專利名稱：17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯及其合成制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯及其合成制備技術(shù)屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域中化學(xué)合成藥物單體成分的合成制備技術(shù)。特別是涉及17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯合成制備方法，以及其在制備輻射防護(hù)、抗腫瘤、保護(hù)造血功能等藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
雌激素類化合物的研究已有幾十年的歷史，有一定的生物效價(jià)，但往往由于雌活力高、副作用大而使應(yīng)用受到限制。雌激素類化合物對(duì)放射損傷有較好的預(yù)防和治療作用。雌激素作為抗放藥物的研究國(guó)外已有近60年的歷史，國(guó)內(nèi)從十九世紀(jì)七十年代開始發(fā)現(xiàn)炔雌醇與環(huán)戊醚-炔雌醇對(duì)放射病有較好的預(yù)防和治療效果，做了大量的研究工作。炔雌醇是一種常用的強(qiáng)雌激素，用炔雌醇預(yù)防小白鼠的急性放射病，于8.50Gy、9.0Gy照射劑量下，可使三十天存活率提高50～70％；于3.0Gy照射下，對(duì)犬具有同等的預(yù)防效果。同時(shí)，用炔雌醇治療犬的急性放射病也有較好的療效，但它有較強(qiáng)的雌活性和對(duì)胃腸肝臟產(chǎn)生不良影響和毒副作用，以及使子宮基底膜增厚的副作用而懷疑其潛在的致癌活性，使其在相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用受到限制。雌激素的輻射防護(hù)效果與雌激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)類型有著密切的關(guān)系。因此在抗放射病藥物研究的過程中，如何尋找一個(gè)有關(guān)雌激素結(jié)構(gòu)的同系物，使其既有較強(qiáng)的輻射防護(hù)效果，又有較低的雌活力及毒副作用，是雌激素類抗放藥物研究工作中的重要內(nèi)容。
為了提高炔雌醇的輻射防護(hù)效價(jià)，降低毒副作用，我們對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，設(shè)計(jì)并合成了甾體激素結(jié)構(gòu)中D-五員環(huán)擴(kuò)為六員環(huán)的化合物——17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，合成步驟較長(zhǎng)。并進(jìn)行了輻射防護(hù)生物效價(jià)、抗腫瘤和保護(hù)造血功能、雌活力的研究工作，取得了明顯的效果。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述原因，本發(fā)明人對(duì)17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯合成制備的工藝方法進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，通過2種方式不同的反應(yīng)對(duì)雌酚酮的擴(kuò)環(huán)，由五員環(huán)制成六員環(huán)的D-高雌酚酮而后再加炔制得17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析確證和室溫放置的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究。由于擴(kuò)環(huán)作用，使得藥物雌活力大大降低，比雌酚酮低10000倍左右，那么毒副作用也相應(yīng)降低。完成17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯的合成及制備工藝的發(fā)明、和含有17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯的藥物組合物，以及該組合物在制備抗輻射損傷、抗腫瘤、和保護(hù)造血功能藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一個(gè)目的在于，公開了1種新型雌激素藥物17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯及其合成制備工藝。
本發(fā)明另一個(gè)目的在于，公開了17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯在用于制備抗輻射損傷、抗腫瘤、保護(hù)造血功能藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明再一個(gè)目的在于，公開了含有治療有效量的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，及與一種或一種以上藥學(xué)上可接受的載體組成的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)地公開了17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯的制備工藝方法。
本發(fā)明的2種技術(shù)方案通過以下內(nèi)容予以實(shí)現(xiàn)以雌酚酮為原料，經(jīng)乙?；?、擴(kuò)環(huán)、乙炔化等反應(yīng)得到目標(biāo)化合物17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯。
技術(shù)方案1具體按以下工藝步驟進(jìn)行(1)乙?；Q取一定量的雌酚酮原料，以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到3-乙?；品油?；(2)加氰將乙酰化產(chǎn)物與氰化鉀或氰化鈉反應(yīng)6-20小時(shí)，得到17位上加氰產(chǎn)物；(3)氫化還原以冰乙酸為溶劑，以PtO2為催化劑，在氫化反應(yīng)釜中進(jìn)行催化加氫還原反應(yīng)，得到17位上氰還原的產(chǎn)物；(4)重氮化擴(kuò)環(huán)17位上氰還原產(chǎn)物，在10-40％乙酸的水溶液中冰浴低溫冷卻下攪拌，滴加NaNO2水溶液進(jìn)行重氮化重排反應(yīng)，D-環(huán)由五員環(huán)擴(kuò)環(huán)為六員環(huán)，生成3-乙酰-D-高雌酚酮；(5)炔化反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將金屬鉀加入叔丁醇和金屬鈉干燥的無水苯中反應(yīng)生成叔丁醇鉀，加入3-乙酰-D-高雌酚酮后通入干燥的乙炔氣反應(yīng)，生成17-aα-乙炔-D-高雌二醇；(6)乙?；?7-aα-乙炔-D-高雌二醇以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到目標(biāo)化合物。
利用本工藝生產(chǎn)多批產(chǎn)品，工藝穩(wěn)定，收率在20-30％。
