專利名稱：Cd5的制作方法
背景技術(shù)：
末梢B細(xì)胞瘤慢性淋巴細(xì)胞性白血病/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤代表了最常見的淋巴細(xì)胞性白血病。顧名思義，其可以表示為白血病或淋巴瘤。然而，關(guān)于該瘤的兩種表現(xiàn)慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)和小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)在形態(tài)學(xué)上、顯型上以及遺傳型上很難區(qū)分，唯一差別在于外周血液淋巴細(xì)胞的程度。
CLL是西方國(guó)家成年人最常見的白血病。在CLL中，外周血液包含缺乏細(xì)胞質(zhì)的小而圓的淋巴細(xì)胞。在所有采取小淋巴細(xì)胞的空隙滲透形式或非類結(jié)核(nonparatubular)聚集形式的CLL和多數(shù)SLL的情形中，都已經(jīng)觀察到骨髓紊亂。CLL和SLL中的腫瘤細(xì)胞表達(dá)pan B細(xì)胞標(biāo)記物CD29和CD20。此外，CD5，一種僅僅在在正常B細(xì)胞的小亞型上表達(dá)的T細(xì)胞標(biāo)記物，存在于該腫瘤細(xì)胞上。CLL細(xì)胞的免疫顯型是唯一的。CLL細(xì)胞共同表達(dá)B淋巴細(xì)胞譜系標(biāo)記物CD19和T淋巴細(xì)胞標(biāo)記物CD5。CLL細(xì)胞還顯示出特征水平的免疫球蛋白受體的表達(dá)。通常，腫瘤細(xì)胞還具有對(duì)帶有κ或λ輕鏈的Ig重鏈的低水平的表面表達(dá)。
CLL為B淋巴細(xì)胞的無性系惡性腫瘤。該疾病通常無痛，并帶有長(zhǎng)命的小淋巴細(xì)胞(其對(duì)抗原刺激缺乏免疫競(jìng)爭(zhēng)和應(yīng)答)緩慢的逐漸累積。CLL不能用常規(guī)的細(xì)胞毒素化學(xué)療法來治愈(Cheson等，Blood1996；874990-4997；和Keating等，Blood 1993；812878-2884)。CLL的標(biāo)志是孤立的淋巴細(xì)胞增多。白血球量通常大于20,000/μL并可能顯著地升高到幾十萬。CLL的診斷要求淋巴細(xì)胞絕對(duì)量大于4000/mm3。CLL臨床表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞的免疫抑制、骨髓衰竭和器官浸透。免疫缺陷還涉及由異常B細(xì)胞產(chǎn)生的不充分的抗體。隨著疾病的發(fā)展，CLL可以通過直接組織滲透而造成損傷。
在某些情況下，患者可以產(chǎn)生皮膚淋巴瘤沉淀-皮膚上的紅斑損傷。該損傷可以包括小而圓的B細(xì)胞的非典型淋巴表皮滲透。
概述已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些小分子免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(IRMs)具有提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面分子表達(dá)的用途。因此，某些IRMs可以用于治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤，例如，慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)、套細(xì)胞淋巴瘤或具有絨狀淋巴細(xì)胞的脾淋巴瘤。
因此，本發(fā)明提供一種治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的方法。通常，該方法包括對(duì)患者給服能有效改善CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種癥狀或臨床信號(hào)的量的IRM化合物。在一些具體實(shí)例中，服用IRM化合物可以導(dǎo)致在兩個(gè)月內(nèi)外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)病或脾腫大減少至少50％。在另外的具體實(shí)例中，給藥IRM化合物可以抑制以至預(yù)防進(jìn)行性疾病的發(fā)展，其中進(jìn)行性疾病(表現(xiàn))為淋巴細(xì)胞循環(huán)至少提高50％或發(fā)展至更顯著的階段。在又一個(gè)具體實(shí)例中，給服IRM化合物可以解決與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的結(jié)節(jié)狀的紅斑損傷。
另一方面，本發(fā)明提供一種提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的方法。通常，該方法包括將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與至少一種可有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的IRM接觸。在一些具體實(shí)例中，該細(xì)胞表面分子可以是共同刺激的分子。
另一方面，本發(fā)明還提供一種刺激CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以產(chǎn)生細(xì)胞因子的方法，其通過將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞與能夠有效誘導(dǎo)產(chǎn)生比由未接觸IRM的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的水平更高水平細(xì)胞因子的IRM接觸。在一些具體實(shí)例中，細(xì)胞因子可以是IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、GM-CSF或其組合。
