專利名稱：Mif抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及MIF抑制劑，例如具有藥物活性的化合物，例如人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的互變異構酶活性抑制劑，例如3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，其在氮原子上被未取代的或取代的(C3-8)環(huán)烷基、(C3-8)環(huán)烷基(C1-4)烷基、(C6-18)芳基或(C6-18)芳基(C1-4)烷基取代。
MIF是具有多種細胞和生物活性的細胞活素(見下列綜述Calandra等人，Nat.Rev.Immunol.3791-800.2003；Orita等人，Curr.Pharm.Design81297-1317，2002；Nishihira，J Interferon Cytokine Res 20751-762，2000；Swope & Lolis，Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol.1391-32，1999；Metz &Bucala，Adv.Immunol.66197-223，1997)。人們發(fā)現(xiàn)MIF可以抑制巨噬細胞的隨機移動并且與遲發(fā)型超敏反應有關(George & Vaughan，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.111514-521，1962；Weiser等人，J.Immunol.1261958-1962，1981；Bloom & Bennett，Science，15380-82，1966；David，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 5672-77，1966)。MIF也可以具有加強巨噬細胞黏附、吞噬和殺腫瘤的活性(Nathan等人，J.Exp.Med.137275-288，1973；Nathan等人，J.Exp.Med.1331356-1376，1971；Churchill等人，J.Immunol.115781-785，1975)。
重組人MIF最初是從人T細胞文庫克隆產(chǎn)生(Weiser等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 867522-7526，1989)并且能夠活化血液衍生的巨噬細胞以在體外殺死細胞內寄生蟲和腫瘤細胞、刺激IL-1β和TNFα表達并且誘導氧化氮的合成(Weiser等人，J.Immunol.1472006-2011，1991；Pozzi等人，Cellular Immunol.145372-379，1992；Weiser等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 898049-8052，1992；Cunha等人，J.Immunol.1501908-1912，1993)。近來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MIF不僅是免疫系統(tǒng)的細胞活素產(chǎn)物，也是內分泌系統(tǒng)(特別是腦垂體腺)的類激素產(chǎn)物。該項研究強調了MIF作為糖皮質激素(內源性釋放的和治療上施用的那些糖皮質激素)的抗炎作用的反向調節(jié)劑的有效活性，其作用為糖皮質激素的限制和抑制炎性反應的嚴重程度的正常的活性被MIF抑制并且因此內源性MIF的反應被認為是多種炎性疾病和病癥的原因或惡化因素(在Donnelly和Bucala，Molecular Medicine Today3502-507，1997中綜述)。
另外，生物活性包括調節(jié)被刺激的T細胞(Bacher等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 937849-7854，1996)、控制IgE合成(Mikayama等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9010056-60，1993)、使p53腫瘤阻抑蛋白功能性失活(Hudson等人，J.Exp.Med.1901375-1382，1999)、調節(jié)葡萄糖和碳水化合物的代謝(Sakaue等人，Mol.Med.5361-371，1999)以及調節(jié)腫瘤細胞生長和血管生成(Chesney等人，Mol Med.5181-191，1999；Shimizu等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.264751-758，1999；Mitchell & Bucala，Cancer Biol.10359-366，2000)。也包含MIF在動脈粥樣化形成(Lin等人，Circulation Res.81202-1208，2000)、哮喘(Yamaguchi等人，Clin.Exp.Allergy 301244-1249，2000)和瘧疾(Martiney等人，InfectionImmunity 682259-2267，2000)中的作用。
