專利名稱：：施用于粘膜的藥劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含疏水基團結(jié)合型糖胺聚糖作為活性成分的施用于粘膜的藥劑，及其制備方法。
背景技術(shù)：
：通常，作為對粘膜病癥如炎癥和損傷具有治療效果的物質(zhì)，已知的有作為代表性糖胺聚糖(下文稱為"GAG")的透明質(zhì)酸(例如，專利文件l)。然而，在角膜、口腔和鼻腔中的粘膜，以及與外界接觸的結(jié)膜，及在膀胱中的粘膜中，粘膜表面被分泌物和排泄物如淚液、唾液和尿沖洗，從而去除異物。因此，需要保持GAG固有的醫(yī)療效果并在這些粘膜組織中發(fā)揮高停留性的GAG書于生物。同時，通過將光交聯(lián)基團如肉桂酸結(jié)合到透明質(zhì)酸，并進一步對其進行堿處理使水溶性增加的光反應性透明質(zhì)酸是已知的(例如，專利文件2)。為了提供醫(yī)療材料如進行光交聯(lián)的抗粘結(jié)材料，已提供了通過將光交聯(lián)基團如肉桂酸結(jié)合到透明質(zhì)酸的光反應性透明質(zhì)酸，但該光反應性透明質(zhì)酸并不旨在提高在粘膜組織中的停留性。[專利文件l]日本公開未審專利公報No.平-1-238530[專利文件2]日本公開未審專利公報No.2002-249501
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的問題本發(fā)明旨在提供施用于粘膜的藥劑，該藥劑在粘膜中發(fā)揮優(yōu)良的停留性和藥理作用。解決問題的手段作為為解決上述問題而深入研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過借助結(jié)合鏈將疏水基團結(jié)合到GAG的"疏水基團結(jié)合型GAG"可用作施用于粘膜的藥劑中非常優(yōu)良的活性成分，這是因為，此GAG保持了GAG所固有的對粘膜病癥如炎癥和損傷的治療效果，且當施用于粘膜上時表現(xiàn)出高停留性，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明涉及含有糖胺聚糖(GAG)的施用于粘膜的藥劑，在該糖胺聚糖中借助結(jié)合鏈引入了疏水基團。發(fā)明效果本發(fā)明施用于粘膜的藥劑即使低頻率給藥也能對粘膜病癥如炎癥和損傷持續(xù)發(fā)揮治療效果，這是因為其可通過在粘膜中表現(xiàn)高停留性而長時間停留在發(fā)病部位。圖l是表示透光率光譜的圖；圖2是表示治愈面積百分比的圖；圖3是表示治愈面積的圖；圖4是表示治愈率的圖；圖5是表示治愈面積的圖；圖6是表示治愈率的圖；圖7是表示治愈面積的圖；圖8是表示治愈率的圖；圖9是表示治愈面積的圖；圖10是表示治愈率的圖；圖ll是表示在兔角膜上皮剝除部位的停留性的圖；圖12是表示在兔角膜上皮剝除部位的停留性的圖；圖13是表示在用紫外線照射后眼球的照片的圖；圖14是表示在摘除的角膜中水蒸發(fā)量的圖；圖15是表示在去除的角膜中水蒸發(fā)量的圖；及圖16是表示在用于口腔干燥的模型倉鼠中水蒸發(fā)量比率變化的圖；圖17是表示治愈面積的圖；圖18是表示治愈率的圖；圖19是表示治愈面積的圖；圖20是表示治愈率的圖。具體實施方式以下，將通過進行本發(fā)明的最佳實施方式更詳細地描述本發(fā)明。在此，烷基指具有所述數(shù)量碳原子的直鏈或支鏈的脂族烴基。鏈烯基指具有至少一個雙鍵的具有所述數(shù)量碳原子的直鏈或支鏈的脂族烴基。炔基指具有至少一個三鍵的具有所述數(shù)量碳原子的直鏈或支鏈的脂族烴基。芳基指具有6至20個碳原子作為環(huán)構(gòu)成原子的單環(huán)或多環(huán)芳烴基。雜芳基指具有3至20個碳原子和一個或多個選自氮、硫和氧原子的雜原子作為環(huán)構(gòu)成原子的單環(huán)或多環(huán)芳烴基。芳烷基指被以上定義的芳基所取代的以上定義的烷基。芳鏈烯基指被以上定義的芳基所取代的以上定義的鏈烯基。芳炔基指被以上定義的芳基所取代的以上定義的炔基。氨基酸基團指通過化學鍵從天然或合成的氨基酸失去羧基、氨基或羥基所衍生的基團。在此，"治療"包括粘膜病癥的預防、病情的控制(防止惡化)、改善(減緩)和療法。該"粘膜病癥"指粘膜所固有的形態(tài)、性質(zhì)和功能以某種形式紊亂的狀態(tài)。例如，該粘膜病癥可包括諸如損傷、缺損、糜爛、炎癥、潰瘍和干燥的狀態(tài)。作為活性成分包含于本發(fā)明的施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG可為任何GAG，只要該GAG結(jié)合了衍生自具有水不溶性和油溶性的疏水化合物的具有疏水性的基團即可。該疏水基團借助結(jié)合鏈結(jié)合至GAG。如后面所述，并不需要GAG的所有組成單元都結(jié)合疏水基團。1)GAG包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG,是具有由氨基糖和糖醛酸(或半乳糖)組成的二糖的重復長鏈結(jié)構(gòu)的酸性多糖。該GAG的實例包括透明質(zhì)酸、軟骨素、硫酸軟骨素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和硫酸角質(zhì)素，其中，優(yōu)選透明質(zhì)酸。這些GAG可為其藥學上可接受的鹽。該鹽的實例包括鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和4丐鹽，其中，優(yōu)選鈉鹽。因此，在本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的GAG最優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉。GAG的來源不特別限定，GAG可源自動物或微生物，或化學合成。例如，當使用透明質(zhì)酸鈉時，可例舉源自雞冠花(cock'scomb)的那些。GAG的分子量不特別限定，但其重均分子量優(yōu)選200,000至3，000,000,更優(yōu)選500，000至2,000,000,最優(yōu)選600,000至1,200,000。當使用透明質(zhì)酸或其藥學上可接受的鹽時，其重均分子量優(yōu)選200,000至3，000，000,更優(yōu)選500,000至2，000，000,最優(yōu)選600，000至1，200,000。2)疏水基團在包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG中的疏水基團為任何基團，只要該疏水基團衍生自具有水不溶性和油溶性的化合物即可。該基團的實例可包括具有2至18個碳原子的烷基、具有2至18個碳原子的鏈烯基、具有2至18個碳原子的炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、芳鏈烯基、芳炔基和氨基酸基團。具有2至18個碳原子的烷基可包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、叔戊基、異戊基、新戊基、正庚基、5-曱基己基、4，4-二曱基-戊基、l，l-二曱基-戊基和正辛基。其中，可優(yōu)選包括具有2至6個碳原子的烷基如正丁基。具有2至18個碳原子的鏈烯基可包括乙烯基、l-丙烯基、2-丙烯基、l-丁烯基、2-甲基-l-丙烯基、l-曱基-l-丙烯基、1-戊烯基、3-曱基-2-丁烯基、l-庚烯-l-基和2-庚烯-l-基。其中，可優(yōu)選包括具有具有2至6個碳原子的鏈烯基如l-丁烯基。具有2至18個碳原子的炔基包括乙炔基、l-丙炔基、2-丙炔基、l-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、l-庚炔基、2-庚炔基和3-庚炔基。其中，可優(yōu)選包括具有2至6個碳原子的炔基如l-丁炔基。芳基可包括基團如苯基、萘基、蒽基和菲基。雜芳基可包括基團如呋喃基、亞硫?；⑧邕蚧?、噁唑基、吡咯基、吡。定基、嘧。定基和吲p朱基。芳烷基可包括基團如千基、苯乙基、萘甲基和萘乙基。芳鏈烯基可包括基團如2-苯基-乙烯基和對氨基苯乙烯基。芳炔基可包括基團如2-苯基-乙炔基和對氨基苯基乙炔基。氨基酸基團可包括衍生自以下的基團脂族氨基酸如甘氨酸、丙氨酸和P-丙氨酸；支鏈脂族氨基酸如亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸；芳族氨基酸如苯丙氨酸和酪氨酸；以及雜環(huán)氨基酸如色氨酸和組氨酸。這些疏水基團可用基團如羥基、羧基、氰基、氨基(其可用上述烷基單取代或二取代)、硝基、氧和烷基羰氧基單取代或多取代。在上述疏水基團中，可優(yōu)選包括為含芳基的疏水基團的芳基、芳烷基、芳鏈烯基和芳炔基，尤其優(yōu)選包括用烷基羰氧基取代的芳鏈烯基和芳基。作為該芳鏈烯基，可具體使用笨乙烯基和對氨基苯乙烯基。作為芳基可優(yōu)選使用基團如CH3-(CH2)廣COO-苯基(其中1表示0或1至18的整數(shù))。這些疏水基團還可具有功能，例如由于在疏水基團中具有雙鍵而帶來的紫外線吸收能力，如由官能團如包含在疏水基團中的以上示例的苯乙烯基所示。例如，當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑用作后面所述的滴眼液時，可通過使用具有紫外線吸收能力的官能團作為疏水基團而使該滴眼液具有有效吸收有害紫外線的功能。另外，例如，當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑用于治療角膜上皮層病癥如角膜干燥(干眼癥)、角膜結(jié)膜炎、淺層點狀角膜炎(SPK)、角膜上皮糜爛、角膜上皮缺失和角膜腫瘤時，可通過使用具有紫外線吸收能力的基團作為疏水基團來使該施用于角膜的對上述病癥具有藥理效果的藥劑結(jié)合有效吸收有害紫外線的功能。作為具有紫外線吸收能力的基團，優(yōu)選例如具有共軛雙鍵的芳基鏈烯基，其由上述2-苯基-乙烯基和對氨基苯乙烯基示例。