另一方面，本發(fā)明提供一種提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞增殖的方法。通常，該方法包括將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與可有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面的至少一種共刺激分子的表達(dá)的IRM接觸，隨后將CD8+T細(xì)胞與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，從而活化CD8+T細(xì)胞；其中該活化的T細(xì)胞為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，且與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(沒有和IRM接觸)接觸的T細(xì)胞相比，證明可以提高增殖。
在一些具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性的。在其他具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞為幼稚細(xì)胞。
在一些具體實(shí)例中，IRM化合物對(duì)被診斷為具有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給藥，因此活化的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞為自體同源性的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞。
在一些具體實(shí)例中，可以用一種或多種其他的免疫調(diào)節(jié)劑(例如IL-2和/或蛋白激酶C激動(dòng)劑)進(jìn)一步接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
另一方面，本發(fā)明還提供一種通過細(xì)胞毒性T細(xì)胞提高殺滅CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的方法。通常，該方法包括將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與能夠有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面的至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM接觸，隨后將CD8+T細(xì)胞與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，從而活化CD8+T細(xì)胞；其中該活化的T細(xì)胞為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，且和未與IRM接觸的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸的T細(xì)胞相比，顯示出提高了的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的殺滅。
在一些具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性的。在其他具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞為幼稚細(xì)胞。
在一些具體實(shí)例中，IRM化合物對(duì)被診斷為具有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給藥，從而活化的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞為自體同源的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞。
在一些具體實(shí)例中，可以用一種或多種其他的免疫調(diào)節(jié)劑(例如IL-2和/或蛋白激酶C激動(dòng)劑)進(jìn)一步接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
另一方面，本發(fā)明還提供一種治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤患者的方法，包括對(duì)患者給服可以有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的IRM。
另一方面，本發(fā)明還提供一種疫苗，其包含分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞或其免疫活性部分，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)與可有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的IRM接觸。在某些具體實(shí)例中，可以用一種或多種其他的免疫調(diào)節(jié)劑(例如IL-2和/或蛋白激酶C激動(dòng)劑)進(jìn)一步接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞劑。
另一方面，本發(fā)明還提供一種制備疫苗的方法，包括用IRM接觸分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，以有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子的表達(dá)。一些具體實(shí)例可以包括用一種或多種其他的免疫調(diào)節(jié)劑(例如IL-2和/或蛋白激酶C激動(dòng)劑)進(jìn)一步接觸分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。在另外的具體實(shí)例中，該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞可以來源于被診斷為CLL或SLL的患者。
在一些具體實(shí)例中，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞可以是慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)細(xì)胞、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)細(xì)胞、套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞、具有絨狀淋巴細(xì)胞的脾淋巴瘤或其組合。
