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環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑及其應用的制作方法

文檔序號:1094373閱讀:196來源:國知局
專利名稱:環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一類具有環(huán)酰亞胺類肽骨架的選擇性抑制金屬蛋白酶作用的類肽化合物的制備方法、活性試驗和含該類肽化合物的組合物,以及這些組合物的用途。
背景技術(shù)
1、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)MMPs是一類依賴鈣離子和鋅離子的內(nèi)肽酶,MMPs的活性由基因表達水平和酶原激活/抑制因子的分泌水平嚴格控制。MMPs在細胞外基質(zhì)降解、組織重建過程中起重要作用。在很多病理過程,如關(guān)節(jié)炎、組織潰爛、惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移中,MMPs也起到了重要作用。
目前在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)了MMPs家族的28個成員(Szabo,K.A.et al.Clinical andApplied Immunology Reviews.2004,4,295),根據(jù)其結(jié)構(gòu)、特異性底物和不同的細胞位置,分為不同的亞型,包括種膠原酶(MMP-1,-8,-13,-18),2種明膠酶(MMP-2,-9),3種基質(zhì)降解酶(MMP-3,-10,-11),6種膜型-基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14,-15,-16,-17,-24,-25),以及其他未歸類的如基質(zhì)溶解素(MMP-7和-26)和巨噬細胞金屬彈性蛋白(MMP-12)等。其中明膠酶(MMP-2和-9)已被證明于侵襲性腫瘤的惡性表型及癌癥病人的不良預后密切相關(guān),他們參與了腫瘤細胞對基底膜、基質(zhì)的侵襲,對血管壁的穿透,以及腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。近年來研究表明,MMPs還與原發(fā)瘤和繼發(fā)瘤的生長、以及血管生成有關(guān),甚至對腫瘤增值過程亦起促進作用。因此,瞄準以這些酶為作用靶點的治療策略也迅速發(fā)展起來,MMPs抑制劑已成為癌癥治療藥物研究中的熱點。
可用MMPs抑制劑治療的例子包括類風濕性關(guān)節(jié)炎(Mullins,D.E.;et al.Biochim.Biophys.Acta.1983,695,117);骨關(guān)節(jié)炎(Henderson,D.;et al.Drugs ofthe Future,1990,15,495);癌癥;腫瘤細胞轉(zhuǎn)移(Deryugina,E.I.;et al.Cancer Metastasis Rev.2006,25,9);多發(fā)性硬化癥(Rosenberg,G.A.et al.Ann Neurol.2001,50,431);以及各種組織潰瘍或組織潰瘍性病癥。如發(fā)生在角膜的潰瘍可能是因堿灼傷所致,或因感染銅綠假單孢菌、Acanthamoeba、單純性皰疹和牛痘病毒所致。
以金屬蛋白酶活性過度為特征的病癥的其他例子包括牙周病、大皰性表皮松懈癥、發(fā)熱、炎癥和鞏膜炎(Cf.Decicco,et al WO95/29892)。
2、氨肽酶N氨肽酶N(APN/CD13)為依賴于鋅離子的金屬外肽酶,參與底物N端氨基酸的降解。正常條件下,APN在哺乳動物的腎臟、小腸以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織中廣泛低水平表達,參與機體的生理調(diào)節(jié)。研究證明,氨肽酶N在腫瘤發(fā)生、免疫功能調(diào)節(jié)以及病毒感染中發(fā)揮重要的作用。1)APN在腫瘤細胞表面高水平表達。該酶可使細胞外基質(zhì)(ECM)的主要成分降解,破壞了機體的天然屏障,促進腫瘤細胞的侵襲、生長和轉(zhuǎn)移,參與腫瘤新血管生成。(Saiki,I.;et al.Int.J.Cancer.,1993,54,137;Sato,Y.Biol.Pharm.Bull.,2004,772,776)。2)APN在粒細胞及淋巴細胞表面大量表達,同時也參與了T淋巴細胞依賴的炎癥反應;還能夠表達于抗原遞呈細胞表面,降解免疫活性物質(zhì)(如白介素-8);參與抗原處理和細胞表面的主要組織相容性復合體II型(MHC-II)粘附抗原決定簇依賴的T細胞對抗原的識別,降低了T細胞的識別能力,同時削弱了巨噬細胞和NK細胞對腫瘤細胞的識別和殺傷能力,使機體免疫力下降。3)APN作為人冠狀病毒HCoV-229E和傳染性胃腸炎病毒(TGEV)表面的受體,在上呼吸道感染(如SARS)和急性腸炎中扮演重要角色,且其發(fā)揮作用與酶的活性相關(guān)(Delmas,B.,et al.Nature,1992,357,417;Yeager,C.L.;etal.Nature,1992,357,420)。4)APN參與HIV病毒顆粒進入宿主細胞的過程。研究表明,在感染HIV的患者體內(nèi)APN活性遠遠高于健康志愿者。在HIV-1入侵宿主細胞時,高表達的APN通過降解能夠使HIV-1輔助受體CCR5脫敏的趨化因子fMLP,從而降低細胞的天然免疫功能,并使CCR5增敏,促進病毒進入宿主細胞。(Shen W,Li B,et al.Blood,2000,96(8),2887;Shipp MA,et al.Blood,1993,82(4),1052)5)APN參與內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)內(nèi)啡肽和腦啡肽的降解,從而引起P物質(zhì)的過度釋放,導致疼痛。6)APN降解血管緊張素,參與機體血壓的調(diào)節(jié)(Mitsui,T.;et al.Biol. Pharm.Bull.,2004,27,768.)。
