專利名稱：：通光藤C₂₁甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種通光藤c21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其制備方法，還涉及通光藤c21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備預(yù)防和/或治療消化道腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是目前嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，它以細(xì)胞異常增殖和轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)資料表明，2000年全球新發(fā)惡性腫瘤病例約1000萬，死亡620萬，患病2200萬例；預(yù)計(jì)到2020年惡性腫瘤新發(fā)病例將達(dá)到1500萬，死亡1000萬，患病3000萬例。通光藤系蘿摩科Ascl印iadaceae牛奶菜屬植物通光散Marsdeniatenacissima(Roxb.)WightetAm.的干燥藤莖，廣泛分布于云南、貴州、福建、廣東、廣西、臺(tái)灣等省?！吨兴幋筠o典》收載大白藥"止血接骨。治外傷出血，接骨，瘡毒"；百靈草"舒筋活絡(luò)，補(bǔ)虛平喘"；通光散"清熱解毒，止咳平喘。治肺炎，支氣管炎，支氣管哮喘，咽喉炎，扁桃體炎，膀胱炎，疔瘡腫毒"[2]。其中通光散曾收載于《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》(1974年版)禾P《中國(guó)藥典》(1977年版)，其提取物被制成片劑、糖漿劑和注射劑主要用于治療肺癌、食道癌、賁門癌、胃癌、肝癌、腸癌、宮頸癌和惡性淋巴瘤、白血病等多種惡性腫瘤。C21甾體類化合物是通光藤的主要化學(xué)成分，迄今從通光藤中分離鑒定的(:21甾體苷類化合物均為3P位單糖鏈苷，糖鏈由P-D-吡喃葡萄糖、P-D-吡喃黃花夾竹桃糖、P-D-吡喃洋地黃毒糖、P-D-吡喃夾竹桃糖、P-D-吡喃磁麻糖、6-脫氧-3-0-甲基-13-D-吡喃阿洛糖等組成，各單糖之間均以1—4糖苷鍵相連。除糖鏈的單糖組成不同以外，苷元lla、1213和20位連有乙?；?Ac)、丙?；?Pro)、2-甲基丁?；?Bu)、順芷酰基(Tig)、苯甲酰基(Bz)、4-羥基苯乙酰基(HPA)、4-羥基苯甲?；?HPM)、肉桂?；?Cin)、Z-肉桂?；?Z-Cin)、煙?；?Nic)等酰基取代基團(tuán)。
發(fā)明內(nèi)容本案發(fā)明人采用活性指標(biāo)指導(dǎo)下的導(dǎo)向分離方法研究通光藤抗腫瘤作用物質(zhì)基礎(chǔ)，確定通光藤(:21甾體苷對(duì)人腫瘤細(xì)胞株增殖有一定的抑制作用。在此基礎(chǔ)上，本案發(fā)明人制備了通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，比較了通光藤(:21甾體苷和通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制作用，結(jié)果表明通光藤c21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制作用顯著增強(qiáng)，因而完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供一種通光藤c21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其制備方法和用途。本發(fā)明的通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量大于等于50%，其中含有11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6%。優(yōu)選的，本發(fā)明的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量大于等于70%，其中含有11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量大于等于8%。本發(fā)明通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中還含有12P-0-2-甲基丁酰基-通光藤苷元八，110-0-2-甲基丁酰基-12|3-0-乙?；?通光藤苷元8，110-0-2-甲基丁酰基-1213-0-苯甲?；?通光藤苷元B。本發(fā)明提供通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，該方法包括以下步驟a)通光藤粗粉用第一溶劑回流提取，濾過，提取液合并，提取液減壓濃縮；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用第二溶劑洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用第三溶劑洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱色譜，46倍柱體積第三溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加強(qiáng)酸水解，用第四溶劑振搖提取，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。在以上步驟中，其中步驟a)的第一溶劑為水或5090%乙醇，該第一溶劑的用量為通光藤粗粉重量的69倍，提取次數(shù)為14次，提取時(shí)間為12小時(shí)。其中步驟c)的第二溶劑為1050X乙醇，步驟d)的第三溶劑為60100%乙醇。其中步驟f)強(qiáng)酸水解的酸為鹽酸、硫酸、磷酸或高氯酸，強(qiáng)酸水溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:i，濃度為15%，水解溫度為40IO(TC，水解時(shí)間為15小時(shí)，第四溶劑為與水不互溶的石油醚、正己烷、乙酸乙酯或正丁醇，第四溶劑體積與通光藤粗粉重量比為12:1。本發(fā)明提供通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，優(yōu)選的包括以下步驟a)通光藤粗粉加69倍量7090%乙醇回流提取23次，每次12小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱D101色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用1030%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用80100%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，46倍柱體積80100%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加12%硫酸溶液水解，硫酸溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:1，水解溫度608(TC，水解時(shí)間35小時(shí)，用乙酸乙酯振搖提取，乙酸乙酯體積與通光藤粗粉重量比為12:l，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。本發(fā)明提供通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，優(yōu)選的包括以下步驟a)通光藤粗粉加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱D101色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，46倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加12%硫酸溶液水解，硫酸溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:1，水解溫度608(TC，水解時(shí)間35小時(shí)，用乙酸乙酯振搖提取，乙酸乙酯體積與通光藤粗粉重量比為12:l，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。