在一些具體實(shí)例中，IRM是TLR7激動(dòng)劑。在一些具體實(shí)例中，IRM是TLR8激動(dòng)劑。在一些具體實(shí)例中，IRM是TLR7和TLR8兩者的激動(dòng)劑。
在一些具體實(shí)例中，IRM可以是咪唑并喹啉胺、四氫咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、1，2-橋接咪唑并喹啉胺、6，7-稠合環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并萘啶胺、四氫咪唑并萘啶胺、噁唑喹啉胺、噻唑喹啉胺、噁唑吡啶胺、噻唑吡啶胺、噁唑萘啶胺或噻唑萘啶胺。在某些具體實(shí)例中，IRM為咪唑并喹啉胺，例如1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺基。在另外的具體實(shí)例中，IRM為四氫咪唑并喹啉胺，例如4-胺基-2-(乙氧基甲基)-α，α-二甲基-6，7，8，9-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇水合物。在另外的具體實(shí)例中，IRM為磺酰胺取代的咪唑并喹啉胺，例如N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]甲烷磺酰胺。
在一些具體實(shí)例中，表達(dá)提高的至少一種細(xì)胞表面分子可以是CD20、CD22或CD23，且該方法進(jìn)一步包括用治療劑(其具有提高表達(dá)的細(xì)胞表面分子的靶點(diǎn))對(duì)患者給藥。在一些具體實(shí)例中，可以提高超過一種細(xì)胞表面分子的表達(dá)。
在一些具體實(shí)例中，表達(dá)提高的至少一種共刺激分子可以是CD40、CD54、CD80、CD83、CD86、CD25或CD38。在一些具體實(shí)例中，可以提高超過一種共刺激分子的表達(dá)。
在一些具體實(shí)例中，IRM可以在體外與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸。在另外的具體實(shí)例中，IRM可以在體內(nèi)與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，例如在患者的器官、組織或血液。
比照以下詳細(xì)說明、實(shí)施例、權(quán)利要求和附圖將很容易明白本發(fā)明的其它多種特性和優(yōu)點(diǎn)。在整個(gè)詳細(xì)說明的多處由實(shí)施例的列表提供引導(dǎo)。在每個(gè)實(shí)例中，所列舉的列表僅作為代表性的組，并不作為唯一的列表。


圖1A-B通過IRM化合物提高CLL細(xì)胞上共刺激分子的表達(dá)。
圖2A-CIRM1化合物(有或者沒有IL-2)在由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子上的效果。
圖3A-BIRM化合物在CLL細(xì)胞刺激細(xì)胞毒性T細(xì)胞增殖效率上的效果。
圖4A-C在CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子上IRM化合物、IL-2和PKC激動(dòng)劑的效果。
圖5A-B通過PKC激動(dòng)劑、IL-2和IRM誘導(dǎo)T細(xì)胞細(xì)胞毒性抵抗自體同源的CLL細(xì)胞。
圖6A-B淋巴瘤的皮膚沉淀在治療前(圖6a)和用IRM治療后(圖6b)的照片。
圖7IRM1在由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子上的效果。
圖8A-BIRM3對(duì)于由CLL細(xì)胞表達(dá)的CD80和CD83上的效果。
圖9在CLL細(xì)胞表面分子表達(dá)中，IRM3介導(dǎo)的改變。
圖10IRM3+IL-2提高在CLL細(xì)胞上CD20的表達(dá)。
實(shí)施方式本發(fā)明提供一種治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的方法，例如慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)。盡管大量臨床觀察表明CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞可以受到T細(xì)胞介導(dǎo)的調(diào)節(jié)免疫識(shí)別的影響(參見例如Ribera等BloodCells 1987；12471-483；Ziegler-Heitbrock等Blood 1989；731426-1430；Wierda等Blood 2000；962917-2924；Gitelson等Clin Cancer Res.2003；991656-1665；和Pavletic等Bone Marrow Transplant 2000；25717-722)，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的弱免疫原性已經(jīng)限制了基于免疫治療方法的發(fā)展，并因此促進(jìn)了疾病發(fā)展。
本發(fā)明第一次證明將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(IRM)化合物接觸可以用于治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤。IRM化合物似乎由基礎(chǔ)免疫系統(tǒng)機(jī)制(通稱Toll狀受體(TLRs))引起某些細(xì)胞因子、趨化因子和共刺激分子選擇的生物合成。因此，某些IRM化合物可以選擇性地誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)的某些方面或一致免疫系統(tǒng)的其它方面。特別是，IRM化合物可以提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面分子表達(dá)、增強(qiáng)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞免疫原性，并提供一種治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的新的免疫治療方法。在某些情況下，該提高表達(dá)的細(xì)胞表面分子可以是共刺激分子。提高共刺激分子的細(xì)胞表面的表達(dá)可以使CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞變成有效的抗原遞呈細(xì)胞(APCs)，并能引發(fā)和/或保持瘤反應(yīng)性的T細(xì)胞活性。
