專利名稱：化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新乙內(nèi)酰脲衍生物，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物以及它們在治療中的用途。
金屬蛋白酶是蛋白酶類(酶)的超家族，近年來，其數(shù)量顯著地增加?；诮Y(jié)構(gòu)和功能性的考慮，這些酶已經(jīng)被分類到家族和亞家族中，如N.M.Hooper(1994)FEBS Letters3541-6中所述。金屬蛋白酶的例子包括基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)例如膠原酶(MMP1，MMP8，MMP13)，明膠酶(MMP2，MMP9)，溶基質(zhì)蛋白酶(stromelysins)(MMP3，MMP10，MMP11)，基質(zhì)溶解因子(matrilysin)(MMP7)，金屬彈性蛋白酶(MMP12)，成釉溶素(enamelysin)(MMP19)，MT-MMPs(MMP14，MMP15，MMP16，MMP17)；reprolysin或釉質(zhì)溶素(adamalysin)或MDC家族，其包括分泌酶和sheddases例如TNF轉(zhuǎn)化酶(ADAM10和TACE)；龍蝦肽酶家族(astacin family)，包括酶例如溶膠原加工蛋白酶(PCP)；及其它金屬蛋白酶例如可聚蛋白聚糖(aggrecanase)，內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶家族和血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶家族。
人們認(rèn)為金屬蛋白酶在涉及組織再造(例如胚胎發(fā)育、骨形成和月經(jīng)期間的子宮再造)的生理病過程的多血癥中是重要的。這基于金屬蛋白酶斷裂大量基質(zhì)底物例如膠原、蛋白多糖和纖連蛋白的能力。也認(rèn)為金屬蛋白酶在生物學(xué)重要細(xì)胞介質(zhì)(例如腫瘤壞死因子(TNF))的加工或分泌、和生物學(xué)重要膜蛋白質(zhì)(例如低親合性IgE受體CD23)的后翻譯蛋白酶解加工或脫落中是重要的(對于更全面的列舉，見N.M.Hooper等人，(1997) Biochem J.321265-279)。
金屬蛋白酶與許多疾病或病癥有關(guān)。抑制一或多種金屬蛋白酶的活性可以在下列這些疾病或病癥中是非常有益的，例如各種炎癥性和變態(tài)反應(yīng)性疾病例如，關(guān)節(jié)炎(特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng))，胃腸道炎癥(特別是炎癥性腸病，潰瘍性結(jié)腸炎和胃炎)，皮膚炎癥(特別是牛皮癬，濕疹，皮炎)；腫瘤轉(zhuǎn)移或侵入；與細(xì)胞外基質(zhì)的非受控降解有關(guān)的疾病，例如骨關(guān)節(jié)炎；骨再吸收性疾病(例如骨質(zhì)疏松癥和變形性骨炎)；與異常血管生成有關(guān)的疾??；與糖尿病、牙周病(例如齦炎)、角膜潰瘍形成、皮膚潰瘍、手術(shù)后病癥(例如結(jié)腸聯(lián)結(jié)現(xiàn)象)和皮膚創(chuàng)傷愈合有關(guān)的膠原再造增加；中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病(例如多發(fā)性硬化)；阿爾茨海默氏?。辉谛难芗膊±缭侏M窄和動脈粥樣硬化中觀察到的細(xì)胞外基質(zhì)再造；哮喘；鼻炎；和慢性阻塞性肺病(COPD)。
MMP12，又稱為巨噬細(xì)胞彈性蛋白酶或金屬彈性酶，最初由Shapiro等人在小鼠中克隆出[1992，Journal of Biological Chemistry2674664]，并且在1995年由同一小組在人類中克隆出。MMP12優(yōu)先在活化巨噬細(xì)胞中表達(dá)，并且已經(jīng)證明，可以從吸煙者的肺泡巨噬細(xì)胞中分泌[Shapiro等人，1993，Journal of Biological Chemistry，26823824]，以及從動脈粥樣硬化病變的泡沫細(xì)胞中分泌[Matsumoto等人，1998，Am J Pathol153109]。COPD的小鼠模型基于用香煙挑戰(zhàn)小鼠，小鼠吸煙六個月，一天兩只香煙，一周六天。這種處理之后，野生型小鼠出現(xiàn)肺氣腫。當(dāng)在該模型中對MMP12基因敲除小鼠進(jìn)行測試時，它們沒有出現(xiàn)顯著的肺氣腫，這強(qiáng)烈表明MMP12是COPD發(fā)病機(jī)理的關(guān)鍵酶。MMPs例如MMP12在COPD(肺氣腫和支氣管炎)中的作用已經(jīng)，在Anderson和Shinagawa，1999，Current Opinion inAnti-inflammatory and Immunomodulatory Investigational Drugs1(1)29-38中進(jìn)行了討論。最近發(fā)現(xiàn)，吸煙增加了在人類的頸動脈斑點中的巨噬細(xì)胞滲透和巨噬細(xì)胞衍生的MMP-12的表達(dá)，Kangavari[Matetzky S，F(xiàn)ishbein MC等人，Circulation102(18)，36-39 Suppl.S，Oct31，2000]。
MMP9(明膠酶B；92kDa TypeIV膠原酶；92kDa明膠酶)是一種分泌的蛋白質(zhì)，其在1989年首先被純化、然后克隆和排序[S.M.Wilhelm等人(1989)J.Biol Chem.264(29)17213-17221；published erratum in J.Biol Chem.(1990)265(36)22570]。MMP9的最近綜述對于這種蛋白酶的詳細(xì)信息和參考文獻(xiàn)提供了出色來源T.H.Vu & Z.Werb(1998)(InMatrixMetalloproteinases.1998.Edited by W.C.Parks & R.R.Mecham.pp 115-148.Academic Press.ISBN0-12-545090-7)。下列要點來自T.H.Vu & Z.Werb(1998)的綜述。
MMP9的表達(dá)通常被限制在幾種細(xì)胞類型中，包括滋養(yǎng)母細(xì)胞、破骨細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。然而，它的表達(dá)能在這些相同細(xì)胞和在其它細(xì)胞類型中由一些介質(zhì)引起，包括細(xì)胞與生長因子或細(xì)胞因子的接觸。這些是常常在初始炎癥性反應(yīng)中牽涉的相同介質(zhì)。如同其它分泌的MMPs一樣，MMP9被釋放為非活性的酶原，隨后酶原斷裂，形成酶促的活性酶。這種體內(nèi)活化所需的蛋白酶不是已知的?；钚訫MP9相對于非活性酶的平衡通過與一種天然存在的蛋白TIMP-1(金屬蛋白酶-1的組織抑制劑)相互作用在體內(nèi)進(jìn)一步得到調(diào)節(jié)。TIMP-1與MMP9的C-末端區(qū)域結(jié)合，導(dǎo)致MMP9的催化區(qū)域的抑制作用。ProMMP9的誘發(fā)表達(dá)的平衡、前MMP9至活性MMP9的裂解和TIMP-1的存在結(jié)合在一起，以測定存在于局部位點的催化活性MMP9的量。蛋白水解活性MMP9攻擊包括明膠、彈性蛋白和天然IV型和V型膠原的底物；它對天然I型膠原、粘蛋白或?qū)诱尺B蛋白沒有活性。