90年代以來,開發(fā)出許多MMPs抑制劑,大多數(shù)為肽或肽的類似物,對酶的降解比較敏感,另外由于大多數(shù)具有長鏈結(jié)構(gòu),所含的可旋轉(zhuǎn)單鍵數(shù)目比較多,因此對同家族中的成員選擇性不好,這也是大多數(shù)MMPs抑制劑在臨床階段被槍斃的原因所在。另外針對APN的抑制劑多為天然產(chǎn)物,唯一一個上市的藥物烏苯美司具有含β-氨基酸的類二肽結(jié)構(gòu),目前作為免疫增強劑用于白血病的治療,但由于是從橄欖網(wǎng)狀鏈霉菌(Streptomycesolivorecticuli)的培養(yǎng)液中分離得到,來源有限。目前文獻中所報道的金屬蛋白酶抑制劑并沒有考慮到對這兩者(內(nèi)肽酶和外肽酶)的選擇性問題,因此從作用機制方面沒有做深入的探討。
眾所周知,由于多肽分子一般都存在著溶解度小、生物利用度低、代謝穩(wěn)定性差,極易被體內(nèi)廣泛存在的各種肽酶降解等缺點而限制了其臨床應用,類肽(Peptidomimetics,又名肽類似物或肽模擬物)由于其自身的優(yōu)點有望取代多肽而成為新型的抗腫瘤、抗病毒藥物設(shè)計與開發(fā)的策略一方面,類肽具有底物的內(nèi)在活性,可以通過識別酶的活性中心來抑制酶的活性,同時提高對靶部位的選擇性和效能;另外,類肽與天然肽類底物存在著結(jié)構(gòu)上的差異不易被肽酶降解,生物穩(wěn)定性和利用度高,且化合物的作用時間長;另一方面,類肽可以模擬配體的天然構(gòu)象,與受體的結(jié)合部位相匹配,發(fā)揮其激動劑或拮抗劑的作用。總之,類肽設(shè)計策略為新藥設(shè)計與開發(fā)提供了一個有效的途徑,同時也將成為抗腫瘤、抗HIV藥物開發(fā)的熱點領(lǐng)域。
本發(fā)明將MMP和APN結(jié)合起來進行研究,由于基質(zhì)金屬蛋白酶和氨肽酶N均屬于鋅離子依賴性水解酶,且均參與細胞外基質(zhì)主要成分IV型膠原酶的降解和腫瘤新血管的生成,區(qū)別僅在于前者為分泌型內(nèi)肽酶,后者為膜型外肽酶。本發(fā)明中在設(shè)計化合物時引入了類肽和構(gòu)象限制策略,一方面可以提高對靶標的識別和選擇性,另一方面提高對水解酶的穩(wěn)定性。本項專利中涉及所設(shè)計的類肽化合物對兩者的選擇性問題,而且通過對類肽化合物結(jié)構(gòu)的優(yōu)化有望分別開發(fā)出特異性選擇性抑制劑。本發(fā)明中所設(shè)計的類肽化合物對MMP的抑制活性處于微摩爾級別且體現(xiàn)出特異的選擇性(IC50APN/IC50MMP接近150),另外針對于APN活性篩選發(fā)現(xiàn)幾個藥物分子其活性相當于目前唯一上市的烏苯美司。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑及其應用,還提供環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑的制備方法。
本發(fā)明以光學純度谷氨酸或天冬氨酸為起始原料,在此基礎(chǔ)上我們將沒食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸以及非甾體抗炎藥有機酸(吲哚-3-乙酸、雙氯芬酸)拼合到谷氨酸或天冬氨酸母核上,形成二羧酸然后再經(jīng)過環(huán)合,轉(zhuǎn)化為構(gòu)象限制的環(huán)酰亞胺骨架,提高對靶標的選擇性。而且這些有機酸自身具有抗腫瘤活性,可以增強抑酶活性。氨基酸由于具有天然性質(zhì),因此可以提高化合物對組織的相容性。另外,也可以以光學純的谷胺酰胺或天冬酰胺為原料,通過Boc或Cbz保護、環(huán)合、取代等步驟合成關(guān)鍵中間體,然后脫保護,再通過與具有生物活性的不同酰氯(如沒食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸、非甾體抗炎藥有機酸)以及氨基酸衍生物得到不同系列類二肽或類三肽。目的均是為了增強化合物與酶或受體的親和力以及代謝穩(wěn)定性。
本發(fā)明設(shè)計合成了一類具有全新結(jié)構(gòu)母核的金屬蛋白酶抑制劑。體外試驗表明其無細胞毒活性但體現(xiàn)出顯著的體外抑酶活性,有望成為一類非細胞毒類抗癌候選藥物。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下具有通式I的類肽化合物,以及其光學異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和消旋體混合物,其藥學上可接受的鹽,溶劑合物或前藥。
其中,R1是芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,C1-6烷基,N端保護或未保護天然或非天然氨基酸衍生物,任選被一個或多個如下基團取代羥基,鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰基,芳基C1-8烷氧羰基。
R2是氫,芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,以及各種天然或非天然氨基酸側(cè)鏈,任選被一個或多個如下基團取代鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰基。
R3是OH,NHOR10(這里R10是氫或C1-8烷基),C1-8烷氧基,NHR11(這里R11是C1-8烷基,芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,NHCH(R2)COR4(這里R4是OH或NHOR10),任選被一個或多個如下基團取代鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰,n是1或2,*是立體構(gòu)型為S或R光學純度或其消旋體。
優(yōu)選的,R1是芳基,芳基C1-6烷基,芳基C2-6烯基,非甾體類抗炎藥有機酸,N端保護或未保護天然或非天然氨基酸衍生物,任選被一個或多個如下基團取代羥基,鹵素,硝基,氰基,C1-8烷氧基;
R2是氫,以及各種天然或非天然氨基酸側(cè)鏈;R3是OH,OCH3,NHCH(R2)COR4,這里R4是OCH3或NHOH。