抗MIF抗體在多種模型中具有活性內毒素和外毒素誘導的中毒性休克(Bernhagen等人，Nature，365756-759，1993；Kobayashi等人，Hepatology，291752-1759，1999；Calandra等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，9511383-11388，1998；Makita等人，Am.J.Respir.Crit.Care Med.158573-579，1998，Calandra等人，Nat.Med.6164-170，2000)、T細胞活化(Bacher等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.937849-7854，1996)、自身免疫疾病(包括類風濕性關節(jié)炎(Leech等人，Arthritis Rheum.，421601-1608，1999)、眼色素層視網(wǎng)膜炎(Kitaichi等人，Curr.Eye Res.，20109-114，2000)、腎小球腎炎(Yang等人，Mol.Med.4413-424，1998)、實驗性急性腦脊髓炎(Denkinger等人，J.Immunol.1701274-1282，2003)、結腸炎(de Jong等人，Nat.Immunol.21061-1066，2001；Ohkawara等人，Gastroenterol.123256-270，2002)和皮膚移植物破壞(Hou等人，Transplantation 721890-1897，2001)以及動脈粥樣硬化(Chen等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24709-714，2004；Schober等人，Circulation 109380-385，2004)。另外，抗MIF抗體還可以抑制腫瘤生長和血管生成(Chesney等人，Mol.Med.5181-191，1999；Ogawa等人，Cytokine 12309-314，2000；Mitchell &Bucala，Cancer Biol.10359-366，2000)?；诳筂IF抗體的活性，低分子量的MIF抑制劑的治療潛力是很高的。
MIF與D-多巴色素互變異構酶具有高度序列同源性(36％同一性)，并且具有催化非生理底物D-多巴色素(Rosengren等人，Mol.Med.2143-149，1996)和L-多巴色素甲酯(Bendrat等人，Biochemistry，3615356-15362，1997)的互變異構化的酶活性(

圖1A)。另外，苯丙酮酸和對羥基苯丙酮酸(Rosengren等人，F(xiàn)EBS Letter，41785-88，1997)以及3，4-二羥基苯基氨基chrome和去甲腎上腺素chrome(Matsunaga等人，J.Biol.Chem.，2743268-3271，1999)是MIF底物。人MIF的三維晶體結構表明蛋白是以同源三聚體存在的(Lolis等人，Proc.Ass.Am.Phys.108415-419，1996)。已經(jīng)描述了多種MIF互變異構酶活性抑制劑(例如Orita等人，J.Med.Chem.44540-547，2001；Senter等人，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)99144-149，2002；Dios等人，J.Med.Chem.452410-2416，2002；Lubetsky等人，J.Biol.Chem.27724976-24982，2002)。
現(xiàn)在令人驚奇地發(fā)現(xiàn)用作MIF抑制劑的一類新化合物。
一方面，本發(fā)明提供了選自以下的化合物3-((C6-12)芳基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，例如3-(苯基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮、3-(萘基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-((C3-8)環(huán)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，例如3-(環(huán)己基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-((C6-12)芳基(C1-4)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，例如3-(芐基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-((C3-8)環(huán)烷基(C1-4)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，優(yōu)選為3-(苯基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(萘基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，
3-(環(huán)己基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-(芐基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(萘基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(環(huán)己基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-(芐基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(苯基)-7-氨基磺?；趸?3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(萘基)-7-氨基磺?；趸?3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(環(huán)己基)-7-氨基磺酰基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-(芐基)-7-氨基磺?；趸?3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。