存在大量的數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)牽涉MMP9在各種生理學(xué)和病理過程中的作用。生理學(xué)作用包括在胚胎移植的最初階段胚胎滋養(yǎng)母細(xì)胞經(jīng)過子宮上皮侵入；在骨生長發(fā)育中的一些作用；和炎性細(xì)胞從血管系統(tǒng)遞送到組織。
與源于其它人群的液體和AM上清液相比較，在源于未經(jīng)治療的哮喘患者的液體和AM上清液中MMP9的釋放顯著地增加，MMP9的釋放是使用酶免疫分析法測定的[Am.J.Resp.Cell & Mol.Biol.，Nov 1997，17(5)583-591]。在某些其它病理學(xué)病癥中也已經(jīng)觀察到MMP9表達(dá)增加，由此在例如COPD、關(guān)節(jié)炎、腫瘤轉(zhuǎn)移病變、阿爾茨海默疾病、多發(fā)性硬化、和導(dǎo)致急性冠狀動脈病癥(例如心肌梗塞)的動脈粥樣硬化的斑點破裂等疾病過程中牽涉MMP9。
許多金屬蛋白酶抑制劑是已知的(例如，參見下列針對MMP抑制劑的綜述Beckett R.P.and Whittaker M.，1998，Exp.Opin.Ther.Patents，8(3)259-282，和Whittaker M.等人，1999，Chemical Reviews99(9)2735-2776)。
WO 02/074767公開了下式的乙內(nèi)酰脲衍生物 其可以作為MMP抑制劑，特別是作為有效的MMP12抑制劑。WO02/074767具體公開了以下的三種化合物 現(xiàn)在，我們發(fā)現(xiàn)了一類化合物，它們是金屬蛋白酶的抑制劑，并在抑制MMPs，例如MMP12和MMP9中特別具有特別的益處。本發(fā)明的化合物具有有益的功效、選擇性和/或藥物動力學(xué)性質(zhì)。本發(fā)明的某些化合物包含在WO 02/074767的通式范圍中，但是為其中沒有具體示例的一類化合物。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽 其中R1表示C1-2烷基、環(huán)丙基、F、CN、OCH3、SCH3或OCF3；所述烷基或環(huán)丙基任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代；和R2表示C1-3烷基。
式(I)的化合物可以以對映體形式存在。應(yīng)當(dāng)理解，所有的對映體、非對映體、外消旋體和其混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(I)的化合物也可以以各種互變異構(gòu)形式存在。所有可能的互變異構(gòu)形式和其混合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在一個實施方式中，R1表示C1-2烷基或環(huán)丙基；所述烷基或環(huán)丙基任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代。
在另一實施方式中，R1表示任選地C1-2烷基，其進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代。
在一個實施方式中，R1表示三氟甲基。
在一個實施方式中，R1表示甲基。
在一個實施方式中，R1表示乙基。
在一個實施方式中，R2表示甲基或乙基。在一個實施方式中，R2表示甲基。
在一個實施方式中，R1表示任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代的C1-2烷基和R2表示甲基或乙基。
在一個實施方式中，R1表示任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代的C1-2烷基和R2表示甲基。
在一個實施方式中，R1表示CF3和R2表示甲基或乙基。
除非另有說明，術(shù)語“C1-3烷基”在本文中表示具有1至3個碳原子的直鏈或支鏈烷基。這種基團(tuán)的例子包括甲基，乙基，正丙基和異-丙基。術(shù)語“C1-2烷基”表示甲基或乙基。
任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代的C1-2烷基的實例包括CF3、CH2F、CH2CF3、CF2CH3和CF2CF3。
任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代的環(huán)丙基環(huán)的實例包括1-氟-1-環(huán)丙基、2，2-二氟-1-環(huán)丙基和2，3-二氟-1-環(huán)丙基 本發(fā)明化合物的實例(5S)-5-({[4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺酰基}甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；(5S)-5-({[4-[(6-氟吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺酰基}甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；5-{[1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺?；?-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基]乙炔基}吡啶-2-腈；(5S)-5-({[4-[(6-乙基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；(5S)-5-甲基-5-({[4-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙炔基}-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)咪唑烷-2，4-二酮；及其藥學(xué)可接受鹽。
各示例的化合物代表了本發(fā)明的具體而又獨立的方面。
式(I)的化合物可以以對映體形式存在。因此，所有的對映體、非對映體、外消旋體和其混合物，包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。各種旋光異構(gòu)體可以使用傳統(tǒng)方法例如分步結(jié)晶或HPLC通過分離化合物的外消旋混合物而進(jìn)行分離?？商鎿Q地，旋光異構(gòu)體可以通過不對稱合成或通過由光學(xué)活性起始原料合成而獲得。
如果本發(fā)明的化合物中存在旋光異構(gòu)體，作為本發(fā)明的獨立具體實施方案，我們公開所有的獨立光學(xué)活性形式和這些的組合，以及它們相應(yīng)的外消旋體。
優(yōu)選式(I)的化合物具有如下所示的(5S)-立體化學(xué)結(jié)構(gòu) 如果本發(fā)明的化合物中存在互變異構(gòu)體，作為本發(fā)明的獨立具體實施方案，我們公開所有的獨立互變異構(gòu)形式和這些的組合。
本發(fā)明包括鹽形式的式(I)化合物。合適的鹽包括那些與有機(jī)或無機(jī)酸或有機(jī)或無機(jī)堿形成的鹽。盡管非藥學(xué)可接受的鹽在具體化合物的制備和純化中具有應(yīng)用性，但這種鹽通常是藥學(xué)可接受的鹽。這種鹽包括酸加成鹽例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，檸檬酸鹽，甲苯磺酸鹽和馬來酸鹽，和與磷酸或硫酸形成的鹽。在另一個方面，合適的鹽是堿鹽(base salt)，例如堿金屬鹽，例如鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽，或有機(jī)胺鹽，例如三乙胺鹽。