本發(fā)明的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備預(yù)防和/或治療消化道腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供用本發(fā)明的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備的藥物制劑。這些藥物制劑選自以下劑型片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、散劑、膏劑、口服液、混懸劑、溶液劑、氣霧劑、注射劑，注射乳劑、凍干粉針，還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑。本發(fā)明的含有通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的藥物制劑，在制備藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體來自抗氧劑、鏊合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、溶劑、緩釋材料、腸溶材料、PH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用載體如甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素、纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、磷脂類材料、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸f丐等。本發(fā)明提供的以通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為原料制得的藥物制劑不僅包括單獨(dú)使用通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的藥物制劑，還包括添加通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物作為活性成分的藥物制劑。本發(fā)明通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，技術(shù)易掌握，能耗小，溶劑可回收循環(huán)使用，生產(chǎn)成本低。本發(fā)明通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法優(yōu)點(diǎn)為通光藤(:21甾體苷元重量百分含量大于等于50%，其中含有11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量大于等于6%。優(yōu)選的，本發(fā)明的通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量大于等于70%，其中含有11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量大于等于8%。這是以前技術(shù)尚未報(bào)道的，由于含量高，從而提高了組合物療效，滿足臨床用藥的需要。本發(fā)明通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901半數(shù)抑制濃度IC5。=97.83±1.94iigm1—1明顯低于通光藤C21甾體苷IC5。=281.98±7.32ygml—1;對(duì)人胃癌細(xì)胞株MGC-803半數(shù)抑制濃度IC5。=109.13±3.81ygml-1明顯低于通光藤C21甾體苷IC5。=234.78±5.82iigml—1;對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C半數(shù)抑制濃度IC5。=88.07±1.79iigml—1明顯低于通光藤C21甾體苷IC5。=276.22±5.85iig'ml—1。以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明并不受限于具體實(shí)施例。具體實(shí)施例方式基于生物組合化學(xué)研究通光藤C21甾體有效部位人腸內(nèi)菌生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物研究結(jié)果表明，通光藤C21甾體苷類化合物在腸道內(nèi)吸收極低，而易被腸道菌群代謝水解，以通光藤c21甾體苷元形式入血而發(fā)揮藥理作用。為應(yīng)用通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物制備預(yù)防和/或治療消化道腫瘤的藥物，比較通光藤C21甾體苷提取物和通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人腫瘤細(xì)胞增殖的影響。實(shí)施例1比較通光藤Ca甾體苷提取物和通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和MGC-803增殖的影響儀器和材料奧地利CIiniBio128C全自動(dòng)酶標(biāo)儀；日本SANYOC02培養(yǎng)箱；日本OLYMPUS倒置顯微鏡；人胃癌細(xì)胞株SGC-7901、MGC_803，吉林省腫瘤醫(yī)院；四甲基偶氮唑藍(lán)、胰蛋白酶、二甲基亞砜，美國(guó)Sigma公司；RPMI-1640，美國(guó)GIBCOBRL公司；胎牛血清，杭州四季青公司。細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)傳代培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和MGC-803接種于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置含有5%(A37t:恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞毒活性測(cè)定取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和MGC-803制成細(xì)胞懸液，分別以細(xì)胞密度1.0Xl()S個(gè)/ml100iil接種在96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24小時(shí)，加入倍比稀釋成5個(gè)不同濃度受試藥物201，另設(shè)溶劑對(duì)照組(腫瘤細(xì)胞和培養(yǎng)液)和空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)，每組均設(shè)4個(gè)復(fù)孔。各受試藥物與細(xì)胞置含有5%C(^37t:飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。在各孔中加入濃度為5mgm"MTT溶液20y1，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，吸取培養(yǎng)液，在各孔中加入二甲基亞砜150iU，經(jīng)微量混合振蕩器振蕩10分鐘，酶標(biāo)儀于570nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(OD)，按下式計(jì)算抑制率抑制率=(溶劑對(duì)照組OD值-受試藥物組OD值)/(溶劑對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通光藤C21甾體苷提取物和通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和MGC-803增殖的影響7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>通光藤C21甾體苷提取物和通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和MGC-803增殖半數(shù)抑制濃度IC5。