技術(shù)方案2具體按以下工藝步驟進(jìn)行(1)乙?；Q取一定量的雌酚酮原料，以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到3-乙?；品油?；(2)重氮甲烷制備以亞硝基甲基尿素，氫氧化鉀/乙醚滴加法反應(yīng)2-6小時(shí)，得到重氮甲烷的乙醚液；(3)重氮甲烷擴(kuò)環(huán)將3-乙?；品油掖家号c重氮甲烷的乙醚液，反應(yīng)3-8小時(shí)，得到3-乙酰-D-高雌酚酮；(4)炔化反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將金屬鉀加入叔丁醇和金屬鈉干燥的無水苯中反應(yīng)生成叔丁醇鉀，加入3-乙酰-D-高雌酚酮后通入干燥的乙炔氣反應(yīng)，生成17-α-乙炔-D-高雌二醇；(5)乙?；?7-α-乙炔-D-高雌二醇以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到目標(biāo)化合物。
利用本工藝生產(chǎn)多批產(chǎn)品，工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，收率在30-36％。
17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯經(jīng)元素分析、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、熔點(diǎn)(Mp)及性狀分析，確證了結(jié)構(gòu)。
17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯具有如下理化特性分子式C23H28O3；分子量352；M.p151-152℃結(jié)構(gòu)式 光譜分析元素分析計(jì)算值C％＝78.37％；H％＝8.00％實(shí)測(cè)值C％＝78.36％；H％＝7.81％IR(KBr)cm-13473.8；3303.0；3034.0，2985.0，2934.4，2862.9；1747.1；1610.3；1579.7；1495.8；1370.7；1220.2；1061。
MS(m/z)352(12)分子離子峰；310(60)；213(95)；159(24)；133(24)；115(15)；43(22)1H-NMR(CDCl3)δ0.92(s，3H，C(18)H)；2.26(s，3H，CH3-CO-)；2.55(s，1H，)；6.78(d，J＝5.24Hz，1H，C(4)H)；6.83(d，J＝8.4Hz，1H，C(2)H)；7.27(d，d J＝3.29Hz，8.4Hz，1H，C(1)H)。
13C-NMR(CDCl3)δ1 126.209；2 116.454；3 148.285；4 120.996；5138.180；6 29.779；7 26.274；8 38.819；9 41.564；10 137.976；1126.015；12 32.906；13 43.080；14 45.680；15 22.895；16 35.005；17 22.971；17α75.826；18 11.784；19——；20 86.696；2174.491.
對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行室溫放置的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在室溫下放置2年以上穩(wěn)定、無分解，純度及理化指標(biāo)不變。技術(shù)指標(biāo)達(dá)到一類新藥報(bào)批的技術(shù)要求。
藥物組合物本發(fā)明的以17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯為活性成分的藥物組合物，含有治療有效量的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，及一種或一種以上的藥學(xué)上可接受的載體。其中，所述的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治療有效量為10～200mg；較好為15～150mg；最佳25～100mg。
所述的組合物包括口服制劑、注射液體制劑，其中口服制劑為片劑、各種膠囊或緩釋片；注射液體制劑為注射用油制劑。
所述的藥學(xué)上可接受的載體，包括制劑中常規(guī)的稀釋劑、填充劑(如甘露醇、乳糖、聚乙二醇)，粘合劑(淀粉、微晶纖維素)，崩解劑(如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素)，潤(rùn)滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂)，濕潤(rùn)劑(如丙二醇、乙醇)，穩(wěn)定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙酰胺)等等。上述輔料可以是常用劑量，以常用的配比與17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯混合，當(dāng)17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯用量確定后，各藥用輔料之間的配比可以根據(jù)需要適當(dāng)調(diào)節(jié)。
壓片制成片劑的使用，用作賦型劑的輔料有MgSO4、玉米淀粉、滑石粉，規(guī)格有25mg、50mg、100mg、150mg、200mg。
17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯油劑將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯溶于注射用茶油、豆油等配成注射油劑。
各種藥物制劑的制備具體操作如下(1).按配置總量計(jì)稱取含10～70％17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，加入30～90％的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑等，充分?jǐn)嚢杌旌现瞥深w粒，在60～70℃干燥2～4小時(shí)壓制成片，使每片含17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯25～200mg。
(2).將制成的濕顆粒直接在60～70℃干燥2～4小時(shí)，然后充填入空膠囊殼中，使每粒膠囊含17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯50～200mg。
(3).油劑的制備是稱取1％～10％的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯與注射用油，如茶油配制成油劑，分裝滅菌，制得。
(4).按配置總量計(jì)，稱取10％～60％的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，加入40％～90％的填充劑、抗氧劑等，加熱熔融溫度(40～90℃)，使原料和輔料充分混熔，滴制成丸，使每粒滴丸含17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯5～25mg。