當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑用于角膜病癥時，優(yōu)選將為本發(fā)明施用于粘膜的藥劑的活性成分的"引入疏水基團的GAG"配制為0.1重量％的水溶液，當通過后面實施例中描述的方法測量紫外線透過率時，該水溶液阻斷70至100%的波長200至300nm的紫外線的透射。具有紫外線吸收能力的該疏水基團可優(yōu)選包括芳基鏈烯基如2-苯基-乙烯基和對氨基苯乙烯基。3)結(jié)合鏈在包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG中，上述GAG借助結(jié)合鏈結(jié)合至上述疏水基團。GAG具有其為羧基、羥基或磺酸基(-S03H)的官能團作為側(cè)鏈。因此，疏水基團可借助通過與這些官能團一起形成醚鍵、羧酸酯鍵、硫酸酯鍵、羧酸酰胺鍵或硫酸酰胺鍵而獲得的結(jié)合鏈結(jié)合到GAG。該結(jié)合鏈可具體包括-CONH-、-COO-、-O-、-S03-和-S02NH-。其中，可優(yōu)選使用羧酸酰胺鍵-CONH-和羧酸酯鍵-COO-,尤其優(yōu)選使用羧酸酰胺鍵-CONH-。4)間隔鏈在包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG中，疏水基團借助上述結(jié)合鏈結(jié)合到GAG，間隔鏈可進一步存在于結(jié)合鏈和疏水基團之間。作為該間隔鏈，可使用任何鏈，只要該間隔鏈不完全失去GAG具有的藥理效果即可。具體可包括-(CH2)m-和-(CH2)-(OCH2)n-(其中m和n分別為1至18的整數(shù))。這些間隔鏈可進一步在疏水基團側(cè)具有與上述相同的結(jié)合鏈如-CONH-、-COO-、-O-、-S034p-S02NH-。該在疏水基團側(cè)具有結(jié)合鏈的間隔鏈可具體包括-COO-(CH2)m-、-COO-(CH2)-(OCH2)n-、-CONH-(CH2)m-和-CONH-(CH2)-(0CH2)n-。5)具有疏水基團的比率在包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG中，不必所有的GAG組成單元分別具有疏水基團。以摩爾當量計的結(jié)合的疏水基團與以摩爾當量計的GAG的二糖重復單元的比率(下文稱為"引入率")可依據(jù)疏水基團的類型、所需疏水性的程度、施用施用于粘膜的藥劑的粘膜病癥的類型和給藥部位等任選決定。例如，當使用可被取代的苯乙烯基作為疏水基團時，相對于以摩爾當量計的GAG的二糖重復單元引入優(yōu)選5至30%，更優(yōu)選10至20%的以摩爾當量計的疏水基團(在不形成后面所述的交聯(lián)鍵的情況下)。6)交聯(lián)形成基團在包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG中，疏水基團可在GAG分子之間通過包含在該基團中的官能團形成交聯(lián)鍵。作為能形成交聯(lián)鍵的疏水基團，可使用任何基團，只要該疏水基團通過紫外線照射產(chǎn)生光二聚反應或光聚合反應，且與上面定義的相同即可。能形成交聯(lián)鍵的疏水基團包括，例如苯乙烯基、對氨基苯乙烯基、乙烯基、2-羧基乙烯基和戊烷-l,3-二烯基。希望這些基團借助包含羰基的結(jié)合鏈結(jié)合到GAG。在這些疏水基團中，可尤其優(yōu)選使用借助含羰基的結(jié)合鏈結(jié)合到GAG的苯乙烯基或?qū)Π被揭蚁┗Ｔ谠撘肽軌蛐纬山宦?lián)鍵的疏水基團的GAG中，GAG分子可通過標準方法進行光二聚反應或光聚合反應而彼此交聯(lián)。例如，根據(jù)描述于日本公開未審專利公報2002-249501中的方法，可進行光二聚反應或光聚合反應。7)優(yōu)選的GAG組成單元包含于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的代表，可具體包括施用于粘膜的包含向其中引入以下官能團的GAG作為活性成分的藥劑Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-NHCO-;Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-NHCO-;Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-NHCO-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-NHCO-;Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-0-CO-;Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-0-CO-;Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-0-CO-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-0-CO-;CHHCH^-COO-Ph-CONH-CCHJm-NHCO-或CH3-(CH2)廣COO-Ph-CONH-CH2-(OCH2)n-NHCO-(其中Ph表示苯基，m和n分別表示l至18的整數(shù)，1表示0或1至18的整數(shù))。作為代表可包括以下GAG。具有以化學式l表示的結(jié)構(gòu)單元的重復單元作為基本骨架的GAG:[化學式l]其中，作為基本骨架，R表示Ri或R2;Ac表示乙酰基；R4表示0Na或0H;R2表示(l)Ph-CH-CH國COO-(CH2)m-NH畫；(2)Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-NH-;(3)Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-NH-;(4)Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-NH-;(5)Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-0-;(6)Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-0-;(7)Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-0-;(8)Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-0-;(9)CH3-(CH2)廣COO-Ph-CONH-(CH2)m-NH畫；或(10)CH3-(CH2)廣COO誦Ph-CO麗國CH2-(OCH2)n-NH-;其中，Ph表示苯基，m和n分別表示l至18的整數(shù)，1表示0或1至18的整數(shù)，其中，以摩爾當量計的R代表R2的上述結(jié)構(gòu)單元與以摩爾當量計的GAG的二糖重復單元的比率為5至30%。8)制備借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的方法為了獲得借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG，使GAG與其中上述疏水基團已結(jié)合到官能團如羥基、羧基、氨基或磺酸基的疏水化合物反應，這些官能團可與GAG中的羧基、羥基或磺酸基(-SCbH)—同形成醚鍵、羧酸酯鍵、硫酸酯鍵、羧酸酰胺鍵或硫酸酰胺鍵。具體地，當該鍵為羧酸酰胺鍵時，使具有羧基的GAG與具有氨基的疏水化合物反應而將GAG中的羧基結(jié)合到疏水化合物中的氨基。在羧酸酯鍵的情況下，使GAG與具有羥基或羧基的疏水化合物反應而將GAG中的羧基結(jié)合到疏水化合物中的羥基，或使GAG中的羥基結(jié)合到疏水化合物中的羧基。在醚鍵的情況下，使具有羥基的GAG與具有羥基的疏水化合物反應而使GAG中的羥基與疏水化合物中的羥基反應。在磺酸酯鍵的情況下，使GAG與具有羥基或磺酸基的疏水化合物反應而將GAG中的幾基結(jié)合到疏水化合物中的磺酸基，或?qū)AG中的磺酸基結(jié)合到疏水化合物中的羥基。這些反應可通過通常的標準方法進行，反應條件可由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員任意選擇。當間隔鏈存在于結(jié)合鏈和疏水基團之間時，將間隔鏈和疏水基團引入GAG的順序不特別限定。例如，可采用下列任一方法使在上述間隔鏈一端具有可與GAG中的官能團一同形成醚鍵、羧酸酯鍵、硫酸酯鍵、羧酸酰胺鍵或磺酸酰胺鍵的官能團如羥基、羧基、氨基或磺酸基的間隔化合物與GAG反應，再使間隔化合物的另一端與結(jié)合到官能團如羥基、羧基、氨基或磺酸基的疏水化合物反應的方法，或者使在上述間隔鏈一端具有可與疏水化合物中的官能團一同形成醚鍵、羧酸酯鍵、硫酸酯鍵、羧酸酰胺鍵或硫酸酰胺鍵的官能團如羥基、羧基、氨基或磺酸基的間隔化合物與疏水基團已結(jié)合到官能團如羥基、羧基、氨基或磺酸基的疏水化合物反應，再使間隔化合物的另一端與GAG反應的方法。尤其是可優(yōu)選使用其中間隔化合物與疏水化合物反應，再與GAG反應的方法。在下進行。該縮合劑可優(yōu)選包括水溶性碳二亞胺如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸化物(EDCI.HCl)、縮合劑如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)。例如，當將透明質(zhì)酸用作GAG，且肉桂酸衍生物如Ph-CH=CH-COO-(<:1^2)111-^^2或？11-(:11=(:11-(:00-(:112-(0(:112)11-nh2(其中m和n分別為1至18的整數(shù))用作結(jié)合到間隔化合物的疏水化合物時，可優(yōu)選使用利用水溶性碳二亞胺如l-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸化物(EDCI.HC1)和N-羥基琥珀酰亞胺的縮合方法。