上述的類肽化合物(I)具體包括如下化合物(S)-甲基-2-(2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸酯(2S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基戊酸酯(S)-甲基1-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙?;?吡咯烷-2-羧酸酯(S)-methyl 2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-5-(3-硝基胍基)戊酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-(甲硫基)丁酸酯(S)-甲基6-(芐氧羰酰胺基)-2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)己酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(4-羥基芐基)丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸酯(R)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-羥基丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-巰基丙酸酯(S)-二甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)鄰苯二甲酸酯(S)-甲基3-氯-2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯(S)-甲基3-(2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯(S)-甲基2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯(S)-N-(1-(2-(羥胺基)-2-氧乙基)-2,6-二氧哌啶-3-基)-3,4,5-三甲氧苯胺。
上述通式(I)的類肽化合物中間體為3,4,5-三甲氧基苯甲酸;3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯;(S)-2-(3,4,5-三甲氧苯胺基)戊二酸;(S)-N-(2,6-二氧-四氫-2H-吡喃-3-基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺;(S)-2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸,(S)-叔丁基-2,6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯,(S)-乙基-2-(3-(叔丁氧羰基氨基)-2,6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯,(S)-芐基-2,6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯,(S)-乙基2-(3-(芐氧羰基氨基)-2,6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯。
上述類肽化合物的制備方法,以光學純度酸性氨基酸為原料,在堿性條件下縮合,所得的化合物再經(jīng)過脫水環(huán)合,親核取代,多肽縮合試劑縮合等反應最終分離純化而得;或以光學純的谷胺酰胺或天冬酰胺為原料,通過Boc或Cbz保護、環(huán)合、取代等步驟合成關(guān)鍵中間體,然后脫保護,再通過與具有生物活性的不同酰氯以及氨基酸衍生物得到不同系列的類二肽或類三肽。
這些類肽化合物在預防或治療與金屬蛋白酶,包括基質(zhì)金屬蛋白酶或氨肽酶N,活性異常表達相關(guān)的哺乳動物疾病的藥物的應用。
所述的與金屬蛋白酶活性異常表達的相關(guān)哺乳動物疾病包括炎癥,癌癥,多發(fā)性硬化癥,各種組織潰瘍或組織潰瘍性病癥,牙周病,大皰性表皮松懈癥,白血病等。因此,本發(fā)明還涉及含有(I)結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物。
一種藥物組合物,包含(1)上述任一項的類肽化合物,和(2)一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
此外,本發(fā)明還包括一種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物,包含(1)上述任一類肽化合物,和(2)藥學上可接受載體,任選包含(3)一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
此外,本發(fā)明還包括一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物,包含(1)上述任一類肽化合物,和(2)藥學上可接受載體,任選包含(3)一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
本發(fā)明含有通式(I)的化合物的設(shè)計首次采用了類肽和構(gòu)象設(shè)計策略。類肽和構(gòu)象限制策略已經(jīng)被廣泛應用于抗病毒、抗腫瘤藥物的設(shè)計和開發(fā)領(lǐng)域,其結(jié)構(gòu)由天然或非天然氨基酸組成類似于肽的結(jié)構(gòu),但總體構(gòu)象由不同于天然的多肽物質(zhì),一方面,類肽具有底物的內(nèi)在活性,可以通過識別酶的活性中心來抑制酶的活性,同時提高對靶部位的選擇性和效能;另外,類肽與天然肽類物質(zhì)存在著結(jié)構(gòu)上的差異不易被肽酶降解,生物穩(wěn)定性和利用度高,且化合物的作用時間長。
發(fā)明詳述所用的定義和術(shù)語本文中所用的術(shù)語和定義含義如下“雜烷基”指飽和或不飽和、含碳原子和至少一個雜原子的鏈,其中任意一個雜原子不相鄰。雜烷基中含有2-15個原子(碳原子),優(yōu)選含有2-10個原子。雜烷基可以是直連或支鏈、取代或未取代的。
“芳基”是指芳族碳環(huán)基團。優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子。
“鹵”,或“鹵素”包括氟、氯、溴或碘,優(yōu)選未氟和氯。
“環(huán)烷基”是取代或未取代的,飽和或不飽和的環(huán)狀基團,其含有碳原子和/或一個或多個雜原子。該環(huán)可以是單環(huán)或稠環(huán),橋環(huán)或螺環(huán)的環(huán)系。單環(huán)通常有3-9個原子,優(yōu)選有4-7個原子,多環(huán)含有7-17個原子,優(yōu)選含有7-13個原子。