在此使用的以下術(shù)語具有下列意義“改善”是指表示具體病癥的程度、嚴(yán)重性、發(fā)生頻度和/或癥狀或臨床征象可能性的任何減少。
“CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞”是指具有獨(dú)特免疫顯型的贅生性細(xì)胞，包括CD19和CD5的共同表達(dá)。除表達(dá)B淋巴細(xì)胞譜系標(biāo)記物CD19之外，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還表達(dá)T淋巴細(xì)胞標(biāo)記物CD5，其通常僅表達(dá)正常B細(xì)胞的一個(gè)小亞類。CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞包括例如慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)細(xì)胞、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)細(xì)胞、套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和具有絨狀淋巴細(xì)胞的脾淋巴瘤。在一些具體實(shí)例中，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞是CLL細(xì)胞或SLL細(xì)胞。在某些特定的具體實(shí)例中，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞是CLL細(xì)胞。
“細(xì)胞表面分子”是指一種分子，其在細(xì)胞表面上表達(dá)并可以用來測(cè)定該細(xì)胞的譜系或用來區(qū)別細(xì)胞或與其它細(xì)胞的類型。
“病者”或“患者”包括例如動(dòng)物，例如但不限于人類、非人類靈長(zhǎng)類、嚙齒類、犬、貓、馬、豬、綿羊、山羊或牛。
“病征”或“臨床征象”是指與能夠被除該患者外的個(gè)體發(fā)現(xiàn)的特定狀況相關(guān)的客觀物理發(fā)現(xiàn)。
“癥狀”是指疾病或患者狀況的任何主觀證據(jù)。
除非另作說明、“一種”、“一個(gè)”、“該”和“至少一個(gè)”可交替使用并且意思是一個(gè)或更多個(gè)。
某些IRM化合物(例如TLR7和/或TLR8的激動(dòng)劑)可以提高提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的大量細(xì)胞表面分子(包括例如，共刺激分子)的表達(dá)，這能導(dǎo)致更有效提高抗CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)。因此，提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面分子的表達(dá)可以用于治療減緩或終止該疾病的發(fā)展。在某些具體實(shí)例中，治療可以逆轉(zhuǎn)該疾病的病程，在某些情形中甚至達(dá)到完全解決的程度，即治愈該疾病。
除具有治療效用外，已提高一種或多種共刺激分子和/或其它細(xì)胞表面分子的表達(dá)的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞可以具有診斷或研究的效用。
在幼稚T細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和產(chǎn)生細(xì)胞因子需要兩個(gè)信號(hào)。第一信號(hào)是外來抗原，其通過存在于抗原遞呈細(xì)胞(APC)的表面的自身主要組織相容性復(fù)合體(MHC)。抗原肽-MHC復(fù)合體在幼稚T細(xì)胞表面與T細(xì)胞受體(TCR)相互作用，從而對(duì)免疫反應(yīng)提供特異性抗原。第二信號(hào)是“共同刺激”信號(hào)。共同刺激信號(hào)是抗原非依賴性的，并通過促進(jìn)例如T細(xì)胞存活、無性系膨脹、細(xì)胞因子分泌和效應(yīng)物功能的特異性受體-配體相互作用由APC提供給幼稚T細(xì)胞細(xì)胞因子。
在兩個(gè)信號(hào)的共同存在下，可以產(chǎn)生一個(gè)適合的免疫應(yīng)答。然而，在缺乏共同刺激信號(hào)的情況下，淋巴細(xì)胞可能無法對(duì)抗原刺激有效應(yīng)答。免疫系統(tǒng)的這種無應(yīng)答可以導(dǎo)致免疫耐受性。
因此，此處使用的“共刺激分子”是指細(xì)胞表面分子亞類的一員，(除介紹的MHCI分子外)，以產(chǎn)生生產(chǎn)性的免疫反應(yīng)，但其表達(dá)不足以獨(dú)立地產(chǎn)生生產(chǎn)性的免疫反應(yīng)。共刺激分子的實(shí)例包括但不局限于B7族成員(包括例如，B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、ICOS-L(B7RP1)和PDL-1)、Ig超級(jí)族的其它分子(包括例如，CD2和OX2)、缺乏死亡域的TNF:TNFR亞族分子(包括例如，CD40、OX40、CD27、4-1BB和CD30)和一些整聯(lián)蛋白(包括例如，VLA-4、ICAM-1和ICAM-3)。
可以使用很多已知的方法提高一種或多種細(xì)胞表面分子的表達(dá)，包括在此描述的任何方法。例如，該方法包括但不局限于，流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織相容、逆錄酶聚合酶連鎖反應(yīng)(RT-PCR)包括連續(xù)變異RT-PCR、和RNA印跡分析。
在一些具體實(shí)例中，可以刺激CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以提高CD20、CD22、CD23、CD25、CD38、CD40、CD54、CD80、CD83或CD86中一種或多種的表達(dá)。