該反應可使用水和水溶性有機溶劑如二噁烷、二曱基曱酰胺或乙醇的混合溶劑完成。該高度溶解于水性介質(zhì)的透明質(zhì)酸衍生物可通過在完成所述反應后用堿如碳酸氫鈉處理而獲得。當使由此制備的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG進行光二聚反應或光聚合反應而使GAG分子彼此交聯(lián)時，可使用例如描述于日本/〉開未審專利/〉凈艮2002-249501中的方法。具體地，在其中苯乙烯基作為疏水基團的化合物借助-COO-(ch2)m-NHCO-結(jié)合到GAG的情況下，可通過使用紫外燈對含有它們的溶液照射光而形成交聯(lián)。9)本發(fā)明施用于粘膜的藥劑本發(fā)明施用于粘膜的藥劑包含一種或多種借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG作為活性成分，且除借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG之外還可進一步包括其它醫(yī)學、藥學或生物學上可接受的物質(zhì)。該物質(zhì)包括但不限于鹽如氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二^方法適當?shù)剡M行，且優(yōu)選在縮合劑存鈉、磷酸二氬鈉和磷酸二氫鉀，以及防腐劑如對羥基苯曱酸酯、苯扎氯銨、氯丁醇和葡萄糖酸氯己定，及其他藥學活性成分。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可制成任何公知的劑型(例如，固體制劑如顆粒和粉末，液體制劑如水溶液、懸浮液和乳劑，以及凝膠制劑)作為施用于粘膜的藥物。在本發(fā)明施用于粘膜的藥劑中，其配制和配送的形式與其施用于粘膜的形式可相同或不同。例如，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可以溶液的形式配制，且可原樣直接施用于粘膜。此外，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可以以固體的形式配制和配送，當施用于粘膜時可制成溶液或凝膠。因此，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可制成當使用時配制的劑型。當通過溶解于水制成液體藥劑時，借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的量優(yōu)選0.02至5重量o/。，更優(yōu)選0.1至3重量％，極其優(yōu)選0.1至1重量％,最優(yōu)選0.1至0.6重量％。<施用對象>本發(fā)明施用于粘膜的藥劑目的在于施用于粘膜。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑施用的動物不特別限定，只要它們具有粘膜即可，優(yōu)選哺乳動物。所述哺乳動物包括但不限于人類、馬、牛、狗、貓、兔、倉鼠、豚鼠和小鼠。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑當然可制成用于人類的藥物，也可制成用于動物的藥物。其中，優(yōu)選制成用于人類的藥物。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑所施用的粘膜不特別限定，只要該粘膜為存在于動物中的粘膜即可。該粘膜包括存在于器官和組織中的粘膜組織，該器官和組織例如胃腸道系統(tǒng)如胃和腸，心血管系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)，排泄系統(tǒng)如膀胱、直腸和肛門，生殖系統(tǒng)如陰道，以及與外界接觸的器官如眼、鼻和口腔。其中，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可優(yōu)選施用于角膜、結(jié)膜、口腔粘膜和膀胱粘膜。<施用的疾病>本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可廣泛施用于此粘膜。該施用的目的不限于此，例如，可列舉諸如保護粘膜組織(例如，防止由紫外線造成的雪盲、翼狀胬肉和白內(nèi)障)、防止粘膜干燥和治療粘膜病癥的目的。因此，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑不僅可施用于異常狀態(tài)的粘膜(例如，已出現(xiàn)病癥的粘膜)，也可施用于正常狀態(tài)的粘膜。然而，由于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑在已經(jīng)出現(xiàn)病癥的粘膜中發(fā)揮優(yōu)良的藥理效果，因此其可優(yōu)選用于治療粘膜病癥，例如在角膜、結(jié)膜、口腔粘膜和膀胱粘膜中的病癥。由于本發(fā)明施用于粘膜的藥劑尤其在粘膜病癥中的粘膜上皮病癥中發(fā)揮優(yōu)良的藥理效果，因此其可優(yōu)選用于治療粘膜上皮中的病癥。該粘膜上皮中的此類病癥的實例包括角膜上皮層病癥如角膜干燥(千眼癥)；角膜結(jié)膜炎、淺層點狀角膜炎(SPK)、角膜上皮糜爛、角膜上皮缺失和角膜腫瘤；口腔粘膜病癥如口腔干燥(口干)、口腔潰瘍(aphthousulcer)、口炎和舌炎；鼻粘膜干燥和瘙癢；膀胱粘膜病癥如間質(zhì)性膀胱炎；潰瘍性結(jié)腸炎，以及直腸或陰道干燥。還可列舉外科手術(shù)時器官粘膜的干燥和損傷。其中，其可優(yōu)選用于治療角膜上皮層病癥、口腔粘膜上皮病癥和膀胱粘膜上皮層病癥。<施用方法和量〉本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可施用于以上列舉的粘膜組織，其施用方法和施用劑型可由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員依據(jù)將施用的粘膜的位置、形態(tài)、性質(zhì)和功能，以及施用的目的而適當確定。然而，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑優(yōu)選在使用中以液體形式如溶液施用于粘膜。在該情況下，在制備(配制)或施用本發(fā)明施用于粘膜的藥劑時，可通過將借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG溶解于溶劑中而獲得該液體。該溶劑不特別限定，只要該溶劑能溶解借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG并為藥學上可接受的溶劑即可。例如，可使用緩沖液如磷酸鹽緩沖液或鹽水，但溶劑不限于此。在該情況下，液體藥劑中借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的濃度不特別限定，可根據(jù)要施用的粘膜的類型和粘膜病癥的程度適當確定。例如，當本發(fā)明施用于粘膜的藥劑為滴眼液時，當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑施用于口腔粘膜或膀胱粘膜時，濃度優(yōu)選0.02至5重量％,更優(yōu)選0.1至3重量％，進一步更優(yōu)選0.1至1重量％，仍然更優(yōu)選0.1至0.6重量％,極其優(yōu)選0.1至0.5重量％,最優(yōu)選0.1至0.3重量％。當本發(fā)明施用于粘膜的藥劑作為上述液體施用于胃中的粘膜時，可選擇口服給藥或使用導管給藥。例如，當施用于例如眼、鼻或口腔的粘膜時，可選擇給藥方法如滴注、鼻滴藥法或口含。例如，當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑施用于膀胱、直腸或陰道中的粘膜，或者外科手術(shù)時涉及到干燥的器官的粘膜時，可選擇將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑通過注射、噴灑或施涂于這些器官或組織的內(nèi)腔或表面的給藥方法，但方法不限于此。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑的施用(給藥)量、次數(shù)和頻率不特別限定，而應當根據(jù)施用的粘膜、施用的目的、要施用的動物的類型、年齡、體重、性別和粘膜病癥的程度來確定。具體地，當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑用于治療人角膜上皮層病癥的目的時，上述濃度的本發(fā)明施用于粘膜的藥劑作為包含借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的用于滴注(滴眼液)的液體劑型可以以每天1至5次，每次給藥滴注1至3滴來給藥，和可以以每天1至3次，每次給藥滴注1至3滴來給藥。當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑用于治療人口腔粘膜病癥的目的時，作為包含借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的液體的上述濃度的本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可以通過將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑放在口腔中每天1至5次，漱口約幾十秒(優(yōu)選約20至30秒)然后吐出來給藥。當將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑施用于膀胱粘膜病癥時，其優(yōu)選用于治療以非細菌性頑固膀胱炎(non-bacterialrefractorycystitis)如間質(zhì)性膀胱炎、嗜酸性膀胱炎和出血性膀胱炎為例的膀胱粘膜病癥，這些非細菌性頑固膀胱炎雖然表現(xiàn)出類似于急性細菌性膀胱炎的癥狀，但對抗菌劑不響應。