本發(fā)明的施藥量可根據(jù)用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴(yán)重程度等諸多因素加以調(diào)整，日劑量一般為10～200mg/kg；較好為15～150mg/kg；最佳為25～100mg/kg?？筛鶕?jù)臨床的病例表現(xiàn)適當(dāng)加以改變。
本發(fā)明還公開了17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯在用于制備抗輻射損傷、抗腫瘤、保護(hù)造血功能方面藥物的應(yīng)用。其中，所述的抗腫瘤活性包括制備治療宮頸癌、白血病、肺癌藥物方面的應(yīng)用。例如17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)乳腺癌、淋巴細(xì)胞白血病、宮頸癌U14、肺腺癌L795，以及對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠造血功能損傷的保護(hù)作用。
藥效學(xué)研究包括如下幾個(gè)方面的研究?jī)?nèi)容(1)輻射防護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究(2)體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究(3)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究(4)體內(nèi)抑瘤增效實(shí)驗(yàn)研究(5)升高白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究(6)小鼠雌活性實(shí)驗(yàn)研究一、輻射防護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠輻射防護(hù)作用的研究材料和方法
1.動(dòng)物及分組昆明種小鼠，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。動(dòng)物按體重隨機(jī)分5組，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，體重為25±26g，雌雄各半。每組59只。
2.藥物及配制將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯、EE2將藥物滴加注射用茶油(天津氨基酸公司提供)配制成25μg/0.2ml，EE3和E3配制成100μg/0.2ml劑量。
3.給藥方法實(shí)驗(yàn)小鼠在照射前連續(xù)3d，每天1次腹腔注射給藥，給藥劑量17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯和EE2組劑量為每只小鼠25μg/0.2ml，EE3和E3劑量組為每只小鼠100μg/0.2ml。按每組小鼠30d存活數(shù)/每組小鼠總數(shù)×100％公式，計(jì)算30d存活率。
4.照射條件利用137Csγ-射線對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全身照射，動(dòng)物受照射量為8.0Gy，劑量率為0.87Gy/min，考察30d存活率。
結(jié)果見表1表1 4種雌激素照射前3、2、1d給藥30d存活率

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物存活22只，存活率比對(duì)照組提高33.9％，E E2組動(dòng)物存活13只，比對(duì)照組提高18.3％，E E3組動(dòng)物存活9只，比對(duì)照組提高11.6％，E3組動(dòng)物存活3只，比對(duì)照組提高1.7％。17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)受γ射線照射小鼠有明顯的防護(hù)作用。
(二)、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)IRM-2和ICR小鼠的輻射防護(hù)作用1.1材料IRM-2小鼠是我所自己培育的近交系輻射抗性小鼠，ICR小鼠由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，兩種品系小鼠各100只。動(dòng)物按體重(24-26g)隨機(jī)分5組，每組20只，雌雄各半，第1組為空白對(duì)照組，第2組為陽性對(duì)照組，3、4、5組為實(shí)驗(yàn)組。
1.2藥物及配制17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯、炔雌醇(EE2)、尼爾雌醇(523)。17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯加注射茶油配制成25μg/0.2ml、50μg/0.2ml、75μg/0.2ml、100μg/0.2ml、150μg/0.2ml、200μg/0.2ml六個(gè)不同濃度組，EE2配制成最佳有效劑量25μg/0.2ml，523配制成最佳有效劑量100μg/0.2ml。
1.3方法實(shí)驗(yàn)小鼠在照射前3、2、1d連續(xù)3次分別腹腔注射17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯、IRM-2小鼠的陽性對(duì)照組給予EE2 0.2ml/只，對(duì)照組腹腔注射茶油0.2ml/只。最后一次腹腔注射給藥后24h進(jìn)行照射。ICR小鼠的陽性對(duì)照組在照射前7d、3d分2次給予523 0.2ml/只，最后一次腹腔注射給藥后72h進(jìn)行照射。
1.4照射條件137Csγ-射線一次性全身照射8.0Gy，劑量率為0.87Gy/min。
1.5觀察指標(biāo)小鼠30d存活率、保護(hù)指數(shù)、小鼠活動(dòng)表現(xiàn)、小鼠平均生存天數(shù)。30d存活率＝每組小鼠30d存活數(shù)/每組小鼠總數(shù)×100％。保護(hù)指數(shù)＝[(ab+30c)/n]/[(a′b′+30c′)/n′]。a、a′分別為給藥組與對(duì)照組死亡鼠平均存活天數(shù)；b、b′分別為給藥組與對(duì)照組死亡鼠數(shù)；c、c′分別為給藥組與對(duì)照組的30d存活只數(shù)；n、n′分別為給藥組與對(duì)照組總鼠數(shù)。
2結(jié)果見表2、3。
表2 IRM-2小鼠8.0Gyγ-射線照射后30d存活率及保護(hù)指數(shù)

注給藥組與對(duì)照組相比*p＜0.001從結(jié)果可以看出，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯100μg/0.2ml、150μg/0.2ml、200μg/0.2ml三個(gè)不同劑量組，存活率分別比對(duì)照組提高55％、85％、75％，平均生存天數(shù)與對(duì)照組比較，差異有極顯著性，(p＜0.001)，保護(hù)指數(shù)分別為1.99、2.56、2.46。EE2組存活率比對(duì)照組提高30％，保護(hù)指數(shù)為1.76，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯與EE2比較，150μg/0.2ml、200μg/0.2ml兩個(gè)劑量組差異有極顯著性，(p＜0.001)。