式(I)化合物的鹽可以通過游離堿或其另一種鹽與一個或多個當(dāng)量的合適酸或堿反應(yīng)來形成。
式(I)的化合物是有用的，因為它們在動物中具有藥理學(xué)活性，并由此作為藥物是潛在可用的。尤其是，本發(fā)明的化合物是金屬蛋白酶抑制劑，并由此可以用于治療由MMP12和/或MMP9介導(dǎo)的疾病或病癥，例如哮喘，鼻炎，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎)，動脈粥樣硬化和再狹窄，癌癥，侵入和轉(zhuǎn)移病變，涉及組織損壞的疾病，髖關(guān)節(jié)移位的松馳，牙周病，纖維化疾病，梗塞和心臟病，肝臟和腎纖維化，子宮內(nèi)膜異位，與細(xì)胞外基質(zhì)弱化有關(guān)的疾病，心力衰竭，主動脈瘤，CNS涉及的疾病例如阿爾茨海默氏病和多發(fā)性硬化(MS)，和血液學(xué)病癥。
通常，本發(fā)明的化合物是MMP9和MMP12的有效抑制劑。本發(fā)明的化合物對較少抑制各種其它MMPs(例如MMP8、MMP14和MMP19)還顯示出良好的選擇性。此外，本發(fā)明的化合物通常還具有改善的log D值，特別是具有0.5＜log D＜2.0范圍內(nèi)的log D值。Log D是反映化合物在生理pH下的親油性的參數(shù)。由于這些有利的log D值，本發(fā)明的化合物具有改善的溶度特征(solubility characteristics)以及降低的血漿蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致改善的藥物動力學(xué)和藥效性質(zhì)。
因此，本發(fā)明提供了如上文所限定的用于治療的式(I)化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供了如上文所限定的式(I)化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了如上文所限定的式(I)化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療其中抑制MMP12和/或MMP9是有益的疾病或病癥的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了如上文所限定的式(I)化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療炎性疾病的藥物中的用途。
另一方面，本發(fā)明提供了如上文所限定的式(I)化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療阻塞性氣道疾病例如哮喘或COPD的藥物中的用途。
在本說明書的上下文中，除非有與此相反的具體說明，術(shù)語“治療”也包括“預(yù)防”。應(yīng)該相應(yīng)地解釋術(shù)語“治療學(xué)的”和“治療地”。
預(yù)防被認(rèn)為與患有所述疾病或病癥的先前發(fā)作的人員的治療特別有關(guān)，或被認(rèn)為與處于所述疾病或病癥的增加危險之中的人員的治療特別有關(guān)。處于形成具體疾病或病癥的危險之中的人員，通常包括具有該疾病或病癥的家族史的那些人員，或已經(jīng)通過遺傳學(xué)試驗或篩選確定為對形成該疾病或病癥特別敏感的那些人員。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了治療其中抑制MMP12和/或MMP9是有益的疾病或病癥的方法，該方法包括對患者給藥治療有效量的上文中定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明也提供了治療阻塞性氣道疾病(例如哮喘或COPD)的方法，該方法包括對患者給藥治療有效量的上文中定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
當(dāng)然，對于上述治療用途，給藥劑量隨所采用的化合物、給藥方式、所需要的治療和所治療的病癥而變化。式(I)化合物/鹽(活性組分)的每日劑量可以在0.001mg/kg至75mg/kg的范圍，尤其是從0.5mg/kg至30mg/kg。這種日劑量可以根據(jù)需要以分開劑量的形式給予。典型地，單位劑型含有約1mg至500mg的本發(fā)明的化合物。
可以單獨使用式(I)的化合物和其藥學(xué)可接受的鹽，但通常以藥物組合物的形式給藥，在藥物組合物中，式(I)化合物/鹽(活性組分)與藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體結(jié)合。根據(jù)給藥方式，藥物組合物優(yōu)選包含0.05至99％w(重量百分比)、更優(yōu)選0.10至70％w的活性組分，和1至99.95％w、更優(yōu)選30至99.90％w的藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體，所有的重量百分?jǐn)?shù)基于全部組合物。例如，選擇和制備合適藥物制劑的常規(guī)方法描述在下面中“Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs”，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988。
由此，本發(fā)明也提供了一種藥物組合物，其包括如上文所限定的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，以及結(jié)合有藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備本發(fā)明藥物組合物的方法，其包括將上文中定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽與藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體混合。
對所希望治療的疾病或病癥，可以以標(biāo)準(zhǔn)方式給藥本發(fā)明的藥物組合物，例如通過口服、局部、腸胃外、口腔、經(jīng)鼻、陰道或直腸給藥或通過吸入給藥。為了達(dá)到上述目的，可以將本發(fā)明化合物通過本領(lǐng)域已知的方法配制成下列形式例如片劑，膠囊，水溶液或油性溶液，懸濁液，乳狀液，乳膏劑，油膏，凝膠劑，鼻腔噴霧劑(nasal spray)，栓劑，用于吸入的微細(xì)粉末或氣霧劑，和用于腸胃外使用(包括靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)或輸液)的無菌水溶液或油性溶液或懸濁液或無菌乳狀液。
除了本發(fā)明的化合物之外，本發(fā)明的藥物組合物也可以含有對于治療一或多種上文所指疾病或病癥中有價值的藥理學(xué)試劑例如“Symbicort”(商標(biāo))產(chǎn)品，或與其共同給藥(同時或順序)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備如以上所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的方法，其包括a)使式(II)的化合物和式(III)化合物(或其鹽)反應(yīng) 其中R2如式(I)所定義和L1表示離去基團(tuán) 其中R1如式(I)中所定義；或b)使式(X)的化合物與式(IX)的炔屬化合物反應(yīng)， 其中R2如式(I)中所定義，R3為H或合適的保護(hù)基團(tuán)和X為離去基團(tuán)，例如鹵素或三氟甲磺酸酯基(triflate)；