比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>儀器和材料奧地利CliniBio128C全自動(dòng)酶標(biāo)儀；日本SANYOC02培養(yǎng)箱；日本OLYMPUS倒置顯微鏡；人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C，吉林省腫瘤醫(yī)院；四甲基偶氮唑藍(lán)、胰蛋白酶、二甲基亞砜，美國(guó)Sigma公司；RPMI-1640，美國(guó)GIBC0BRL公司；胎牛血清，杭州四季青公司。細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)傳代培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C接種于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置含有5%(A37t:恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞毒活性測(cè)定取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C制成細(xì)胞懸液，分別以細(xì)胞密度1.OX105個(gè)/ml100ii1接種在96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24小時(shí)，加入倍比稀釋成5個(gè)不同濃度受試藥物201，另設(shè)溶劑對(duì)照組(腫瘤細(xì)胞和培養(yǎng)液)和空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)，每組均設(shè)4個(gè)復(fù)孔。各受試藥物與細(xì)胞置含有5%C(^37t:飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。在各孔中加入濃度為5mgm"MTT溶液20iU，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，吸取培養(yǎng)液，在各孔中加入二甲基亞砜150iU，經(jīng)微量混合振蕩器振蕩10分鐘，酶標(biāo)儀于570nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(OD)，按下式計(jì)算抑制率抑制率=(溶劑對(duì)照組OD值-受試藥物組OD值)/(溶劑對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通光藤C21甾體苷提取物和通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C增殖的影響分組齊IJ量抑制率(％)(〃g'mr1)SW-111C100098.51±0.0131通光藤c21甾體50066.66±0.0184苷提取物25024.79±0馬912513.36±0.022362.56.67±0.0091100099.67±0.0020通光藤c^甾體50099.50±0.0012苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物25098.98±0.000712563.83±0.002162.517.77±0.0213通光藤C21甾體苷提取物和通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-111C增殖半數(shù)抑制濃度IC5。比較受試藥物ICsoO^ml'1)SW-111C通光藤c21甾體276.22±5.85苷提取物通光藤(:21甾體88.07±1.79苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物實(shí)施例3通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離取通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物3.0g，經(jīng)十八烷基鍵合硅膠柱色譜，以甲醇-水(45:55，60:40,100:0)梯度洗脫，得10個(gè)分離組分Fr.1(202.lmg)，F(xiàn)r.11(84.8mg)，F(xiàn)r.Ill(33.4mg)，F(xiàn)r.IV(118.6mg)，F(xiàn)r.V(349.lmg)，F(xiàn)r.VI(1241.lmg)，F(xiàn)r.VII(190.8mg)，F(xiàn)r.VIII(458.5mg)，F(xiàn)r.IX(256.7mg)，F(xiàn)r.X(156.9mg)。Fr.V經(jīng)制備高效液相色譜(色譜柱SenshuPakC6H5-3125_N，cp8x150mm;流動(dòng)相:甲醇-水=45:55;流速1.5mlmin—1;檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器RI-102得化合物I(295.4mg);Fr.VI經(jīng)制備高效液相色譜(色譜柱SenshuPakC6H5-3125_N，(p8xl50mm;流動(dòng)相:甲醇-水=50:50;流速1.5mlmin—1;檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器RI-102得化合物II(323.lmg)和III(388.5mg);Fr.X經(jīng)制備高效液相色譜(色譜柱SenshuPakC6H5-3125-N，(p8xl50mm;流動(dòng)相甲醇-水=60:40;流速1.5mlmin—1;檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器RI-102得化合物IV(43.3mg)?；瘜W(xué)成分的結(jié)構(gòu)鑒定化合物I:11a-0-順芷?；鵢12P_0_乙?；鵢通光藤苷元B'H-NMR(CDCl3，500MHz)S6.77(lH，q，J=6.7Hz，H_3，)，5.42(1H，t，J=10.2Hz，H-ll)，5.OO(IH，d，J=10.2Hz，H-12)，3.58(1H，m，H_3)，2.93(1H，d，J=7.4Hz，H_17)，2.19(3H，s，H_21)，1.86(3H，s，H_2，，)，1.77(3H，s，H_5，)，1.76(3H，d，J=6.8Hz，H-4，)，1.11(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H—19);13C_NMR(CDC13，125MHz)S210.79(C—20)，170.71(C-1")，167.22(C-1，)，138.00(C_3，)，128.66(C_2，)，75.16(C_12)，71.39(C_14)，70.53(C_3)，68.77(C_11)，66.84(C_8)，59.85(C_17)，51.22(C_9)，45.81(C_13)，44.09(C_5)，38.85(C_10)，38.36(C_4)，37.23(C_l)，31.82(C_7)，31.40(C_2)，30.10(C_21)，26.66(C_6)，26.61(C_15)，25.00(C_16)，20.51(C_2，，)，16.64(C_18)，14.45(C-5，)，12.71(C-19)，11.94(C-4，)；ESI_MSm/z511[M+Na]+。化合物II:12|3-0-2-甲基丁?；鵢通光藤苷元A'H-NMR(CDCl3，500MHz)S5.28(1H，d，J=3.9Hz，H—12)，4.30(1H，dd，J=3.9，2.0Hz，H-ll)，3.63(1H，m，H_3)，1.98(1H，d，J=6.2Hz，H—17)，1.21(3H，d，J=5.OHz，H-5，)，1.20(3H，s，H-21)，l.11(3H，s，H—19)，1.07(3H，s，H—18)，0.91(3H，t，J=7.4Hz，H-4，)；13C-NMR(CDC13，125MHz)S176.31(C-l')，99.69(C_20)，80.94(C_14)，77.85(C_8)，71.65(C_12)，71.04(C_3)，68.58(C_ll)，57.37(C_9)，55.19(C_17)，45.91(C_5)，44.37(C_13)，41.60(C-2')，38.24(C_1)，37.05(C_4)，35.20(C_10)，34.38(C_15)，34.06(C_7)，30.47(C_2)，27.54(C_6)，26.32(C-3')，24.22(C_21)，22.95(C_16)，17.70(C-5，)，16.17(C-18)，15.81(C-19)，11.96(C-4，)；ESI_MSm/z471[M+Na]+?