從結(jié)果可以看出，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯100μg/0.2ml、150μg/0.2ml、200μg/0.2ml三個(gè)不同劑量組，存活率分別比對(duì)照組提高20％、35％、30％，100μg/0.2ml劑量組平均生存天數(shù)與對(duì)照組比較，差異有顯著性(p＜0.05)；150μg/0.2ml、200μg/0.2ml劑量組與對(duì)照組比較，差異有極顯著性(p＜0.001)，保護(hù)指數(shù)分別為1.78、2.17、1.89。523組存活率比空白對(duì)照組提高25％，保護(hù)指數(shù)為1.82。平均生存天數(shù)與對(duì)照組比較差異有極顯著性(p＜0.001)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯能顯著提高受照射小鼠30d存活率和保護(hù)指數(shù)。
表3 ICR小鼠8.0Gyγ-射線照射后30d存活率及保護(hù)指數(shù)

二、體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)采用MTT檢驗(yàn)方法。
(1)接種細(xì)胞取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，經(jīng)0.02％的EDTA消化后加入含有10～15％胎牛血清的RPMI-1640溶液，將細(xì)胞稀釋成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞數(shù)并接種于96孔板。將接種后的細(xì)胞置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。
(2)加藥將樣品分設(shè)1.55～200ug/ml等不同濃度，每濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔，對(duì)照設(shè)8個(gè)以上復(fù)孔。被檢樣品用RPMI-1640稀釋，用DMSO助溶。加藥后仍將細(xì)胞置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。
(3)加MTTMTT以RPMI-1640溶解，每孔加50ul。再置37℃繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后取出。
(4)測(cè)OD值棄除96孔板內(nèi)的上清液，每孔加入DMSO 150ul。在酶標(biāo)儀630nm處測(cè)定OD值。
評(píng)價(jià)指標(biāo)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。抑制率＝(1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)×100％。以直線回歸方法計(jì)算IC50。
結(jié)果17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)人乳腺癌腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，測(cè)定其IC50為5.6ug/ml；對(duì)培養(yǎng)的小鼠淋巴細(xì)胞白血病L1210細(xì)胞抑制作用IC50為3.42ug/ml。
三、體內(nèi)抗腫瘤活性研究(一)、對(duì)小鼠宮頸癌U14的治療研究1材料與方法1.1將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯配制成5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)不同劑量組。環(huán)磷酰胺(CY)用前用無菌生理鹽水配為25mg/kg。
1.2瘤種及動(dòng)物 小鼠宮頸癌U14細(xì)胞，由天津市藥物研究所提供。IRM-2小鼠是我所自己培育的近交系小鼠。
1.3抑瘤實(shí)驗(yàn) 將小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，體重為22～23g，實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯低、中、高劑量組和陽性對(duì)照CY組，給藥途徑采用腹腔注射。取U14細(xì)胞在IRM-2小鼠接種7-9d的腹水，用生理鹽水稀釋約5×107/ml瘤細(xì)胞。取細(xì)胞懸液0.2ml/只接種于小鼠腋部皮下。第2d開始給藥0.2ml/只，每日1次，共7次。CY于接種腫瘤后第2d開始給藥，0.2ml/只、隔日1次，共4次。實(shí)驗(yàn)中逐日觀察各組動(dòng)物的腫瘤體積，用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑a和短徑b，并繪制腫瘤生長(zhǎng)變化曲線，體積根據(jù)公式V＝ab2/2(a-長(zhǎng)徑，b-短徑)計(jì)算。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行10d后頸椎脫臼處死小鼠，稱量體重、瘤重、脾臟和胸腺重量，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率＝(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100％。
1.4股骨有核細(xì)胞的測(cè)定 處死小鼠后，取出一側(cè)股骨，去除肌肉組織，用白細(xì)胞稀釋液沖洗骨髓細(xì)胞，觀察骨髓有核細(xì)胞數(shù)。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果用x±S表示，兩組比較用t檢驗(yàn)。
2.藥物對(duì)小鼠移植性腫瘤U14細(xì)胞的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。
表4藥物對(duì)小鼠移植性腫瘤U14的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注與對(duì)照組相比，*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001
17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠U14腫瘤的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。三個(gè)不同濃度組對(duì)小鼠U14腫瘤的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg對(duì)小鼠U14的瘤重抑制率分別為36.8％、64.3％和49.7％，其中10mg/kg劑量組與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)，7.5mg/kg劑量組與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.01)，對(duì)U14抑瘤作用明顯。陽性對(duì)照藥物環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠U14腫瘤生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，對(duì)小鼠U14的瘤重抑制率為70.8％。