另一方面，本發(fā)明提供了下式化合物 例如其為3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮其中R1為未取代的或取代的(C3-8)環(huán)烷基(C1-4)烷基、(C6-18)芳基(C1-4)烷基、-(C3-8)環(huán)烷基、(C6-18)芳基，例如其中(C6-18)芳基任選地增加另外的環(huán)(體系)，例如其中取代基包括例如選自(C6-18)芳基、鹵素、羥基、氨基磺?；趸?、(C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基、鹵(C1-4)烷基或鹵(C1-4)烷氧基，R2為氫或未取代的或取代的羥基，例如氫、羥基、氨基磺酰基氧基、(C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基或鹵(C1-4)烷氧基。
在式I化合物中，優(yōu)選R1為未取代的或取代的環(huán)己基、苯基、萘基、與另外的環(huán)(體系)稠合的苯基，例如與冠醚稠合的苯基，或苯基(C1-4)烷基，其中取代基包括例如選自(C6-18)芳基、鹵素、羥基、氨基磺酰基氧基、(C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基、鹵(C1-4)烷基、鹵(C1-4)烷氧基，
R2為氫、羥基、氨基磺?；趸?、(C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基、鹵(C1-4)烷基或鹵(C1-4)烷氧基。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物，其中R1為環(huán)己基；羥基環(huán)己基，例如4-羥基環(huán)己基；苯基；聯(lián)苯基，例如聯(lián)苯-4-基；萘基，例如萘-1-基；-羥基苯基，例如3-羥基苯基、4-羥基苯基；甲氧基苯基，例如4-甲氧基苯基；三氟甲氧基苯基，例如4-三氟甲氧基苯基；溴苯基，例如4-溴苯基；氨基磺?；趸交?，例如3-氨基磺?；趸交?、4-氨基磺?；趸交?；(叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基苯基，例如4-(叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基苯基；苯基甲基或與18-冠-6稠合的苯基，例如苯并-18-冠-6，并且R2如上定義。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物，其中R1如上定義，并且R2為氫、羥基、氨基磺酰基氧基。
在式I化合物中，每個單獨定義的取代基可以為優(yōu)選的取代基，例如各取代基互相獨立。
另一方面，本發(fā)明提供了選自下列的化合物3-環(huán)己基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-甲氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-羥基環(huán)己基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-苯基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(3-羥基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-羥基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-氨基硫烷基氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-(叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(6.7.9.10.12.13.15.16.18.19-十氫-5，8，11，14，17，20-六氧基苯并環(huán)十八烯-2-基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(苯基甲基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-三氟甲基氧基苯基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，
3-(4-甲氧基苯基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(聯(lián)苯-4-基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(萘-1-基)-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-溴苯基))-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(3-氨基硫烷基氧基苯基)-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-環(huán)己基-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-氨基硫烷基氧基苯基)-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-甲氧基苯基)-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-苯基-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-(4-羥基苯基)-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-(苯基甲基)-7-氨基硫烷基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。