在此情況下，作為包含借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG的液體的上述濃度的本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可通過將本發(fā)明施用于粘膜的藥劑以每周1至7次，每次給藥50mL的量直接施用于膀胱，或者用膀胱中的導尿管給藥。本發(fā)明施用于粘膜的藥劑可長時間停留在發(fā)病部位，這是因為，與包含沒有結(jié)合疏水基團的透明質(zhì)酸作為活性成分的常規(guī)藥物相比，包含在該藥劑中的活性成分在粘膜中表現(xiàn)高停留性。因此，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑即使在低給藥頻率下也對粘膜中的病癥如炎癥和損傷持續(xù)地發(fā)揮治療效果。然而，本發(fā)明施用于粘膜的藥劑不受其給藥頻率限制。以下通過實施例描述本發(fā)明。<實施例1〉(1-l)制備引入肉桂酸衍生物的透明質(zhì)酸鈉將172mg/5mL的羥基琥銷酰亞胺(HOSu:WatanabeChemicalIndustries,Ltd.)的水溶液、143mg/5mL的1-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸化物(EDCI.HCl)(WatanabeChemicalIndustries,Ltd.)的水溶液和181mg/5mL的3-氨基丙基肉桂酸鹽酸化物(TokyoChemicalIndustryCo.，Ltd.)的水溶液加入在水(115mL)/二噁烷(144mL)中的透明質(zhì)酸鈉(1.06g,2.7mmol/二糖單位，重均分子量900，000;源自雞冠花，SeikagakuCorporation)的溶液中。將該混合物攪拌3小時，再力口入750mg/10mL的碳酸氫鈉(JapanesePharmacopoeia)的水溶液中。再攪拌2小時30分鐘后，將該反應用乙酸(214mg)和氯化鈉(1.0g)淬滅。加入乙醇(300mL),將所得沉淀過濾，并用80%乙醇、95%乙醇連續(xù)洗兩次。將固體在真空中在40。C干燥過夜而得到白色固體(1.06g)(在下文的實施例中，將"引入肉桂酸書于生物的透明質(zhì)酸鈉"簡稱為"引入肉桂酸衍生物的HA")。肉桂酸衍生物的引入率為16%。通過吸光度測量法(波長269nm)基于肉桂酸的量計算肉桂酸衍生物的引入率，透明質(zhì)酸的量根據(jù)硫酸咔唑法計算。(1-2)制備引入肉桂酸衍生物的HA的溶液將鹽水加入在以上(l-l)中獲得的86mg引入肉桂酸衍生物的HA中以達到總量15.45ml，然后將該溶液用振蕩器振蕩過夜直至均勻溶解。獲得0.5重量％的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液(干燥損失10%)。同樣地，獲得0.3重量％和0.1重量％的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液。<實施例2>(1-1)制備引入肉桂酸衍生物的HA將75mg/5mL的HOSu水溶液、62mg/5mL的EDCI.HCl注射用水溶液和92mg/5mL的6-氨基己基肉桂酸鹽酸化物(TokyoChemicalIndustryCo.,Ltd.)的注射用水溶液加入在注射用水(下文稱作WFI)(150mL)/二噁烷(75mL)中的透明質(zhì)酸鈉(1.0g，2.5mmol/二糖單位，重均分子量1,500,000;源自雞冠花，SeikagakuCorporation)的溶液中。將該混合物攪拌4小時，再加入氯化鈉(1.0g)。加入乙醇(500mL)，將所得沉淀過濾，并用80%乙醇、乙醇連續(xù)洗兩次。將固體在真空中在40。C千燥而得到白色固體(l.lg)。肉桂酸衍生物的引入率為2.7%。(2-2)制備交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA將上述引入肉桂酸衍生物的HA(12.5g)溶解于磷酸鹽緩沖的鹽水(磷酸鹽濃度1.5mM,下文簡稱為"PBS")中以制備2.5%的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液(500mL)。將2.5%的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液用800W高壓汞燈照射，并通過在121。C的高壓鍋中熱處理7.5min以產(chǎn)生交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA。進一步，將lg上述交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA溶解于11.5mlWFI中以制備0.2重量°/。的交聯(lián)的引入肉桂酸書亍生物的HA。<實施例3>(3-l)制備引入肉桂酸書亍生物的HA將172mg/5mL的HOSu水溶液、143mg/5mL的EDCI.HC1的水溶液和181mg/5mL的3-氨基丙基肉桂酸鹽酸化物(TokyoChemicalIndustryCo.，Ltd.)的水溶液加入在水(l50mL)/二噁烷(75mL)中的透明質(zhì)酸鈉(1.0g,2.5mmol/二糖單位，重均分子量900,000;源自雞冠花，SeikagakuCorporation)的溶液中。將該混合物攪拌3小時，再加入750mg/10mL的碳酸氫鈉(JapanesePharmacopoeia)的水溶液。再攪拌2小時30分鐘后，將該反應用乙酸(214mg)和氯化鈉(1.0g)淬滅。加入乙醇(300mL),將所得沉淀過濾，并用80%乙醇、95%乙醇連續(xù)洗兩次。將固體在真空中在40。C干燥過夜而得到作為引入肉桂酸衍生物的HA的白色固體(1.0g)。肉桂酸衍生物的引入率為10.1%。(3-2)制備熒光染料標記的引入肉桂酸衍生物的HA將3.0mmol/mL的HOSu的水溶液、1.5mmol/mL的EDCI.HC1的水溶液和1.5mmol/mL的4-氨基熒光素(TokyoChemicalIndustryCo.,Ltd.)水溶液加入在水(150mL)/二噁烷(75mL)中的在上面(3-l)中獲得的引入肉桂酸衍生物的HA(1.00g,2.5mmo1/二糖單位)的溶液中。將該混合物攪拌一天，加入500mg/10mL的碳酸氫鈉(JapanesePharmacopoeia)的水溶液。再攪拌4小時30分鐘后，將反應用乙酸(2mL)和氯化鈉(6.0g)淬滅。加入乙醇(500mL),將所得沉淀過濾并用80%乙醇洗四次，乙醇洗兩次。將該固體在真空中干燥過夜而得到熒光染料標記的固體(782mg)。熒光的引入率為0.60%。<比4交例1>制備熒光染料標記的HA將3.0mmol/mL的HOSu的水溶液、1.5mmol/mL的EDCI.HC1的水溶液和1.5mmol/mL的4-氨基熒光素(TokyoChemicalIndustryCo.,Ltd.)水溶液加入在水(150mL)/二噁烷(75mL)中的透明質(zhì)酸鈉(1.00g，2.5mmol/二糖單位，重均分子量900，000;源自雞冠花，SeikagakuCorporation)的溶液中。將該混合物攪4半一天，力口入500mg/10mL的碳酸氛納(JapanesePharmacopoeia)的水溶液。再攪拌4小時30分鐘后，將反應用乙酸(2mL)和氯化鈉(6.0g)淬滅。加入乙醇(500mL)，將所得沉淀過濾并用80%乙醇洗四次，乙醇洗兩次。將該固體在真空中干燥過夜而得到熒光染料標記的固體(830mg)。熒光的引入率為0.32%。<實施例4〉測量引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的紫外線透過率制備在上面(1-1)中獲得引入肉桂酸衍生物的HA的0.1重量%的水溶液，通過分光光度計(UV-1600，ShimadzuCorporation)測量紫外線透過率。表示透過率的光譜示于圖l中，在各種波長下的透過率(％)示于表1中。結(jié)果，在波長340nm以上顯示100。/。的透過率，但在波長約320nm以下的透過率為極低的20%以下，這表明該溶液有效地阻斷了紫外線的透射。在圖1中，刻度在橫坐標軸上以65nm的間隔，在縱坐標軸以20%的間隔標出。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>在該表中，X和T分別表示波長和透過率(。/())。<實施例5>引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用。實施例l中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。(5-l)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻嗪(xylazine)，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因(oxybuprocainehydrochloride)麻醉后，通過使用環(huán)鋸(trephine)(8mmI.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150|11鹽水作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150)li10.5重量％的在上述實施例(1-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除一天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的六只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg甲苯噻,對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除3天后最終給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從進行角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(5-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積百分比的結(jié)果示于圖2中，每一個體治愈面積百分比和治愈面積百分比的比率的結(jié)果示于表2中。