但是目前可利用的IVIG制備物在大多數(shù)免疫缺陷患者中 耐受良好。雖然如此，一小部分患者仍有不適、甚至喪失能力的反應(yīng)如頭痛、疲乏和肌痛。發(fā) 熱和寒戰(zhàn)仍是問題，特別是當(dāng)患者具有并發(fā)感染時(shí)。盡管嘗試其它IVIG制備物或者提前給 予對(duì)乙酰氨基酚、苯海拉明和皮質(zhì)類固醇，但是所述反應(yīng)通常持續(xù)存在。進(jìn)一步地，由于需 要靜脈內(nèi)給藥而存在患者依從性的問題。皮下(SQ)給予免疫球蛋白可代替靜脈內(nèi)給予。與靜脈內(nèi)(IV)輸注相比，SQ給予 免疫球蛋白具有許多優(yōu)勢(shì)。例如，其降低了全身反應(yīng)的發(fā)生率，不需要有時(shí)較困難的IV通 道，改良了波谷血液濃度(trough level)，并且使得患者更獨(dú)立。由于在一個(gè)部位難以給予 大量液體，因此需要一周SQ輸注一或兩次，一次使用兩個(gè)或者多如五個(gè)部位。因此，與一個(gè) 月給予一次的IVIG不同皮下給予通常每周進(jìn)行一次。由此需要另外的給予免疫球蛋白的 方法。概述本發(fā)明提供了皮下給予免疫球蛋白及治療IG可治療的疾病或者病癥的方法、組 合物、組合以及試劑盒。本發(fā)明提供了治療對(duì)象中IG可治療的疾病或者病癥的方法，通過 皮下給予該對(duì)象可溶性透明質(zhì)酸酶和免疫球蛋白(IG)以治療所述疾病或者病癥。共同給 予IG和透明質(zhì)酸酶增加了皮下給予IG的生物利用度，使得皮下給予IG可以使用與特定疾 病或者病癥的靜脈內(nèi)給予IG(IVIG)基本相同的給藥方案。給予IG的給予量和給予頻率與 對(duì)于相同疾病或者病癥通過IV (靜脈內(nèi))給予的量和頻率基本相同。通過IV給予的量對(duì)于 特定疾病或者病癥可以預(yù)定或者是已知的。通常，在存在可溶性透明質(zhì)酸酶的條件下，對(duì)于
10皮下給予而言，給予速度可以大于IV給予速度。因此，可以減少特定劑量的給予時(shí)間。給 藥速度可以通過如泵控制，或者可以依賴于重力。因此，本發(fā)明提供了在需要治療的對(duì)象中治療IG可治療的疾病或者病癥的方法， 通過皮下給予該對(duì)象可溶性透明質(zhì)酸酶和有效治療所述疾病或者病癥的量的免疫球蛋白 (IG)進(jìn)行。所述給予利用這樣的給藥方案，其中為了連續(xù)給予對(duì)象IG，選擇(a)IG的數(shù)量 以及(b)給藥頻率，使得皮下給予對(duì)象IG的治療效力與使用相同給藥方案通過靜脈內(nèi)給予 對(duì)象IG的治療效力至少基本相等。在本發(fā)明提供的方法的一些實(shí)施例中，皮下給予的IG的生物利用度是通過IV給 予的相同劑量的IG的生物利用度的至少大約90%。給予的可溶性透明質(zhì)酸酶的量是足以 實(shí)現(xiàn)以不超過每月一次皮下給予IG的量。在其它實(shí)施例中，IG的給予不超過每月一次。本發(fā)明提供的方法和應(yīng)用中使用的可溶性透明質(zhì)酸酶可以是PH20或者其截短形 式。例如，可溶性透明質(zhì)酸酶可以是綿陽或者?；蛘呓囟痰娜薖H20。在其中截短的人PH20 用于本發(fā)明提供的方法和應(yīng)用中的情況中，所述截短的人PH20可以選自具有SEQ ID NO 4-9之一所示的氨基酸序列的多肽或者其等位基因變體或者其其它變體。在一個(gè)實(shí)施例中， 可溶性透明質(zhì)酸酶是rHuPH20。使用本發(fā)明的方法和應(yīng)用給予的IG可以純化自人血漿，如通過醇分餾方法純化。 在一些實(shí)施例中，所述IG通過如下任何一種或多種方法進(jìn)一步純化化學(xué)修飾、在pH 4. 0 在有或者沒有胃蛋白酶的條件下保溫、聚乙二醇(PEG)沉淀、離子交換層析、酶裂解、溶劑 去污劑處理、滲濾或者超濾。本發(fā)明提供的方法和應(yīng)用可以應(yīng)用含有IgG、IgA和IgM的IG。 在一些實(shí)施例中，所述IG含有超過95%的IgG。進(jìn)一步地，所示IG可以是單體。所述IG中也可以存在蛋白質(zhì)穩(wěn)定賦形劑，如甘氨 酸、麥芽糖、多元醇、人血清白蛋白、甘露醇以及非離子去污劑中的一或多種物質(zhì)。在一些實(shí) 施例中，IG制備物的pH是或者是大約4. 2-5. 4,4. 6-5. 1或者4. 8-5. 0，蛋白質(zhì)濃度是或者 是大約5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG組合物。在一個(gè)實(shí)施例中，IG的蛋白 質(zhì)濃度是10% w/v。本發(fā)明提供了治療IG可治療的疾病或者病癥的方法和應(yīng)用，其中用于治療疾病 或者病癥的可溶性透明質(zhì)酸酶和免疫球蛋白(IG)是皮下給予的，IG的輸注速度是10ml/ 小時(shí)至300ml/小時(shí)，如是或是大約10ml/小時(shí)、20ml/小時(shí)、30ml/小時(shí)、40ml/小時(shí)、50ml/ 小時(shí)、60ml/小時(shí)、70ml/小時(shí)、80ml/小時(shí)、90ml/小時(shí)、100ml/小時(shí)、150ml/小時(shí)、200ml/小 時(shí)、250ml/小時(shí)以及300ml/小時(shí)。輸注速度由泵或者重力控制。在一些實(shí)施例中，所述IG 和透明質(zhì)酸酶是單獨(dú)、同時(shí)或者交替給予的。例如，透明質(zhì)酸酶可以在給予IG之前如0.5 分鐘、1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、20分鐘 或者30分鐘給予。在其它實(shí)施例中，所述IG和透明質(zhì)酸酶在單一組合物中。在另外的實(shí) 施例中，給予大約或給予 5 克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、 30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g 的 IG,給予的透明質(zhì)酸酶與 IG 的 比率(透明質(zhì)酸酶單位/IG克數(shù))是或者是大約10U/克(g)、20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、 50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g 或者 300U/g?？梢允褂帽景l(fā)明提供的方法和應(yīng)用給予可溶性透明質(zhì)酸酶和IG，用以治療例 如免疫缺陷病、繼發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病癥(CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-ffoltmann綜合 征、繼發(fā)低丙種球蛋白血癥(包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊 髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng)性壞死性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類 天皰瘡、Evans綜合征(包括具有免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新 生兒同種異體免疫血小板減少癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干 細(xì)胞移植、IgM副蛋白血癥神經(jīng)病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落 葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、輸血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/ SJS)、中毒性休克綜合征、阿爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞 腫瘤、外傷，以及細(xì)菌、病毒或者真菌感染。在給予IG和透明質(zhì)酸酶以治療免疫缺陷病的 情況中，所述免疫缺陷病可選自常見變異型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏癥、 Wiskott-Aldrich綜合征、重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)、原發(fā)性低丙種球蛋白血癥、抗體缺 陷的原發(fā)性免疫缺陷病、X連鎖無丙種球蛋白血癥(XLA)、嬰兒期低丙球蛋白血癥以及無抗 體的副腫瘤性小腦變性。在所述IG可治療的疾病或者病癥是繼發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血 癥情況中，所述惡性血液病可以是慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、多發(fā)性骨髓瘤(MM)或者非 霍奇金淋巴瘤(NHL)。在所述IG可治療的疾病或者病癥是炎癥性肌病的情況中，所述炎癥 性肌病可以是多肌炎、皮肌炎或者包涵體肌炎。在一些實(shí)施例中，皮下給予可溶性透明質(zhì)酸酶和IG用以治療細(xì)菌、病毒或者真菌 感染，所述細(xì)菌、病毒或者真菌例如是B型流感嗜血桿菌、A和B型銅綠假單胞菌、金黃色葡 萄球菌、B族鏈球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎鏈球菌、2和5型腺病毒、巨 細(xì)胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病毒_2、 甲型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小兒脊髓灰質(zhì)炎病毒、水痘一帶狀皰疹病 毒、曲霉和白色念珠菌。本發(fā)明提供了含有第一種組合物與第二種組合物的組合，其中第一種含有配制為 不超過每月一次皮下單劑量給予的IG，第二種組合物含有配制為不超過每月一次單劑量給 予的可溶性透明質(zhì)酸酶。所述組合物可以是雙室容器內(nèi)或者在一個(gè)容器內(nèi)彼此分離。在一 些實(shí)施例中，所述透明質(zhì)酸酶位于容器中在IG之前給予。所述容器可以是注射器、試管或 者小瓶，且可以進(jìn)一步含有注射針頭。本發(fā)明提供的組合物組合可以含有PH20或者其截短形式。例如，本發(fā)明提供的組 合物組合中可包含綿羊、牛或者截短的人PH20，如具有SEQID NO :4_9之一所示的氨基酸序 列的多肽或者其等位基因變體或者其它變體。在一些實(shí)施例中，所述組合中的可溶性透明 質(zhì)酸酶是rHuPH20。此外，所述組合物組合中的IG可以純化自人血漿，且可以是凍干或者液 體形式。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的所述組合物組合中液體的體積是或者是大約 100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者 700ml。所述組合物組合中 IG 的蛋白 質(zhì)濃度是或者是大約5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG組合物，例如10% w/v. 在一些實(shí)施例中，所述組合物中的IG是或者是大約5克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、 24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g。所述
12透明質(zhì)酸酶可以是液體。在一些實(shí)施例中，所述透明質(zhì)酸酶液體的體積是或者是大約1ml、 2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、20ml 或者 30ml，所述透明質(zhì)酸酶是或者是大約 10 單位-500，000 單位、100 單位-100，000 單位、500 單位-50，000 單位、1000 單位-10，000 單位、5000單位-7500單位、5000單位-50，000單位，或者1，000單位-10，000單位。本發(fā)明提供了這樣的組合物，其包含配制為每月一次單劑量給予的免疫球蛋白 (IG)和可溶性透明質(zhì)酸酶。所述組合物中包含的可溶性透明質(zhì)酸酶可以是PH20或者其截 短形式。例如，本發(fā)明提供的配制為單劑量給予的組合物中可包含綿羊、牛或者截短的人 PH20，如具有SEQ ID NO :4-9之一所示的氨基酸序列的多肽或者其等位基因變體或者其它 變體。在一些實(shí)施例中，所述組合物中可溶性透明質(zhì)酸酶是rHuPH20。所述組合物中的IG 可以純化自人血漿，且可以是液體。在舉例的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的配制為單劑量給予的所述組合物中IG的蛋 白質(zhì)濃度是或者是大約5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG組合物，例如10% w/ v。所述組合物中的 IG 是或者是大約 5 克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、 27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g，透明質(zhì)酸酶是或者 是大約10單位-500，000單位、100單位-100，000單位、500單位-50，000單位、1000單 位-10，000單位、5000單位-7500單位、5000單位-50，000單位，或者1，000單位-10，000單 位。所述組合物中液體的體積可以是大約100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者700ml。本發(fā)明提供了試劑盒，其包含第一種組合物和第二種組合物的組合，其中第一種 組合物包含配制為不超過每月一次皮下單劑量給予的IG，第二種組合物包含配制為不超過 每月一次單劑量給予的可溶性透明質(zhì)酸酶。本發(fā)明還提供了含有免疫球蛋白(IG)和可溶 性透明質(zhì)酸酶的組合物，其配制為每月一次單劑量給予。任選地，所述試劑盒中可包含說明 書。詳細(xì)描述大綱A.定義B.免疫球蛋白(IG)的皮下給予C.免疫球蛋白D.透明質(zhì)酸酶可溶性透明質(zhì)酸酶可溶性人PH20可溶性重組人PH20 (rHuPH20)E.產(chǎn)生編碼可溶性透明質(zhì)酸酶的核酸及其多肽的方法1.載體和細(xì)胞2.表達(dá)a.原核細(xì)胞b.酵母細(xì)胞c.昆蟲細(xì)胞d.哺乳動(dòng)物細(xì)胞