其中R1如式(I)中所定義；或c)使式(XI)的化合物與式(VI)的芳基鹵或芳基三氟甲磺酸酯反應(yīng) 其中R表示H或三甲基甲硅烷基，R2如式(I)中所定義和R3表示H或合適的保護(hù)基團(tuán)； 其中R1如式(I)中所定義和X表示鹵素或三氟甲磺酸酯基；和其后任選形成藥學(xué)可接受的鹽。
在上述方法中，合適的離去基團(tuán)L1包括鹵素，特別是氯。反應(yīng)優(yōu)選在合適的溶劑中、任選在加入堿的情況下、在環(huán)境至回流溫度下進(jìn)行合適的時間，典型地是0.5至24小時。通常，使用溶劑例如吡啶，二甲基甲酰胺，四氫呋喃，乙腈或二氯甲烷。當(dāng)使用時，加入的堿可以是有機(jī)堿例如三乙胺，二異丙基乙基胺，N-甲基嗎啉或吡啶，或無機(jī)堿例如堿金屬碳酸鹽。反應(yīng)典型地在室溫進(jìn)行0.5至16小時，或直至已經(jīng)達(dá)到反應(yīng)結(jié)束，通過色譜或光譜方法測定?；酋；u化物和酰鹵與各種伯胺和仲胺的反應(yīng)是文獻(xiàn)中已知的，并且反應(yīng)條件的改變對本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯然的。
式(II)的磺酰氯(其中L1表示氯)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯的方法，通過氧化氯化式(IV)化合物而便利地制備(Mosher，J.，J.Org.Chem.1958.23，1257；Griffith，O.，J.Biol.Chem.1983.258，(3)，1591；WO 02/074767)
可以通過文獻(xiàn)中所述的各種方法以及其變化形式制備式(III)化合物，正如有機(jī)合成化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的。合適的方法包括但不限于下述方案1所顯示的方法。
方案1在方案1中，PG表示合適的保護(hù)基團(tuán)，例如t-Boc(叔丁氧基羰基)；X表示離去基團(tuán)例如鹵素或三氟甲磺酸酯基；R表示氫或三甲基甲硅烷基；tms表示三甲基甲硅烷基；Ar表示在2位被R1取代的5-吡啶基環(huán)；和R1如式(I)中所定義。
芳基-或乙烯基衍生物[(V)或(VI)]和炔[(VII)，(VIII)或(IX)]之間的反應(yīng)可以任選地在有機(jī)溶劑存在下，使用催化劑，例如合適的鈀鹽，如PdCl2(PPh3)2，添加/或不添加銅鹽以及胺堿，例如哌啶、三乙胺、二異丙胺或二異丙乙基胺下進(jìn)行反應(yīng)。當(dāng)使用溶劑時，添加的溶劑可以為例如四氫呋喃、乙腈或N，N-二甲基甲酰胺。在環(huán)境溫度至回流溫度下反應(yīng)20分鐘至幾小時，直至色譜法或分光法顯示反應(yīng)完全。涉及炔屬化合物的鈀催化反應(yīng)在文獻(xiàn)中是已知的，條件的改變對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是明顯的。這類型的通常方法描述于例如Brandsma，L.，Synthesis of Acetylenes，Allenes和CumulenesMethods和Techniques，2004，Elsiever Academic Press，.Chapter 16，pages 293-317；Transition Metals-Catalysed Couplings of Acetylenes withsp2-halides，Sonogashira，K.J.Organomet.Chem.，2002，653，46-49；Tykwinski，R.R.，Angew.Chem.Int.Ed.，2003，42，1566-1568。
可根據(jù)文獻(xiàn)(Wustrow，D.J.，Synthesis，1991，993-995)所述制備乙烯基三氟甲磺酸酯(V)(其中X為O-三氟甲磺酸酯基和PG為t-Boc)。
可以從三氟甲磺酸酯(V)，通過與三甲基甲硅烷基乙炔的鈀催化偶合反應(yīng)，然后如果需要使用例如氟化鉀，在合適的溶劑中使三甲基甲硅烷基去保護(hù)，從而制備炔屬化合物(VIII)?？商鎿Q地，可以通過式(VII)化合物的脫水，例如通過甲磺?；?，接著用合適的堿(例如二異丙乙基胺)處理而制備其中R為H和PG為t-Boc的化合物(VIII)。
式(IX)的炔屬雜芳基化合物可以通過文獻(xiàn)中所述的各種方法制備。
在方法(b)中，使用與上述制備式(VIII)化合物的方法類似的方法進(jìn)行反應(yīng)。如果需要，在鈀催化反應(yīng)進(jìn)行前，可以使用SEMCl(R3＝SEM)保護(hù)式(X)化合物的乙內(nèi)酰脲環(huán)中的一個氮?？梢酝ㄟ^式(V)(PG＝t-Boc)化合物的酸催化去保護(hù)，接著與式(II)化合物反應(yīng)，以上述制備式(I)化合物相似的方式制備式(X)化合物。
在方法(c)中，以上述制備式(VIII)化合物相似的方式進(jìn)行反應(yīng)。如果需要，在鈀催化反應(yīng)進(jìn)行前，可以使用SEMCl(R3＝SEM)保護(hù)式(XI)化合物的乙內(nèi)酰脲環(huán)中的一個氮。從其中R為三甲基甲硅烷基和PG為t-Boc的化合物(VIII)通過酸催化除去t-Boc基團(tuán)(例如，使用乙酰氯的甲醇溶液)，接著與式(II)化合物反應(yīng)，如上述式(II)和(III)化合物之間的反應(yīng)，便利地制備化合物(XI)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在本發(fā)明的方法中，起始試劑或中間體化合物中的某些潛在地反應(yīng)性官能團(tuán)例如羥基或氨基，可以需要通過合適的保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。由此，在各步驟中，本發(fā)明化合物制備可以包括一或多種保護(hù)基的添加和除去。
合適的保護(hù)基和添加與除去這種基團(tuán)的詳細(xì)方法描述在‘ProtectiveGroups in Organic Chemistry’，edited by J.W.F.McOmie，Plenum Press(1973)and′Protective Groups in Organic Synthesis′，3rdEdition，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1999)中。
本發(fā)明的化合物和其中間體可以從它們的反應(yīng)混合物中分離，并且如果需要的話，可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)一步純化。
現(xiàn)在將參考下列說明性的實施例進(jìn)一步解釋本發(fā)明。
一般方法在Varian Inova 400MHz或Varian Mercury-VX 300MHz儀器上記錄1HNMR和13C NMR譜圖。氯仿-d(δH7.27ppm)、二甲基亞砜-d6(δH2.50ppm)、乙腈-d3(δH1.95ppm)或甲醇-d4(δH3.31ppm)的中心峰用作內(nèi)標(biāo)。使用硅膠(0.040-0.063mm，Merck)進(jìn)行柱色譜分析。使用Kromasil KR-100-5-C18柱(250×20mm，Akzo Nobel)和乙腈/水的混合物以及0.1％TFA，10mL/min的流量用于制備型HPLC。除非另外說明，原料是市售的。所有的溶劑和商用試劑是實驗室級的，并且原樣使用。
