專利名稱：從東紫蘇中提取木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物提取藥物的方法，尤其涉及一種從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。
背景技術(shù)：
東紫蘇(Elsholtzia bodinieri Vaniot.)為唇形科(Labiatae)香薷屬(Elsholtzia)植物。其全草均可入藥，用于治療感冒風(fēng)寒、頭痛身痛、虛火牙痛、瀉肚、急性結(jié)膜炎、肝炎、咽喉痛、消化不良、閉尿等癥；嫩葉可做茶飲用，有清熱解毒之功效。在對(duì)東紫蘇進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離研究中發(fā)現(xiàn)，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucoside)在東紫蘇中含量較高，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷具有止咳、祛痰、消炎作用，而且有降低兔實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化和膽固醇的作用，大鼠皮下注射，有增強(qiáng)毛細(xì)血管通透性作用，但目前沒有從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)上述目的從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，首先對(duì)東紫蘇利用溶劑提取，提取溶劑為乙醇、甲醇、丙酮和水以不同配比所組成的溶劑，東紫蘇與提取溶劑的重量比為1∶8-20，提取液濃縮后得濃縮液或浸膏，將濃縮液或浸膏溶于水，用弱極性或中等極性的有機(jī)萃取劑萃取脫脂，脫脂后的水相再用與水不互溶的低碳醇類萃取劑萃取，醇類萃取相濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
弱極性或中等極性的萃取劑為石油醚、環(huán)己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯，與水不互溶的低碳醇類萃取劑為C4～C10的醇類。
與水不互溶的低碳醇類萃取劑為正丁醇、1-戊醇、環(huán)戊醇、環(huán)己醇或異辛醇。
另一種從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，首先對(duì)東紫蘇利用溶劑提取，提取溶劑為乙醇、甲醇、丙酮和水以不同配比所組成的溶劑，東紫蘇與提取溶劑的重量比為1∶8-20，提取液濃縮后得濃縮液或浸膏，濃縮液或浸膏溶解于水，用弱極性或中等極性的有機(jī)溶劑萃取脫脂，脫脂后的水相過大孔吸附樹脂，先用水洗去水溶性雜質(zhì)后，再用洗脫劑洗脫，洗脫液濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
弱極性或中等極性的萃取劑為石油醚、環(huán)己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯。
大孔吸附樹脂為弱極性、非極性或中等極性的大孔吸附樹脂，洗脫劑為醇-水體系洗脫劑。
選用弱極性、水份含量為60-70％、比表面積為480-520m2/g、平均孔徑為130-140的大孔吸附樹脂。
本發(fā)明的方法可從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷純品，提取工藝簡(jiǎn)單，制備方便，能耗小，主要以醇-水體系為溶劑，無(wú)環(huán)境污染，溶劑可循環(huán)使用，提取率高，粗品提取可得到含量在60-80％的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，純化后得到含量在95-99％的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷可用于研發(fā)治療心腦血管疾病、支氣管炎、哮喘、肺癌等疾病的藥物。


圖1是對(duì)照品的高效液相色譜圖；圖2是本發(fā)明樣品的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1，東紫蘇采自云南省紅河州，將東紫蘇全草500g粉碎，用4000ml的乙醇-水作提取劑，回流提取，其中乙醇的體積百分比為70％，提取液減壓濃縮至無(wú)乙醇后，得東紫蘇提取物濃縮液，用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯萃取后的水相減壓濃縮除去殘留的乙酸乙酯后，冷凍干燥得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷粗產(chǎn)品，HPLC、UV測(cè)定含量為80％，對(duì)粗品進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，則得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷純品，HPLC、UV測(cè)定含量為96％。
實(shí)施例2，將東紫蘇全草500g粉碎，用7000ml的乙醇-水作提取劑，回流提取，其中乙醇的體積百分比為90％，提取液減壓濃縮至無(wú)乙醇后，得東紫蘇濃縮浸膏，將東紫蘇浸膏制成水懸浮液，用與懸浮液等體積氯仿萃取三次，氯仿萃取后的水相再用1-戊醇萃取，1-戊醇萃取相減壓濃縮后，真空干燥，則得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷粗品，HPLC、UV測(cè)定含量約為61％，對(duì)粗品進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，則得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷純品，HPLC、UV測(cè)定含量為98％。