如下計算治愈面積百分比和治愈面積百分比的比率。治愈面積百分比(％)=(治愈面積/剝除面積)x100治愈面積百分比的比率=(右眼的治愈面積百分比/左眼的治愈面積百分比)x100表2<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>對于個體編號為1至6的每個個體，左邊的列示出了右眼的治愈面積百分比(施用引入肉桂酸衍生物的HA),右邊的列給出了左眼的治愈面積百分比(施用鹽水)。在圖2和表2中，在給藥的6個個體的5個中觀察到明顯的促進角膜上皮層病癥治愈的效果。<實施例6>0.5%引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用。實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮遷移(外科手術(shù)模型)的作用。(6-l)方法l)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻嗪，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mmI.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150fll鹽水作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150inl在上述實施例(l-2)中制備的0.5重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除1天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的十四只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻溱對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除1至3天后第二次給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥之后3小時的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(6-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖3中，每一個體治愈率的結(jié)果示于圖4中。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積*-每一時間點的面積(1至3天后)*下文中，計算治愈面積中的"剝除后的面積"指'角膜剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前，。治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(1至3天后)在圖3和4中，觀察到與在對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在施用0.5重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還觀察到，在施用0.5重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中治愈率明顯提高。<實施例7>0.3%引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用。實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。(7-i)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯瘞。秦，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mmI.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150pl鹽水作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150iul在上述實施例(l-2)中制備的0.3重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除1天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，進行與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的十四只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯瘞。秦對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除1至3天后第二次給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除l小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(7-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖5中，每一個體治愈率的結(jié)果示于圖6中。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積-每一時間點的面積(1至3天后)治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(l至3天后)在圖5和6中，觀察到與在對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在施用0.3重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還觀察到，在施用0.3重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中治愈率明顯提高。<實施例8>0.1%引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用(0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA水溶液和0.1重量％HA水溶液，每天4次滴眼)實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。(8-l)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯綣，秦，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mml.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150pl0.1重量％的重均分子量600,000至1，200，000的HA水溶液作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150pl在上述實施例(1-2)中制備的0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除一天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的八只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg甲苯塞溱對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除1至3天后第二次給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用焚光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(8-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖7中，每一個體治愈面積和治愈率的結(jié)果示于圖8中。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積-每一時間點的面積(1至3天后)治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(l至3天后)在圖7和8中，觀察到與施用0.1重量％HA水溶液的對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在施用0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還觀察到，在給予0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中治愈率明顯<實施例9〉0.1%引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用(0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA水溶液和0.1重量y。HA水溶液，每天l次滴眼)實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。