下面的方法用于LC/MS分析儀器Agilent 1100；Column Waters Symmetry2.1×30mm；質(zhì)量APCI；流量0.7mL/min；波長254或220nm；溶劑A水+0.1％TFA；溶劑B乙腈+0.1％TFA；梯度15-95％/B 2.7分鐘，95％B 0.3分鐘。
下面的方法用于LC分析方法A.儀器Agilent 1100；柱Kromasil C18 100×3mm，5μ粒度，溶劑A0.1％TFA/水，溶劑B0.08％TFA/乙腈；流量1mL/min，梯度10-100％/B 20分鐘，100％B 1分鐘。在220、254和280nm處測量吸收。
方法B.儀器Agilent 1100；柱XTerra C8，100×3mm，5μ粒度，溶劑A15mM NH3/水，溶劑B乙腈；流量1mL/min；梯度10-100％/B 20分鐘，100％B 1分鐘。在220、254和280nm處測量吸收。
縮寫Ac 乙?；鵇MFN，N-二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亞砜eq 當(dāng)量Et 乙基
LDA二異丙基氨基鋰(lithium diisopropyl amide)Me 甲基MS 質(zhì)譜Tert 叔THF四氫呋喃TFA三氟乙酸實施例1(5S)-5-({[4-[(6-甲氧吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮三氟乙酸鹽將4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(85mg，0.27mmol)溶于THF(4mL)和HCl(4mL)和在室溫下攪拌1小時。將所得2-甲氧基-5-(1，2，3，6-四氫吡啶-4-基乙炔基)吡啶鹽酸鹽溶于EtOH/甲苯，并濃縮(三次)，然后真空干燥。將產(chǎn)物溶于THF(3mL)和DMSO(1mL)中，并在氬氣下加入二異丙基乙基胺(106μL，0.62mmol)。將混合物冷卻到0℃和加入[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲磺酰氯(73mg，0.32mmol)的THF(1mL)溶液。將混合物在室溫下攪拌3.5小時，濃縮并用制備型HPLC純化，得到固體產(chǎn)物(4mg)。
1H-NMR(CD3CN)δ8.48(1H，s)；8.26(1H，m)；7.68(1H，dd)；6.77(1H，d)；6.29(1H，s)；6.14(1H，m)；3.91(3H，s)；3.86(2H，m)；3.41(2H，q)；3.39(2H，m)；2.41(2H，m)；1.47(3H，s).
APCI-MS m/z405[MH+-CF3COOH].
a)4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯向0℃的4-羥基-4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(285mg，0.86mmol)的二氯甲烷(2.5mL)和吡啶(2.5mL)的溶液中加入三溴化磷(85μL，0.90mmol)。2.5小時后，再加入三溴化磷(30μL)，再攪拌反應(yīng)混合物2小時。將混合物傾入水中，用檸檬酸(10％)將pH中和到7。用二氯甲烷萃取水層四次，將合并的有機(jī)層用水洗滌，干燥并濃縮得到黃色油狀物(185mg)。使用0至100％EtOAc/庚烷梯度，對粗產(chǎn)物進(jìn)行快速色譜純化，得到小標(biāo)題化合物，為油狀物(85mg)。
1H-NMR(CDCl3)δ8.25(1H，m)；7.60(1H，m)；6.71(1H，d)；6.11(1H，m)；4.03(2H，m)；3.95(3H，s)；3.55(2H，m)；2.34(2H，m)；1.51(3H，s)；1.49(9H，s).
APCI-MS m/z315[MH+].
b)4-羥基-4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]哌啶-1-羧酸叔丁酯通過Yamanaka，等人Synth.Commun.，1983，312-314的方法制備小標(biāo)題的化合物。向5-溴-2-甲氧基吡啶(188mg，0.99mmol)和4-乙炔基-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，1.11mmol)的Et3N(1.5mL)溶液中加入CuI(5mol％)和PdCl2(PPh3)2(3mol％)，并將混合物在80℃加熱4小時。濃縮反應(yīng)混合物，并使用10至100％EtOAc/庚烷梯度，通過快速色譜純化，得到小標(biāo)題化合物，其為固體(285mg)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ8.26(1H，m)；7.75(1H，dd)；6.83(1H，d)；5.75(1H，s)；3.86(3H，s)；3.59(2H，m)；3.24(2H，m)；1.81(2H，m)；1.61(2H，m)；1.40(9H，s).
APCI-MS m/z277[MH+-56].
c)4-乙炔基-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯如WO 00/35908所述，從4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯制備。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ3.77(dd，2H)，3.26(ddd，2H)，2.52(s，1H)，2.03(s，1H)，1.89(tdd，2H)，1.70(ddd，2H)，1.44(d，9H).
GCMS-MS m/z225[M+].
d)[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲磺酰氯根據(jù)下面文獻(xiàn)的方法制備Mosher，J.，J.Org.Chem.，1958，23，1257；Griffith，O.，J.Biol.Chem.，1983，258，(3)，1591和WO 02/074767。
實施例2(5S)-5-({[4-[(6-氟吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮三氟乙酸鹽通過實施例1所述的相同方法，從5-溴-2-氟吡啶獲得標(biāo)題化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ10.77(1H，bs)；8.38(1H，d)；8.06(2H，m)；7.27(1H，m)；6.29(1H，m)；3.81(3H，s)；3.75(2H，m)；3.48(2H，m)；3.30(2H，m)；2.33(2H，m)；1.34(3H，s).
APCI-MS m/z393[MH+-CF3COOH].
實施例35-{[1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺?；?-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基]乙炔基}吡啶-2-腈三氟乙酸鹽通過實施例1所述的相同方法，從5-溴吡啶-2-腈制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CD3CN)δ8.71(1H，s)；8.48(1H，bs)；7.94(1H，dd)；7.80(1H，d)；6.29(2H，m)；3.89(2H，q)；3.41(2H，q)；3.39(2H，t)；2.44(2H，m)；1.46(3H，s).
APCI-MS m/z400[MH+-CF3COOH].