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e.植物3.純化技術(shù)E免疫球蛋白和可溶性透明質(zhì)酸酶多肽的制備、配制和給予1.配制凍干的粉末2.劑量和給予G.評(píng)估活性、生物利用度和藥動(dòng)學(xué)的方法1.藥動(dòng)學(xué)和耐受性2.生物學(xué)活性a.免疫球蛋白b.透明質(zhì)酸酶H.治療應(yīng)用1.抗體缺陷的原發(fā)性免疫缺陷病2.繼發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥3.川崎病4.慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)神經(jīng)病5.格林巴利綜合癥6.特發(fā)性血小板減少性紫癜7.炎性肌病多肌炎、皮肌炎以及包涵體肌炎8. Lambert-Eaton 肌無力綜合征9.多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病10.重癥肌無力11. Moersch-Woltmann 綜合征12.阿爾茨海默病13.其它疾病和病癥I.產(chǎn)品和試劑盒J.實(shí)施例A.定義除非特別指出，則本文所用所有技術(shù)和學(xué)術(shù)用語均具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人 員通常理解的含義。除非特別指出，則本文中所有專利、專利申請(qǐng)、公開的應(yīng)用和申請(qǐng)、 Genbank序列、數(shù)據(jù)庫、網(wǎng)站以及其它公開材料均以其全部?jī)?nèi)容并入作參考。在術(shù)語具有多 個(gè)定義的情況中，以在本章節(jié)中所述含義為主。參考URL或其他這樣的標(biāo)示符或地址時(shí)，應(yīng) 理解所述的標(biāo)示符可改變而且網(wǎng)上的具體信息時(shí)有時(shí)無，但通過在網(wǎng)上搜索應(yīng)當(dāng)能獲得相 當(dāng)?shù)男畔?。參考上述?nèi)容可證明所述信息的可用性以及公眾傳播。如本文所用，“免疫球蛋白”、“Y球蛋白”是指得自集合的成熟供體血漿的 血漿蛋白。IgG抗體位置，但是也存在其它抗體亞類如IgA和IgM。治療性免疫球蛋 白通過增加受體的血清循環(huán)抗體水平而可以提供被動(dòng)免疫。例如，IgG抗體可以結(jié)合 并中和細(xì)菌毒素；調(diào)理病原體；激活補(bǔ)體；以及抑制病原性細(xì)胞因子和噬菌細(xì)胞，通 過與細(xì)胞因子及其受體相互作用而進(jìn)行，如CD5、白細(xì)胞介素-la(IL-la)、白細(xì)胞介素6(IL_6)、腫瘤壞死因子-a (TNF-a)以及T_細(xì)胞受體。治療性免疫球蛋白可以抑 制自體抗體的活性。免疫球蛋白制備物還包括但不限于靜脈內(nèi)的免疫球蛋白(IGIV)、 免疫球蛋白IV、治療性免疫球蛋白。免疫球蛋白為本領(lǐng)域熟知，且包括許多品牌，如 BayGam 、Gamimune Gammagard S/D、Gammar -P、Iveegam EN、Panglobulin 、Polygam S/D、Sandoglobulin 、Venoglobulin -I、
Venoglobulin -S、WinRho SDF等。免疫球蛋白制備物也可以得自人血漿，或者重組產(chǎn)生。如本文所用，IG-可治療的疾病或者病癥是指使用免疫球蛋白制備物治療的任 何疾病或者病癥。這種疾病和病癥包括但不限于其中增加循環(huán)抗體是有益的任何疾病， 例如免疫缺陷病、繼發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫 髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病癥(CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、 Lambert-Eaton肌無力綜合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-ffoltmann綜合 征、繼發(fā)低丙種球蛋白血癥(包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊 髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng)性壞死性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類 天皰瘡、Evans綜合征(包括具有免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新 生兒同種異體免疫血小板減少癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干 細(xì)胞移植、IgM副蛋白血癥神經(jīng)病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落 葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、輸血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/ SJS)、中毒性休克綜合征、阿爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞腫 瘤、外傷，以及細(xì)菌、病毒或者真菌感染。如本文所用，給藥方案是指給予的免疫球蛋白的量和給予頻率。所述給藥方案與 所治療的疾病或者病癥相關(guān)，因此是可變的。如本文所用，“與靜脈內(nèi)給予IG(IVIG)的給藥方案基本相同”是指這樣的方案， 其中所述劑量和/或頻率在治療特定疾病或者病癥的有效量?jī)?nèi)，典型是或者大約是靜脈內(nèi) (IV)劑量或者頻率的10 %。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知治療特定疾病或者病癥的IVIG的有效量， 或者可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。例如在下文舉例說明，300mg/kg(即如果平均成年人體重70kg，則 使用21克)至600mg/kg(即42克)是典型的給予患有原發(fā)性免疫缺陷疾病的患者每月一 次IVIG的劑量。因此，當(dāng)IG組合透明質(zhì)酸酶給予治療原發(fā)性免疫缺陷疾病時(shí)，皮下給予IG 的劑量是或者是大約300mg/kg至600mg/kg。如本文所用，給予頻率是指連續(xù)給予免疫球蛋白之間的時(shí)間。例如，給予頻率可以 是一周、兩周、三周、四周一次，且與治療的特定疾病或者病癥相關(guān)。通常地，所述頻率是至 少每?jī)芍芑蛘呷芙o予一次，典型為一個(gè)月不超過一次。如本文所用，透明質(zhì)酸酶是指降解透明質(zhì)酸的酶。透明質(zhì)酸酶包括細(xì)菌透明質(zhì)酸 酶(EC 4. 2.99. 1)，來自水蛭、其它寄生蟲和甲殼動(dòng)物的透明質(zhì)酸酶(EC 3. 2. 1. 36)，以及 哺乳動(dòng)物型透明質(zhì)酸酶(EC 3. 2. 1. 35)。透明質(zhì)酸酶也包括任何非人源以及來自水蛭、其它 寄生蟲和甲殼動(dòng)物的酶，所述非人源包括但不限于鼠、犬、貓、野兔、鳥類、牛、綿羊、豬、馬、 魚類、蛙科動(dòng)物、細(xì)菌。舉例的非人透明質(zhì)酸酶包括來自如下動(dòng)物的透明質(zhì)酸酶牛(SEQ ID NO :10 禾口 11)、黃蜂(SEQ ID N0:12 和 13)、蜜蜂(SEQ ID N0:14)、白臉馬蜂(SEQ ID NO:15)、胡蜂(SEQ ID NO :16)、小鼠(SEQ ID NO 17_19、32)、豬(SEQ ID NO :20_21)、大鼠(SEQ ID NO :22-24、31)、兔(SEQ ID N0:25)、羊(SEQ ID NO:26 和 27)、猩猩(SEQ ID NO :28)、稱 猴(SEQ ID NO:29)、豚鼠(SEQ ID NO :30)、金黃色葡萄球菌(SEQ ID NO :33)、化膿鏈球菌 (SEQ IDN0:34)，以及產(chǎn)氣莢膜梭菌(SEQ ID NO :35)。透明質(zhì)酸酶也包括那些人源透明質(zhì) 酸酶。舉例的人透明質(zhì)酸酶包括 HYAL1 (SEQ ID NO :36)、HYAL2 (SEQ ID NO :37)、HYAL3 (SEQ ID NO :38)、HYAL4(SEQ ID NO 39)和PH20 (SEQ ID N0:1)。透明質(zhì)酸酶還包括可溶性透明 質(zhì)酸酶，包括綿羊和牛PH20、可溶性人PH20和可溶性人rHuPH20。提及的透明質(zhì)酸酶包括前體透明質(zhì)酸酶多肽和成熟透明質(zhì)酸酶多肽(如其中已 經(jīng)除去信號(hào)序列的那些多肽)、其具有活性的截短形式，以及包括等位基因變體和種變體， 由剪接變體編碼的變體，以及其它變體，包括與SEQ ID NO :1和10-39所示前體多肽具有 40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%, 99%或者更多序列先天性的多肽，或者其成熟形式。例如，提及的透明質(zhì)酸酶也包括SEQ ID N0:50-51所示PH20前體多肽。透明質(zhì)酸酶也包括含有化學(xué)或者翻譯后修飾的那些酶， 以及不含有化學(xué)或者翻譯后修飾的那些酶。這種修飾包括但不限于聚乙二醇化、白蛋白化 (albumination)、糖基化、法尼基化(farnesylation)、羧化、羥基化、磷酸化及本領(lǐng)域已知 的其它多肽修飾。如本文所用，可溶性透明質(zhì)酸酶是指特征在于其在生理?xiàng)l件下的可溶性的多肽。 例如，通過其在加熱至37°C的Triton X-114溶液中分配至水相而可以區(qū)分可溶性透明質(zhì) 酸酶(Bordier et al.，(1981) J. Biol. Chem.，256 1604-7)。膜錨定的如脂質(zhì)錨定的透明質(zhì) 酸酶將分配在去污劑富集相，但是在用磷脂酶-C處理后將分配至去污劑不足或者水相中。 可溶性透明質(zhì)酸酶包括膜錨定的透明質(zhì)酸酶，其中透明質(zhì)酸酶與膜錨定相關(guān)的一或多個(gè)區(qū) 域已經(jīng)被除去或者修飾，其中所述可溶形式保留透明質(zhì)酸酶活性。可溶性透明質(zhì)酸酶包括 重組可溶性透明質(zhì)酸酶以及包含于或者純化自天然來源的那些酶，例如羊或者牛睪丸提取 物。舉例的這種可溶性透明質(zhì)酸酶是可溶人PH20。其它可溶性透明質(zhì)酸酶包括綿羊(SEQ ID NO 27)和牛(SEQ IDN0 :11)PH20。如本文所用，可溶性人PH20或者sHuPH20包括缺少所有或者部分C末端糖基磷 脂酰肌醇(GPI)附著位點(diǎn)的成熟多肽，由此在表達(dá)時(shí)所述多肽是可溶的。舉例的sHuPH20 多肽包括具有SEQ ID NO :4-9和47-48之一所示的氨基酸序列的成熟多肽。這種舉例的 sHuPH20多肽的前體多肽包括信號(hào)序列。舉例的前體如SEQ ID NO :3和40-46所示，其在 第1-35位氨基酸均含有一個(gè)具有35個(gè)氨基酸的信號(hào)序列?？扇苄訦uPH20多肽還包括在 本文所述生產(chǎn)和純化期間或者之后降解的那些序列。如本文所用，可溶性重組人PH20(rHuPH20)是指在中國倉鼠卵巢(CH0)細(xì)胞中重 組表達(dá)的可溶形式的人PH20。可溶性rHuPH20由包含信號(hào)序列及由SEQ ID N0:49所示的 核酸編碼。還包括是其等位基因變體及其它可溶變體的DNA分子。編碼可溶rHuPH20的核 酸在CH0細(xì)胞中表達(dá)，其分泌成熟多肽。如在培養(yǎng)基中產(chǎn)生，在C末端具有異質(zhì)性，由此產(chǎn) 物是混合物，其可以包括不同豐度的任一或多個(gè)SEQ ID NO :4-9。