(9-l)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻。秦，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mml.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮l小時后，將150iil0.1重量％的重均分子量600,000至1，200,000的HA水溶液作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150|il0.1重量％的在上述實施例(1-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。此外，剝除1至3天后，每天1次，進行與上述相同的給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的八只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg甲苯噻，秦對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除后1至3天給藥6小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(9-2)結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖9中，每一個體中治愈率的結(jié)果示于圖10中。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積-每一時間點的面積(1至3天后)治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(l至3天后)在圖9和10中，觀察到與施用0.1重量y。HA水溶液的對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在l至3天的所有時間點在施用0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還觀察到，在給予0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中治愈率明顯提高。<實施例10>使用熒光標記的引入肉桂酸衍生物的HA在兔角膜上皮剝除部位的停留性在實施例3中制備的熒光標記的引入肉桂酸衍生物的HA和皮(外科手術(shù)模型)殘留性的作用。Cio-i)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg甲苯噻嗪，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mml.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時后，將150|^10.3重量％的以上比較例1中制備的熒光標記的HA水溶液作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150^10.3重量％的以上實施例3中制備的熒光標記的引入肉桂酸衍生物的HA的水溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的八只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)去除角膜上皮及制備冷凍塊(frozenblock)通過每個兔靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻嗪對兩只兔進行全麻，在施用目標物質(zhì)和對照物質(zhì)30分鐘、l小時、1.5小時和2.5小時后去除眼球。使用外科手術(shù)刀在去除的眼球的角膜和鞏膜之間開孔，使用微型手術(shù)剪僅去除角膜。將去除的角膜放置在生物樣品切割板(NisshinEMCorporation提供，CatNo.428)上，使用單刃不銹鋼刀片(GEM(R)STAINLESSSTEELUNCOATED，NisshinEMCorporation,CatNo.429)+刀出待觀察的部分。將切出的部分浸入O.C.T.化合物(Tissue-Tek(R)4583，Lot.1178)中，然后嵌入裝有O.C.T.化合物的低溫恒溫器盤(cryostattray)(MurazumiCo.,Ltd.提供，Cat.No.31),以使待觀察的部分在底部，并使用泡沫聚苯乙烯中的液氮迅速冷凍以得到不固定的冷凍塊。4)制備冷凍切片接下來，將冷凍塊從低溫恒溫器盤取出，并使用O.C.T.化合物粘附在樣品臺上。將樣品臺和一次性切片機刀片(LeicaMicrosystemsJapan提供，型號818,Lot.No.913212)放在高效冷凍切片機中用于研究，將冷凍塊在-20。C的冷凍室溫度(CT)和-16。C的樣品側(cè)溫度(OT)的條件下切片，使用硅烷涂布的玻片(MutoPureChemicalsCo.,Ltd.提供，StarFrostSlideGlass,Cat.No.5116)制備厚度5pm的切片。5)觀察和拍照的方法將冷凍切片放置在入射光熒光顯微鏡(OlympusCorporation,BH2-RFC)中，在IBcube(BH2-DMIB，激發(fā)波長495nm，吸收波長460nm)和Ucube(BH2-DMU，寬波段U激發(fā)，吸收波長435nm)中分別觀察FA圖像和自動熒光圖像。使用冷卻的高靈敏度CCD相機(KeyenceCorporation,VB-6010),在曝光時間一秒和ISO靈敏度200的條件下拍攝FA圖像和自動焚光圖像。(10-2)研究結(jié)果取樣的角膜的照片示于圖11和12。從圖11和12,通過熒光標記的顏色變化可確定，作為對照物質(zhì)的0.3重量％熒光標記的HA的水溶液在給藥后直到30分鐘停留，但到1小時后沒有停留。同時，盡管為目標物質(zhì)的0.3重量％的熒光標記的引入肉桂酸衍生物的HA的水溶液的熒光顏色變化隨時間變?nèi)?，但在給藥后30分鐘至2小時30分鐘的所有時間點均觀察到顏色變化，從而確認了高停留性能。<實施例11〉0.3%引入肉桂酸衍生物的HA對暴露于紫外線后的兔眼的作用實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對患有角膜淺層點狀角膜病變(cornealsuperficialpunctuatekeratopathy)的兔的保護作用。(ll-l)研究步驟1)對兔麻醉和打開眼瞼對兔通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻嗪施行麻醉，并通過吸入異氟烷(isoflurane)保持麻醉。接下來，使用兒童用眼險拉鉤(eyelidretractor)保持眼瞼一直崢開。2)施用目標物質(zhì)和對照物質(zhì)在眼睛凈開的狀態(tài)下，將150ji10.3重量％的重均分子量600，000至1，200，000的HA的水溶液作為對照物質(zhì)施用于右眼，150^10.3重量％的上述實施例(1-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA作為目標物質(zhì)施用于左眼。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中所述的一只兔作為給藥對象。3)對兔的角膜照射紫外線使用15kW的殺菌燈，從距兔眼球約10cm的距離對雙眼照射紫外線。照射進行3小時。4)對紫外線照射部位進行拍照在兔持續(xù)麻醉的狀態(tài)下用0.2%熒光素鈉對眼球染色，并在紫外光下拍照。拍照時保持焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。(11-2)研究結(jié)果用紫外線照射后的照片示于圖13中。從圖13，在施用對照物質(zhì)后用紫外線照射的眼球中，用0.2%熒光素鈉染色的病癥部位明顯。同時，在施用目標物質(zhì)后用紫外線照射的眼球中，用0.2%熒光素鈉染色的病癥部位明顯小于給予對照物質(zhì)的病癥部位，從而防止了由紫外線引起的角膜病癥。<實施例12>使用去除的角膜的潤濕效果使用兔去除的角膜，驗證實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA的潤濕性能。(12-1)方法1)去除角膜通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻。秦對兔進行全麻，去除眼球。使用外科手術(shù)刀在去除的眼球的角膜和鞏膜之間開孔，使用微型手術(shù)剪僅去除角膜。2)對角膜干燥處理通過將去除的角膜用義齒穩(wěn)定材料放置在石蠟塊上，并從距角膜約lm的距離使用干燥機吹冷風5分鐘來進行千燥處理。3)施用實驗物質(zhì)后(目標物質(zhì)、對照物質(zhì)和陰性對照物質(zhì))完成干燥處理后，將100lLll鹽水作為陰性對照物質(zhì)、重均分子量600，000至l，200，000的HA的0.3重量y。的水溶液作為對照物質(zhì)或上述實施例(1-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA的0.5重量％水溶液作為目標物質(zhì)施用于兩角膜。在給藥中，使用lml注射器。將以上1)中所述的三只兔(6只角膜)用作給藥對象。4)測量水蒸發(fā)量在施用實驗物質(zhì)后之前、干燥處理之后、施用實驗物質(zhì)后之后以及施用實驗物質(zhì)后后以10分鐘為間隔直至40分鐘，使用水蒸發(fā)量測量設(shè)備(AS-TW2,ASAHIBIOMED)測量水蒸發(fā)量。(12-2)研究結(jié)果水蒸發(fā)量的測量結(jié)果示于圖14。從圖14,在為對照物質(zhì)的HA水溶液中的水蒸發(fā)量略高于作為陰性對照的鹽水中的蒸發(fā)量，而在鹽水中的值在40分鐘后接近于0。