；衔颕II:11a-0-2-甲基丁酰基-12P_0_乙?；鵢通光藤苷元B'H-NMR(CDCl3，500MHz)S5.37(lH，t，J=10.lHz，H-ll)，4.99(1H，d，J=10.2Hz，H-12)，3.59(1H，m，H_3)，2.93(1H，d，J=7.5Hz，H—17)，2.20(3H，s，H—21)，1.97(3H，s，H-2")，1.08(3H，s，H-18)，1.06(3H，d，J=6.6Hz，H_5，)，1.06(3H，s，H—19)，0.90(3H，t，J=7.5Hz，H-4');13C-NMR(CDC13，125MHz)S210.59(C-20)，175.58(C_1')，170.71(C_1")，75.19(C_12)，71.33(C_14)，70.42(C_3)，68.52(C_11)，66.83(C_8)，60.19(C_17)，51.09(C_9)，45.83(C_13)，44.06(C_5)，41.34(C_2，)，38.93(C_10)，38.35(C_4)，37.57(C_l)，31.76(C_7)，31.14(C_2)，29.74(C_21)，26.63(C_6)，26.48(C_15)，26.18(C-3')，24.90(C-16)，20.86(C_2")，16.79(C_18)，15.33(C_5')，12.76(C_19)，11.77(C-4，)；ESI-MSm/z513[M+Na]+?；衔颕V:11a-0-2-甲基丁?；鵢12P_0_苯甲酰基-通光藤苷元B'H-畫R(CDCl3，500MHz)S7.96(2H，dd，J=8.5，1.3Hz，H_3"，7")，7.55(1H，t，J=7.4Hz，H-5")，7.42(2H，t，J=7.7Hz，H—4"，6")，5.55(1H，t，J=10.lHz，H—ll)，5.25(1H，d，J=10.2Hz，H—12)，3.61(1H，m，H_3)，2.99(1H，d，J=7.5Hz，H—17)，2.27(3H，s，H-21)，l.17(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H—19)，0.86(3H，d，J=7.0Hz，H—5')，0.56(3H，t，J=7.5Hz，H-4，)；13C-NMR(CDC13，125MHz)S210.80(C-20)，175.72(C_1，)，166.08(C_1")，133.29(C_5，，)，129.86(C_3，，，7，，)，129.48(C_2，，)，128.49(C_4，，，6，，)，75.47(C_12)，71.46(C_14)，70.47(C_3)，68.56(C_11)，66.93(C_8)，60.07(C_17)，51.14(C_9)，46.15(C_13)，44.10(C_5)，41.23(C-2')，38.99(C_10)，38.37(C_4)，37.67(C_1)，31.82(C_7)，31.19(C_2)，29.94(C_21)，26.69(C_6)，26.60(C_15)，25.77(C-3')，25.00(C_16)，16.80(C_18)，15.07(C_5')，12.84(C_19)，11.43(C_4');ESI_MSm/z575[M+Na]+。實(shí)施例4比色法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元含量的方法溶液的制備對(duì)照品溶液的制備精密稱取11a-0-順芷酰基-12P_0_乙?；鵢通光藤苷元B對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含127.0g的溶液，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物0.3g，精密稱定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。含量測(cè)定方法精密吸取供試品溶液lOOia，置具塞試管中，揮干溶劑，精密加入新鮮配制的濃硫11酸-甲醇(6:1)5ml，搖勻，置6(TC水浴中加熱60分鐘，取出，立即置冰水中放置15分鐘。以濃硫酸-甲醇(6:1)為空白，在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法以lla-O-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B計(jì)算總C21甾體苷元的含量。實(shí)施例5HPLC法測(cè)定通光藤C^甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a_0_順芷?；鵢12P_0_乙酰基-通光藤苷元B含量的方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(45:55)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論塔板數(shù)按11a-0-順芷?；?12P-0-乙?；?通光藤苷元B峰計(jì)算，不低于3000。溶液的制備對(duì)照品溶液的制備精密稱取11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B對(duì)照品適量，加甲醇制成127.0iig.m1—1的溶液。供試品溶液的制備取通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物0.3g，精密稱定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。樣品測(cè)定方法精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20iU，按色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B的含實(shí)施例6取通光藤粗粉50kg，加9倍量50%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，70%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用4倍量70%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%磷酸溶液10000ml，置6(TC水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用正丁醇振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收正丁醇得通光藤C21甾體苷組合物1345g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為52%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為6.15%。實(shí)施例7取通光藤粗粉50kg，加6倍量50%乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD200大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，80%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用5倍量80%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加3%磷酸溶液lOOOOml，置60°C水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用正丁醇振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收正丁醇得通光藤C21甾體苷組合物1590g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為58%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量為6.58%。