在某些的具體實(shí)例中，可以刺激CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以提高治療劑靶點(diǎn)的細(xì)胞表面分子的表達(dá)，治療劑例如為與細(xì)胞表面分子特異性結(jié)合的單克隆抗體。這樣，提高細(xì)胞表面分子的表達(dá)可以用于靶點(diǎn)是細(xì)胞表面分子的治療。例如，Rituximab(美羅華)是一種以單CD20為靶點(diǎn)的單克隆抗體，并已經(jīng)證明有效治療非霍奇金淋巴瘤。Rituximab結(jié)合表達(dá)CD20的B細(xì)胞，從而表記那些用于通過免疫系統(tǒng)消除的Rituximab標(biāo)記的細(xì)胞。因此，一種治療包括，例如(a)提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞上的CD20的表達(dá)，以及隨后(b)給服Rituximab可使得Rituximab與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞粘合，從而對(duì)用于通過免疫系統(tǒng)消除的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤進(jìn)行標(biāo)記，并從而使得Rituximab能夠有效治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤。其它在CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中提高表達(dá)且可以作為治療劑靶點(diǎn)的細(xì)胞表面分子包括例如CD22和CD23。
在一些具體實(shí)例中，可以通過將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞與能夠有效產(chǎn)生大于沒有接觸IRM的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)因子的IRM接觸，刺激CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以產(chǎn)生細(xì)胞因子。在一些具體實(shí)例中，IRM化合物可以是一種或多種TLRs激動(dòng)劑，例如TLR7激動(dòng)劑、TLR8激動(dòng)劑或TLR7和TLR8激動(dòng)劑。產(chǎn)生的細(xì)胞因子可以包括但不限于IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、GM-CSF和其組合。
在一些具體實(shí)例中，IRM化合物可以在體外與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，例如在細(xì)胞培養(yǎng)中。在另外的具體實(shí)例中，IRM化合物可以在體內(nèi)與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，即CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和IRM化合物在器官、組織或血液里接觸。在此情況下，可以通過例如給對(duì)被診斷為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給服IRM化合物，可以使CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞在患者體內(nèi)與IRM化合物接觸。直接給患者給服IRM使得CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞在與IRM接觸之后，活化自體同源的T細(xì)胞(即患者自身的T細(xì)胞)，從而產(chǎn)生對(duì)抗CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞的T細(xì)胞依賴性的免疫反應(yīng)。通過使用患者自身T細(xì)胞群產(chǎn)生對(duì)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，也許可以減少甚至消除與涉及給服異源的生物試樣治療相關(guān)的某些風(fēng)險(xiǎn)(例如炎癥、排異等)。
IRM化合物可以經(jīng)由任何合適的方法給藥，包括例如，非腸道給藥、皮下給藥、鼻內(nèi)給藥和口服。下面詳細(xì)描述了IRM化合物給藥的合適的制劑。
在一些具體實(shí)例中，可以給患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給服臨床有效量的、可有效提高在CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面上的至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM。此處使用的“臨床有效量”是顯示出一種或多種臨床跡象有效改善的量。該臨床改善跡象可以包括任何用于醫(yī)療實(shí)踐或?qū)嶒?yàn)室研究的度量。參考，例如Cheson等，National CancerInstitute-sponsored Working Group guidelines for chronic lymphocyticleukemiarevised guidelines for diagnosis and treatment.Blood.1996；874990-4997。例如，臨床有效量可以是得到部分反應(yīng)(PR)的有效量。此處使用的“部分反應(yīng)”是至少兩個(gè)月，外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)病和/或脾腫大減少至少約50％。臨床有效量可以是得到完全反應(yīng)(CR)的有效量。此處使用的“完全反應(yīng)”指沒有檢查出白血病或淋巴瘤細(xì)胞。臨床有效量可以是預(yù)防進(jìn)行性疾病(PD)的有效量。此處使用的“進(jìn)行性疾病”指通過已知的病理標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定的淋巴細(xì)胞循環(huán)至少提高約50％或組織發(fā)展為更加嚴(yán)重性的。臨床有效量可以是提高長(zhǎng)期生存可能性或程度的有效量?？蛇x擇地，臨床有效量可以是減少或改善至少一種與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的癥狀或臨床征象的量。例如，臨床有效量可以是足以減少嚴(yán)重性、程度或皮膚淋巴瘤沉淀的數(shù)量的量。