實施例4(5S)-5-({[4-[(6-乙基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺酰基}甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮通過Nishihara，等人，J.Org.Chem.，2000，65，1780-1787所述的方法，制備標(biāo)題化合物。向2-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]吡啶(0.22g，1.1mmol)和1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺酰基)-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基三氟甲磺酸酯(0.42g，1mmol)的溶液加入CuCl(10mol％)和PdCl2(PPh3)2(5mol％)，在85℃加熱混合物6小時。在EtOAc(20mL)和水(10mL)之間分配混合物，用EtOA萃取水層三次。用鹽水和水洗滌合并的有機(jī)層，濃縮得到棕色油狀物。用制備型HPLC純化得到標(biāo)題化合物，其為固體(20mg)。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.75(1H，s)；8.56(1H，d，J＝1.8Hz)；8.02(1H，s)；7.80(1H，m)；7.32(1H，d，J＝8.1Hz)；6.24(1H，s)；3.81(2H，d，J＝3.2Hz)；3.45(2H，q，J＝26.9Hz)；3.34-3.21(2H，m)；2.75(2H，q，J＝20.8Hz)；2.34(2H，m)；1.29(3H，s)；1.19(3H，t，J＝7.6Hz).
APCI-MS m/z403[MH+].
a)2-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]吡啶5-溴-2-乙基-吡啶(0.707g，3.8mmol)(根據(jù)J.Org.Chem.，1988，53(2)，386-390制備)，乙炔基(三甲基)硅烷(1.6mL，11.4mmol)，CuI(0.072g，0.38mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.267g，0.38mmol)的Et3N(5mL)溶液在80℃攪拌4h。冷卻后，真空除去溶劑，將殘余物色譜分離得到0.25g(32％)標(biāo)題化合物。
APCI-MS m/z204[MH+].
b)1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺酰基)-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基三氟甲磺酸酯1，2，3，6-四氫吡啶-4-基三氟甲磺酸酯鹽酸鹽與[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲磺酰氯(實施例1d)以實施例1相同的方式進(jìn)行反應(yīng)。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.77(1H，s)，8.04(1H，d)，6.10(1H，t)，3.88(2H，q)，3.36-3.58(4H，m)，2.50-2.56(2H，m)，1.32(3H，s).
APCI-MS m/z422[MH+].
c)4-{[(三氟甲基)磺?；鵠氧}-1，2，3，6-四氫吡啶氯化物將4-{[(三氟甲基)磺?；鵠氧}-3，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3.77g，11.4mmol)溶于THF(15mL)和加入濃鹽酸(15mL)。1小時后，蒸去溶劑，通過與甲苯和甲醇的共沸蒸發(fā)干燥產(chǎn)物，得到米色固體(88％)，將該固體直接使用而沒有進(jìn)行進(jìn)一步純化。
1H NMR(CDCl3)δ9.72(2H，s)，6.22(1H，s)，3.75(2H，q)，3.30(2H，t)，2.65(2H，td).
APCI-MS m/z232[MH+].
d)4-{[(三氟甲基)磺?；鵠氧}-3，6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯將N-boc-哌啶-4-酮(10.14g，50mmol)的THF(80mL)溶液滴加到2MLDA的THF(30mL，60mmol，1.2eq.)和THF(80mL)的冷(-78℃)溶液中，歷經(jīng)大約30分鐘。再攪拌10分鐘后，將1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三氟甲基)磺?；鵠甲磺酰胺(20g，56mmol，1.1eq.)的THF(80mL)溶液加入并使混合物溫?zé)岬绞覝?。用水洗滌溶液，用EtOAc(×2)洗滌水層，以及合并有機(jī)層并用飽和氯化銨溶液、鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)和蒸發(fā)。通過中性氧化鋁(200g)，用正庚烷接著用正庚烷/EtOAc 9∶1洗脫，過濾殘余物。蒸發(fā)后，1H-NMR譜圖顯示仍然存在某些三氟甲磺酸化試劑，但是直接使用產(chǎn)物而無需進(jìn)一步純化。產(chǎn)率13.17g(79.5％)。(Wustrow，DJ.，Synthesis，1991，993-995).
1H NMR(CDCl3)δ5.77(1H，s)，4.05(2H，q)，3.64(2H，t)，2.45(2H，五重峰)，1.48(9H，s).
GCMS-MS m/z274[M-57].
實施例5(5S)-5-甲基-5-({[4-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙炔基}-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺酰基}甲基)咪唑烷-2，4-二酮按照與實施例4相同的方式，從2-三氟甲基-5-(三甲基硅烷基乙炔基)吡啶和1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺?；?-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基三氟甲磺酸酯(實施例4b)出發(fā)獲得標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.75(1H，s)；8.81(1H，s)；8.14(1H，d，J＝8.4Hz)；8.02(1H，s)；7.80(1H，m)；7.19(1H，d，J＝8.4Hz)；7.32(1H，d，J＝8.1Hz)；6.24(1H，s)；3.81(2H，d，J＝3.2Hz)；3.34-3.21(2H，m)；3.30(3H，s)；2.75(2H，q，J＝20.8Hz)；2.34(2H，m)；1.19(3H，t，J＝7.6Hz).
APCI-MS m/z443[MH+].
a)2-三氟甲基-5-(三甲基硅烷基乙炔基)吡啶以與實施例4a相同的方式，從5-碘-2-(三氟甲基)吡啶以98％的收率獲得標(biāo)題化合物。
APCI-MS m/z244[MH+].
b)5-碘-2-(三氟甲基)吡啶將6-(三氟甲基)吡啶-3-胺(1.9g，12mmol)的三氟硼酸(50％，23mL)溶液在冰浴中冷卻。攪拌下，以小份向所得漿液中加入NaNO2(1.0g，16mmol)。15分鐘后，以小份加入KI(2.4g，14mmol)的水(25mL)溶液。使混合物得到室溫，然后再攪拌40分鐘。用Na2S2O3(10％aq.)使溶液脫色，并用飽和NaHCO3水溶液小心中和。用EtOAc/乙醚(2×50mL)萃取水溶液。干燥有機(jī)層并用EtOAc/庚烷(1∶2)的柱色譜純化，得到標(biāo)題化合物(1.2g)。
APCI-MS m/z274[MH+].