3.17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治療后U14荷瘤鼠免疫系統(tǒng)指標(biāo)變化17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治療后U14荷瘤鼠胸腺、脾臟及骨髓有核細(xì)胞數(shù)變化結(jié)果見表5，三個(gè)不同濃度組小鼠的胸腺重量及骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量均高于對(duì)照組。中劑量組最明顯。
表5藥物治療后U14荷瘤鼠胸腺、脾臟、BMC的變化

注*與對(duì)照組比較，P＜0.01。
結(jié)果17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)劑量對(duì)小鼠U14的抑瘤率分別為36.8％、64.3％、BMC數(shù)均高于對(duì)照組，腫瘤生長(zhǎng)也較對(duì)照組慢。17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠U14腫瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用和刺激骨髓細(xì)胞增殖功能。
(二)、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠肺腺癌LA795的治療研究1材料與方法1.1藥物將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯配制成5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)不同劑量組。環(huán)磷酰胺(CY)配為25mg/kg。
1.2瘤種及動(dòng)物小鼠肺腺癌LA795細(xì)胞，由天津市藥物研究所提供。IRM-2小鼠是我所自己培育的近交系小鼠。
1.3抑瘤實(shí)驗(yàn) 將小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，體重為22～23g，實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯低、中、高劑量組和陽性對(duì)照CY組，給藥途徑采用腹腔注射。取LA795細(xì)胞在IRM-2小鼠接種，取第2代瘤塊1～2mm，無菌環(huán)境在小鼠腹股溝皮下包埋。接種后第2d開始按17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯藥物的三個(gè)不同劑量給藥0.2ml/只，對(duì)照組注射茶油0.2ml/只，每日1次，共7次。CY于接種腫瘤后第2d開始給藥，0.2ml/只、隔日1次，共4次。10d后頸椎脫臼處死小鼠，稱量體重、瘤重、脾臟和胸腺重量，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率＝(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100％。
1.4股骨有核細(xì)胞的測(cè)定 處死小鼠后，取出一側(cè)股骨，去除肌肉組織，用白細(xì)胞稀釋液沖洗骨髓細(xì)胞，觀察骨髓有核細(xì)胞數(shù)。
2結(jié)果見表617aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠LA795的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。三個(gè)不同濃度組對(duì)LA795腫瘤的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg對(duì)LA795的瘤重抑制率分別為46.0％、60.0％，58.0％，其中7.5mg/kg、10mg/kg與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.01)。陽性對(duì)照藥物環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠LA795腫瘤生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，對(duì)LA795的瘤重抑制率為68％。
表6藥物對(duì)小鼠移植性腫瘤LA795的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注與對(duì)照組相比*P＜0.01。
3.17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治療后LA795荷瘤鼠免疫系統(tǒng)指標(biāo)變化17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治療后LA795荷瘤鼠胸腺、脾臟及骨髓有核細(xì)胞數(shù)變化結(jié)果見表7，三個(gè)不同濃度組小鼠的胸腺重量及骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量均高于對(duì)照組。中劑量組最明顯。
表7藥物后LA795荷瘤鼠胸腺、脾臟、BMC的變化

注與對(duì)照組相比*P＜0.01從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯三個(gè)劑量組5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg對(duì)肺腺癌的抑瘤率達(dá)分別為46.0％、60.0％、58.0％，而7.5mg/kg、10mg/kg劑量組與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P＜0.01)。胸腺重量及骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量均高于對(duì)照組。說明17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠免疫功能有明顯的保護(hù)作用。17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯藥物不僅有直接的抗腫瘤作用，更主要的還能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，調(diào)動(dòng)機(jī)體自身的抗癌能力。
四、體內(nèi)對(duì)小鼠S180瘤株放射增效作用1材料與方法1.1藥物 將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯配制成5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)不同劑量組。環(huán)磷酰胺(CY)配為25mg/kg。
1.2瘤種及動(dòng)物 小鼠S180瘤株，由天津市藥物研究所提供。IRM-2小鼠是我所自己培育的近交系小鼠。
1.3抑瘤增效實(shí)驗(yàn) 將小鼠隨機(jī)分為11組，每組8只，體重為22～23g，給藥途徑采用腹腔注射。取S180腹水瘤用生理鹽水1∶3稀釋接種0.2ml/只，第2d開始按17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯藥物的三個(gè)不同劑量給藥0.2ml/只，對(duì)照組注射茶油0.2ml/只，每日1次，共7次。CY于接種腫瘤后第2d開始給藥，0.2ml/只、隔日1次，共4次。接種后第4d開始用137Csγ-射線一次性全身照射1.0Gy，劑量率為0.84Gy/min。連續(xù)5d。