“雜芳基”是芳族雜環(huán),可以是單環(huán)或雙環(huán)基團。較佳的雜芳基包括,例如噻吩基,呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、嘧啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋哺基、吲哚基等。
“藥學上可接受的鹽”是指式(I)化合物具有療效且無毒的鹽形式。其可由任一酸性基團(如羧基)形成陰離子鹽,或由任一堿性基團(如氨基)形成陽離子鹽。本領(lǐng)域已知許多這樣的鹽。在任何酸性基團(如羧基)上形成的陽離子鹽,或是在任何堿性基團(如氨基)上形成的陰離子鹽。這些鹽由許多式本領(lǐng)域已知的,如陽離子鹽包括堿金屬(如鈉和鉀)和堿土金屬(如鎂和鈣)的鹽以及有機鹽(如銨鹽)。還可通過使用相應的酸處理堿性形式的(I)方便地獲得陰離子鹽,這樣的酸包括無機酸如硫酸、硝酸、磷酸等;或有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、2-羥基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、2-羥基-1,2,3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、環(huán)己基亞磺酸、2-羥基苯甲酸、4-氨基-2-羥基苯甲酸等。這些鹽式熟練技術(shù)人員熟知的,熟練的技術(shù)人員可制備本領(lǐng)域知識所提供的任何鹽。此外,熟練技術(shù)人員可根據(jù)溶解度、穩(wěn)定性、容易制劑等取某種鹽而舍另一種鹽。這些鹽的測定和最優(yōu)化在熟練技術(shù)人員的經(jīng)驗范圍內(nèi)。
“溶劑合物”是溶質(zhì)(如金屬蛋白酶抑制劑)和溶劑(如水)組合形成的配合物。參見J.Honig等,The Van Nostrand Chemist’s Dictionary,p.650(1953)。本發(fā)明采用的藥學上可接受的溶劑包括不干擾金屬蛋白酶抑制劑的生物活性的那些溶劑(例如水、乙醇、乙酸、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜以及該領(lǐng)域技術(shù)人員所知的或容易確定的溶劑)。
本文所用的“光學異構(gòu)體”、“對映體”、“非對映體”、“消旋體”等定義了本發(fā)明化合物或其生理上的衍生物所有可能的立體異構(gòu)體的形式。除非另有指示,本發(fā)明化合物的化學命名包括所有可能的立體化學形式的混合物,所屬混合物包含基本結(jié)構(gòu)分子的所有非對映體和對映體,以及基本純凈的本發(fā)明化合物的單個異構(gòu)體形式,即其中含有低于10%,優(yōu)選低于5%,特別是低于2%,最優(yōu)選低于1%的其它異構(gòu)體。本發(fā)明類肽化合物各種立體異構(gòu)體形式均明顯包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式(I)類肽化合物還可以其它被保護的形式或衍生物的形式存在,這些形式對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的,均應該包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
如上所述的取代基自身還可被一個或多個取代基取代。這樣的取代基包括在C.Hansch和A.Leo,Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。優(yōu)選的取代基包括,例如烷基,烯基,烷氧基,羥基,氧基,硝基,氨基,氨基烷基(如氨甲基等),氰基,鹵,羧基,羰基烷氧基(如羰基乙氧基等),硫基,芳基,環(huán)烷基,雜芳基,雜環(huán)烷基(如哌啶基,嗎啉基,吡咯基等),亞氨基,羥烷基,芳基氧基,芳基烷基,及其結(jié)合。
合成目標化合物經(jīng)如下路線合成。
簡言之,上述通式(I)的類肽化合物的制備方法,本發(fā)明以光學純度谷氨酸或天冬氨酸為起始原料,在此基礎(chǔ)上我們將沒食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸以及非甾體抗炎藥有機酸(吲哚-3-乙酸、雙氯芬酸)拼合到谷氨酸或天冬氨酸母核上,形成二羧酸然后再經(jīng)過環(huán)合,轉(zhuǎn)化為構(gòu)象限制的環(huán)酰亞胺骨架,提高對靶標的選擇性。而且這些有機酸自身具有抗腫瘤活性,可以增強抑酶活性。氨基酸由于具有天然性質(zhì),因此可以提高化合物對組織的相容性。另外,也可以以光學純的谷胺酰胺或天冬酰胺為原料,通過Boc或Cbz保護、環(huán)合、取代等步驟合成關(guān)鍵中間體,然后脫保護,再通過與具有生物活性的不同酰氯(如沒食子酸、咖啡酸、苯乙酸、阿魏酸、非甾體抗炎藥有機酸)以及氨基酸衍生物得到不同系列類二肽或類三肽。目的均是為了增強化合物與酶或受體的親和力以及代謝穩(wěn)定性。具體合成路線根據(jù)所要制備的某種具體的化合物結(jié)合本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)進行設(shè)計。下面以沒食子酸環(huán)酰亞胺類肽衍生物為例,說明部分該類化合物的合成路線及制備方法。
試劑a.1)硫酸二甲酯,氫氧化鈉2)鹽酸;b.氯化亞砜,苯;c.L-谷氨酸,碳酸鈉,2)鹽酸;d.乙酸酐,55-60℃;e.甘氨酸,N,N-二甲基甲酰胺,110℃,5h;f.氨基酸甲酯鹽酸鹽,1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI),1-羥基苯并三唑,二氯甲烷/二甲基亞砜;g.1)羥胺,氫氧化鉀,甲醇2)三溴化硼,二氯甲烷,-78℃;h.氯化亞砜,甲醇;i.羥胺,氫氧化鉀,甲醇。
用Me2SO4保護沒食子酸的游離羥基,然后與L-谷氨酸在堿性條件下縮合,所得的(S)-2-(3,4,5-三甲氧苯胺基)戊二酸,在乙酸酐中脫水環(huán)合,所得的產(chǎn)物在非質(zhì)子性溶劑中與甘氨酸親核取代,再在DCM或THF中經(jīng)多肽縮合劑EDCI縮合,分離純化即得最終產(chǎn)物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對上述步驟進行變動以提高收率,他們可據(jù)本領(lǐng)域的基本知識確定合成的路線,如選擇反應物,溶劑和溫度,可以通過使用各種常規(guī)保護基以避免副反應的發(fā)生從而提高收率。這些常規(guī)的保護方法可參見例如T.Greene,Protecting Groups inOrganic Synthesis.