另一方面，本發(fā)明提供了下式化合物 本發(fā)明提供的化合物在本文中稱為“(根據(jù))本發(fā)明的化合物”。
本發(fā)明化合物包括任何形式的化合物，例如游離形式、鹽形式、溶劑化物形式以及鹽和溶劑化物形式。
另一方面，本發(fā)明提供了鹽形式的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物的鹽包括可藥用鹽，例如包括金屬鹽或酸加成鹽。金屬鹽包括例如堿金屬或堿土金屬鹽，酸加成鹽包括與有機酸或無機酸的鹽，例如與HCl的鹽。游離形式的本發(fā)明化合物可以轉化為相應的鹽形式的化合物；并且反之亦然。游離形式或鹽形式以及溶劑化物形式的本發(fā)明化合物可以轉化為相應的游離形式或非溶劑化形式的鹽形式的化合物；并且反之亦然。
本發(fā)明化合物可以以異構體或其混合物的形式存在；例如旋光異構體，非對映異構體、順/反構象異構體。本發(fā)明化合物可以例如包含不對稱碳原子并且可以因此以對映異構體或非對映異構體或它們的混合物的形式存在，例如以外消旋體存在。在任何不對稱碳原子上的取代基可以以(R)-、(S)-或(R；S)-構型存在，優(yōu)選以(R)-或(S)-構型存在。
例如，在式I化合物的R1的定義中，與環(huán)烷基連接的取代基，例如在環(huán)烷基的非對位連接的取代基，相對于也連接于該環(huán)烷基上的7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮基團，可以為(R)-或(S)-構型。
異構體混合物可以按照適當?shù)?，例如根?jù)常規(guī)的方法分離以獲得純的異構體。本發(fā)明包括任何異構體形式和任何異構體混合物形式的本發(fā)明化合物。當互變異構體可以存在時，本發(fā)明也包括式I化合物的互變異構體。
另一方面，本發(fā)明提供制備式I化合物的方法a.分別將式II化合物 或式IIA化合物 其中PROT為羥基保護基(例如芐基)，與下式化合物反應H2N-R1其中R1如上定義，該反應在還原劑(例如NaBH4)存在下進行，以分別獲得式III化合物 或式IIIA化合物
b.分別將獲得的式III或式IIIA化合物與羰基二咪唑在堿(例如三乙胺)的存在下反應，以分別獲得式IV化合物 或式IVA化合物 c.任選地，如果R1包含羥基取代基，那么使該羥基與所述取代基的活性衍生物反應以獲得取代的羥基，例如，在式I化合物中的R1包含三(C1-6)烷基甲硅烷氧基的情況中，將羥基例如在咪唑的存在下與三(C1-6)烷基甲硅烷基鹵化物(例如氯化物)反應，例如，在式I化合物中的R1為氨基磺酰基氧基的情況下，將羥基與氨基氯磺酸反應，d.任選地去保護，例如通過催化氫化例如將保護基PROT除去以獲得式I化合物，e.任選地，如果式II化合物用作原料，將在步驟d中獲得的羥基與所述取代基的活性衍生物反應以獲得取代的羥基，例如在式I中的R2為三(C1-6)烷基甲硅烷氧基的情況中，將在步驟d中獲得的羥基例如在咪唑的存在下與三(C1-6)烷基甲硅烷基鹵化物(例如氯化物)反應，例如，在R2為氨基磺?；趸那闆r下，將在步驟d中獲得的羥基與氨基氯磺酸反應，并且e.將獲得的式I化合物分離。
本發(fā)明中描述的任何化合物，例如本發(fā)明化合物可以適當?shù)乩珙愃频馗鶕?jù)常規(guī)的方法(例如本發(fā)明中說明的方法)制備。式II或式III化合物是已知的或可以例如類似地根據(jù)常規(guī)的方法獲得。
已經(jīng)令人驚奇地確定本發(fā)明化合物為MIF抑制劑，其是通過該抑制劑在體外對MIF酶活性的抑制確定的。MIF天然底物的酶活性并沒有明確已知。但是，MIF的互變異構酶活性可以用底物D-多巴色素和對羥基苯丙酮酸鹽(HPP)容易地說明(Rosengren等人，Molec.Med.2143-149，1996；Rosengren E，F(xiàn)EBS Lett.41785-88，1997)。本發(fā)明中所用的試驗是適于微量滴定板形式的HPP試驗-根據(jù)Bernhagen等人，Biochemistry，3314144-14155，1994純化人MIF蛋白。酶的稀釋液是在50mM磷酸鈉緩沖液，1mM EDTA，pH6.5中制備的。
-HPP是從Aldrich獲得的。制備60mM HPP的乙醇儲備液并將其在冰上至多保存4小時。底物的工作液(600μM)通過用50mM磷酸鈉緩沖液，1mM EDTA，pH6.5稀釋儲備液來制備。
-UV透明微量滴定板(96孔)從Corning(Cat#3635)獲得。抑制劑和酶溶液用Eppendorf 12通道移液器手動吸出。加入底物以開始反應是用Igel96吸量裝置(pipetting station)(OpalJena，Jena，Germany)進行的，該裝置可以使液體同時加入到96孔板中。
-用SPECTRAmax 250讀板儀(Molecular Devices)確定光密度(OD)。該讀板儀用SoftmaxPro 2.6.1軟件操作。
-試驗將微量滴定板的三個孔中僅裝入緩沖液以作為空白。將下列物質連續(xù)吸出加至試驗孔中-50μL抑制劑稀釋液(或緩沖液作為對照)，-50μL酶稀釋液(55nM；試驗終濃度18.3nM)，-50μL新鮮稀釋的底物工作液(600μM；終濃度200μM)。
最后一步用96通道移液裝置進行。然后立即(即在數(shù)秒內)將板手動轉移至SPECTRAmax 250讀板儀并且確定光密度(310nm)。
從獲得的數(shù)據(jù)，應用ExcelTM和XLfitTM軟件計算IC50值。