實(shí)施例8取通光藤粗粉50kg，加9倍量70%乙醇回流提取1次，提取時(shí)間1小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD100大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90X乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1X硫酸溶液10000ml，置40°C水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用石油醚振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收石油醚得通光藤C21甾體苷組合物1233g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為62%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量為6.86%。實(shí)施例9取通光藤粗粉50kg，加6倍量70%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于AB8大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用95%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，95%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量95%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加5%硫酸溶液10000ml，置40°C水浴中加熱回流1小時(shí)，取出，立即冷卻，用石油醚振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收石油醚得通光藤C21甾體苷組合物1269g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為65%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為7.03%。實(shí)施例10取通光藤粗粉50kg，加9倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D201大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用60%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，60%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量60%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加5%高氯酸溶液10000ml，置80°C水浴中加熱回流4小時(shí)，取出，立即冷卻，用正己烷振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收正己烷得通光藤C21甾體苷組合物1186g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為69%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為7.53%。實(shí)施例ll取通光藤粗粉50kg，加9倍量70%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，70%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量70%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%硫酸溶液10000ml，置80°C水浴中加熱回流2小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1244g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為80%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.72%。實(shí)施例12取通光藤粗粉50kg，加9倍量70%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，80%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量80%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加2%硫酸溶液lOOOOml，置80°C水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1315g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為82%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.88%。實(shí)施例13取通光藤粗粉50kg，加9倍量70%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，依次用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用5倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加4%鹽酸溶液10000ml，置6(TC水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤(:21甾體苷組合物1321g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為85%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.98%。實(shí)施例14取通光藤粗粉50kg，加9倍量90%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D201大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用95%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，95%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用5倍量95%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加2%鹽酸溶液10000ml，置60°C水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1580g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為78%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.35%。實(shí)施例15取通光藤粗粉50kg，加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，80%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量80%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加2%硫酸溶液10000ml，置80°C水浴中加熱回流4小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1474g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為83%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量為8.85%。實(shí)施例16取通光藤粗粉50kg，加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用4倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加2%硫酸溶液10000ml，置60°C水浴中加熱回流4小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1474g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為88%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為9.45%。