也包括相應(yīng)的等位基因變 體及其它變體，包括相應(yīng)于SEQ ID NO :50-51所示前體人PH20多肽的那些變體。其它變體 與 SEQ ID NO :4-9 和 47-48 所示任何序列可具有 60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者更高的序列相同性，只要其保留透明質(zhì)酸酶活性且是可溶的即可。如本文所用，活性是指與全長(完整)蛋白質(zhì)相關(guān)的多肽或者其一部分的功能活 性。功能活性包括但不限于生物活性、催化或者酶活性、抗原性(結(jié)合或者競(jìng)爭(zhēng)多肽結(jié)合抗 多肽抗體的能力)、免疫原性、形成多聚體的能力以及特異性結(jié)合所述多肽的受體或者配體 的能力。如本文所用，透明質(zhì)酸酶活性是指透明質(zhì)酸酶裂解透明質(zhì)酸的能力。本領(lǐng)域已知 且在本文中描述了確定透明質(zhì)酸酶如可溶性rHuPH20的透明質(zhì)酸酶活性的體外測(cè)定。舉例 的測(cè)定包括下文描述(見實(shí)施例3)的微濁度(microturbidity)測(cè)定，其通過檢測(cè)當(dāng)未裂 解的透明質(zhì)酸結(jié)合血清白蛋白時(shí)形成的不溶沉淀而間接測(cè)量由透明質(zhì)酸酶對(duì)透明質(zhì)酸的 裂解。如本文所用，天然發(fā)生的a-氨基酸的殘基是在自然屆中發(fā)現(xiàn)的20個(gè)a-氨基酸 的殘基，它們通過在人體中的其關(guān)聯(lián)mRNA密碼子對(duì)負(fù)載的tRNA分子的特異性識(shí)別而被摻 入蛋白質(zhì)中。如本文所用，核酸包括DNA、RNA及其類似物，包括肽核酸(PNA)及其混合物。核酸 可以是單鏈或者雙鏈核酸。當(dāng)提及探針或者引物時(shí)，包括單鏈分子，其任選被標(biāo)記，如用檢 測(cè)標(biāo)記標(biāo)記，例如熒光或者放射標(biāo)記。這種分子典型是這樣的長度，由此其靶對(duì)于探查或者 引導(dǎo)(priming)文庫是統(tǒng)計(jì)學(xué)獨(dú)特的或者是低拷貝數(shù)(典型少于5個(gè)，通常少于3個(gè))。通 常地，探針或者引物包含與感興趣的基因互補(bǔ)或者相同的序列的至少14、16或者30個(gè)連續(xù) 核苷酸。探針和引物的長度可以是10、20、30、50、100或者更多個(gè)核酸。如本文所用，肽是指長度為2-40個(gè)氨基酸的多肽。如本文所用，在本發(fā)明提供的各個(gè)氨基酸序列中存在的氨基酸是根據(jù)其已知的三 字母或者單字母縮寫詞識(shí)別的(表1)。在各個(gè)核酸片段中存在的核苷酸根據(jù)本領(lǐng)域常用的 標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)字母命名法命名。如本文所用，“氨基酸”是含有氨基基團(tuán)和羧基基團(tuán)的有機(jī)化合物。多肽含有兩或 多個(gè)氨基酸。對(duì)于本發(fā)明，氨基酸包括20個(gè)天然發(fā)生的氨基酸、非天然氨基酸以及氨基酸 類似物(即其中a"碳具有側(cè)鏈的氨基酸)。如本文所用，“氨基酸殘基”是指對(duì)多肽在其肽鍵處進(jìn)行化學(xué)消化(水解)而形 成的氨基酸。本文所述氨基酸殘基假定是“L”異構(gòu)體形式。也如此命名的“D”異構(gòu)體形 式中的殘基可以由任何L-氨基酸殘基取代，只要多肽保留希望的功能性質(zhì)即可。NH2是 指在多肽的氨基末端存在的游離氨基基團(tuán)。C00H是指在多肽的羧基末端存在的游離羧基 基團(tuán)。與J. Biol. Chem.，243 =3557-3559 (1968)所述標(biāo)準(zhǔn)多肽命名法一致，以及采用37C. F.R.. § § 1.821-1. 822，氨基酸殘基的縮寫在表1中示出。表1 對(duì)照表
符號(hào)一個(gè)字母三個(gè)字母氨基酸YTyr酪氨酸GGly甘氨酸FPhe苯丙氨酸MMet甲硫氨酸AAla丙氨酸SSer絲氨酸Ilie異亮氨酸
符號(hào)一個(gè)字母三個(gè)字母氨基酸LLeu亮氨酸TThr蘇氨酸VVal纈氨酸PPro脯氨酸KLys賴氨酸HHis組氨酸QGin谷氨酰胺EGlu谷氨酸ZGlxGlu 和/或 GinWTrp色氨酸RArg精氨酸DAsp天冬氨酸NAsn天冬酰胺BAsxAsn 禾口/或 AspCCys半胱氨酸XXaa未知或者其它應(yīng)注意本文由公式表示的所有氨基酸殘基序列從左至右方向是從氨基末端至羧 基末端的常規(guī)方向。此外，短語“氨基酸殘基”廣義是指包括對(duì)照表(表1)中列舉的氨基 酸以及修飾的和獨(dú)特的氨基酸，如在37C.F.R. § § 1.821-1.822中提及的那些氨基酸，在 此并入作參考。另外，應(yīng)注意在氨基酸序列的起始或者末尾的破折號(hào)表示與一或多個(gè)氨基 酸殘基的其它序列、氨基末端基團(tuán)如NH2或者羧基末端基團(tuán)如C00H的肽鍵。如本文所用，“天然發(fā)生的氨基酸”是指在多肽中存在的20個(gè)L-氨基酸。如本文所用，“非天然氨基酸”是指具有與天然氨基酸相似的結(jié)構(gòu)但是在結(jié)構(gòu)上被 修飾以模擬天然氨基酸的結(jié)構(gòu)和反應(yīng)性的有機(jī)化合物。非天然發(fā)生的氨基酸因此包括例如 除了所述20個(gè)天然發(fā)生的氨基酸之外的氨基酸或者氨基酸類似物，包括但不限于氨基酸 的D-立體異構(gòu)體(isostereomers)。舉例的非天然氨基酸在本文描述且為本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知。如本文所用，DNA構(gòu)建體是單鏈或者雙鏈的、線性或者環(huán)狀DNA分子，其含有以在 自然中未發(fā)現(xiàn)的方式組合和并列的DNA節(jié)段。DNA構(gòu)建體以人工操縱的結(jié)果存在，包括操縱
18的分子的克隆及其它拷貝。如本文所用，DNA節(jié)段是具有特定屬性的較大的DNA分子的一部分。例如，編碼特 定多肽的DNA節(jié)段是較長的DNA分子的一部分，如質(zhì)?；蛘哔|(zhì)粒片段，當(dāng)從5’至3’方向讀 取時(shí)，編碼該特定多肽的氨基酸序列。如本文所用，術(shù)語“多核苷酸”是指從5’至3’末端讀取的脫氧核糖核苷酸或者 核糖核苷酸的單鏈或者雙鏈聚合物。多核苷酸包括RNA和DNA，可以分離自天然來源、在體 外合成，或者從天然分子與合成分子的組合中制備。在本文多核苷酸分子的長度以核苷酸 (縮寫為nt)或者堿基對(duì)(縮寫為bp)表示。術(shù)語“核苷酸”在上下文允許的情況下用于 單鏈和雙鏈分子。當(dāng)該術(shù)語用于雙鏈分子時(shí)，其用于描述全長，且應(yīng)理解為等同于術(shù)語堿基 對(duì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員意識(shí)到雙鏈多核苷酸的兩條鏈的長度可以略有不同，因此其末端可以 錯(cuò)列；因此雙鏈多核苷酸分子內(nèi)的所有核苷酸均不可配對(duì)。這種未配對(duì)的末端的長度通常 不超過20個(gè)核苷酸。如本文所用，兩個(gè)蛋白質(zhì)或者核酸之間的“相似性”是指蛋白質(zhì)的氨基酸序列或者 核酸的核苷酸序列之間的關(guān)系。相似性可基于殘基序列及其中包含的殘基的相同性和/或 同源性程度。評(píng)估蛋白質(zhì)或者核酸之間相似性程度的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知。例如， 在評(píng)估序列相似性的一個(gè)方法中，以產(chǎn)生序列之間最大水平相同性的方式排列兩個(gè)氨基酸 或者核苷酸序列?！跋嗤浴笔侵赴被峄蛘吆塑账嵝蛄斜３植蛔兊某潭?。氨基酸序列以及 某種程度上的核苷酸序列的排列對(duì)比也可考慮氨基酸(或者核苷酸)中的保守差異和/或 常見取代。保守差異是保持所包含的殘基的物理-化學(xué)性質(zhì)的那些差異。序列對(duì)比可以是 整體對(duì)比(對(duì)比序列的全長序列及包含所有殘基的對(duì)比)或者局部對(duì)比(僅包括最相似區(qū) 域的序列部分的對(duì)比)?！跋嗤浴本哂斜绢I(lǐng)域公認(rèn)的含義，可以使用公開的技術(shù)計(jì)算(見例如 Computational Molecular Biology, Lesk，Α. Μ.，ed.，Oxford University Press， New York，1988 ；Biocomputing :Informatics and Genome Projects，Smith，D. W.，ed.， Academic Press，New York，1993 ；Computer Analysis of Sequence Data，Part I， Griffin，A. M.，and Griffin，H. G.，eds.，Humana Press，New Jersey,1994 ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje，G.，Academic Press，1987 ；以及 Sequence Analysis Primer，Gribskov，M. and Devereux, J.，eds.，MStockton Press，New York， 1991)。雖然有許多方法測(cè)量?jī)蓚€(gè)多核苷酸或者多肽之間的相同性，術(shù)語“相同性”仍為本 領(lǐng)域技術(shù)人員熟知(Carillo，H. &Lipton，D.，SIAMJ Applied Math 48 1073 (1988)) 如本文所用，同源(關(guān)于核酸和/或氨基酸序列)是指大于或者等于25%的序 列同源性，典型為大于或者等于25%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%或者95%的 序列同源性；如果需要?jiǎng)t可以指定精確的百分比。對(duì)于本發(fā)明，除非特別指出，則術(shù)語“同 源性”與“相同性”通?？苫Q使用。通常地，為了確定同源性或者相同性百分比，對(duì)比序 列由此獲得最高級(jí)別的匹配(見例如Computational Molecular Biology, Lesk, A.M.， ed. , Oxford University Press, New York,1988 ；Biocomputing Informatics andGenome Projects, Smith, D. W., ed. , Academic Press, New York, 1993 ；Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. , and Griffin, H. G. , eds. , Humana Press, New Jersey, 1994 ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G. , AcademicPress, 1987 ；以及 Sequence Analysis Primer, Gribskov, Μ. and Devereux, J. , eds. , M Stockton Press,New York, 1991 ；Carilloet al. (1988)SIAMJAppliedMath 48 :1073)。通 過序列同源性，保守氨基酸的數(shù)目通過標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比算法程序確定，可以使用每個(gè)供應(yīng)商確定 的默認(rèn)空位罰分(default gap penalties).基本同源的核酸分子通常在中等嚴(yán)格或者高 嚴(yán)格條件下沿著感興趣的核酸的長度雜交。也包含這樣的核酸分子，其含有簡(jiǎn)并密碼子代 替雜交核酸分子中的密碼子。任兩個(gè)分子是否具有至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 者99 % “相同，，或者“同源”的核苷酸序列或者氨基酸序列，可以使用已知的計(jì)算機(jī)算法確 定，如“FASTA”程序，使用 Pearson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444 中所 述默認(rèn)參數(shù)(其它程序包括GCG程序包(Devereux，J.，et al, Nucleic Acids Research 12(1) :387(1984))、BLASTP、BLASTN、FASTA(Atschul, S. F.，et al.，JMolec Biol 215 403 (1990)) ；Guide toHuge Computers, Martin J. Bishop, ed. , Academic Press, San Diego，1994 以及 Carillo et al. 1988) SIAMJAppliedMath 48 :1073)。例如，美國國立生物 技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫的BLAST函數(shù)可用于確定相同性。其它商購或者公開的程序包 括DNAStar“MegAlign，，程序(Madison,WI)和University offfisconsin Genetics Computer Group (UffG) “Gap”程序(Madison WI)。