藥理學(xué)實施例分離的酶測定MMP12重組人類MMP12催化區(qū)域可以按照Parkar A.A.等人(2000)，ProteinExpression and Purification，20152的描述來表達(dá)和純化。純化的酶能夠用于監(jiān)測抑制劑的活性，如下所述在存在抑制劑(10倍濃度)或不存在抑制劑的條件下，在室溫下，將MMP12(50ng/ml最終濃度)在測定緩沖液(0.1M“Tris-HCl”(商標(biāo))緩沖液，pH值7.3，含有0.1M NaCl、20mM CaCl2、0.020mMZnCl和0.05％(w/v)“Brij 35”(商標(biāo))清凈劑)中用合成底物Mac-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(10μM)培養(yǎng)60分鐘。通過在λex320nm和λem 405nm處測定熒光來測定活性。百分?jǐn)?shù)抑制計算如下％抑制等于[熒光加抑制劑-熒光背景]/[熒光無抑制劑-熒光背景]。
MMP8純化的前MMP8購自Calbiochem。通過1mM的對氨基-苯基-乙酸汞(APMA)在35℃將酶(10μg/ml)活化2.5h。活化的酶可以用于如下監(jiān)測抑制劑的活性在35℃(80％H2O)，在存在抑制劑(10倍濃度)或不存在抑制劑的條件下，將MMP8(200ng/ml的最終濃度)在測定緩沖液(0.1M“Tris-HCl”(商標(biāo))緩沖液，pH7.5，含有0.1M NaCl、30mM CaCl2、0.040mM ZnCl和0.05％(w/v)、“Brij 35”(商標(biāo))清凈劑)中，用合成底物Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(12.5μM)培養(yǎng)90分鐘。通過在λex320nm和λem 405nm處測定熒光來測定活性。百分?jǐn)?shù)抑制計算如下％抑制等于[熒光加制劑-熒光背景]/[熒光無抑制劑-熒光背景]。
MMP9表達(dá)重組人類MMP9催化區(qū)域，然后通過螯合Zn柱色譜并接著通過氧肟酸酯親合柱色譜來純化。該酶能夠用于如下監(jiān)測抑制劑的活性在室溫，在存在抑制劑(10倍濃度)或不存在抑制劑的條件下，將MMP9(5ng/ml的最終濃度)在測定緩沖液(0.1M“Tris-HCl”(商標(biāo))緩沖液，pH 7.3，含有0.1MNaCl、20mM CaCl2、0.020 mM ZnCl和0.05％(w/v)、“Brij 35”(商標(biāo))清凈劑)中，用合成底物Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(5μM)培養(yǎng)30分鐘。通過在λex 320nm和λem 405nm處測定熒光來測定活性。百分?jǐn)?shù)抑制計算如下％抑制等于[熒光加抑制劑-熒光背景]/[熒光無抑制劑-熒光背景]。
MMP14重組人類MMP14催化區(qū)域可以按照Parkar A.A.等人(2000)，ProteinExpression and Purication，20，152來表達(dá)和純化。純化的酶能夠用于監(jiān)測抑制劑的活性，如下所述在存在抑制劑(5倍濃度)或不存在抑制劑的條件下，在室溫下，將MMP14(10ng/ml最終濃度)在測定緩沖液(0.1M“Tris-HCl”(商標(biāo))緩沖液，pH值7.5，含有0.1M NaCl、20mM CaCl2、0.020mM ZnCl和0.05％(w/v)“Brij 35”(商標(biāo))清凈劑)中用合成底物Mac-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(10μM)培養(yǎng)60分鐘。通過在λex320nm和λem 405nm處測定熒光來測定活性。百分?jǐn)?shù)抑制計算如下％抑制等于[熒光加抑制劑-熒光背景]/[熒光無抑制劑-熒光背景]。
使用表達(dá)和純化的前MMP來試驗其它基質(zhì)金屬蛋白酶(包括MMP9)的方案，描述在例如C.Graham Knight等人(1992)FEBS Lett.296(3)263-266中。
MMP19重組人類MMP19催化區(qū)域可以按照Parkar A.A.等人(2000)，ProteinExpression and Purification，20，152來表達(dá)和純化。純化的酶能夠用于監(jiān)測抑制劑的活性，如下所述在存在抑制劑(5倍濃度)或不存在抑制劑的條件下，在35℃下，將MMP19(40ng/ml最終濃度)在測定緩沖液(0.1M“Tris-HCl”(商標(biāo))緩沖液，pH值7.3，含有0.1M NaCl、20mM CaCl2、0.020mM ZnCl和0.05％(w/v)“Brij 35”(商標(biāo))清凈劑)中用合成底物Mca-Pro-Leu-Ala-Nva-Dpa-Ala-Arg-NH2(5μM)培養(yǎng)120分鐘。通過在λex320nm和λem 405nm處測定熒光來測定活性。百分?jǐn)?shù)抑制計算如下％抑制等于[熒光加抑制劑-熒光背景]/[熒光無抑制劑-熒光背景]。
蛋白質(zhì)結(jié)合通過在自動化96孔格式實驗(format assay)中進(jìn)行超濾，確定血漿蛋白結(jié)合。對于每一次實驗，平行監(jiān)測參比化合物(budesonide)的血漿蛋白結(jié)合。將測試化合物(10mM，溶于DMSO)加入到血漿中，得到10μM的最終濃度，并在室溫下平衡10分鐘。將350μL血漿轉(zhuǎn)移到Microcon-96超濾板(10kDa cutoff，Millipore)。在室溫下將超濾板以3000G離心70分鐘。離心后，通過LC-MS/MS，使用三點校正曲線并與原始增敏血漿(spiked plasma)濃度相比較，確定在所獲血漿水(未結(jié)合部分)中的化合物的濃度。
使用梯度色譜系統(tǒng)，使用乙酸/乙腈作為流動相，進(jìn)行分析。使用來自Applied Biosystems具有電噴霧界面的三重四倍質(zhì)譜儀(triple quadropolemass spectrometer)，API3000或API4000進(jìn)行測量。
溶度測量方案如下所述測量測試化合物在0.1M磷酸鹽緩沖溶液，pH 7.4中的溶度將測試化合物(1mg)稱量到2mL具有螺帽的玻璃瓶中，并加入0.1M磷酸鹽緩沖液pH 7.4.(1.00mL)。然后將樣品瓶超聲處理約10分鐘，之后在20℃下在振動板上過夜。然后通過Millipore Millex-LH 0.45μm過濾器，將樣品瓶中的內(nèi)含物過濾到新的2mL玻璃瓶中，得到澄清溶液。將該澄清溶液(40μL)轉(zhuǎn)移到新的2mL玻璃瓶中，用0.1M磷酸鹽緩沖液pH7.4(960μL)稀釋。
對于每個特定的測試化合物，使用已知濃度的溶液建立標(biāo)準(zhǔn)校正曲線。通常選擇這些已知濃度的溶液，以具有～10μg/mL和～50μg/mL的濃度。通過將已知重量的化合物溶解在99.5％乙醇(500μL)中，然后根據(jù)需要超聲處理1分鐘，從而制備這些溶液。如果化合物仍然沒有完全溶解，加入 DMSO(500μL)，再超聲處理混合物1分鐘。然后將所得溶液用乙腈/100mM乙酸銨pH5.5 20-50/80-50稀釋到適當(dāng)體積。如果需要，通過稀釋制備更稀的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
然后通過具有UV檢測功能的HPLC，使用下列參數(shù)分析測試化合物溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，由此確定測試化合物在0.1M磷酸鹽緩沖液中的溶度。
HPLC-設(shè)備 HP1100/HP1050柱 HyPURITY Advanced，5μm，125×3mm柱溫度 RT流量1mL/min流動相 A＝乙腈B＝100mM乙酸銨pH 5.5等度比例A/B20-50/80-50UV檢測器254nm(220-280nm)注射體積20μL色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)ATLAS/Xchrome