實(shí)施例17取通光藤粗粉50kg，加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于D101大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用5倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%硫酸溶液10000ml，置6(TC水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1520g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為87%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量為9.63%。實(shí)施例18取通光藤粗粉50kg，加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%硫酸溶液10000ml，置80°C水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1497g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤(:21甾體苷元重量百分含量為96%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量為9.12%。實(shí)施例19取通光藤粗粉50kg，加6倍量水回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用60%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，60%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用4倍量60%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加2%硫酸溶液10000ml，置IO(TC水浴中加熱回流1小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1274g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為81%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為7.03%。實(shí)施例20取通光藤粗粉50kg，加9倍量水回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，80%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用5倍量80%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%硫酸溶液10000ml，置8(TC水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1574g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為88%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.08%。實(shí)施例21取通光藤粗粉50kg，加6倍量70%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，80%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量80%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1^硫酸溶液10000ml，置8(TC水浴中加熱回流3小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1594g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為87%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為9.35%。實(shí)施例22取通光藤粗粉50kg，加9倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，90%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用6倍量90%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1^硫酸溶液10000ml，置8(TC水浴中加熱回流4小時(shí)，取出，立即冷卻，用正丁醇振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液用無水硫酸鈉脫水，回收正丁醇得通光藤C21甾體苷組合物1774g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為86%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷?；?1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為8.40%。實(shí)施例23取通光藤粗粉50kg，加9倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收得提取物。取提取物加水溶解，加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用95%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，95%乙醇洗脫液加于D941脫色樹脂柱上，用4倍量95%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇得洗脫物。取洗脫物加1%硫酸溶液10000ml，置8(TC水浴中加熱回流4小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次6000ml，提取液合并，用碳酸鈉試液24000ml洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水24000ml洗滌，棄去水洗液，提取液17用無水硫酸鈉脫水，回收乙酸乙酯得通光藤C21甾體苷組合物1450g。采用實(shí)施例4的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中通光藤C21甾體苷元重量百分含量為88%，采用實(shí)施例5的方法測(cè)定通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中11a-0-順芷酰基-1213-0-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量為9.43%。實(shí)施例24通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物用藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備的藥物制劑。這些藥物制劑選自以下劑型片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、散劑、膏劑、口服液、混懸齊U、溶液齊U、氣霧齊U、注射劑，注射乳齊U、凍干粉針，還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑，在制備藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體來自抗氧劑、鏊合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、溶劑、緩釋材料、腸溶材料、pH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用載體如甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素、纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、磷脂類材料、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣。上述制備工藝均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，在此不加贅述。實(shí)施例25通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為原料制得的藥物制劑不僅包括單獨(dú)使用通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的藥物制劑，還包括添加通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物作為活性成分的藥物制劑。權(quán)利要求一種通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其特征在于，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中含有通光藤C21甾體苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-順芷?；?12β-O-乙?；?通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其特征在于，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中含有通光藤C21甾體苷元重量百分含量大于等于70%，其中含有11a-0-順芷?；?12|3-o-乙酰基_通光藤苷元B重量百分含量大于等于8%。3.根據(jù)權(quán)利要求12所述的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其特征在于，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中還含有12|3-0-2-甲基丁酰基_通光藤苷元A，11a-0-2-甲基丁酰基-12P_0_乙?；?通光藤苷元B，11a-0-2-甲基丁?；?1213-0-苯甲酰基_通光藤苷元B。4.權(quán)利要求1或2所述的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟a)通光藤粗粉用第一溶劑回流提取，濾過，提取液合并，提取液減壓濃縮；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用第二溶劑洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用第三溶劑洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱色譜，46倍柱體積第三溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加強(qiáng)酸水解，用第四溶劑振搖提取，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。5.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其中步驟a)的第一溶劑為水或5090%乙醇，該第一溶劑的用量為通光藤粗粉重量的69倍，提取次數(shù)為14次，提取時(shí)間為12小時(shí)。6.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其中步驟c)的第二溶劑為1050X乙醇，步驟d)的第三溶劑為60100%乙醇。7.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其中步驟f)強(qiáng)酸水解的酸為鹽酸、硫酸、磷酸或高氯酸，強(qiáng)酸水溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:1，濃度為15%，水解溫度為40IO(TC，水解時(shí)間為15小時(shí)，第四溶劑為與水不互溶的石油醚、正己烷、乙酸乙酯或正丁醇，第四溶劑體積與通光藤粗粉重量比為12:1。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟a)通光藤粗粉加69倍量7090%乙醇回流提取23次，每次12小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱D101色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用1030%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用80100%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，46倍柱體積80100%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加12%硫酸溶液水解，硫酸溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:1，水解溫度608(TC，水解時(shí)間35小時(shí)，用乙酸乙酯振搖提取，乙酸乙酯體積與通光藤粗粉重量比為12:l，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21留體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的通光藤(:21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟a)通光藤粗粉加6倍量90%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱D101色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；c)用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；d)用90%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；e)將步驟d)獲得的洗脫液，經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，46倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮；f)將步驟e)獲得的洗脫物加12%硫酸溶液水解，硫酸溶液體積與通光藤粗粉重量比為20:1，水解溫度608(TC，水解時(shí)間35小時(shí)，用乙酸乙酯振搖提取，乙酸乙酯體積與通光藤粗粉重量比為12:l，提取液用碳酸鈉試液洗滌，棄去碳酸鈉試液洗液，再用水洗滌，棄去水洗液，提取液減壓濃縮、干燥得通光藤C21留體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。10.權(quán)利要求1或2所述的通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備預(yù)防和/或治療消化道腫瘤的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其制備方法和用途，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中含有通光藤C21甾體苷元重量百分含量大于等于50％，其中含有11α-O-順芷?；?12β-O-乙酰基-通光藤苷元B重量百分含量大于等于6％；本發(fā)明還公開了通光藤C21甾體苷轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法及其在制備預(yù)防和/或治療消化道腫瘤的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K31/357GK101724008SQ200810051250公開日2010年6月9日申請(qǐng)日期2008年10月8日優(yōu)先權(quán)日2008年10月8日發(fā)明者李紅巖,王威,董方言申請(qǐng)人:吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院