10d后頸椎脫臼處死小鼠，稱量體重、瘤重、脾臟和胸腺重量，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率＝(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100％。觀察骨髓有核細(xì)胞數(shù)。
2.117aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯對(duì)小鼠S180的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8。三個(gè)不同濃度組對(duì)S180腫瘤的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg對(duì)S180的瘤重抑制率分別為39.9％(與對(duì)照組相比有顯著性差異P＜0.01)、54.81％(與對(duì)照組相比有極顯著性差異P＜0.001)，53.85％(與對(duì)照組相比有顯著性差異P＜0.05)，照射組對(duì)瘤重的抑制率分別為52.12％、59.62％，59.62％，其中5mg/kg、7.5mg/kg與對(duì)照組相比有極顯著性差異(P＜0.001)，10mg/gk劑量組與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.01)陽性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺對(duì)S180的瘤重抑制率為72.49％。
表8藥物對(duì)小鼠肉瘤S180瘤株放療增效作用研究結(jié)果

結(jié)果表明，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯和1Gy的r射線照射合用，對(duì)IRM-2小鼠的S180抑制與對(duì)照組相比差異顯著。
五、對(duì)小鼠造血功能保護(hù)作用的研究材料與方法1.藥物 將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯配制成5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)不同劑量組，茜草雙酯配為100mg/kg，環(huán)磷酰胺配為100mg/kg。
2.動(dòng)物 IRM-2小鼠是我所自己培育的近交系小鼠，體重22-23g。
3.實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物隨機(jī)分為5組，每組10只，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯藥物的三個(gè)不同劑量及陽性對(duì)照組給藥，0.2ml/只，對(duì)照組注射茶油0.2ml/只，每日1次，共5次。CY于實(shí)驗(yàn)第3d開始給藥，腹腔注射0.2ml/只，連續(xù)3天。
4.觀察指標(biāo)造血功能三項(xiàng)指標(biāo)，第9d頸椎脫臼處死小鼠，脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，電子顯微鏡下記骨髓有核細(xì)胞數(shù)，脾結(jié)節(jié)數(shù)。
結(jié)果見表9。
表9 IRM-2小鼠第9天股骨有核細(xì)胞數(shù)、脾結(jié)節(jié)數(shù)和脾臟指數(shù)

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg三個(gè)不同劑量組BMC經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與對(duì)照組相比有顯著性差異。CFU-S系代表一類多向性的造血干細(xì)胞群，它們具有自我更新和向骨髓紅系、粒系和巨核細(xì)胞分化的能力，CFU-S是促進(jìn)造血恢復(fù)的主要成分。BMC是骨髓中的有核細(xì)胞成分。CFU-S和BMC的變化代表機(jī)體造血組織恢復(fù)的能力。從本實(shí)驗(yàn)中可以看出，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯具有保護(hù)小鼠的造血功能作用。
六、藥物雌活性的研究材料和方法1.動(dòng)物及分組昆明種小白鼠，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。實(shí)驗(yàn)用出生后18d的雌性小鼠70只，按體重隨機(jī)分7組，每組10只。
2.藥物及配制將17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯、EE2將藥物滴加注射用油配制成25μg/0.2ml。
給藥方法17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯和EE2組劑量為每只小鼠25μg/0.2ml，在照射前連續(xù)3d，每天1次腹腔注射給藥，最后1次給藥后24h，將小鼠頸椎脫臼處死，取出子宮迅速稱重。
按公式求值比較。子宮重量百分率＝子宮濕重/每100克體重×100％。
3.觀察指標(biāo)子宮重量百分率。
結(jié)果見表10。
17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯與炔雌醇雌活性測(cè)定結(jié)果見表10，從結(jié)果中可以看出，17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯的雌活性低，僅為炔雌醇的1/10000。因此17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯具有療效高、毒副作用小的特點(diǎn)。
表10 17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯與E E2雌活性測(cè)定比較

本發(fā)明的新型雌激素化合物17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯及制備方法具有如下的優(yōu)點(diǎn)(1).17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，具有雌活性低，副作用小的特點(diǎn)。
(2)。17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯同時(shí)具有輻射防護(hù)、抗腫瘤和保護(hù)造血等多種功效的特點(diǎn)(3).利用本工藝制備的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯，具有收率較高工藝穩(wěn)定的特點(diǎn)，總收率在20-36％之間。
(4).本發(fā)明的17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯有效成分確切，具有穩(wěn)定性好，藥效穩(wěn)定的特點(diǎn)。