另一方面，在施用目標物質(zhì)后的水蒸發(fā)量即使在40分鐘后仍保持高的值，從而證實了目標物質(zhì)明顯的潤濕性能。<實施例13>G3-l)方法1)去除角膜上皮使兔無痛死，在去除眼球后，通過沿鞏膜切割去除整個角膜層。將去除的角膜保存在鹽水中，在測量前通過將角膜上皮用義齒穩(wěn)定材料放置在石蠟塊上來固定角膜上皮(下文稱為"待測量的角膜")。2)角膜上皮中的水蒸發(fā)將待測量的角膜以干燥機從30cm的距離吹冷風5分鐘，并放置在室溫中l(wèi)小時。3)施用目標物質(zhì)在水蒸發(fā)后，將兩滴(約100)dl)鹽水作為陰性對照物質(zhì)、重均分子量600,000至1，200,000的HA的0.3重量％的水溶液作為對照物質(zhì)或上述實施例(l-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA的0.5重量％的水溶液作為目標物質(zhì)用lml注射器給藥。4)測量水蒸發(fā)量使用水蒸發(fā)量測量設(shè)備(AS-TW2),直接測量作為未被感知的蒸發(fā)量而感知的量(每1112每小時釋放的水量)作為從待測量的角膜蒸發(fā)的水量。(13-2)研究結(jié)果測量水蒸發(fā)量的結(jié)果示于圖15中。從圖15,在作為對照物質(zhì)的HA水溶液中的水蒸發(fā)量略高于作為陰性對照的鹽水中的蒸發(fā)量，而鹽水在40分鐘后表現(xiàn)接近于0的值。另一方面，施用目標物質(zhì)的水蒸發(fā)量即使在40分鐘后仍保持高的值，從而證實了目標物質(zhì)與鹽水和HA水溶液相比，在角膜上具有更持久的水停留性。<實施例14>驗證交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的治療效果使用口腔干燥的模型倉鼠，驗證實施例2中制備的交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA對口腔干燥的治療效果。(14-1)試驗方法l)制備口腔干燥的模型倉鼠在用Nembutal麻醉下，通過將直徑約10mm的試管接近頰側(cè)插入口腔并將其顛倒而使雄性Syrian倉鼠的口腔內(nèi)部暴露。通過使用干燥機對暴露的口腔內(nèi)部吹熱風約20秒，再吹冷風2分40秒而獲得口腔干燥的模型倉鼠?？谇粌?nèi)部持續(xù)暴露直至完成測量。2)施用目標物質(zhì)和對照物質(zhì)在制備口腔干燥模型后，立即使用微量注射器，通過施用至口腔內(nèi)部，施用100iul(A)PBS、(B)0.2重量0/0HA溶液(SeikagakuCorporation提供，重均分子量1，500，000)或(C)0.2重量％交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液。下文中，分別將施用(A)的組、施用(B)的組和施用(C)的組稱為PBS組、HA組和交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的組。對于給藥分組(給藥組組成)，將七只倉鼠用于每一PBS組、HA組和交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的組。3)計算水蒸發(fā)量比率使用水蒸發(fā)系統(tǒng)(Asahibiomed)測量口腔干燥模型倉鼠中口腔內(nèi)側(cè)的水蒸發(fā)量，以制備口腔干燥模型倉鼠后立即測量的值為l,計算水蒸發(fā)量比率。水蒸發(fā)量比率越高，越能保持濕潤的條件(口腔干燥程度低)。在制備口腔干燥模型倉鼠后即刻、給藥后即刻、給藥10分鐘和20分鐘后進行測量。(14-2)研究結(jié)果水蒸發(fā)量比率的測量結(jié)果示于圖16。在圖中，橫軸上圓圈中的數(shù)字l、2、3和4分別表示制備口腔干燥模型倉鼠后即刻、給藥后即刻、給藥后10分鐘和20分鐘的數(shù)據(jù)。P表示顯著性水平。給藥后即刻，所有的給藥組顯示3.3至4.5的水蒸發(fā)量比率。給藥IO分鐘后在PBS組中水蒸發(fā)量比率平均為0.9，在HA組中平均為2.3。另一方面，在交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的組中平均為3.2,因此，表現(xiàn)出比PBS組和HA組高的水蒸發(fā)量比率。另外，在給藥20分鐘后蒸發(fā)量比率在PBS組中平均為0.9,在HA組中平均為1.3。另一方面，在交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的組中平均為3.2,因此，表現(xiàn)出比PBS組和HA組高得多的水蒸發(fā)量比率。另外，從圖16顯而易見，在交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的組中水蒸發(fā)量比率隨時間變化很穩(wěn)定。這表明，交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA長時間停留在給藥部位，發(fā)揮高度的持續(xù)效果。以上結(jié)果表明，包括引入肉桂酸衍生物的HA和交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA的借助結(jié)合鏈引入疏水基團的GAG適于施用于粘膜，并能夠通過施用于粘膜而有效地治療粘膜上皮層的病癥。還表明，治療效果高度持久。由于在上述任何動物研究中都未觀察到由于施用引入肉桂酸衍生物的HA和交聯(lián)的引入肉桂酸衍生物的HA而引起的副作用，從而可以充分地預計本發(fā)明施用于粘膜的藥劑的安全性。<實施例15>(15-1)制備引入辛胺的透明質(zhì)酸鈉將25.8mg/2mL辛胺溶液(乙醇0.1MHC卜l:l)、2mL0.1MDMT-MM(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)溶液(乙醇l:水^:l)加入透明質(zhì)酸鈉(502mg，1.25mmol/二糖單位，重均分子量900,000)的水(50mL)/乙醇(50mL)溶液中。將該混合物攪拌過夜,力口入376mg/5mL碳酸氫鈉(JapanesePharmacopoeia)的水溶液。再攪拌5小時后，用乙酸(107mg)和氯化鈉(522mg)淬滅反應。加入乙醇(250mL)，將所得沉淀過濾，用80%乙醇、乙醇連續(xù)洗兩次。將固體在真空中干燥以得到白色固體(475mg)。根據(jù)HPLC,辛胺的引入率為12.6%。(15-2)制備引入十六烷胺的透明質(zhì)酸鈉將30mg/3mL辛胺溶液(乙醇0.1MHC卜l:l)、1.25mL0.1MDMT-MM(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)溶液(乙醇l:wateFl:l)加入透明質(zhì)酸鈉(501mg，1.25mmol/二糖單位，重均分子量900，000)的水(50mL)/乙醇(50mL)溶液中。將該混合物攪拌過夜,力口入381mg/5mL碳酸氬鈉(JapanesePharmacopoeia)的水溶液。再攪拌5小時后，用乙酸(107mg)和氯化鈉(497mg)淬滅反應。加入乙醇(250mL),將所得沉淀濾出，用80%乙醇、乙醇連續(xù)洗兩次。將固體在真空中干燥以得到白色固體(497mg)。根據(jù)HPLC，十六烷胺的引入率為12%。(15-3)制備樣品溶液將64mg以上(15-l)中獲得的化合物加入5mM磷酸鹽緩沖的鹽水中以達到總量59ml，然后將該溶液用振蕩器器振蕩過夜。獲得以上(15-1)中制備的化合物的0.1重量％的溶液。同樣地，獲得以上(15-2)中制備的化合物的0.1重量％的溶液。<實施例16>0.1%引入肉桂酸衍生物的HA對兔角膜上皮遷移的作用。實施例1中制備的引入肉桂酸衍生物的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。(16-1)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻嗪，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mmI.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150)Lil鹽水作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150)ul0.1重量％的在上述實施例(1-2)中制備的引入肉桂酸衍生物的HA的溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除1天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，進行與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的十四只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱苯噻。秦對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除1至3天后第二次給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(16-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖17中，每一個體治愈率的結(jié)果示于圖18中。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積-每一時間點的面積(1至3天后)治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(l至3天后)在圖17和18中，觀察到與在對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在1至3天的所有時間點，在施用0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還觀察到，在施用0.1重量％引入肉桂酸衍生物的HA的溶液的眼中治愈率明顯提高。