本發(fā)明化合物在試驗中顯示活性，即它們抑制MIF(互變異構酶)-酶活性并且因此表明其可用作例如治療MIF介導的疾病的藥物。典型地，該化合物對MIF互變異構酶活性的抑制的半數(shù)最大抑制(IC50)的范圍為20nM至20μM。優(yōu)選的化合物是實施例2的化合物，其IC50＝20nM。
本發(fā)明化合物適于治療或預防MIF介導的疾病。
MIF介導的疾病，例如炎性疾病、自身免疫疾病、神經(jīng)病障礙和癌癥，例如包括移植，例如包括-與細胞活素介導的毒性有關的疾病，例如包括白介素-2毒性，-與骨有關的疾病例如包括骨質疏松，-與腦和神經(jīng)有關的疾病，例如包括與下丘腦-垂體-腎上腺軸有關的病癥、神經(jīng)變性疾病、腦血管疾病、中樞神經(jīng)感染、創(chuàng)傷性疾病、阿爾茨海默病、腦障礙，包括創(chuàng)傷和創(chuàng)傷的炎性后果，-與眼有關的疾病，例如包括眼色素視網(wǎng)膜炎、玻璃體視網(wǎng)膜病變、角膜疾病、虹膜炎、虹膜睫狀體炎、白內障、眼色素層炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變，-與胃腸道有關的疾病，例如包括結腸炎、炎性腸病、結腸炎、克隆病、潰瘍性結腸炎、消化性潰瘍、胃炎、oseophagitis，-與心臟和血管病癥有關的疾病，例如包括心臟病、增生性血管疾病、血管炎、結節(jié)性多動脈炎、局部缺血的炎性后果、局部缺血性心臟病、心肌梗塞、中風、外周血管疾病、肺動脈高血壓，-與肝和腎有關的疾病，例如包括肝硬化、肝炎、硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化，-與呼吸道和肺有關的疾病，例如包括肺部疾病、慢性肺部疾病、急性(成人)呼吸窘迫綜合征(ARDS)、哮喘、哮喘性支氣管炎、支氣管擴張、擴散性間質性肺部疾病、塵肺、fibrosing aveolitis，-與皮膚和結締組織疾病有關的疾病例如包括濕疹、特應性皮炎、接觸性皮炎、銀屑病、皮肌炎、舍格倫綜合征、丘-斯綜合征、曬傷、皮膚癌、創(chuàng)傷愈合，-與過敏性疾病有關的疾病例如包括遲發(fā)型超敏反應、過敏性鼻炎，-與血管生成有關的疾病，例如包括特征為odified血管生成的疾病，腫瘤相關的血管生成，-與細胞過度增生有關的疾病，例如包括惡化前病癥、高增生性障礙、原發(fā)性或轉移的癌癥、caervical和轉移的癌癥、實體腫瘤、腫瘤生長、淋巴瘤、B細胞或T細胞淋巴瘤、惡化前病癥、良性腫瘤、良性不良增生性障礙、腎癌、食管癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、乳腺癌、結腸癌、肺癌、黑素瘤、鼻咽癌、骨癌、卵巢癌、子宮癌、前列腺癌、皮膚癌、白血病、腫瘤新血管形成、血管瘤、肌發(fā)育異常疾病，-與糖尿病有關的疾病例如包括糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、胰島素依賴性糖尿病、糖尿病，-與endiometriosis、睪丸功能障礙有關的疾病，-與感染性疾病，例如慢性感染性疾病有關的疾病，例如包括細菌性疾病、中耳炎、萊姆病、thryoditis、病毒性疾病、寄生物疾病、真菌疾病、瘧疾(例如瘧疾貧血)、膿毒病、嚴重膿毒病、敗血癥性休克(例如內毒素誘導的敗血癥性休克)、外毒素誘導的中毒休克、感染性(真實敗血癥性(true septic))休克、由革蘭氏陰性菌引起的敗血癥性休克、骨盆炎性疾病、AIDS，-與重癥肌無力有關的疾病，-與腎炎有關的疾病，例如包括腎小球腎炎、間質性腎炎、韋格納肉芽腫病，-與疼痛有關的疾病，
-與風濕性疾病有關的疾病，例如包括關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、銀屑病關節(jié)炎、晶體關節(jié)病、痛風、假痛風、焦磷酸鈣沉積疾病、狼瘡綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬化、硬皮病、多發(fā)性硬化、動脈粥樣硬化、動脈硬化、脊椎關節(jié)病、系統(tǒng)性硬化病、反應性關節(jié)炎、賴特爾綜合征、強直性脊椎炎、多肌炎，-與結節(jié)病有關的疾病，-與移植有關的疾病，例如包括移植物抗宿主病、伴隨器官移植排斥反應的衰竭、移植排斥反應、保護移植器官；例如治療或預防炎性疾病、自身免疫疾病、神經(jīng)病障礙和癌癥，例如包括移植后疾病。
優(yōu)選的是治療或預防與胃腸道有關的疾病，包括結腸炎、炎性腸病、克隆病、潰瘍性結腸炎；以及與風濕性疾病有關的疾病，例如關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎。
另一方面，本發(fā)明提供了用作藥物的本發(fā)明化合物，例如用作MIF介導的疾病的藥物，例如治療或預防炎性疾病、自身免疫疾病、神經(jīng)病障礙和癌癥，例如包括移植后疾病。
例如包括與細胞活素介導的毒性、骨、腦、神經(jīng)、眼、胃腸道、心臟和血管疾病、肝和腎、呼吸道和肺、皮膚和結締組織疾病、過敏性疾病、血管生成、細胞過度增生和癌癥、糖尿病、endiometriosis、睪丸功能障礙、感染疾病、重癥肌無力、腎炎、疼痛、風濕性疾病、結節(jié)病有關的疾病，以及治療和預防移植后疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療或預防MIF介導的疾病，例如上述疾病的藥物，例如藥物組合物中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了用于治療或預防MIF介導的疾病，例如上述疾病的方法，該方法包括給需要該治療的個體施用治療有效量的本發(fā)明化合物。
治療包括治療和預防(防止)。