蛋白質(zhì)和/或核酸分子的同源性或者相同性百分 比可以通過例如使用GAP計(jì)算機(jī)程序?qū)Ρ刃蛄行畔⒋_定(例如Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol. 48 :443，由 Smith and Waterman ((1981) Adv. Appl. Math. 2 :482 改進(jìn))。簡(jiǎn)而 言之，GAP程序?qū)⑾嗨菩远x為相似的被比對(duì)標(biāo)志(即核苷酸或氨基酸)的數(shù)量除以兩條 序列中較短一條中所述標(biāo)志的總數(shù)的結(jié)果。GAP程序的默認(rèn)參數(shù)可包括(1) 一元比較矩陣 (包含1這個(gè)值表示恒等(identities)，O表示非恒等(non-identities))和加權(quán)比較矩陣 (Gribskov et al. (1986) Nucl. Acids Res. 14 :6745)，如 Schwartz 禾口 Dayhoff，eds.，ATLAS OF PROTEIN SEQUENCEAND STR UCTURE, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358(1979)所述；(2)每一缺口罰分3. 0，每一缺口中的每個(gè)符號(hào)額外罰分0. 10;以 及⑶末端缺口無罰分。因此，如本文所用，術(shù)語“相同性”或者“同源性”是指待檢和參考多肽或者多核苷 酸之間的對(duì)比。如本文所用，術(shù)語至少“90%相同”是指相對(duì)于參考多肽的核酸或者氨基酸 序列從90至99. 99的相同性百分比。在90%或者更高水平的相同性表示這樣的事實(shí)，即例 如假定對(duì)比長度為100個(gè)氨基酸的待檢和參考多肽，待檢多肽中不超過10% (即100個(gè)中 的10個(gè))的氨基酸與參考多肽不同。在待檢和參考多核苷酸之間可以進(jìn)行相似對(duì)比。這 種差異可以表現(xiàn)為在多肽全長隨機(jī)分布的點(diǎn)突變，或者其可以群集在不同長度直至最大允 許長度的一或多個(gè)位置，例如10/100氨基酸差異(大約90%相同性)。差異確定為核酸或 者氨基酸取代、插入或者缺失。在大約85-90%以上的特異性或者相同性水平，結(jié)果應(yīng)與所 述程序和空位參數(shù)集無關(guān)；這種高水平相同性可易于評(píng)估，通常通過人工對(duì)比而不依賴于 軟件進(jìn)行。如本文所用，對(duì)比序列是指使用同源性(相似性和/或相同性)對(duì)比核苷酸或者 氨基酸序列種相應(yīng)位置。通常，對(duì)比具有50%或者更高相同性的兩或多個(gè)序列。對(duì)比的序 列是指在相應(yīng)位置對(duì)比的兩或多個(gè)序列，且可包括衍生自RNA的對(duì)比序列，如EST及其它 cDNA，以基因組DNA序列對(duì)比。
如本文所用，“引物”是指在適當(dāng)條件下合適的緩沖液及在合適溫度下，可作為模 板指導(dǎo)的DNA合成的起始點(diǎn)的核酸分子(例如存在四個(gè)不同的三磷酸核苷和聚合劑，如DNA 聚合酶、RNA聚合酶或者逆轉(zhuǎn)錄酶)。應(yīng)意識(shí)到某些核酸分子可作為“探針”和作為“引物”。 然而，引物具有3’羥基基團(tuán)以進(jìn)行延伸。引物可用于各種方法中，包括例如聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)、逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)-PCR, RNA PCR、LCR、多重 PCR、鍋柄式 PCR、捕獲 PCR、表達(dá) PCR、3'和 5' RACE、原位PCR、連接介導(dǎo)的PCR以及其它擴(kuò)增方案。如本文所用，“引物對(duì)”是指一組引物，其包含與待擴(kuò)增(例如通過PCR)的序列的 5’末端雜交的5’ (上游)引物以及與待擴(kuò)增序列的3’末端的互補(bǔ)體雜交的3’ (下游)引 物。如本文所用，“特異性雜交”是指通過互補(bǔ)堿基配對(duì)，核酸分子(例如寡核苷酸) 與靶核酸分子退火。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知影響特異性雜交的體外和體內(nèi)參數(shù)，如特定分子 的長度和成分。與體外雜交特別相關(guān)的參數(shù)進(jìn)一步包括退火和洗滌溫度、緩沖液成分以及 鹽濃度。舉例的除去非特異性結(jié)合的核酸分子的高嚴(yán)格洗滌條件是0. 1XSSPE、0. 1% SDS、 65°C，中等嚴(yán)格條件是0. 2XSSPE、0. SDS、50°C。本領(lǐng)域已知相等的嚴(yán)格條件。技術(shù)人 員可易于調(diào)節(jié)這些參數(shù)以實(shí)現(xiàn)核酸分子與適于特定應(yīng)用的靶核酸分子的特異性雜交。當(dāng)提 及兩個(gè)核苷酸序列時(shí)，互補(bǔ)是指兩個(gè)核苷酸序列能雜交，典型在相對(duì)的核苷酸之間具有低 于25%、15%或者5%的錯(cuò)配。如果需要，將指定互補(bǔ)性百分比。通常，選擇兩個(gè)分子，由此 其在高嚴(yán)格條件下雜交。如本文所用，與產(chǎn)物基本相同是指足夠相似，由此感興趣的性質(zhì)未改變，由此所述 基本相同的產(chǎn)物可用于代替該產(chǎn)物。如本文所用，也應(yīng)理解術(shù)語“基本相同”或者“相似”隨著上下文的語境而有所變 化。如本文所用，等位基因變體或者等位基因變異是指基因的兩或多種改變形式占據(jù) 相同染色體位置。等位基因變異是通過突變自然產(chǎn)生的，且可以導(dǎo)致群內(nèi)表型多態(tài)性。基 因突變可以是沉默的(編碼的多肽中無變化)，或者可以編碼具有改變的氨基酸序列的多 肽。術(shù)語“等位基因變體”在本文也用于表示有基因的等位基因變體編碼的蛋白質(zhì)。通常， 基因的參考形式編碼來自種群或者物種的單個(gè)參考成員的多肽的野生型形式和/或優(yōu)勢(shì) 型形式。通常，包括物種之間和之中的變體的等位基因變體與相同物種的野生型或者優(yōu)勢(shì) 型形式典型具有至少80%、90%或者更高的氨基酸相同性；相同性程度依賴于基因以及對(duì) 比是種間還是種內(nèi)對(duì)比。通常地，種內(nèi)等位基因變體與野生型和/或優(yōu)勢(shì)型形式具有至少 大約80%、85%、90%或95%或者更高的相同性，包括與多肽的野生型和/或優(yōu)勢(shì)型形式具 有96%、97%、98%、99%或者更高的相同性。本文提及的等位基因變體通常是指相同種的 成員之中的蛋白質(zhì)變異。如本文所用，“等位基因”與“等位基因變體”在本文可互換使用，是指基因的另一 形式或者其一部分。等位基因占據(jù)同源染色體上的相同座或者位置。當(dāng)一個(gè)對(duì)象具有基因 的兩個(gè)相同的等位基因時(shí)，稱該對(duì)象對(duì)于該基因或者等位基因是純合的。當(dāng)一個(gè)對(duì)象具有 基因的兩個(gè)不同的等位基因時(shí)，稱該對(duì)象對(duì)于該基因是雜合的。特定基因的等位基因在一 個(gè)核苷酸或者幾個(gè)核苷酸上可以彼此不同，且可以包含核苷酸的取代、缺失和插入。基因的 等位基因也可以是含有突變的基因形式。
如本文所用，種變體是指不同種之中的多肽變體，包括不同的哺乳動(dòng)物種，如小鼠 和人。如本文所用，剪接變體是指通過對(duì)基因組DNA的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行不同處理而產(chǎn)生 的變體，產(chǎn)生一種以上類型的mRNA。如本文所用，修飾是指對(duì)多肽的氨基酸序列或者核酸分子的核苷酸序列的修飾， 分別包括氨基酸和核苷酸的缺失、插入和置換。修飾多肽的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，如 通過使用重組DNA技術(shù)進(jìn)行修飾。如本文所用，術(shù)語“啟動(dòng)子”是指基因的一部分，其含有使得RNA聚合酶結(jié)合及轉(zhuǎn) 錄起始的DNA序列的。啟動(dòng)子序列通常但不總是在基因的5’非編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)。如本文所用，分離的或者純化的多肽或者蛋白質(zhì)或者其生物活性部分基本上沒有 來自該蛋白質(zhì)衍生自其中的細(xì)胞或者組織的細(xì)胞材料或者其它污染蛋白質(zhì)，或者當(dāng)其是化 學(xué)合成時(shí)基本上沒有化學(xué)前體或者其它化合物。如果制備物看起來不存在通過本領(lǐng)域技 術(shù)人員用于評(píng)估這種純度的標(biāo)準(zhǔn)分子方法確定可易于檢測(cè)的雜質(zhì)，則可以確定其是基本純 的，所述標(biāo)準(zhǔn)分析方法薄層層析(TLC)、凝膠電泳和高效液相層析(HPLC)；或者是足夠純 的，由此進(jìn)一步純化不改變所述物質(zhì)的物理和化學(xué)性質(zhì)，如酶和生物活性。本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知純化化合物產(chǎn)生化學(xué)基本純的化合物的方法。然而，化學(xué)基本純的化合物可以是立體 異構(gòu)體的混合物。在這種情況中，進(jìn)一步純化可增加化合物的特異性活性。術(shù)語基本上沒有細(xì)胞材料包括這樣的蛋白質(zhì)制備物，其中所述蛋白質(zhì)與其從中分 離或者重組產(chǎn)生的細(xì)胞的細(xì)胞成分分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語基本沒有細(xì)胞材料包括 酶蛋白質(zhì)制備物，其具有低于大約30% (干重)的非酶蛋白質(zhì)(在本文也稱作污染蛋白 質(zhì))，通常低于大約20%的非酶蛋白質(zhì)或者10%的非酶蛋白質(zhì)，或者低于大約5%的非酶蛋 白質(zhì)。當(dāng)所述酶蛋白質(zhì)是重組產(chǎn)生的，其也基本上沒有培養(yǎng)基，即存在低于大約20%、10% 或者5%酶蛋白質(zhì)制備物體積的培養(yǎng)基。如本文所用，術(shù)語基本沒有化學(xué)前體或者其它化合物包括這樣的酶蛋白質(zhì)制備 物，其中所述蛋白質(zhì)與參與其合成的化學(xué)前體或者其它化合物分離。該術(shù)語包括具有低于 大約30 % (干重)、20 %、10 %、5 %或者更低的化學(xué)前體或者非酶化合物或者成分的酶蛋白 質(zhì)制備物。如本文所用，關(guān)于例如合成的核酸分子或者合成的基因或者合成的肽提及的術(shù)語 合成是指核酸分子或者多肽分子是通過重組方法和/或通過化學(xué)合成方法產(chǎn)生。如本文所用，通過使用重組DNA方法通過重組發(fā)生產(chǎn)生是指使用熟知的分子生物 學(xué)方法表達(dá)由克隆的DNA編碼的蛋白質(zhì)。如本文所用，載體(或者質(zhì)粒)是指用于將異源核酸導(dǎo)入細(xì)胞以使其表達(dá)或者復(fù) 制的獨(dú)立的元件。載體典型保留附加體，但是可以設(shè)計(jì)為實(shí)現(xiàn)基因或者其一部分整合進(jìn)基 因組的染色體中。也包含這樣的載體，其是人工染色體，如酵母人工染色體和哺乳動(dòng)物人工 染色體。這種載體的選擇和使用為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知。如本文所用，表達(dá)載體包括能表達(dá)與調(diào)節(jié)序列可操縱地連接的DNA的載體，所述 調(diào)節(jié)序列如啟動(dòng)子區(qū)域，其能實(shí)現(xiàn)這種DNA片段的表達(dá)。這種額外的節(jié)段可包括啟動(dòng)子和 終止子序列，任選可包含一或多個(gè)復(fù)制起源、一或多個(gè)選擇標(biāo)記、增強(qiáng)子、聚腺苷酸化信號(hào) 等。表達(dá)載體通常衍生自質(zhì)?；蛘卟《綝NA，或者可以含有這兩個(gè)元件。因此，表達(dá)載體是指重組DNA或者RNA構(gòu)建體，如質(zhì)粒、噬菌體、重組病毒或者其它載體，在導(dǎo)入合適的宿主細(xì) 胞中使得克隆的DNA表達(dá)。合適的表達(dá)載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，包括在真核細(xì)胞和/ 或原核細(xì)胞中可復(fù)制的那些載體，以及保留附加體或者整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組中的那些載 體。如本文所用，載體還包括“病毒載體”。病毒載體是工程化的病毒，其與外源基因可 操縱地連接以將該外源基因轉(zhuǎn)移(作為運(yùn)載體或者穿梭載體)進(jìn)細(xì)胞中。如本文所用，當(dāng)提及DNA節(jié)段時(shí)所用術(shù)語“可操縱地連接”是指排列該節(jié)段，由此 其發(fā)揮與指定目的一致的功能，例如轉(zhuǎn)錄在啟動(dòng)子中開始，并且通過編碼節(jié)段行進(jìn)至終止 子。