顯然,上述路線為立體選擇性合成,可通過上述路線還可制備得到其光學活性的類肽化合物。例如將原料L-谷氨酸替換為其光學異構(gòu)體(R構(gòu)型)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可方便地獲得環(huán)酰亞胺衍生物的各種其他異構(gòu)體,并可通過常規(guī)的分離手段純化,如手性鹽或手性層析柱等。
MMPs抑制活性的測試描述于Vijaykumar,M.B.等,Matrix Biol.2000,19,26中。琥珀酰明膠已證明能被明膠酶(包括MMP-2,-9)水解,肽鍵水解產(chǎn)生的游離氨基濃度的高低與酶活性大小呈正相關(guān)。琥珀酸酐保護明膠中的游離氨基,水解后暴露的伯氨與2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)反應顯色,通過檢測450nm處的吸收度確定氨基含量,從而確定明膠酶的活性。
APN抑制活性的測試描述于Lejczak,B等.Biochemistry,1989,28,3549中。底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺被APN降解,產(chǎn)生在405nm有吸收的p-硝基苯胺,并且p-硝基苯胺的濃度與酶活性的大小呈正相關(guān)。通過檢測405nm處的吸收度確定p-硝基苯胺的含量,從而確定氨肽酶的活性,間接反映出抑制劑對酶活性抑制程度的大小。
通式(I)的類肽化合物的體外抑酶試驗證明該類肽化合物為一種環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑本發(fā)明的環(huán)酰亞胺衍生物在空間上與金屬蛋白酶的活性位點相匹配,因此在體外顯示了較高的抑制活性。而且,其可在體內(nèi)代謝成活性片段,如沒食子酸衍生物,仍具有抗腫瘤活性,因此在體內(nèi)也顯示了較高的抗腫瘤活性。
制劑,藥物組合物,劑量和服用本發(fā)明的環(huán)酰亞胺衍生物可以游離形式或以鹽形式存在。本領(lǐng)域熟練人員已知許多化合物類型的藥學上可接受的鹽及其制備方法。藥學上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒性的鹽,包括這樣的化合物堿與無機或有機酸形成的季銨鹽。
本發(fā)明的化合物可形成水合物或溶劑合物。本領(lǐng)域熟練人員已知將化合物與水一起凍干時所形成的水合物或在溶液中與合適的有機溶劑濃縮時形成溶劑合物的方法。
本發(fā)明包含含有治療量本發(fā)明化合物的藥物,和一種或多種藥學上可接受載體和/或賦形劑的藥物組合物。載體包括如鹽水,緩沖鹽水,葡萄糖,水,甘油,乙醇和它們的結(jié)合物,下文更詳細地論述。如果需要,該組合物還可以包含較小量的潤濕劑或乳化劑,或pH緩沖劑。該組合物可以是液體,懸浮液,乳劑,片劑,丸劑,膠囊,持續(xù)釋放制劑或粉末。該組合物可以用傳統(tǒng)的黏合劑和載體如三酸甘油酯配制成栓劑??诜苿┛梢园藴瘦d體如藥物品級的甘露糖醇,乳糖,淀粉,硬脂酸鎂,糖精鈉,纖維素和碳酸鎂等等。視需要制劑而定,配制可以設(shè)計混合,制粒和壓縮或溶解成分。在另一個途徑中,該組合物可以配制成納米顆粒。
使用的藥物載體可以為,例如,固體或者液體。
典型的固體載體包括乳糖,石膏粉,蔗糖,滑石,凝膠,瓊脂,果膠,阿拉伯膠,硬脂酸鎂,硬脂酸等等。固體載體可以包括一種或多種可能同時作為增香劑,潤滑劑,增溶劑,懸浮劑,填料,助流劑,壓縮助劑,粘合劑或片劑-崩解劑的物質(zhì);它還可以是包封材料。在粉末中,載體為精細粉碎的固體,它與精細粉碎的活性成分的混合。在片劑中,火星成分與具有必要的壓縮性質(zhì)的載體以合適的比例混合,以需要的形狀和大小壓縮。粉末和片劑優(yōu)選包含至多99%活性成分。合適的固體載體包括,例如,磷酸鈣,硬脂酸鎂,滑石,糖,乳糖,糊精,淀粉,凝膠,纖維素,甲基纖維素,羧甲基纖維素鈉鹽,聚乙烯吡咯烷酮烷酮,低熔點蠟和離子交換樹脂。
典型的液體載體包括糖漿,花生油,橄欖油,水,等等。液體載體用于制備溶液,懸浮液,乳劑,糖漿,酊劑和密封的組合物?;钚猿煞挚梢匀芙饣驊腋∮谒帉W上可接受的液體載體如水,有機溶劑,二者的混合物或藥學上可接受的油類或脂肪。液體載體可以包含其他合適的藥物添加劑如增溶劑,乳化劑,緩沖劑,防腐劑,增甜劑,增香劑,懸浮劑,增稠劑,顏料,粘度調(diào)節(jié)劑,穩(wěn)定形或滲透壓-調(diào)節(jié)劑。用于口服和腸胃外給藥的液體載體的合適的例子包括水(部分地包含如同上述的添加劑,例如纖維素衍生物,優(yōu)選羧甲基纖維素鈉鹽溶液),醇(包括一元醇和多元醇,例如乙二醇)和它們的衍生物,和油類(例如分餾椰子油和花生油)。用于腸胃外給藥的載體還可以為油脂如油酸乙酯和異丙基肉豆蔻酸鹽。無菌的液體載體用于腸胃外給藥的無菌的液態(tài)組合物。用于加壓組合物的液體載體可以為鹵代烴或其他藥學上可接受的推進劑。無菌溶液或懸浮溶液液體藥物組合物可以用來,例如,靜脈內(nèi),肌內(nèi),腹膜內(nèi)或皮下注射。注射時可單次推入或逐漸注入,入30分鐘的經(jīng)脈內(nèi)灌注。該化合物還可以以液體或者固體組合物的形式口服給藥。
載體或賦形劑可以包括本領(lǐng)域已知的時間延遲材料,如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯,還可包括蠟,乙基纖維素,羥丙基甲基纖維素,異丁烯酸甲酯等等。當制劑用于口服時,公認PHOSALPG-50(phospholipid與1,2-丙二醇濃縮,A.Nattermann & Cie.GmbH)中的0.01%吐溫80用于其他化合物的可接受的口服制劑的配制,可以適應于本發(fā)明各種化合物的配制。
給予本發(fā)明化合物時可以使用各式各樣的藥物形式。如果使用固體載體,制劑可以為片劑,被放入硬膠囊中的粉末或小藥丸形式或錠劑或糖錠形式。固體載體的量在很大程度上變化,但是優(yōu)選從約25mg到約1.0g。如果使用液體載體,制劑可以為糖漿,乳劑,軟膠囊,在安瓿或小瓶或非水的液體懸浮液中的無菌注射溶液或懸浮液。
為了獲得穩(wěn)定的水溶性的劑型,可以將化合物或其藥學上可接受的鹽溶于有機或無機酸的水溶液,0.3M琥珀酸或檸檬酸溶液。選擇性地,酸性的衍生物可以溶于合適的堿性溶液。如果得不到可溶形式,可將化合物溶于合適的共溶劑或它們的結(jié)合。這樣的合適的共溶劑的例子包括,但是不局限于,濃度范圍從0-60%總體積的乙醇,丙二醇,聚乙二醇300,聚山梨酸酯80,甘油,聚氧乙烯脂肪酸酯,脂肪醇或甘油羥脂肪酸酯等等。