實(shí)施例3，將東紫蘇全草500g粉碎，用10000ml的丙酮-水作提取劑，回流提取，其中丙酮的體積百分比為60％，提取液減壓濃縮至無(wú)丙酮后，得東紫蘇提取物濃縮液，用與濃縮液等體積石油醚萃取兩次脫脂，水相過大孔吸附樹脂，用水洗至流出液無(wú)色，以95％乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫液減壓濃縮后，再冷凍干燥，得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷精品，HPLC、UV測(cè)定含量約為90％；對(duì)粗品和精品進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，則得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷純品，HPLC、UV測(cè)定含量為99％。其中，大孔吸附樹脂選用弱極性，粒度mm(0.3-1.25)≥90％，水份含量70％，平均比表面積為520m2/g，平均孔徑140的大孔吸附樹脂。
實(shí)施例4，將東紫蘇全草500g粉碎，用5000ml的丙酮-水作提取劑，回流提取，其中丙酮的體積百分比為60％，提取液減壓濃縮至無(wú)丙酮后，得東紫蘇提取物濃縮液，用等體積的環(huán)己烷萃取三次后，水相過大孔吸附樹脂，用水洗至流出液無(wú)色，以95％乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫液減壓濃縮后，再噴霧干燥，得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷精品，HPLC、UV測(cè)定含量約為90％；對(duì)精品進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，則得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷純品，HPLC、UV測(cè)定含量為99％。其中，大孔吸附樹脂選用非極性，粒度mm(O.3-1.25)≥90％，水份含量60％，平均比表面積為480m2/g，平均孔徑130的大孔吸附樹脂。
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷產(chǎn)物鑒定一、性狀含量為99％，淺黃色粉末，mp 251-253℃；HCl-Zn反應(yīng)陽(yáng)性，TLC遇硫酸乙醇溶液加熱顯黃色，薄層水解檢出葡萄糖和木犀草素。
二、光譜圖EI-MS m/z(％)448 (26)，286(苷元)(100)，270(5)，258(16)，257(5)，212(38)，162(3)，示為黃酮類化合物，推得分子式為C21H20O11，與質(zhì)譜分子離子峰一致；化合物的13C-NMR、DEPT譜中，在δC 60.6-105范圍內(nèi)，出現(xiàn)典型的葡萄糖特征碳吸收信號(hào)，示為黃酮苷。在1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ中，12.98(1H，s)、10.00(1H，s)和9.41(1H，s)的三個(gè)峰分別歸屬為5、4′和3′位的羥基信號(hào)，7.43(1H，dd，J＝2.0，8.4Hz)是6′位的質(zhì)子信號(hào)，7.41(1H，d，J＝2.0Hz)和6.89(1H，d，J＝8.0Hz)則為2′和5′位的峰，6.78(1H，d，J＝2.0Hz)和6.43(1H，d，J＝2.0Hz)分別是8位和6位質(zhì)子信號(hào)，6.75(1H，s)則為3位質(zhì)子信號(hào)，5.08(1H，d，J＝6.8Hz)是糖端基質(zhì)子信號(hào)，為β-型。綜合所有光譜數(shù)據(jù)，經(jīng)與文獻(xiàn)對(duì)照，確定該化合物為5，3′，4′-三羥基黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，即木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
三、含量測(cè)定選用安捷倫高效液相色譜儀，日本島津公司UV-250分光光度儀；色譜柱Agilent ODS(5μm，21mm×150mm)，流動(dòng)相甲醇-1.5％冰醋酸水溶液(60∶40v/v)；流速0.3mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)360nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量5μL，選用甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品自制，結(jié)構(gòu)通過UV，IR，NMR等譜學(xué)方法鑒定，純度經(jīng)HPLC面積歸一化法測(cè)定大于99％，可作定量之用，對(duì)照品的高效液相色譜圖如圖1所示。
(一)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的考察1、高效液相標(biāo)準(zhǔn)曲線的考察取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5mL，用甲醇稀釋10倍，準(zhǔn)確吸取標(biāo)液3.0，4.0，5.0，6.0，7.0μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y＝305.7167+7864.7871Xr＝0.9994線性范圍為0.3～0.7μg。
2、分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的考察分別用吸量管依次吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5mL于比色管中，用甲醇稀釋至25mL，混勻，在360nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo)，以吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y＝-0.00155+44.5428X r＝0.9999線性范圍為0.004～0.014g·L-1。