如本文所用，術(shù)語“評(píng)估(assessing) ”是指包括在數(shù)量上和性質(zhì)上確定獲得的樣 品中存在的蛋白酶或者其結(jié)構(gòu)域的活性絕對(duì)值，以及獲得的指數(shù)、比率、百分比、目測(cè)或者 其它表示活性水平的數(shù)值。評(píng)估可以是直接或者間接評(píng)估，實(shí)際檢測(cè)的化學(xué)物種當(dāng)然不需 要是蛋白酶解產(chǎn)物自身，但是可例如是其衍生物或者一些進(jìn)一步的物質(zhì)。例如，檢測(cè)補(bǔ)體蛋 白質(zhì)的裂解產(chǎn)物，如通過SDS-PAGE以及考馬斯藍(lán)染色蛋白質(zhì)進(jìn)行。如本文所用，生物活性是指化合物的體內(nèi)活性或者當(dāng)在體內(nèi)給予化合物、組合物 或者其它混合物時(shí)獲得的生理反應(yīng)。因此，生物活性包括這種化合物、組合物和混合物的治 療作用和藥物活性。生物活性可以在設(shè)計(jì)為檢測(cè)或者使用這種活性的體外系統(tǒng)中觀測(cè)。因 此，對(duì)于本發(fā)明而言，蛋白酶的生物活性是其中多肽被水解的其催化活性。如本文所用，當(dāng)提及兩個(gè)核酸序列時(shí)所用術(shù)語“相等”是指這兩個(gè)序列編碼相同的 氨基酸序列或者相等的蛋白質(zhì)。當(dāng)相等用于描述兩個(gè)蛋白質(zhì)或者肽時(shí)，是指這兩個(gè)蛋白質(zhì) 或者肽具有基本相同的氨基酸序列，僅具有基本上不改變所述蛋白質(zhì)或者肽的活性或者功 能的氨基酸取代。當(dāng)相等是指性質(zhì)時(shí)，所述性質(zhì)不需要表現(xiàn)為相同程度(例如兩個(gè)多肽可 以呈現(xiàn)不同速度的相同類型酶活性)，但是所述活性通?；鞠嗤Ｈ绫疚乃?，“調(diào)節(jié)”或者“改變”是指分子如蛋白質(zhì)的活性改變。舉例的活性包括 但不限于生物活性，如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。調(diào)節(jié)可包括增強(qiáng)活性(即正調(diào)節(jié)或者激動(dòng)活性)、降低活 性(即負(fù)調(diào)節(jié)或者抑制)或者活性的任何其它改變(如周期性、頻率、持續(xù)時(shí)間、動(dòng)力學(xué)或 者其它參數(shù)的改變)。調(diào)節(jié)可以與背景相關(guān)，通常是與指定狀態(tài)對(duì)比，例如野生型蛋白質(zhì)、組 成型狀態(tài)蛋白質(zhì)，或者在指定細(xì)胞類型或者狀況中表達(dá)的蛋白質(zhì)。如本文所用，組合物是指任何混合物。其可以是溶液、懸浮液、液體、粉末、糊劑、水 溶液、非水溶液或者其任何組合。如本文所用，組合是指兩或多個(gè)項(xiàng)目之間或者之中的任何關(guān)聯(lián)。所述組合可以是 兩或多個(gè)單獨(dú)的項(xiàng)目，如兩個(gè)組合物或者兩個(gè)集合，可以是其混合物，如兩或多個(gè)項(xiàng)目的單 混合物，或者其任何變化。所述組合的原件通常聯(lián)合或者相關(guān)地起作用。如本文所用，試劑盒是經(jīng)包裝的組合，其任選包含其它元件，如另外的試劑以及所 述組合或者其元件的使用說明書。如本文所用，“疾病或者失調(diào)”是指由一些原因或者狀況導(dǎo)致的生物體內(nèi)的病理狀 況，所述原因或狀況包括但不限于感染、獲得性狀況、遺傳狀況，特征在于可鑒別的癥狀。本 發(fā)明感興趣的疾病和失調(diào)是可通過免疫球蛋白治療的那些疾病和失調(diào)。如本文所用，“治療”患病對(duì)象是指所述對(duì)象的癥狀在治療后部分或者全部減輕，或者保持穩(wěn)定。因此，治療包括預(yù)防、治療和/或治愈。預(yù)防是指防止?jié)撛诘募膊『?或防 止疾病的癥狀惡化或者進(jìn)展。治療還包括本發(fā)明提供的免疫球蛋白制備物和組合物的任何 藥物學(xué)應(yīng)用。如本文所用，藥物有效制劑包括任何治療劑或者生物活性劑，包括但不限于例如 麻醉劑、血管收縮劑、分散劑、常規(guī)治療藥物，包括小分子藥物和治療性蛋白質(zhì)。如本文所用，治療是指使得病癥、失調(diào)或者疾病的癥狀或者其它指征得以改善或 者另外有益地改變的任何方式。如本文所用，治療作用是指治療對(duì)象獲得的結(jié)果，其改變、典型地改善或者減輕疾 病或者病癥的癥狀或者治愈疾病或者病癥。治療有效量是指組合物、分子或者化合物在給 予對(duì)象后產(chǎn)生治療作用的量。如本文所用，術(shù)語“對(duì)象”是指動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物如人。如本文所用，患者是指對(duì)象是人。如本文所用，通過治療如通過給予藥物組合物或者其它治療劑使特定疾病或失調(diào) 的癥狀得以改善是指歸因于給予所述組合物或者治療劑或者與之相關(guān)的癥狀的任何減輕， 無論持久或是短暫、持續(xù)或者瞬時(shí)的減輕。如本文所用，防止或者預(yù)防是指降低疾病或者病癥發(fā)生的危險(xiǎn)的方法。如本文所用，“治療有效量”或者“治療有效劑量”是指含有化合物的制劑、化合物、 材料或者組合物至少足以產(chǎn)生治療作用的數(shù)量。因此，治療有效量是預(yù)防、治愈、改善、阻止 或者部分阻止疾病或者失調(diào)的癥狀必需的數(shù)量。如本文所用，單位劑量形式是指適于人和動(dòng)物對(duì)象的物理分離的單位，且單獨(dú)包裝。如本文所用，單劑量配制物是指直接給予的配制物。如本文所用，“制品”是指生產(chǎn)和銷售的產(chǎn)物。如本申請(qǐng)書中所用，該術(shù)語包括在包 裝物品中包含的IG和透明質(zhì)酸酶組合物。如本文所用，液體是指可以流動(dòng)的任何組合物。因此液體包括半固體、糊劑、溶液、 水相混合物、凝膠、洗劑、乳液形式的組合物及其它這種組合物。如本文所用，“試劑盒”是指本發(fā)明提供的組合物以及另一物質(zhì)的組合，用于包括 但不限于激活、給予、診斷和評(píng)估生物活性或者性質(zhì)的目的。試劑盒任選包括使用說明書。如本文所用，細(xì)胞提取物或者裂解物是指從裂解或者破壞的細(xì)胞中制備的制備物 或者一部分。如本文所用，動(dòng)物包括任何動(dòng)物，例如但不限于靈長類動(dòng)物，包括人、大猩猩和 猴；嚙齒動(dòng)物，如小鼠和大鼠；禽類，如雞；反芻動(dòng)物，如山羊、牛、鹿、綿羊(sheep)；綿羊 (ovine)，如豬及其它動(dòng)物。非人動(dòng)物是除了人之外的預(yù)期動(dòng)物。本發(fā)明提供的酶來自任何 來源，動(dòng)物、植物、原核生物和真菌。大多數(shù)酶源自動(dòng)物，包括源自哺乳動(dòng)物。如本文所用，對(duì)照物是指與檢測(cè)樣品基本相同的樣品，不同之處是其未用檢測(cè)參 數(shù)處理，或者如果是血漿樣品，則其可以來自未受感興趣的狀況影響的正常志愿者。對(duì)照也 可以是內(nèi)部對(duì)照。如本文所用，除非特別指出，則單數(shù)形式“一種”包括其復(fù)數(shù)形式。因此，例如提及 一種化合物包含“一種胞外結(jié)構(gòu)域”是指具有一或多個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域的化合物。
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如本文所用，范圍和量可以特定數(shù)值或范圍的“大約值”表示。大約也包括精確量。 因此，“大約5個(gè)堿基”是指“大約5個(gè)堿基”以及“5個(gè)堿基”。如本文所用，“任選地”是指隨后描述的事件或者情況發(fā)生或者不發(fā)生，且該描述 包括其中所述事件或者情況發(fā)生的實(shí)例以及其中所述事件或者情況不發(fā)生的事例。例如， 任選取代的基團(tuán)是指該基團(tuán)未被取代或者被取代。如本文所用，除非特別指出，則任何保護(hù)性基團(tuán)、氨基端及其它化合物的縮寫與 其通常用途、公認(rèn)的縮寫或者 IUPAC-IUB Commission onBiochemical Nomenclature (見 (1972)MochenLli 1726)所述一致。B.免疫球蛋白(IG)的皮下給予本發(fā)明提供了通過皮下給予免疫球蛋白(IG)組合可溶性透明質(zhì)酸酶治療IG可 治療的疾病和病癥的方法和應(yīng)用。因此，本發(fā)明還提供了 IG與可溶性透明質(zhì)酸酶的組合。 借助于透明質(zhì)酸酶在胞外基質(zhì)中分解透明質(zhì)酸的能力，透明質(zhì)酸酶便于治療劑的皮下輸 注。免疫球蛋白是一種治療劑，主要通過靜脈內(nèi)給予以治療患有免疫缺陷的個(gè)體，稱作IVIG 療法。IG在存在透明質(zhì)酸酶的條件下的生物利用度高于IVIG治療中IG的生物利用度的 90%。因此，在本發(fā)明提供的方法和應(yīng)用中，透明質(zhì)酸酶與IG的組合治療使得可以皮下給 予免疫球蛋白，給予劑量和頻率與IVIG相似。因此，例如在本發(fā)明提供的方法和應(yīng)用中， 當(dāng)IG在存在可溶性透明質(zhì)酸酶的條件下皮下給予時(shí)，對(duì)于特定指征可以普遍的IVIG劑量 每月給予一次。此外，由于透明質(zhì)酸酶作用是打開皮膚流動(dòng)通道，其可以加快輸注速度。因 此，皮下給予與透明質(zhì)酸酶共同配制和/或共同給予的IG可以提高輸注速度，從而減少IG 療法的輸送時(shí)間。缺陷的抗體形成在大多數(shù)原發(fā)性免疫缺陷病(PID)中是最常見的異常；其通常由 血清免疫球蛋白減少反映出來，由此導(dǎo)致尤其是竇肺呼吸道(sinopulmonary tract)對(duì)細(xì) 菌感染的易感性增加。在抗體缺陷的個(gè)體中發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白水平降低，如χ-連鎖的血丙 種球蛋白缺乏、免疫球蛋白重鏈缺失、選擇性免疫球蛋白G(IgG)亞類缺陷、常見變異型免 疫缺陷病，或者X-連鎖的高免疫球蛋白M綜合征。降低的免疫球蛋白水平也見于由于T 細(xì)胞和B細(xì)胞缺陷兒具有聯(lián)合的免疫缺陷的個(gè)體，例如但不限于重癥聯(lián)合免疫缺陷病或者 Wiskott Aldrich 綜合征(IUIS Scientific Committee，1999)?；加羞@些疾病的個(gè)體需要使用免疫球蛋白產(chǎn)品進(jìn)行替代治療，以預(yù)防或者降低感 染的嚴(yán)重性。最初的免疫球蛋白替代治療通過肌內(nèi)途徑給予，但是從1981年開始已經(jīng)通過 靜脈內(nèi)(IV)途徑治療絕大多數(shù)患者。目前在美國大多數(shù)免疫球蛋白產(chǎn)品是通過IV給予。 然而，最近已經(jīng)開發(fā)了通過皮下給予的免疫球蛋白制備物(Gardulf et al. (2006)Curr. Opin.Allergy Clin.Immunol. ,6434~42 ；Gardulf et al. (2006)J Clin.Immunol. , 26
177-85 ；Ochs etal. (2006) J Clin. Immunol.，26 :265_73)。至少一種產(chǎn)品 Vivaglobin 已
經(jīng)被許可用于皮下給予。目前使用的所有免疫球蛋白制備物均配制濃度為16%，相比之下IVIG制備物配 制物濃度為5-12%。相對(duì)于IV制備物的更高的濃度允許更小的輸注體積，這種制備物不 可以靜脈內(nèi)輸注。這種皮下給予免疫球蛋白替代治療方法被認(rèn)為是有效、安全的且也為患 者高度接受，因?yàn)槠渚哂休^低的全身性不利反應(yīng)的危險(xiǎn)，且與每月靜脈內(nèi)輸注一次相比導(dǎo) 致更高的波谷血清 IgG濃度(Gardulf et al. (1995) J Adv. Nurs. ,21 :917_27 ；Gardulf etal. (1993) Clin. Exp. Immunol. ,92 200-4 ；Gardulfet al. (1991) Lancet, 338 162—6)。皮下給予免疫球蛋白的生物利用度通常低于靜脈內(nèi)輸注的生物利用度。免疫球蛋 白在血液中是可立即利用的，且在3-5天內(nèi)緩慢與血管外區(qū)室平衡(Schiff et al. (1986) J.Clin. Immunol.，6 :256_64)。皮下給予的免疫球蛋白從皮下間隙緩慢吸收進(jìn)血液中， 同時(shí)與血管外區(qū)室平衡；不存在高靜脈內(nèi)穿刺。生物利用度還未廣泛研究，但是在近來 的ZLB-Behring制備(即Vivaglobin )試驗(yàn)中個(gè)，通過測(cè)量曲線下面積(AUC)確定，僅 67%的免疫球蛋白被吸收，因此推薦劑量為IV劑量的137% (Ochs et al. (2006) J Clin. Immunol. ,26 :265_73)。盡管存在對(duì)比兩個(gè)不同途徑和給予頻率的AUC的技術(shù)難題，但是在 兔中經(jīng)皮內(nèi)給予免疫球蛋白的研究提示通過皮下給予途徑的生物利用度降低。這也許是由 于大的蛋白質(zhì)分子的吸收模式所致，其不易通過毛細(xì)血管壁擴(kuò)散，必須通過淋巴系統(tǒng)吸收 (Supersaxo et al. (1990) Pharm. Res.，7 167-9)。