各種釋放系統(tǒng)是已知的并且可以用于化合物或其他各種制劑的給藥,這些制劑包括片劑,膠囊,可注射的溶液,脂質(zhì)體中的膠囊,微粒,微膠囊,等等。引入的方法包括但是不局限于皮膚的,皮內(nèi),肌內(nèi),腹膜內(nèi)的,靜脈內(nèi)的,皮下的,鼻腔內(nèi)的,肺的,硬膜外的,眼睛的和(通常優(yōu)選的)口服途徑?;衔锟梢酝ㄟ^任何方便的或者其它適當?shù)耐緩浇o藥,例如通過注入或快速濃注,通過上皮的或粘膜線路(例如,口腔粘膜,直腸和腸粘膜,等等)吸收或通過負載藥物的支架以及可以于其他生物活性劑一起給藥??梢匀砘蚓植拷o藥。用于鼻,支氣管或肺疾病的治療或預防時,優(yōu)選的給藥途徑為口服,鼻給藥或支氣管煙霧劑或噴霧器。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明,但不限于此。
實施例1.(S)-2-(3,4,5-三甲氧苯胺基)戊二酸(4)的制備1)3,4,5-三甲氧基苯甲酸(2)。NaOH(80g,2mol)溶解在500ml蒸餾水中,冷卻至室溫,加入3,4,5-三羥基苯甲酸(沒食子酸,50g,0.294mol),立即塞緊塞子,攪拌至溶??刂苾?nèi)溫低于20℃,加入(CH3)2SO4(89g,67ml,0.71mol),此時溫度可升至30~45℃,不時打開瓶塞放氣。20min后,加入第二批等量的(CH3)2SO4,此時溫度可升至40~45℃,攪拌10min,升溫煮沸2h。再加入50g 40%的NaOH溶液煮沸2h,使可能生成的酯皂化。冷卻反應液至室溫,用稀鹽酸酸化,抽濾,冷水洗滌濾餅,得粗品48g。
粗品的精制。將粗品4g加熱溶解在200ml蒸餾水中,加入0.2g活性炭,煮沸20min,趁熱過濾,將濾液冰箱放置,析出白色針狀結(jié)晶,過濾,干燥稱重3.4g,mp 168~171℃。
2)3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯(3)。3,4,5-三甲氧基苯甲酸(21.2g,0.1mol)溶解在250ml苯中,加入25ml SOCl2,加熱回流4h。停止反應,減壓蒸干溶劑,再加入苯50ml溶解后蒸干,重復兩次,以除盡SOCl2。加入200ml苯溶解備用。
3)(S)-2-(3,4,5-三甲氧苯胺基)戊二酸(4)。無水碳酸鈉(19.6g,0.185mol)和L-谷氨酸(16.9g,0.115mol)溶解在150ml水中,機械攪拌下慢慢滴加上述酰氯的苯溶液同時冰鹽浴,約1h加完。機械攪拌5h后停止攪拌,用酸水調(diào)pH至弱酸性,靜置分層,棄去苯層。繼續(xù)調(diào)pH并用氯仿提取,同時用薄層監(jiān)測至水相只有一個點,棄去氯仿層,水相繼續(xù)調(diào)pH至2,析出大量白色絮狀沉淀,冰箱放置過夜。過濾干燥稱重28.6g,產(chǎn)率89.3%,mp120~121℃。IR(KBr,cm-1)3299.7,3255.4,2942.5,1744.7,1699.5,1500.7,1235.5,1127.7;1H-NMR(DMSO-d6,ppm)12.41(s,2H),8.53(d,1H,J=7.2Hz),7.22(s,2H),4.41(m,1H),3.83(s,6H),3.71(s,3H),2.35(m,2H),2.21(m,1H),1.96(m,1H);ESI-MSm/z 341.8。
實施例2.(S)-2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸(6)的制備1)(S)-N-(2,6-二氧-四氫-2H-吡喃-3-基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺(5)。3,4,5-三甲氧基苯甲酰谷氨酸(10g,2.9mmol),加入80ml乙酸酐,55~60℃油浴保溫5h。趁熱過濾除去不溶物,加入適量無水乙醚,冷卻,析出白色固體。過濾稱重5.2g,產(chǎn)率55%,mp150~152℃。IR(KBr,cm-1)3310.0,2945.1,1777.0,1640.7,1504.2,1239.6,1129.6;ESI-MSm/z323.8。
2)(S)-2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸(6)?;衔?(5.0g)溶解于50mlDMF,1.0g甘氨酸研磨后加入DMF中,110℃加熱5小時。混合物冷卻致室溫,倒如等體積的pH為2的冰水中,放置過夜,析出大量白色結(jié)晶。過濾洗滌稱重3.0g,產(chǎn)率70%。1H-NMR(DMSO-d6,ppm)δ12.34(s,1H),8.88(d,1H),7.17(s,2H),4.53(m,1H),4.42(s,2H),3.83(s,6H),3.71(s,3H),2.18(dt,2H),2.11(dt,2H);ESI-MS m/z[M+1]+381.3。
實施例3.(S)-甲基-2-(2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯(7a)的制備。
化合物6(1.90g,5mmol)和HoBt(0.81g,6mmol)溶解于20ml二氯甲烷和2ml二甲基亞砜,冰浴冷卻至0℃,緩慢滴加EDCI(1.44g,7.5mmol)的二氯甲烷溶液,約1小時滴加完畢,撤去冰浴室溫攪拌2小時。冰浴條件下分批加入甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.75g,6mmol),以三乙胺調(diào)節(jié)pH值7,待冰塊自動融化,繼續(xù)攪拌過夜。反應液先后以lN鹽酸,1%碳酸鈉,飽和鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,柱層析純化得到最終產(chǎn)物,產(chǎn)率79%。mp98.7-100.6℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ9.04(t,1H),8.88(d,1H),7.17(s,2H),4.53(m,1H),4.37(s,2H),4.16(s,2H),3.83(s,6H),3.71(s,3H),3.67(s,3H),2.18(dt,2H),2.11(dt,2H)。ESI-MS m/z[M+1]+452.5。