對于該治療，適合的劑量當然將取決于以下因素，例如所應用的本發(fā)明化合物的化學性質和藥物動力學數(shù)據(jù)、個體宿主、施用方式以及待治療的疾病的性質和嚴重程度。
本文中所用的“藥學上有效量”指的是引起以MIF釋放和生成為特征的疾病的發(fā)展減緩或嚴重程度的降低的本發(fā)明化合物的量。該化合物的毒性和療效可以在細胞培養(yǎng)或試驗動物中通過標準的藥學、藥理學和毒理學方法來確定，例如確定LD50(50％群體致死劑量)和ED50(50％群體治療有效劑量)，例如從細胞培養(yǎng)試驗或動物研究中獲得的數(shù)據(jù)可以用于在人中應用的劑量確定。本發(fā)明化合物的劑量優(yōu)選為在循環(huán)濃度范圍內，其包括ED50(或ED99)，具有低毒性或無毒性。劑量可以取決于所應用的劑型和施用途徑。確切的藥物組合物、施用途徑和劑量可以通過不同的醫(yī)師根據(jù)病人的狀況選擇。(見例如Fingl等人，1975，“The Pharmacological Basis ofTherapeutics”，Ch.1 p.1)。
劑量和間隔可以分別調節(jié)以提供活性成分的血漿水平，該水平有效維持預期的活性，或提供最小的抑制濃度(MIC)。MIC對于每個化合物不同但是可以從體外數(shù)據(jù)(例如獲得50-97％抑制MIF活性的需要的濃度)估計。獲得MIC需要的劑量將取決于各自的特征和施用途徑。但是，可以應用HPLC分析、生物分析或免疫分析來確定血漿濃度。劑量間隔也可以應用MIC值確定?；衔飸搼靡韵路桨甘┯迷?0-90％的時間內，優(yōu)選為在30-90％的時間內并且最優(yōu)選為在50-90％時間內保持血漿水平在MIC以上。
但是，通常對于較大的哺乳動物，例如人，指示的日劑量范圍為約0.5mg至1000mg(例如約0.00625mg/kg至約12.5mg/kg)的本發(fā)明活性化合物，其最佳例如以至多每天4次的分劑量施用。
本發(fā)明化合物可以通過任何常規(guī)的途徑施用，例如腸道施用，例如包括鼻、口腔、直腸、口服施用；非腸道施用；例如包括靜脈內、肌內、皮下施用；或局部施用，例如包括表皮、鼻內、氣管內施用；例如以包衣或未包衣片劑、膠囊劑、可注射溶液劑或混懸劑的形式，例如以安瓿、小瓶的形式，以乳膏劑、凝膠劑、糊劑、吸入粉末泡沫劑、酊劑、唇膏、滴劑、噴霧劑的形式，或以栓劑的形式。
本發(fā)明化合物可以以可藥用鹽形式(例如酸加成鹽或金屬鹽)或游離形式施用；任選地以溶劑化物的形式施用。鹽形式的本發(fā)明化合物顯示出與游離形式的本發(fā)明活性化合物相同的活性級別；任選地以溶劑化物的形式。
另一方面，本發(fā)明提供了包含例如至少一種本發(fā)明化合物以及至少一種藥用賦形劑的藥物組合物，所述賦形劑為例如適當?shù)妮d體和/或稀釋劑，例如包括填充劑、粘合劑、崩解劑、流動調節(jié)劑、潤滑劑、糖和甜味劑、芳香劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑和/或乳化劑、增溶劑、調節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。
本發(fā)明的藥物組合物可以按照類似常規(guī)的方法制備，例如通過混合、溶解、制備糖錠、懸浮、乳化、形成膠囊、包埋或凍干方法，例如應用一種或多種可藥用賦形劑，例如包括載體、稀釋劑和輔助劑，該賦形劑有利于將本發(fā)明化合物制備成藥物組合物。制備和施用本發(fā)明化合物的有用的技術可以在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”Mack PublishingCo.，Easton，Pa.，latest addition中找到。
藥物組合物，例如包括用于下列的藥物組合物-口服施用，例如用于口服攝取的片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊劑、液體制劑、凝膠劑、糖漿劑、漿劑、混懸劑；-口腔施用，例如以片劑或錠劑的形式，-吸入施用，例如其中本發(fā)明化合物最好以氣溶膠的形式從加壓的包裝或噴霧器中噴出來傳遞，例如其應用適當?shù)膾伾鋭?，或以例如明膠的膠囊和筒的形式用于吸入器或吹入器中，其可以配制為含有化合物的粉末混合物和適當?shù)姆勰┗|(例如乳糖或淀粉)。
-通過注射非腸道施用，例如通過推注或連續(xù)輸注，例如以單位劑型，如安瓿或多劑量容器，其中本發(fā)明藥物組合物是例如以混懸劑、溶液劑或乳劑的形式，例如在油性或水性載體中，任選包括另外的配制劑，例如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑；另外，活性成分可以以散劑的形式，其在使用前用適當?shù)娜苊?液體)、例如水配制。
-直腸施用，例如栓劑或停滯灌腸劑(retention enemas)，例如其中包含常規(guī)的栓劑基質例如可可脂或其它的甘油酯。
-局部施用，例如包括凝膠劑、乳膏劑。
本發(fā)明的一種化合物或一種以上化合物可以單獨或與一種或多種其它的藥用活性成分組合用于本發(fā)明的藥物治療。
其它的藥物包括例如用于治療MIF介導的疾病的藥物，例如包括用于治療炎性疾病、自身免疫疾病、神經(jīng)病障礙和癌癥，例如包括移植后的疾病的藥物。所述的其它的藥用活性成分包括例如類固醇、糖皮質激素、其它炎性細胞活素的抑制劑(例如抗-TNF-α抗體、抗-IL-1抗體、抗-IFN-γ抗體)或其它細胞活素例如IL-1RA或IL-10、其它降低細胞內或細胞外MIF的內源量的試劑例如MIF抗體、其它MIF-LMW抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、fibrate型降高血脂藥、抗癌劑或免疫調節(jié)化合物(例如包括免疫抑制劑)；或單獨的例如上述藥物的組合。