(5).由于有效成分確切，具有藥物質(zhì)量穩(wěn)定可控制的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式為了更充分的解釋本發(fā)明的實(shí)施，提供下述制劑實(shí)施實(shí)例。這些實(shí)施實(shí)例僅僅是解釋、而不是限制本發(fā)明的范圍。制劑可以采用本發(fā)明中的任意一批的化合物活性成分。下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1(1)雌酚酮-3-乙酯(I)的合成將100g雌酚酮，66ml吡啶，66ml醋酐于25℃恒溫?cái)嚢?hr，外加干燥管，緩慢傾入600ml水中，析出白色固體，放置2hr，抽濾，以大量熱水洗至無吡啶味，于60℃干燥，重量110.0g，mp119-121℃，經(jīng)薄層層析監(jiān)測(cè)為單一成份。產(chǎn)率94.8％。
(2)17-氰基雌二醇-3-乙酯(II)的合成將110.0g(0.352mole)雌酚酮-3-醋酸酯，220g KCN，1830ml 95％乙醇，950ml的冰乙酸于25℃恒溫?cái)嚢?4hr，而后于75℃恒溫1hr，移出放冷，傾入6000ml水中，析出白色沉淀，抽濾，水淋洗干凈，抽干，60℃干燥，重110.5g。TLC顯示為二組份，反應(yīng)不完全，仍含少量原料點(diǎn)。乙酸乙酯、正己烷重結(jié)晶，重84.7g，收率71％。
(3)D-高雌酚酮-3-乙酯(III)的合成將25g(0.074)17-氰基雌二醇-3-醋酸酯，8.3g PtO2和1300ml冰乙酸于25-30℃恒溫，至不再吸收氫氣為止，共加氫6hrs。過濾除去PtO2，減壓蒸除大部分冰乙酸，蒸至還有約200ml體積時(shí)，轉(zhuǎn)移至另一反應(yīng)瓶中，冷卻下加入水1000ml，冰浴冷卻攪拌，維持在0-2℃，滴加25g亞硝酸鈉(NaNO2)溶于250ml水中的稀溶液，加畢攪拌6hr，放置過夜。每次用700ml乙醚萃取，共3次，合并提取液，飽和NaHCO3液洗2次，水洗二次，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，重27g。經(jīng)丙酮、環(huán)己烷重結(jié)晶得21g純品，mp116-118℃，收率87％。
(4)17aα-D-高炔雌二醇(IV)的合成反應(yīng)瓶裝置以回流冷凝器，于其內(nèi)放入237.5ml(0.235mol)叔丁醇和100ml用金屬鈉干燥的無水苯，將18.8g金屬鉀(0.048mol)加入其中。加金屬鉀前，儀器系統(tǒng)先通N2氣，并于55-60℃，在N2氣流下使鉀溶解(約需2小時(shí))。
外用熱水浴使溫度升至35-40℃，于攪拌下通入干燥乙炔氣約2小時(shí)，反應(yīng)液成為糊狀物。將6.5g(0.020mol)D-高雌酚酮(mp 253-257℃)放在60ml無水四氫呋喃和75ml無水苯的溶液中，全部溶解。用等壓漏斗于0.5小時(shí)滴入至上述炔鉀的溶液中，攪拌下繼續(xù)通入乙炔氣反應(yīng)10小時(shí)，反應(yīng)液呈堿性(pH＞10-11)。冰浴冷卻下，用30％H2SO4中和至酸性(約用60ml)，反應(yīng)液中析出粘稠固體，用95％的乙醇洗出，于40℃水浴中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，得白色固體，用水洗至中性。固體于紅外燈下干燥，粗產(chǎn)物重4.6g，mp90.7-98.8℃。用乙醇和水重結(jié)晶，干燥后重3.9g，收率62.9％。
(5)17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(V)的合成將上步制得的17aα-D-高炔雌二醇2.0g(0.0064mol)，加入吡啶10ml溶解，加入5ml(0.0053mol)醋酸酐，于室溫(25-28℃)攪拌2小時(shí)，反應(yīng)混和物倒入冰水中，用乙醚提取，乙醚提取液用水洗2次，無水硫酸鎂干燥。濾去干燥劑，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，殘余物為粘稠固化物，重1.95g，產(chǎn)率85％。以苯和正己烷重結(jié)晶，加入苯剛好使其溶解，而后滴加正己烷至混濁，析出白色固體，放入冰箱過夜，次日過濾得白色固體，重1.7g，mp125.3-127.6℃。收率75.5％。五步總收率27.8％。
實(shí)施例2(1)雌酚酮-3-乙酯(I)的合成將100g(0.37mole)雌酚酮，66ml吡啶，66ml醋酐于25℃恒溫?cái)嚢?hr，外加干燥管，緩慢傾入600ml水中，析出白色固體，放置2hr，抽濾，以大量熱水洗至無吡啶味，于60℃干燥，重量112.0g，mp119-121℃，產(chǎn)率96.5％。
(2)重氮甲烷的制備在500ml的燒瓶中加入60ml 50％的NaOH溶液及200ml的乙醚，混合物冷卻到5℃，并且加入20.6g(0.2mole)的亞硝基甲基尿，并加攪拌子輕輕攪拌反應(yīng)4小時(shí)，醚層呈淺黃色，以分液漏斗將醚層，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
(3)D-高雌酚酮-3-乙酯(III)的合成將62.4g(0.20mole)加入1000ml的燒瓶中，加乙醇300ml攪拌溶解，以冰浴冷卻至5℃，滴加重氮甲烷的乙醚液，在0.5小時(shí)滴加完，繼續(xù)攪拌3小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，終止反應(yīng)，蒸除溶劑，得固體64g。經(jīng)丙酮、環(huán)己烷重結(jié)晶得51g純品，收率78.2％，mp117-118℃。
(4)17aα-D-高炔雌二醇(IV)的合成反應(yīng)瓶裝置以回流冷凝器，于其內(nèi)放入245ml(0.242mole)叔丁醇和120ml用金屬鈉干燥的無水苯，將20g金屬鉀(0.051mole)加入其中。加金屬鉀前，儀器系統(tǒng)先通N2氣，并于55-60℃，在N2氣流下使鉀溶解(約需2小時(shí))。
外用熱水浴使溫度升至35-40℃，于攪拌下通入干燥乙炔氣約2小時(shí)，反應(yīng)液成為糊狀物。將7.5g(0.023mol)D-高雌酚酮-3-乙酯(mp 253-257℃)放在70ml無水四氫呋喃和85ml無水苯的溶液中，全部溶解。用等壓漏斗于0.5小時(shí)滴入至上述炔鉀的溶液中，攪拌下繼續(xù)通入乙炔氣反應(yīng)10小時(shí)，反應(yīng)液呈堿性(pH＞10-11)。冰浴冷卻下，用30％H2SO4中和至酸性(約用75ml)，反應(yīng)液中析出粘稠固體，用95％的乙醇洗出，于40℃水浴中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，得白色固體，用水洗至中性。固體于紅外燈下干燥，粗產(chǎn)物重5.2g，mp90.5-98.6℃。用乙醇和水重結(jié)晶，干燥后重4.3g。收率59.9％。