實施例4.(S)-甲基-2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯(8)將化合物6混旋于20ml無水甲醇,冰浴條件下緩慢滴加SOCl2,滴加完畢后,撤去冰浴,于35-40℃攪拌,約4小時溶液變得澄清。旋轉(zhuǎn)蒸除溶劑,再加入50ml甲醇溶解再蒸除,反復兩次后,加入50ml甲醇,蒸除致1/3體積,室溫放置析出大量白色片狀結(jié)晶,產(chǎn)率。mp 134-137℃;IR(KBr,cm-1)3423.5,3216.3,2945.7,1743.1,1675.6,1632.8,1343.3,1127.8;1H-NMR(DMSO-d6,ppm)δ8.88(d,1H,),7.17(s,2H),4.53(m,1H,),4.44(s,2H),3.83(s,6H),3.71(s,3H),3.67(s,3H),2.18(dt,2H,),2.11(dt,2H);ESI-MS m/z [M+1]+395.4。
實施例5.(S)-N-(1-(2-(羥胺基)-2-氧乙基)-2,6-二氧哌啶-3-基)-3,4,5-三甲氧苯胺(9)。將789mg(2mmol)化合物8溶于7mL無水甲醇中,加入1.5mL NH2OK的甲醇溶液,(按Fieserand Fieser,Vol 1,P 478制備),室溫攪拌,24h后加入1.5g硅膠,旋轉(zhuǎn)蒸除溶劑,所得干粉硅膠上減壓硅膠柱,三氯甲烷∶甲醇(50∶1~5∶1)洗脫,得淡黃色固體512mg,遇FeCl3溶液顯紅色,產(chǎn)率64.7%。熔點117.3-118.8℃。δ8.88(d,1H),8.0(d,1H),7.17(s,2H),4.53(m,1H),4.37(s,2H),3.83(s,6H),3.71(s,3H),2.18(dt,2H),2.11(dt,2H),2.0(brs,1H,OH).ESI-MS m/z[M+1]+396.5。
實施例6目標化合物抑制明膠酶活性試驗(In vitro)試驗原理及詳細步驟參見CN 1528745A吡咯烷類基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑及其制備方法。
實驗結(jié)果見表一。
實施例7目標化合物抑制氨肽酶N的活性試驗(In vitro)1原理氨肽酶N與其底物(L-亮氨酰-p-硝基苯胺)相互作用,產(chǎn)生在405nm有吸收的對—硝基苯胺,并且對—硝基苯胺的濃度與酶活性的大小呈正相關(guān)。通過檢測405nm處的吸收度確定對—硝基苯胺的含量,從而確定氨肽酶的活性,間接反映出抑制劑對酶活性抑制程度的大小。
2材料與方法氨肽酶N與底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺均購自Sigma公司溶液的配制緩沖液,配制pH7.2,50mM磷酸鹽緩沖液,室溫放置備用。
氨肽酶N溶解在緩沖液中配成0.2mg/mL的溶液;底物溶解在DMSO中配成0.5mg/mL溶液,各溶液冰箱放置備用。
3氨肽酶活性分析96孔板中加入上述氨肽酶N溶液10μL,底物溶液,用緩沖液補足200μL。室溫放置1h,于405nm波長處測定吸收值。


空白組

空白組的吸收度與96孔板中的無試劑孔吸收度相差無幾(無試劑孔吸收是0.035),說明空白組幾乎無吸收。對照吸收度可以看出,在酶溶液固定時,底物溶液最好選15μL更適宜,所以定底物為15μL。
4抑酶檢測96孔板中分別加入上述氨肽酶N溶液10μL,底物15μL,不同梯度濃度的化合物20μL,50mM磷酸鹽緩沖液(pH7.2)補足200μL。100%組不含抑制劑??瞻捉M用失活的酶代替活性酶,均用緩沖液補足200μL。室溫放置1h,于405nm波長處測定吸收值。按照如下公式計算抑制率抑制率=(100%吸收度-化合物吸收度)/(100%吸收度-空白吸收度)根據(jù)化合物的濃度與相應的抑制率,利用origin7.5軟件擬合藥效曲線,計算各化合物的IC50。
表一、體外抑酶試驗結(jié)果



a表中數(shù)值為三次實驗的平均值,“±”后數(shù)值表示標準偏差。
實施例8目標化合物抑制荷肝癌H22小鼠血道轉(zhuǎn)移試驗(體內(nèi)試驗)具體方法以及操作步驟見CN 1528745A”吡咯烷類基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑及其制備方法”表二、體內(nèi)試驗結(jié)果

*()內(nèi)為實驗起始動物數(shù)數(shù)據(jù)處理采用One-Way ANOVA方法比較組間差異時,各組體重與空白組均無顯著性差異(p<0.05);各組肺重與空白組均無顯著性差異(p<0.05);結(jié)節(jié)數(shù)均存在極顯著性差異(p<0.01)。與空白組比較,體重與肺重無顯著性差異說明所合成的類肽抑制劑毒副作用較??;結(jié)節(jié)數(shù)明顯減少說明所合成的類肽抑制劑顯示了極好的體內(nèi)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移活性。
權(quán)利要求
1.具有通式I的類肽化合物,以及其光學異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和消旋體混合物,其藥學上可接受的鹽,溶劑合物或前藥, 其中,R1是芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,C1-6烷基,N端保護或未保護天然或非天然氨基酸衍生物,任選被一個或多個如下基團取代羥基,鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰基,芳基C1-8烷氧羰基;R2是氫,芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,以及各種天然或非天然氨基酸側(cè)鏈,任選被一個或多個如下基團取代鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰基;R3是OH,NHOR10(這里R10是氫或C1-8烷基)C1-8烷氧基,NHR11(這里R11是C1-8烷基),芳基,雜芳基,芳基C1-6烷基,雜芳基C1-9烷基,芳基C2-6烯基,雜芳基C2-6烯基,芳基C2-6炔基,雜芳基C2-6炔基,NHCH(R2)COR4(這里R4是OH或NHOR10),任選被一個或多個如下基團取代鹵素,硝基,氰基,鹵C1-8烷基,C1-8烷氧基,C1-6烷基羰基,C1-8烷氧羰,n是1或2,*是立體構(gòu)型為S或R光學純度或其消旋體。
2.如權(quán)利要求1所述的類肽化合物,其特征在于R1是芳基,芳基C1-6烷基,芳基C2-6烯基,非甾體類抗炎藥有機酸,N端保護或未保護天然或非天然氨基酸衍生物,任選被一個或多個如下基團取代羥基,鹵素,硝基,氰基,C1-8烷氧基;R2是氫,以及各種天然或非天然氨基酸側(cè)鏈;R3是OH,OCH3,NHCH(R2)COR4,這里R4是OCH3或NHOH。