確定Log D的方案使用搖瓶法測量在pH 7.4的Log D值。在室溫下，將適量的少量測試化合物置于2mL具有螺帽的玻璃瓶中，并加入600μL的1-辛醇(用10mM磷酸鹽緩沖液pH 7.4飽和)。然后將瓶超聲處理1分鐘，以將化合物完全溶解。然后加入600μL的10mM磷酸鹽緩沖液pH 7.4(用1-辛醇飽和)，將瓶振動4分鐘，混合兩相。然后在室溫下以1000g將樣品離心10分鐘，從而分離兩相。最后，使用下面的條件，通過HPLC重復(fù)分析分離的水相和有機(jī)相注射器Spark Holland，Endurance泵HP1050檢測器Kratos，Spectroflow 783柱YMC Pro C18，5μm，50×4mm，Part no.AS12S050504QT柱溫度室溫流量 1mL/min流動相A＝乙腈B＝25mM甲酸C＝100mM乙酸銨，pH 5.5D＝0.05％乙酸銨梯度 0.00分鐘A/B或A/C或A/D 5/955.00分鐘A/B或A/C或A/D 100/07.00分鐘A/B或A/C或A/D 100/07.02分鐘A/B或A/C或A/D 5/95UV檢測器 254nm注射體積 50μL未稀釋的水相和5μL 10倍稀釋的(用甲醇)有機(jī)相注射循環(huán)時間 11分鐘離心 Hettich，Universal 30RF渦流 Scientific Industries，Vortex-2 genie色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ATLAS/Xchrome通過Excel表格，在人工輸入化合物峰面積響應(yīng)后，自動計算log DpH7.4值(參見下式)，所述響應(yīng)得自ATLAS色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
通過下式計算log DpH7.4LogD=([Analyte]org[Analyte]aq)=log(Areaorg×Dilution factororgAreaaq×Dilution factoraq×Vinj(org)Vinj(aq))]]>其中Analyte 分析物org 有機(jī)相aq 水相Area面積Dilution factor 稀釋因子Vinj注射體積下表顯示了本發(fā)明化合物代表性選擇和選自WO 02/074767化合物的數(shù)據(jù)。
表
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽， 其中R1表示C1-2烷基、環(huán)丙基、F、CN、OCH3、SCH3或OCF3；所述烷基或環(huán)丙基任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代；和R2表示C1-3烷基。
2.A權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R1表示C1-2烷基，其任選地進(jìn)一步被一個或多個氟原子取代。
3.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R1表示CF3。
4.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R1表示乙基。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R2表示甲基或乙基。
6.權(quán)利要求5的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R2表示甲基。
7.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，所述化合物選自(5S)-5-({[4-[(6-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；(5S)-5-({[4-[(6-氟吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；5-{[1-({[(4S)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-4-基]甲基}磺?；?-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基]乙炔基}吡啶-2-腈；(5S)-5-({[4-[(6-乙基吡啶-3-基)乙炔基]-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)-5-甲基咪唑烷-2，4-二酮；(5S)-5-甲基-5-({[4-{[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙炔基}-3，6-二氫吡啶-1(2H)-基]磺?；鶀甲基)咪唑烷-2，4-二酮。
8.制備權(quán)利要求1所要求的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的方法a)使式(II)的化合物與式(III)的化合物(或其鹽)反應(yīng) 其中R2如式(I)中所定義和L1表示離去基團(tuán) 其中R1如式(I)中所定義；或b)使式(X)的化合物與式(IX)的炔屬化合物反應(yīng) 其中R2如式(I)中所定義，R3為H或適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)和X為離去基團(tuán)例如鹵素或三氟甲磺酸酯基； 其中R1如式(I)中所定義；或者c)使式(XI)的化合物與式(VI)的芳基鹵或芳基三氟甲磺酸酯反應(yīng) 其中R表示H或三甲基甲硅烷基，R2如式(I)中所定義和R3表示H或適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)； 其中R1如式(I)中所定義和X表示鹵素或三氟甲磺酸酯基；以及之后任選地形成其藥學(xué)可接受的鹽。
9.一種藥物組合物，包括如權(quán)利要求1-7中任一項所要求的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，以及結(jié)合有藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體。
10.一種制備權(quán)利要求9所要求的藥物組合物的方法，其包括將權(quán)利要求1-6中任一項所要求的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽與藥學(xué)可接受的助劑、稀釋劑或載體混合。
11.權(quán)利要求1-7中任一項所要求的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在治療中的用途。
12.權(quán)利要求1-7所要求的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療阻塞性氣道疾病的藥物中的用途。
13.權(quán)利要求12的用途，其中阻塞性氣道疾病是哮喘或慢性阻塞性肺病。
14.治療由MMP12和/或MMP9介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，該方法包括對患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1至7的任一項所要求的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
15.治療阻塞性氣道疾病的方法，該方法包括對患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1至7的任一項所要求的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的化合物，式(I)中R
文檔編號A61P11/06GK1980915SQ200580022806
公開日2007年6月13日 申請日期2005年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月5日
發(fā)明者巴林特·加博斯, 利納·里帕, 克里斯蒂娜·斯滕瓦爾 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司