除了與皮下給予IG相關(guān)的生物利用度的問題之外，SC給予的主要缺點(diǎn)是在每個(gè) 部位僅可以輸注很小體積，迫使需要每周或者每?jī)芍苁褂枚鄠€(gè)部位。通常地，可以在每個(gè)部 位使用大約20ml的16%的溶液輸注；成人患者接受400mg/kg體重(BW)因此需要每周至少 3個(gè)部位或者每月至少12個(gè)部位。即使每周或者每?jī)芍芙o予一次比每月靜脈內(nèi)給予一次對(duì) 于維持更好的波谷水平具有額外益處，但是需要多個(gè)針頭刺入對(duì)于許多患者是個(gè)威懾。SC間隙由充填凝膠樣物質(zhì)_透明質(zhì)酸_的膠原網(wǎng)形成。透明質(zhì)酸半衰期為大約5 小時(shí)，與通過液體流經(jīng)組織的抗性密切相關(guān)。透明質(zhì)酸酶暫時(shí)地消化透明質(zhì)酸，從而促進(jìn)輸 注進(jìn)皮下間隙中。所述透明質(zhì)酸在24小時(shí)內(nèi)恢復(fù)，導(dǎo)致無可觀測(cè)的改變。由于透明質(zhì)酸酶 通過葡糖胺聚糖降解打開細(xì)胞間隙中的通道的能力，因此給予可溶性透明質(zhì)酸酶使得分子 擴(kuò)散，從而改善這種共配制或者共給予的分子的生物利用度、藥動(dòng)學(xué)和/或藥效學(xué)特性。在一些實(shí)施例中，與透明質(zhì)酸酶通過皮下共同給予的IG的生物利用度是IVIG 的生物度的 70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者 100%。通常，所述生物利用度高于90%。進(jìn)一步地，與可溶性透明質(zhì)酸酶的共同給予使得 可以在一個(gè)皮下輸注部位大體積輸注。例如，直至600ml或者更大體積的IG可以在一個(gè) 部位給予，例如在一次給予時(shí)可以在一個(gè)部位給予200ml、300ml、400ml、500ml、600ml或者 更多。因此，配制為5-12%濃度的IG制備物可以與可溶性透明質(zhì)酸酶在皮下共同給予， 劑量與每月給予一次IVIG的劑量相同，例如給予劑量是或者是大約100mg/kg、200mg/kg、 300mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg或者更多。該劑量可以是一次給予，或者分成多 次每天或者每周給予，如一周一次或者每?jī)芍芤淮巍⑷蛩闹芙o予一次或者組合這些給予 方式。因此，通過皮下給予存在可溶性透明質(zhì)酸酶的IG，解決了與皮下給予IG相關(guān)的一或 全部問題。因此，利用透明質(zhì)酸酶的擴(kuò)散性質(zhì)，在存在可溶性透明質(zhì)酸酶的條件下皮下給予 IG使得可以每月給予一次IVIG的頻率給予IVIG，同時(shí)保持IVIG的生物利用度。如下章節(jié)描述了舉例的免疫球蛋白和可溶性透明質(zhì)酸酶的組合，生產(chǎn)其的方法以 及使用其治療IG可治療的疾病和病癥的方法。C.免疫球蛋白本發(fā)明提供了免疫球蛋白(IG，也稱作、球蛋白或者IgG)，其可用于與可溶性透 明質(zhì)酸酶組合皮下給予。IG通過調(diào)節(jié)補(bǔ)體活性、抑制自身抗體產(chǎn)生、使巨噬細(xì)胞和B淋巴細(xì) 胞上Fc受體飽和或者封閉以及抑制炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子、趨化因子和金屬蛋白酶產(chǎn)生而強(qiáng)化免疫系統(tǒng)。 IG是在高等動(dòng)物血漿中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)成分，其含有大量具有不同特異性的抗 體。通常地，IG含有血清免疫球蛋白，其可以是任何獨(dú)特型，如IgG及各個(gè)亞類IgA、IgM、 IgD、IgE。不同的免疫球蛋白或者亞類可以不同濃度和特異性存在，根據(jù)例如血漿供體暴 露于抗原(例如通過接種)而可以在免疫球蛋白制備物中有所不同。通常免疫球蛋白以在 血清中正常發(fā)現(xiàn)的量存在(見表2)，但是可以應(yīng)用純化步驟以改變特定的免疫球蛋白類別 的比率。通常，IG制備物含有90%或者更多的IgG，如90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或者更多的IgG。所述免疫球蛋白可以是多克隆或者是單克隆。通 常，所述制備物包括高百分比的單體IgG和低含量的IgA。
權(quán)利要求
一種組合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明質(zhì)酸酶，其中所述組合物配制為皮下給予形式；所述組合物中IG的量與以相同給藥方案靜脈內(nèi)給予時(shí)的量基本相同；所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量足以使得該組合物在治療上有效。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述給藥方案是不超過每月一次給予IG的給藥頻率。
3.權(quán)利要求1或者2任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量是以不超過 每月一次的給予劑量足以實(shí)現(xiàn)IG的皮下給予的量。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的IG和透明質(zhì)酸酶配制為多劑量 給予形式。
5.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的免疫球蛋白(IG)和透明質(zhì)酸酶 配制為每月給予一次的單劑量形式。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組合物中IG的量是或者是大約5克(g)、10g、15g、 20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、 39g 或者 40g。
7.權(quán)利要求5或者6的組合物，其中所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約10單 位-500，000 單位、100 單位-100，000 單位、500 單位-50，000 單位、1000 單位-10，000 單 位、5000單位-7500單位、5000單位-50，000單位，或者1，000單位-10，000單位。
8.權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是液體，且所述液體體積是或者是 大約 100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者 700ml。
9.權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約 IOU/ 克(g)、20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/ g或者300U/g的比率(透明質(zhì)酸酶單位/IG克數(shù))。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述組合物中的透明質(zhì)酸酶是以或以大約50U/克IG的 比率給予。
11.權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的透明質(zhì)酸酶是PH20，或者是 其截短形式。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述PH20選自綿羊、?；蛘呓囟痰娜薖H20。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述截短的人PH20選自具有SEQIDNO :4_9之一所示 的氨基酸序列的多肽，或者其等位基因變體或者其它變體。
14.權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)的組合物，其中所述透明質(zhì)酸酶被稱作rHuPH20。
15.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的IG是從人血漿中純化的。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述組合物中純化自人血漿的IG是通過醇分餾純化。
17.權(quán)利要求16的組合物，其中通過如下任何一種或者多種方法進(jìn)一步純化所述組合 物中的IG:化學(xué)修飾、在pH 4.0在有或者沒有胃蛋白酶的條件下保溫、聚乙二醇(PEG)沉 淀、離子交換層析、酶裂解、溶劑去污劑處理、滲濾或者超濾。
18.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的IG包含IgG、IgA和IgM。
19.權(quán)利要求1-18任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的IG包含超過95%的IgG。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述IgG是單體。
21.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)的組合物，其中組合物中的IG進(jìn)一步含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定賦形劑。
22.權(quán)利要求21的組合物，其中所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定賦形劑選自甘氨酸、麥芽糖、多元醇、 人血清白蛋白、甘露醇以及非離子去污劑中的一種或多種物質(zhì)。
23.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中IG制備物的pH是或者是大約 4. 2-5. 4,4. 6-5. 1 或者 4. 8-5. 0。
24.權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中的IG的蛋白質(zhì)濃度是或者是大 約 5-15% w/v,6-15% w/v 或者 8-12% w/v 的 IG 組合物。
25.權(quán)利要求24的組合物，其中所述蛋白質(zhì)濃度是10%w/v。
26.權(quán)利要求1-25任一項(xiàng)的組合物，其是液體。
27.權(quán)利要求1-26任一項(xiàng)的組合物，其中IG和透明質(zhì)酸酶在單一組合物中。
28.權(quán)利要求1-26任一項(xiàng)的組合物，其中IG和透明質(zhì)酸酶是分開配制的。
29.組合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明質(zhì)酸酶，其中所述組合物配制為皮下給予形式；所述組合物中IG的量與當(dāng)經(jīng)靜脈內(nèi)給予用以治療IG可治療的疾病或者病癥時(shí)的量基 本相同；所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量足以使得該組合物在治療上有效。
30.權(quán)利要求29的組合物，其中所述IG可治療的疾病或者病癥選自免疫缺陷病、繼發(fā) 于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病癥 (CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌無力綜 合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-Woltmann綜合征、繼發(fā)低丙種球蛋白血癥 (包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng)性壞死 性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類天皰瘡、Evans綜合征(包括 具有免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新生兒同種異體免疫血小板減 少癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干細(xì)胞移植、IgM副蛋白血癥神 經(jīng)病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、 輸血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/SJS)、中毒性休克綜合征、阿 爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞腫瘤、外傷，以及細(xì)菌、病毒或 者真菌感染。
31.權(quán)利要求29或者30的組合物，其中所述組合物中IG的量是或者是大約1克(g)、 5g、10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g、80g、90g、100g 或者 200g。
32.權(quán)利要求29-30任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大 約500單位、1000單位、2000單位、5000單位、10，000單位、30，000單位、40，000單位，、 50，000單位、60，000單位、70，000單位、80，000單位、90，000單位、100，000單位或者更多。