(5)17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(V)的合成將上步制得的17aα-D-高炔雌二醇2.5mg(0.0080mol)，加入吡啶14ml溶解，加入7.5ml(0.0080mol)醋酸酐，于室溫(25-28℃)攪拌2小時(shí)，反應(yīng)混和物倒入冰水中，用乙醚提取，乙醚提取液用水洗2次，無水硫酸鎂干燥。濾去干燥劑，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，殘余物為粘稠固化物，重2.0g，產(chǎn)率87.2％。以苯和正己烷重結(jié)晶，加入苯剛好使其溶解，而后滴加正己烷至混濁，析出白色固體，放入冰箱過夜，次日過濾得白色固體，重2.1g；mp125.3-127.6℃。收率74.6％。五步總收率33.7％實(shí)施例3取17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯50.0g，藥用淀粉50.0g，50％乙醇適量，制粒，整粒，烘干，裝2#膠囊，每粒含17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯0.1g。
實(shí)施例4取17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯50.0g，藥用淀粉30.0g，糊精30.0g，50％乙醇適量，將上述原料充分?jǐn)嚢杌旌现瞥深w粒，在60～70℃干燥2～4小時(shí)，制成1000片，每片含17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯0.05g。
實(shí)施例5無菌條件下取17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯25g，加入到注射用茶油5000ml中，攪拌約30分鐘溶解，灌封、滅菌，即得注射油劑。
在詳細(xì)說明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請(qǐng)專利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受限于說明書中所舉實(shí)例的實(shí)施方式。
權(quán)利要求
1.新型雌激素化合物17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯的合成，其特征在于，以雌酚酮為原料，經(jīng)乙?；?、擴(kuò)環(huán)、炔化及乙?；磻?yīng)得到目標(biāo)化合物17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯。
2.權(quán)利要求1所述的目標(biāo)化合物17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯的合成方法，其特征在于按以下工藝步驟進(jìn)行(1)乙酰化稱取一定量的雌酚酮原料，以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到3-乙酰雌酚酮；(2)加氰將乙?；a(chǎn)物與氰化鉀或氰化鈉反應(yīng)6-20小時(shí)，得到17位上加氰產(chǎn)物；(3)氫化還原以冰乙酸為溶劑，以PtO2為催化劑，在氫化反應(yīng)釜中進(jìn)行催化加氫還原反應(yīng)，得到17位上氰還原的產(chǎn)物；(4)重氮化擴(kuò)環(huán)17位上氰還原產(chǎn)物，在10-40％乙酸的水溶液中冰浴低溫冷卻下攪拌，滴加NaNO2水溶液進(jìn)行重氮化反應(yīng)并重排，D-環(huán)由五員環(huán)擴(kuò)環(huán)為六員環(huán)，生成3-乙酰-D-高雌酚酮；(5)炔化反應(yīng)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將金屬鉀加入叔丁醇和金屬鈉干燥的無水苯中反應(yīng)生成叔丁醇鉀，加入3-乙酰-D-高雌酚酮后通入干燥的乙炔氣反應(yīng)，生成17-a α-乙炔-D-高雌二醇；(6)乙?；?7-a α-乙炔-D-高雌二醇以乙酸酐和吡啶，攪拌反應(yīng)2-8小時(shí)，得到目標(biāo)化合物。
3.權(quán)利要求1所述的目標(biāo)化合物17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯合成的擴(kuò)環(huán)方法以重氮甲烷，對(duì)乙?；a(chǎn)物3-乙酰雌酚酮直接進(jìn)行擴(kuò)環(huán)得到3-乙酰-D-高雌酚酮，再進(jìn)行上述炔化和乙?；磻?yīng)得到目標(biāo)化合物。
4.以17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯為活性成分的藥物組合物，該組合物含有治療有效劑量的17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯，及一種或一種以上的藥學(xué)上可接受的載體。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中，該組合物可以是口服制劑、注射劑的形式。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中，口服制劑為片劑、各種膠囊劑、緩釋片劑、滴丸劑；注射劑為液體油制劑。
7.權(quán)利要求1所述的17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯在用于制備抗輻射損傷、防治腫瘤、保護(hù)造血功能藥物方面的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1所述的17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯在用于制備輻射防護(hù)藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1所述的17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯在用于制備防治惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯的合成、光譜分析結(jié)構(gòu)確證、穩(wěn)定性研究、雌活性研究、含17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯的藥物組合物，以及該合成產(chǎn)物的藥物用途。將原料雌酚酮，經(jīng)乙?；?、擴(kuò)環(huán)、乙炔化等反應(yīng)得到目標(biāo)化合物17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯。本發(fā)明17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯藥理活性的研究表明，其具有明顯的抗輻射和對(duì)保護(hù)造血功能等生物活性，以及明顯的抗癌效價(jià)，對(duì)多種試驗(yàn)?zāi)[瘤具有明顯的抑制活性。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯可望研制成為低毒高效具有抗輻射及抗腫瘤等多種生物功效的抗輻射及腫瘤治療新藥。
文檔編號(hào)A61K9/52GK1765918SQ200510016408
公開日2006年5月3日 申請(qǐng)日期2005年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月25日
發(fā)明者周則衛(wèi), 王月英, 李志旺, 王汝勤, 趙云庭, 沈秀, 劉培勛, 胡璧, 張良安 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所