所述的免疫調節(jié)化合物包括免疫抑制劑，包括例如皮質類固醇；硫唑嘌呤；鈣調磷酸酶抑制劑，例如環(huán)孢菌素，如包括環(huán)孢菌素A；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素，如包括雷帕霉素、32-脫氧雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-脫氧雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素(依維莫司)、CCI779、AP23573、AP22549；酶肌苷5’-一磷酸脫氫酶(IMPDH)抑制劑，例如麥考酚酸，包括鹽形式的麥考酚酸，如麥考酚酸嗎乙酯；巨菲蛋白12(macrophilin-12)結合化合物，例如子囊霉素，如包括FK506(他克莫司)；S1P受體調節(jié)劑，例如FTY720以及免疫抑制劑抗體，例如包括免疫抑制單克隆抗體，如CD3、CD4、CD25、CD28或CD45的單克隆抗體；或其它的免疫調節(jié)化合物。
組合包括固定的組合，其中兩種或多種藥用活性劑在同一制劑中；藥盒，其中在不同的制劑中的兩種或多種藥用活性劑例如與聯(lián)合施用的說明書一起在同一包裝中出售；以及自由組合產(chǎn)品，其中將藥用活性成分分別包裝，但給出同時或順序施用的說明書。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包括作為活性成分的例如至少一種在組合(例如包括固定組合、藥盒或自由組合)中的本發(fā)明的化合物，以及一種或多種其它的藥用活性劑，例如其它的藥用活性劑，例如選自類固醇、糖皮質激素、其它炎性細胞活素的抑制劑(例如抗-TNF-α抗體、抗-IL-1抗體、抗-IFN-γ抗體)、其它細胞活素例如IL-1RA或IL-10、其它降低細胞內或細胞外MIF的內源量的試劑例如MIF抗體、其它MIF-LMW抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、fibrate型降高血脂藥、抗癌劑或免疫調節(jié)化合物；或單獨的例如上述藥物與例如至少一種可藥用賦形劑的組合。
另一方面，本發(fā)明提供了7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，其在氮原子上被下列基團取代未取代的或取代的(C3-8)環(huán)烷基、(C1-4)烷基(C3-8)環(huán)烷基、(C6-18)芳基或(C6-18)芳基(C1-4)烷基，例如包括下式化合物 其中R1為未取代的或取代的(C3-8)環(huán)烷基、(C1-4)烷基(C3-8)環(huán)烷基、(C6-18)芳基、(C6-18)芳基(C1-4)烷基，其中(C6-18)芳基任選與另外的環(huán)(體系)稠合并且其中取代基選自未取代的和取代的羥基；例如R1為環(huán)己基、羥基環(huán)己基、苯基、羥基苯基、甲氧基苯基、氨基磺?；趸交?叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基苯基、苯基甲基或與18-冠-6稠合的苯基，例如苯并-18-冠-6。
在說明本發(fā)明的以下實施例中涉及的溫度為攝氏度(℃)并且未校準。
應用以下縮略語EX.實施例 EtOH乙醇m.p.熔點 RT室溫實施例1制備下式的3-環(huán)己基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮 A.3-環(huán)己基-7-甲氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮在室溫下，將40g環(huán)己基胺加入到26g 2-羥基-4-甲氧基-苯甲醛的800mL無水EtOH溶液中。將獲得的混合物攪拌1.5小時，冷卻至0℃并且分批加入20g NaBH4。將獲得的混合物在室溫下攪拌3小時，傾倒至H2O中并且用CH2Cl2萃取獲得的混合物。形成兩相并且將其分離。將獲得的有機層干燥，加入42g羰基-二咪唑并且將獲得的混合物在室溫下攪拌16小時。加入另外的21.5g羰基-二咪唑，將獲得的混合物攪拌3小時，用1NHCl、飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，干燥并且在真空中濃縮。獲得3-環(huán)己基-7-甲氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。m.p.76-77℃。
1H-NMR(CDCl3)δ6.99(d，J＝8.4Hz，1H)，6.66(dd，J＝2.5+8.4Hz，1H)，6.57(d，J＝2.5Hz，1H)，4.30(s，2H)，4.24(tt，J＝3.6+11.6Hz，1H)；3.78(s，3H)，1.33-1.90(m，9H)，1.02-1.20(m，1H)。
將步驟A中獲得的化合物樣品進行硅膠快速色譜并且將包含純的3-環(huán)己基-7-甲氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮的級分用HCl處理。獲得鹽酸鹽形式的3-環(huán)己基-7-甲氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。m.p.169-172℃，1H-NMR(CDCl3)δ6.86(d，J＝8.25Hz，1H)，6.41(d，J＝2.55Hz，1H)，6.33(dd，J＝2.55+8.25Hz，1H)，3.96(s，2H)，3.76(s，3H)，2.53(tt，J＝3.7+10Hz，1H)，1.92-2.03(m，2H)，1.56-1.80(m，3H)，1.03-1.37(m，5H)。