33.權(quán)利要求29-32任一項(xiàng)的組合物，其中組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約 10U/g、20U/g、30U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g、200U/g、 300U/g、400U/g、500U/g或者更高的比率(透明質(zhì)酸酶單位/IG克數(shù))。
34.權(quán)利要求29-33任一項(xiàng)的組合物，其被配制為按照每日一次、每周一次、每?jī)芍芤?次、每2-3周一次、每3-4周一次或者每月一次的給藥頻率給藥。
35.權(quán)利要求29-34任一項(xiàng)的組合物，其是單劑量給予形式。
36.權(quán)利要求29-34任一項(xiàng)的組合物，其是多劑量給予形式。
37.組合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明質(zhì)酸酶，其中所述組合物配制為皮下給予形式；所述組合物中IG的蛋白質(zhì)濃度低于16% w/v IG ；所述組合物中透明質(zhì)酸酶的量足以使得該組合物在治療上有效。
38.權(quán)利要求37的組合物，其中IG的蛋白質(zhì)濃度是或者是大約5-15%w/V、6-15%w/ ν,或者 8-12% w/v 的 IG0
39.權(quán)利要求37或者38的組合物，其中IG的蛋白質(zhì)濃度是或者是大約10%w/v。
40.權(quán)利要求37-39任一項(xiàng)的組合物，其中組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約500 單位、1000單位、2000單位、5000單位、10，000單位、30，000單位、40，000單位、50，000單 位、60，000單位、70，000單位、80，000單位、90，000單位、100，000單位或者更多。
41.權(quán)利要求37-40任一項(xiàng)的組合物，其中IG和透明質(zhì)酸酶配制為單一組合物。
42.權(quán)利要求37-40任一項(xiàng)的組合物，其中IG和透明質(zhì)酸酶是分開配制的。
43.權(quán)利要求1-42任一項(xiàng)的組合物在配制治療對(duì)象中IG可治療的疾病或者病癥的藥 物中的應(yīng)用。
44.權(quán)利要求43的應(yīng)用，其中所述IG可治療的疾病或者病癥選自免疫缺陷病、繼發(fā) 于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病癥 (CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌無力綜 合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-Woltmann綜合征、繼發(fā)低丙種球蛋白血癥 (包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng)性壞死 性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類天皰瘡、Evans綜合征(包括 具有免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新生兒同種異體免疫血小板減 少癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干細(xì)胞移植、IgM副蛋白血癥神 經(jīng)病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、 輸血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/SJS)、中毒性休克綜合征、阿 爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞腫瘤、外傷以及細(xì)菌、病毒或者 真菌感染。
45.權(quán)利要求44的應(yīng)用，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是免疫缺陷病，且所述免 疫缺陷病選自常見變異型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏癥、Wiskott-Aldrich 綜合征、重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)、原發(fā)性低丙種球蛋白血癥、抗體缺陷的原發(fā)性免疫缺 陷病、X連鎖無丙種球蛋白血癥(XLA)、嬰兒期低丙球蛋白血癥以及無抗體副腫瘤性小腦變 性。
46.權(quán)利要求44的應(yīng)用，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是繼發(fā)于惡性血液病的 獲得性低丙種球蛋白血癥，所述惡性血液病選自慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、多發(fā)性骨髓瘤 (MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
47.權(quán)利要求44的應(yīng)用，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是炎癥性肌病，所述炎癥 性疾病選自多肌炎、皮肌炎和包涵體肌炎。
48.權(quán)利要求44的應(yīng)用，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是細(xì)菌、病毒或者真菌病 癥，所述細(xì)菌、病毒或者真菌選自B型流感嗜血桿菌、A和B型銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、B族鏈球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎鏈球菌、2和5型腺病毒、巨細(xì)胞 病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病毒_2、甲型 流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小兒脊髓灰質(zhì)炎病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、曲 霉和白色念珠菌。
49.權(quán)利要求1-42任一項(xiàng)的藥物組合物，用于治療對(duì)象中IG可治療的疾病或者病癥。
50.權(quán)利要求49的藥物組合物，其中所述IG可治療的疾病或病癥選自免疫缺陷病、繼 發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病 癥(CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌無力 綜合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-Woltmann綜合征、繼發(fā)低丙種球蛋白血 癥(包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng)性壞 死性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類天皰瘡、Evans綜合征(包 括免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新生兒同種異體免疫血小板減少 癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干細(xì)胞移植、IgM副蛋白血癥神經(jīng) 病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰瘡、輸 血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/SJS)、中毒性休克綜合征、阿爾 茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞腫瘤、外傷，以及細(xì)菌、病毒或者 真菌感染。
51.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是免疫缺陷 病，所述免疫缺陷病選自常見變異型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏癥、 Wiskott-Aldrich綜合征、重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)、原發(fā)性低丙種球蛋白血癥、抗體缺 陷的原發(fā)性免疫缺陷病、X連鎖無丙種球蛋白血癥(XLA)、嬰兒期低丙球蛋白血癥以及無抗 體的副腫瘤性小腦變性。
52.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是繼發(fā)于惡性血液 病的獲得性低丙種球蛋白血癥，所述惡性血液病選自慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、多發(fā)性骨 髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
53.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是炎癥性肌病，所 述炎癥性肌病選自多肌炎、皮肌炎和包涵體肌炎。
54.權(quán)利要求50的藥物組合物，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是細(xì)菌、病毒或者 真菌病癥，所述細(xì)菌、病毒或者真菌選自B型流感嗜血桿菌、A和B型銅綠假單胞菌、金黃 色葡萄球菌、8族鏈球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎鏈球菌、2和5型腺病 毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病 毒_2、甲型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小兒脊髓灰質(zhì)炎病毒、水痘-帶狀 皰疹病毒、曲霉和白色念珠菌。
55.組合物的組合，其包含第一種組合物，其包含配制為皮下單劑量給予的IG，其量為用于以不超過每月一次治 療IG可治療的疾病的量；以及第二種組合物，其包含配制為單劑量給予的可溶性透明質(zhì)酸酶，與以不超過每月一次 進(jìn)行治療的IG組合。
56.權(quán)利要求55的組合，其中所述組合物在雙室容器中或者在單個(gè)容器中彼此分離。
57.權(quán)利要求56的組合，其中所述透明質(zhì)酸酶位于容器中在IG之前給予。
58.權(quán)利要求56或者57的組合，其中所述容器是注射器、試管或者小瓶。
59.權(quán)利要求58的組合，其中所述容器進(jìn)一步包含注射針頭。
60.權(quán)利要求55-59任一項(xiàng)的組合，其中所述可溶性透明質(zhì)酸酶是PH20或者其截短形式。
61.權(quán)利要求60的組合，其中所述PH20選自綿羊、?；蛘呓囟痰娜薖H20。
62.權(quán)利要求61的組合，其中所述截短的人PH20選自具有SEQIDNO :4_9之一所示氨 基酸序列的多肽或者其等位基因變體或者其它變體。
63.權(quán)利要求55-62任一項(xiàng)的組合，其中所述可溶性透明質(zhì)酸酶被稱作rHuPH20。
64.權(quán)利要求55-63任一項(xiàng)的組合，其中所述IG純化自人血漿。
65.權(quán)利要求55-64任一項(xiàng)的組合，其中所述IG是凍干或者在液體中提供的形式。
66.權(quán)利要求65的組合，其中所述液體體積是或者是大約100ml、150ml、200ml、300ml、 400ml、500ml、600ml 或者 700ml。
67.權(quán)利要求55-66任一項(xiàng)的組合，其中所述IG的蛋白質(zhì)濃度是或者是大約5-15%w/ v、6-15%w/v 或者 8-12% w/v IG 組合物。
68.權(quán)利要求67的組合，其中所述蛋白質(zhì)濃度是10%w/Vo
69.權(quán)利要求55-68任一項(xiàng)的組合，其中組合物中的IG是或者是大約5克(g)、10g、 15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、 38g、39g 或者 40g。
70.權(quán)利要求55-69任一項(xiàng)的組合，其中所述透明質(zhì)酸酶在液體中提供。
71.權(quán)利要求70的組合，其中所述液體體積是或者是大約1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、 7ml、8ml、9ml、10ml、20ml 或者 30ml。
72.權(quán)利要求55-71任一項(xiàng)的組合，其中所述透明質(zhì)酸酶是或者是大約10單 位-500，000 單位、100 單位-100，000 單位、500 單位-50，000 單位、1000 單位-10，000 單 位、5000單位-7500單位、5000單位-50，000單位，或者1，000單位-10，000單位。