<實施例17>0.1%引入辛胺的HA和引入十六烷胺的HA對兔角膜上皮遷移的作用。實施例15中制備的引入辛胺的HA和引入十六烷胺的HA對用外科手術(shù)去除的兔角膜上皮(外科手術(shù)模型)遷移的作用。C17-l)方法1)外科手術(shù)去除角膜上皮(外科手術(shù)模型)在靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg曱笨噻溱，并局部施用0.4%鹽酸丁氧普魯卡因麻醉后，通過使用環(huán)鋸(8mmI.D)、23G針和微型手術(shù)剪去除中央?yún)^(qū)域的角膜上皮。2)局部給藥在剝除角膜上皮1小時和4小時后，將150p1鹽水作為對照物質(zhì)施用于左眼，將150^10.1重量％的在上述實施例(15-2)中制備的引入辛胺的HA和引入十六烷胺的HA溶液作為目標物質(zhì)施用于右眼。在剝除1天和2天后，以3小時為間隔，總共4次，以及在剝除3天后，以3小時為間隔，進行與上述同樣地給藥。在給藥時，使用lml的注射器。將上述l)中的八只用于角膜上皮層病癥的模型兔用作給藥對象。3)對角膜上皮缺損區(qū)域拍照通過靜脈注射5mg/kg氯胺酮和2mg/kg甲苯噻溱對兔進行全麻，接著，用溶解于PBS的0.2。/。熒光素鈉對角膜上皮缺損部位染色，然后在紫外燈下拍照。在剝除角膜l小時后即將施用目標物質(zhì)之前和剝除1至3天后第二次給藥3小時之后進行拍照。拍照時，使焦距恒定以使照片的放大倍數(shù)恒定。4)測量角膜上皮缺損區(qū)域使用圖像分析儀在打印的照片上測量用熒光素鈉染色的角膜上皮缺損區(qū)域的面積。將從角膜上皮剝除1小時后即將施用目標物質(zhì)之前的剝除部位的面積(剝除面積)減去剝除3天后最終給藥3小時之后的剝除部位的面積而獲得的值稱為"治愈面積"。(17-2)研究結(jié)果每一個體中治愈面積的結(jié)果示于圖19中，每一個體治愈率的結(jié)果示于圖20中。在圖19中，C8-L(a:對照)、C8-R(b)、C16-L(c:對照)、C16-R(d)分別表示施用鹽水的左眼作為C8-R的對照、施用引入辛胺的HA溶液的右眼、施用鹽水的左眼作為C16-R的對照、施用0.1%引入十六烷胺的HA溶液的右眼。在圖20中，C8表示使用辛胺的上述研究的結(jié)果，C16表示使用十六烷胺的上述研究的結(jié)果。如下計算治愈面積和治愈率。治愈面積=剝除后的面積-每一時間點的面積(1至3天后)治愈率=各個時間點的治愈面積的平均值(1至3天后)在圖19和20中，觀察到與在對照眼中的角膜上皮的治愈面積相比，在1至3天的所有時間點在施用0.1%引入辛胺的HA和引入十六烷胺的HA的溶液的眼中角膜上皮的治愈面積明顯增加。還^L察到，在施用0.1%引入辛胺的HA或引入十六烷胺的HA的溶液的眼中治愈率明顯提高。權(quán)利要求1.一種施用于粘膜的藥劑，其包含借助結(jié)合鏈引入疏水基團的糖胺聚糖作為活性成分。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的施用于粘膜的藥劑，其中該糖胺聚糖選自透明質(zhì)酸、軟骨素、硫酸軟骨素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和硫酸角質(zhì)素及其鹽。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的施用于粘膜的藥劑，其中該糖胺聚糖為透明質(zhì)酸鈉。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中該疏水基團選自具有2至18個碳原子的烷基、具有2至18個碳原子的鏈烯基、具有2至18個碳原子的炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、芳鏈烯基、芳炔基和氨基酸基團。5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中該疏水基團為芳鏈烯基。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的施用于粘膜的藥劑，其中該疏水基團為苯乙烯基。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中該結(jié)合鏈選自-CONH-、-COO-、-0-、-S034。-S02NH-。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中"借助結(jié)合鏈引入疏水基團的糖胺聚糖"在結(jié)合鏈和疏水基團之間進一步包括間隔鏈(間隔鏈在疏水基團側(cè)進一步包括結(jié)合鏈)。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的施用于粘膜的藥劑，其中在疏水基團側(cè)進一步具有結(jié)合鏈的間隔鏈選自-COO-(CH2)m-、-COO-(CH2)-(OCH2)n-、-CONH-(CH2)m-和-CONH-(CH2)-(OCH2)n-(其中m和n分別表示1至18的整數(shù))。10.—種施用于粘膜的藥劑，其包含引入以下基團的糖胺聚糖作為活性成分Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-NHCO-;Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-NHCO-;Ph-CH:CH-CONH-(CH2)m-NHCO-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-NHCO-;Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-0-CO-;Ph-CH=CH-COO-CH2-COCH2)n-0-CO-;Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-0-CO-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-0-CO-;CHHCHOrCOO-Ph-CONH^CH^m-NHCO-或CH3-(CH2)廣COO-Ph-CONH-CH2-(OCH2)n-NHCO-(其中Ph表示苯基，m和n分別表示l至18的整數(shù)，1表示0或1至18的整數(shù))。11.一種施用于粘膜的藥劑，其包含具有由下式表示的結(jié)構(gòu)單元的重復結(jié)構(gòu)作為基本骨架的糖胺聚糖<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，作為基本骨架，R表示Ri或R2;Ac表示乙?；籖t表示ONa或OH;R2表示Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-NH-;Ph-CH=CH-COO-CH2-(OCH2)n-NH-;Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-NH-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-(OCH2)n-NH-;Ph-CH=CH-COO-(CH2)m-0-;Ph-CH=CH-COO-CH2-COCH2)n-0-;Ph-CH=CH-CONH-(CH2)m-0-;Ph-CH=CH-CONH-CH2-COCH2)n-O-;CH3-(CH2)(-COO-Ph-CONH-(CH2)m-NH-;或CH3-(CH2)廣COO-Ph-CONH-CH2-(OCH2)n-NH-;(其中,Ph表示笨基，m和n分別表示l至18的整數(shù)，1表示0或1至18的整數(shù))，其中以摩爾當量計的上述R代表R2的上述結(jié)構(gòu)單元與以摩爾當量計的糖胺聚糖的二糖重復單元的比率為5至30%。12.根據(jù)權(quán)利要求l至ll任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中該藥劑為液體。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的施用于粘膜的藥劑，其中借助結(jié)合鏈引入疏水基團的糖胺聚糖的濃度為0.02至5重量％。14.根據(jù)權(quán)利要求1至13任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其中該粘膜為角膜、結(jié)膜、口腔粘膜或膀胱粘膜。15.根據(jù)權(quán)利要求1至14任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其用于治療粘膜病癥。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的施用于粘膜的藥劑，其中該粘膜病癥為粘膜上皮層病癥。17.根據(jù)權(quán)利要求1至16任一項所述的施用于粘膜的藥劑，其為滴眼液。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的施用于粘膜的藥劑，其用于預防由紫外線引起的角膜病癥。全文摘要提供了一種，即使較低頻率給藥也能夠?qū)φ衬ぶ械牟“Y如炎癥和損傷持續(xù)發(fā)揮治療效果的施用于粘膜的藥劑，這是因為該藥劑通過在粘膜上皮層表現(xiàn)高停留性而長時間停留在發(fā)病部位，所述施用于粘膜的藥劑包含借助結(jié)合鏈引入疏水基團的糖胺聚糖(GAG)作為活性成分。文檔編號A61P17/00GK101287473SQ200680038019公開日2008年10月15日申請日期2006年10月12日優(yōu)先權(quán)日2005年10月12日發(fā)明者下島裕司,宮本健司,高橋勝哉申請人:生化學工業(yè)株式會社