3.如權(quán)利要求1-2任一項的化合物,其特征在于是下述化合物(S)-甲基-2-(2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)乙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸酯,(2S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-甲基戊酸酯,(S)-甲基1-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰基)吡咯烷-2-羧酸酯,(S)-methyl 2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-5-(3-硝基胍基)戊酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-4-(甲硫基)丁酸酯,(S)-甲基6-(芐氧羰酰胺基)-2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)己酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(4-羥基芐基)丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸酯,(R)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-羥基丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-苯基丙酸酯,(S)-甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3-巰基丙酸酯,(S)-二甲基2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)鄰苯二甲酸酯,(S)-甲基3-氯-2-(2-((S)-2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯,(S)-甲基3-(2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酰胺基)丙酸酯,(S)-甲基2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯胺基)哌啶-1-基)乙酸酯,(S)-N-(1-(2-(羥胺基)-2-氧乙基)-2,6-二氧哌啶-3-基)-3,4,5-三甲氧苯胺。
4.制備權(quán)利要求1所述類肽化合物的中間體,其特征在于,是3,4,5-三甲氧基苯甲酸;3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯;(S)-2-(3,4,5-三甲氧苯胺基)戊二酸;(S)-N-(2,6-二氧-四氫-2H-吡喃-3-基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺;(S)-2-(2,6-二氧-3-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)乙酸,(S)-叔丁基-2,6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯,(S)-乙基-2-(3-(叔丁氧羰基氨基)-2,6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯,(S)-芐基-2,6-二氧哌啶-3-基氨基甲酸酯,(S)-乙基2-(3-(芐氧羰基氨基)-2,6-二氧哌啶-1-基)乙酸酯。
5.權(quán)利要求1所述類肽化合物的制備方法,其特征在于,以光學純度酸性氨基酸為原料,在堿性條件下縮合,所得的化合物再經(jīng)過脫水環(huán)合,親核取代,多肽縮合試劑縮合等反應最終分離純化而得;或以光學純的谷胺酰胺或天冬酰胺為原料,通過Boc或Cbz保護、環(huán)合、取代等步驟合成關(guān)鍵中間體,然后脫保護,再通過與具有生物活性的不同酰氯以及氨基酸衍生物得到不同系列的類二肽或類三肽。
6.權(quán)利要求1-3任一項類肽化合物在預防或治療與金屬蛋白酶,包括基質(zhì)金屬蛋白酶或氨肽酶N,活性異常表達相關(guān)的哺乳動物疾病的藥物的應用。
7.如權(quán)利要求6所述的應用,所述的與金屬蛋白酶活性異常表達的相關(guān)哺乳動物疾病包括炎癥,癌癥,多發(fā)性硬化癥,各種組織潰瘍或組織潰瘍性病癥,牙周病,大皰性表皮松懈癥,白血病等。
8.一種藥物組合物,包含(1)權(quán)利要求1-3任一項的類肽化合物,和(2)一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
9.一種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物,包含(1)權(quán)利要求1-3任一類肽化合物,和(2)藥學上可接受載體,任選包含(3)一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
10.一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物,包含(1)權(quán)利要求1-3任一類肽化合物,和(2)藥學上可接受載體,任選包含(3)一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
全文摘要
環(huán)酰亞胺類肽金屬蛋白酶抑制劑及其應用。本發(fā)明提供了一類強效的類肽金屬蛋白酶抑制劑,并且在內(nèi)肽酶和外肽酶之間體現(xiàn)出顯著的選擇性,可有效治療金屬蛋白酶活性異常表達的疾病。具體而言,本發(fā)明涉及具有通式(I)結(jié)構(gòu)的類肽化合物,還涉及其各種光學異構(gòu)體,藥學上可接受的鹽,溶劑合物以及前藥。本發(fā)明還涉及含有式(I)結(jié)構(gòu)類肽化合物的藥物組合物及其制藥用途。
文檔編號A61K31/4412GK1974554SQ20061014620
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月12日
發(fā)明者徐文方, 李乾斌 申請人:山東大學
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