B.制備3-環(huán)己基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮在無溶劑的情況下，在金屬浴上將66g 3-環(huán)己基-7-甲氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮和200g HCl吡啶攪拌加熱至200℃達45分鐘。將產(chǎn)生的HCl氣體吸出。將獲得的混合物冷卻至室溫，將獲得的熔融物溶于H2O和乙酸乙酯中并且將獲得的兩相分離。將獲得的水層用乙酸乙酯萃取并且用1N HCl洗滌，干燥并且在真空下濃縮。將獲得的殘留物經(jīng)硅膠過濾并且將獲得的濾液殘留物濃縮。獲得結晶形式的3-環(huán)己基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。m.p.193-196℃。
1H-NMR(CDCl3)δ7.19(br.s，1H)，6.95(d，J＝8.3Hz，1H)，6.65(dd，J＝2.4+8.3Hz，1H)，4.30(s，2H)，4.23(tt，J＝3.6+11.6Hz，1H)，1.30-1.90(m，9H)，1.02-1.20(m，1H)。
實施例2下表1中實施例17的化合物的制備方法制備3-環(huán)己基-7-氨基磺酰基氧基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮在無溶劑的情況下，將22.5g 3-環(huán)己基-7-羥基-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮用42.3g氨基氯磺酸處理。將獲得的混合物在60℃減壓(100mbar)下攪拌1小時。將獲得的混合物冷卻至室溫，加入乙酸乙酯和水并且萃取混合物。將獲得的有機層干燥并且在真空中濃縮。獲得3-環(huán)己基-7-氨基磺?；趸?3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。
1H-NMR(DMSO-d6)δ8.06(br.s，2H)，7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.06(dd，J＝2.3+8.3Hz，1H)，6.96(d，J＝2.3Hz，1H)，4.46(s，2H)，3.99(tt，J＝3.6+11.6Hz，1H)，1.20-1.84(m，9H)，1.00-1.19(m，1H)。13C NMR(d6-DMSO)δ25.376，25.641，29.039，41.450，56.165，109.794，117.801，118.292，127.513，149.593，150.048，150.211。
類似實施例1中列出的并且任選實施例2中列出的方法，但應用適當?shù)脑?，獲得下式化合物 其中R1和R2在如表1中列出的，該表中列出了熔點(“F.p.”)和/或“1H-NMR數(shù)據(jù)”(如果沒有另外說明，1H-NMR數(shù)據(jù)是在CDCl3中測定的)。
表1


權利要求
1.3-((C6-12)芳基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-((C3-8)環(huán)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，3-((C6-12)芳基(C1-4)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮，以及3-((C3-8)環(huán)烷基(C1-4)烷基)-3，4-二氫-苯并[e][1，3]嗪-2-酮。
2.權利要求1的化合物，其具有下式 其中R1為未取代的或取代的(C3-8)環(huán)烷基(C1-4)烷基、(C6-18)芳基(C1-4)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、(C6-18)芳基，其中所述取代基包括(C6-18)芳基、鹵素、羥基、氨基磺?；趸?、(C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基、鹵(C1-4)烷基或鹵(C1-4)烷氧基，R2為氫、羥基、氨基磺?；趸?C1-4)烷氧基、三(C1-6)烷基甲硅烷氧基或鹵(C1-4)烷氧基。
3.權利要求2的化合物，其中R1為環(huán)己基、羥基環(huán)己基、苯基、聯(lián)苯基、萘基、羥基苯基、甲氧基苯基、三氟甲氧基苯基、溴苯基、氨基磺酰基氧基苯基、(叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基苯基或與18-冠-6稠合的苯基，并且R2如權利要求2中定義。
4.權利要求2或3中任意一項的化合物，其中R1如權利要求2或3中任意一項的定義，并且R2為氫、羥基或氨基磺酰基氧基。
5.權利要求1至4中任意一項的化合物，其具有下式
6.權利要求1或5中任意一項的化合物，其為鹽形式。
7.權利要求1至6中任意一項的化合物，其用作藥物。
8.權利要求1至6中任意一項的化合物在制備用于治療或預防MIF介導的疾病的藥物中的用途。
9.治療或預防MIF介導的疾病的方法，該方法包括給需要該治療的個體施用治療有效量的權利要求1至6中任意一項的化合物。
10.藥物組合物，該藥物組合物包含權利要求1至6中任意一項的化合物以及至少一種藥用賦形劑。
11.權利要求10的藥物組合物，該藥物組合物還包含一種或多種其它的藥用活性劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及3，4－二氫－苯并[e][1，3]嗪－2－酮，其在氮原子上被未取代的或取代的(C
文檔編號A61P29/00GK101035782SQ200580034206
公開日2007年9月12日 申請日期2005年10月19日 優(yōu)先權日2004年10月21日
發(fā)明者A·比利希, P·萊爾, H·格斯塔西 申請人:諾瓦提斯公司