(二)、精密度和重現(xiàn)性1、高效液相法的精密度和重現(xiàn)性取同一樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積RSD＝0.045％。準(zhǔn)確稱取同一樣品5份，用上述方法配制樣品溶液，測(cè)定得如圖2所示的樣品高效液相色譜圖，其峰面積的RSD＝2.1％。
2、分光光度法的精密度和重現(xiàn)性取同一樣品溶液連續(xù)測(cè)定5次，得吸光度的RSD＝0.045％。準(zhǔn)確稱取同一樣品5份，用上述方法配制樣品溶液，依法測(cè)定，得吸光度的RSD＝2.1％。
(三)、穩(wěn)定性和回收率1、高效液相法的穩(wěn)定性和回收率取同一樣品溶液，室溫放置0，2，4，6，8h分別進(jìn)樣，測(cè)得峰面積平均值為3.936×103，RSD＝2.2％。取對(duì)照品儲(chǔ)備液與樣品溶液各5mL混勻，共五份，測(cè)定回收率見表1。
2、分光光度法穩(wěn)定性與回收率取對(duì)照品儲(chǔ)備液與樣品溶液各5mL混勻，共五份，測(cè)定回收率見表1。
(四)、含量結(jié)果1、高效液相色譜法測(cè)定分別取樣品儲(chǔ)備液2.5mL三份，用甲醇稀釋10倍，在選定的色譜條件下，進(jìn)樣5μL，測(cè)得樣品含量見表1。
2、紫外分光光度法測(cè)定分別吸取樣品儲(chǔ)備液2.5mL三份，用甲醇稀釋至25mL，測(cè)得含量見表1。
表1HPLC和UV法測(cè)定結(jié)果比較

*P＞0.01，兩種方法測(cè)定的結(jié)果無(wú)顯著性差異。
權(quán)利要求
1.從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，對(duì)東紫蘇利用溶劑提取，其特征在于，將提取后的濃縮液或浸膏溶于水，用弱極性或中等極性的有機(jī)萃取劑萃取脫脂，脫脂后的水相再用與水不互溶的低碳醇類萃取劑萃取，萃取相濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
2.如權(quán)利要求1所述的從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，弱極性或中等極性的萃取劑為石油醚、環(huán)己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯，與水不互溶的低碳醇類萃取劑為C4～C10的醇類。
3.如權(quán)利要求1或2所述的從東紫蘇中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，與水不互溶的低碳醇類萃取劑為正丁醇、1-戊醇、環(huán)戊醇、環(huán)己醇或異辛醇。
4.如權(quán)利要求3所述的從東紫蘇中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，提取溶劑為乙醇、甲醇或丙酮和水以不同配比所組成的溶劑，東紫蘇與提取溶劑的重量比為1∶8-20。
5.從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，對(duì)東紫蘇利用溶劑提取，其特征在于，將提取后的濃縮液或浸膏溶解于水，用弱極性或中等極性的有機(jī)萃取劑萃取脫脂，脫脂后的水相過大孔吸附樹脂，洗脫劑洗脫，洗脫液濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
6.如權(quán)利要求5所述的從東紫蘇中提取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，弱極性或中等極性的萃取劑為石油醚、環(huán)己烷、正己烷、氯仿或乙酸乙酯。
7.如權(quán)利要求5或6所述的從東紫蘇中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，大孔吸附樹脂為弱極性、非極性或中等極性的大孔吸附樹脂，洗脫劑為醇-水體系洗脫劑。
8.如權(quán)利要求7所述的從東紫蘇中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，選用弱極性、水份含量為60-70％、比表面積為480-520m2/g、平均孔徑為130-140的大孔吸附樹脂。
9.如權(quán)利要求8所述的從東紫蘇中提取的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于，提取溶劑為乙醇、甲醇或丙酮和水以不同配比所組成的溶劑，東紫蘇與提取溶劑的重量比為1∶8-20。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物提取藥物的方法，尤其涉及一種從東紫蘇中提取木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷的方法，對(duì)東紫蘇利用溶劑提取，將提取后的濃縮液或浸膏溶于水，用弱極性或中等極性的有機(jī)萃取劑萃取脫脂，脫脂后的水相再用與水不互溶的低碳醇類萃取劑萃取，萃取相濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷；或者脫脂后的水相過大孔吸附樹脂，洗脫劑洗脫，洗脫液濃縮干燥，重結(jié)晶后得木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷；本發(fā)明提取工藝簡(jiǎn)單，制備方便，能耗小，無(wú)環(huán)境污染，溶劑可循環(huán)使用，提取率高，可用于研發(fā)治療心腦血管疾病、支氣管炎、哮喘、肺癌等疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K127/00GK1974590SQ20061012829
公開日2007年6月6日 申請(qǐng)日期2006年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月29日
發(fā)明者趙東保, 劉繡華, 李明靜, 張衛(wèi), 邵鵬 申請(qǐng)人:河南大學(xué)