73.組合物組合，其包含第一種組合物，其包含配制為皮下給予的IG，所述組合物中IG的蛋白質(zhì)濃度低于16% w/v IG;以及第二種組合物，其包含與IG組合配制的可溶性透明質(zhì)酸酶，其量為足以使得IG組合物 在治療上有效。
74.權(quán)利要求73的組合，其中所述組合物配制為單劑量給予或者多劑量給予形式。
75.權(quán)利要求73或者74的組合，其中所述組合物中IG的量與當(dāng)經(jīng)靜脈內(nèi)給予用以治 療IG可治療的疾病或者病癥時(shí)的單劑量給予的量基本相同。
76.權(quán)利要求73-75任一項(xiàng)的組合，其中第一種組合物和第二種組合物以每日一次、每 周一次、每?jī)芍芤淮巍⒚?-3周一次、每3-4周一次或者每月一次的給予量的配制。
77.權(quán)利要求73-76任一項(xiàng)的組合，其中第一種組合物中IG的量是或者是大約1克 (g)、5g、10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g、80g、90g、100g 或者 200g。
78.權(quán)利要求73-77任一項(xiàng)的組合，其中組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約500單 位、1000單位、2000單位、5000單位、10，000單位、30，000單位、40，000單位、50，000單位、，60，000單位、70，000單位、80，000單位、90，000單位、100，000單位或者更多。
79.權(quán)利要求73-78任一項(xiàng)的組合，其中組合物中透明質(zhì)酸酶的量是或者是大約10U/ g、20U/g、30U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g、200U/g、300U/ g、400U/g、500U/g或者更多的比率(透明質(zhì)酸酶單位/IG克數(shù))。
80.試劑盒，其包含權(quán)利要求55-79任一項(xiàng)的組合或者權(quán)利要求1-42任一項(xiàng)的組合物， 以及任選治療IG可治療的疾病或者病癥的使用說明。
81.治療對(duì)象中IG可治療的疾病或者病癥的方法，包括皮下給予所述對(duì)象可溶性透明質(zhì)酸酶和免疫球蛋白(IG)以治療所述疾病或者病癥， 其中給予IG的給予量和給予頻率與通過靜脈內(nèi)給予相同量的IG以治療相同疾病或病癥的 IV(靜脈內(nèi))給予的給予量和給予頻率基本相同。
82.治療需要這種治療的對(duì)象中IG可治療的疾病或者病癥的方法，包括皮下給予該對(duì)象可溶性透明質(zhì)酸酶和治療所述疾病或者病癥有效量的免疫球蛋白 (IG)，其中所述給予通過使用給藥方案進(jìn)行，其中選擇(a)IG的數(shù)量；以及(b)給予該對(duì)象IG的連續(xù)給藥頻率使得皮下給予IG對(duì)于對(duì)象的治療效力與使用相同給藥方案經(jīng)靜脈內(nèi)給予IG的治療效 力至少基本相等。
83.權(quán)利要求81或者82的方法，其中皮下給予IG的生物利用度是通過靜脈內(nèi)給予相 同劑量IG的生物利用度的至少大約90%。
84.權(quán)利要求81或者82的方法，其中可溶性透明質(zhì)酸酶的量足以使得給予的IG在治 療上有效。
85.權(quán)利要求81或者82的方法，其中可溶性透明質(zhì)酸酶的量足以實(shí)現(xiàn)以不超過每月一 次的劑量皮下給予IG。
86.權(quán)利要求81或者82的方法，其中所述給藥方案的頻率包括不超過每月一次給予IG。
87.權(quán)利要求81或者82的方法，其中所述給藥方案的頻率是每天一次、每周一次、每?jī)?周一次、每2-3周一次、每3-4周一次或者每月一次。
88.權(quán)利要求81-87任一項(xiàng)的方法，其中可溶性透明質(zhì)酸酶是PH20或者其截短形式。
89.權(quán)利要求88的方法，其中所述PH20選自綿羊、牛或者截短的人PH20。
90.權(quán)利要求89的方法，其中所述截短的人PH20選自具有SEQIDN0 :4_9之一所示的 氨基酸序列的多肽或者其等位基因變體或者其它變體。
91.權(quán)利要求81-90任一項(xiàng)的方法，其中所述可溶性透明質(zhì)酸酶是rHuPH20。
92.權(quán)利要求81-91任一項(xiàng)的方法，其中所述IG純化自人血漿。
93.權(quán)利要求92的方法，其中所述純化自人血漿的IG通過醇分餾方法純化。
94.權(quán)利要求93的方法，其中所述IG通過如下任何一種或多種方法進(jìn)一步純化化學(xué) 修飾、在pH 4.0有或者沒有胃蛋白酶條件下保溫、聚乙二醇(PEG)沉淀、離子交換層析、酶 裂解、溶劑去污劑處理、滲濾或者超濾。
95.權(quán)利要求81-94任一項(xiàng)的方法，其中所述IG包含IgG、IgA和IgM。
96.權(quán)利要求95的方法，其中所述IG包含超過95%的IgG。
97.權(quán)利要求96的方法，其中所述IgG是單體。
98.權(quán)利要求81-97任一項(xiàng)的方法，其中所述IG進(jìn)一步含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定賦形劑。
99.權(quán)利要求98的方法，其中所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定賦形劑選自甘氨酸、麥芽糖、多元醇、人 血清白蛋白、甘露醇以及非離子去污劑中任一或多種物質(zhì)。
100.權(quán)利要求81-99任一項(xiàng)的方法，其中所述IG制備物的pH是或者是大約4.2-5. 4、 4. 6-5. 1 或者 4. 8-5. 0。
101.權(quán)利要求81-100任一項(xiàng)的方法，其中所述IG的蛋白質(zhì)濃度是或者是大約5-15% w/v,6-15% w/v 或者 8-12% w/v 的 IG 組合物。
102.權(quán)利要求101的方法，其中所述蛋白質(zhì)濃度是10%w/v。
103.權(quán)利要求81-102任一項(xiàng)的方法，其中所述IG的輸注速度是10ml/小時(shí)_300ml/ 小時(shí)。
104.權(quán)利要求103的方法，其中所述速度選自大約10ml/小時(shí)、20ml/小時(shí)、30ml/小 時(shí)、40ml/小時(shí)、50ml/小時(shí)、60ml/小時(shí)、70ml/小時(shí)、80ml/小時(shí)、90ml/小時(shí)、100ml/小時(shí)、 150ml/小時(shí)、200ml/小時(shí)、250ml/小時(shí)和300ml/小時(shí)。
105.權(quán)利要求103或者104的方法，其中所述速度由泵控制。
106.權(quán)利要求103或者104的方法，其中所述速度由重力控制。
107.權(quán)利要求81-106任一項(xiàng)的方法，其中單獨(dú)給予所述IG和透明質(zhì)酸酶。
108.權(quán)利要求107的方法，其中同時(shí)或者交替給予所述IG和透明質(zhì)酸酶。
109.權(quán)利要求81-108任一項(xiàng)的方法，其中在給予IG之前給予透明質(zhì)酸酶。
110.權(quán)利要求109的方法，其中在給予IG之前0.5分鐘、1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分 鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、20分鐘或者30分鐘給予透明質(zhì)酸酶。
111.權(quán)利要求81-110的方法，其中所述IG和透明質(zhì)酸酶在單一組合物中。
112.權(quán)利要求81-111任一項(xiàng)的方法，其中給予大約或者5克(g)、10g、15g、20g、21g、 22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g 的 IG。
113.權(quán)利要求81-112任一項(xiàng)的方法，其中所述透明質(zhì)酸酶以與IG大約10U/克(g)、 20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g 或者 300U/ g的比率(透明質(zhì)酸酶(單位)/IG(g))給予。
114.權(quán)利要求113的方法，其中所述透明質(zhì)酸酶以大約50U/gIG的比率給予。
115.權(quán)利要求81-114任一項(xiàng)的方法，其中所述IG可治療的疾病或病癥選自免疫缺陷 病、繼發(fā)于惡性血液病的獲得性低丙種球蛋白血癥、川崎病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神 經(jīng)病癥(CIDP)、格林巴利綜合癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌 無力綜合征、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、重癥肌無力、Moersch-ffoltmann綜合征、繼發(fā)低丙種球蛋 白血癥(包括醫(yī)源性免疫缺陷病)、特異性抗體缺陷、急性播散性腦脊髓炎、ANCA-陽性系統(tǒng) 性壞死性血管炎、自身免疫性溶血性貧血、大皰性類天皰瘡、疤痕性類天皰瘡、Evans綜合征 (包括具有免疫性血小板減少的自身免疫性溶血性貧血)、胎母/新生兒同種異體免疫血小 板減少癥(FMAIT/NAIT)、噬血細(xì)胞綜合征、高危同種異基因造血干細(xì)胞移植、IgM副蛋白血 癥神經(jīng)病、腎移植、多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥、落葉型天皰瘡、尋常型天皰 瘡、輸血后紫癜、中毒性表皮壞死/Steven Johnson綜合征(TEN/SJS)、中毒性休克綜合征、阿爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、敗血癥、B細(xì)胞腫瘤、外傷，以及細(xì)菌、病毒 或者真菌感染。
116.權(quán)利要求115的方法，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是免疫缺陷病，所述免 疫缺陷病選自常見變異型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏癥、Wiskott-Aldrich 綜合征、重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)、原發(fā)性低丙種球蛋白血癥、抗體缺陷的原發(fā)性免疫缺 陷病、X連鎖無丙種球蛋白血癥(XLA)、嬰兒低丙種球蛋白血癥以及無抗體的副腫瘤性小腦 變性。
117.權(quán)利要求115的方法，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是繼發(fā)于惡性血液病的 獲得性低丙種球蛋白血癥，所述惡性血液病選自慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、多發(fā)性骨髓瘤 (MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
118.權(quán)利要求115的方法，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是炎癥性肌病，所述炎 癥性肌病選自多肌炎、皮肌炎和包涵體肌炎。
119.權(quán)利要求115的方法，其中所述IG可治療的疾病或者病癥是細(xì)菌、病毒或者真菌 病癥，所述細(xì)菌、病毒或者真菌選自B型流感嗜血桿菌、A和B型銅綠假單胞菌、金黃色葡萄 球菌、B族鏈球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎鏈球菌、2和5型腺病毒、巨細(xì) 胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、單純皰疹病毒-1、單純皰疹病毒_2、甲 型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小兒脊髓灰質(zhì)炎病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、 曲霉和白色念珠菌。
全文摘要
本發(fā)明提供了配制為皮下給予的含有免疫球蛋白(IG)成分及可溶性透明質(zhì)酸酶成分的組合、組合物和試劑盒。這種產(chǎn)物可用于治療IG可治療的疾病或者病癥的方法中。本發(fā)明還提供了皮下給予免疫球蛋白的方法，從而所述給藥方案與靜脈內(nèi)給予相同劑量的方案基本相同，用于治療相同的IG可治療的疾病或者病癥。
文檔編號(hào)C07K16/06GK101977627SQ200980109505
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2009年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月17日
發(fā)明者G·I.·弗羅斯特, H·萊布爾, R·希夫 申請(qǐng)人:巴克斯特衛(wèi)生保健有限公司;巴克斯特國際公司;哈洛齊梅公司