在一些具體實(shí)例中，用CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞接觸一種或多種IRMs的效果可以通過用一種或多種另外的免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞來增強(qiáng)。在這種具體實(shí)例中，IRM與一種或多種另外的免疫調(diào)節(jié)劑可以是一種組合，例如一種治療的組合。如果該成分以這樣的形式提供允許CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞與一個(gè)成分接觸的生物效應(yīng)持續(xù)不變至少直到該CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞與另一個(gè)成分接觸，則該組合的成分據(jù)信可以彼此“組合”的方式遞送。因此，即使該成分以單獨(dú)的制劑提供、經(jīng)由不同的給藥途徑傳遞和/或不同時(shí)期給藥，它們也可以彼此結(jié)合遞送。
適合的免疫調(diào)節(jié)藥劑可以包括，例如白介素-2(“IL-2”)。IL-2是一種抗原刺激T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，并在抗原識(shí)別后導(dǎo)致T細(xì)胞無性系膨脹。IL-2可以從許多已知的來源獲得。例如，臨床級(jí)IL-2可以商業(yè)購買，例如從ChironCorporation，San Francisco，CA購買。
在一些具體實(shí)例中，IL-2可以在體外與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，例如在細(xì)胞培養(yǎng)中。在另外的具體實(shí)例中，IL-2可以在體內(nèi)與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，即CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和IL-2在器官、組織或血液里接觸。在此情況下，例如用IL-2對(duì)患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給藥，可以使IL-2在患者體內(nèi)與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸。IL-2可以經(jīng)由任何合適的方法給藥，包括例如，非腸道、皮下、鼻內(nèi)和口服。下面詳細(xì)描寫給藥了IL-2的合適的制劑。
用于任何具體實(shí)例的IL-2的精確量可以根據(jù)該領(lǐng)域已知的因素來改變，包括但不限于，IL-2的物理和化學(xué)性質(zhì)、與IL-2組合提供的IRM或IRMs的物理和化學(xué)性質(zhì)、預(yù)期的劑量服法、患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)(例如抑制的、失能的、刺激的)、PKC激動(dòng)劑給藥方法、是否有任何其它免疫調(diào)節(jié)藥劑與PKC激動(dòng)劑聯(lián)合給藥、以及所給藥的物種。因此，指定PKC激動(dòng)劑所有可能的有效量通常是不切實(shí)際的。然而，本領(lǐng)域熟練的普通技術(shù)人員適當(dāng)考慮這些因素后可以很容易決定其合適用量。例如，IL-2可以根據(jù)類似與這樣的(Rosenberg等通過給服IL-2以治療黑素瘤和腎細(xì)胞惡性腫瘤)步驟對(duì)患者給藥。Rosenberg等，JAMA，1994；271907-913。
另一個(gè)適合的免疫調(diào)節(jié)藥劑可以包括，例如蛋白激酶C(PKC)激動(dòng)劑。PKC激動(dòng)劑的實(shí)例包括但不限于佛波醇酯(Totterman等，Nature，1980；288176-178)和苔蘚蟲素(bryostatin)-1(Drexler等，Blood，1989；741747-1757)。淋巴瘤細(xì)胞表面分子的生理性配體通過由細(xì)胞表面分子的誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)還可以作為PKC激動(dòng)劑，并導(dǎo)致蛋白質(zhì)的PKC族成員的活化。例如，抗淋巴瘤細(xì)胞表面某些分子的抗體還可以作為PKC激動(dòng)劑。該抗體包括，例如抗MHC I級(jí)分子的抗體和表面Ig抗體。
在一些具體實(shí)例中，PKC激動(dòng)劑可以在體外與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，例如在細(xì)胞培養(yǎng)中。在另外的具體實(shí)例中，PKC激動(dòng)劑可以在體內(nèi)與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸，即CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和PKC激動(dòng)劑在器官、組織或血液里接觸。在此情況下，例如給患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者給服PKC激動(dòng)劑，可使PKC激動(dòng)劑與患者的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞接觸。PKC激動(dòng)劑可以經(jīng)由任何合適的方法給藥，包括例如，非腸道給藥、皮下給藥、鼻內(nèi)給藥和口服。下面詳細(xì)描述了PKC激動(dòng)劑給藥的合適的制劑。
用于任何一個(gè)具體實(shí)例的PKC激動(dòng)劑的精確量可以根據(jù)該領(lǐng)域已知的因素來改變，包括但不限于，PKC激動(dòng)劑的物理和化學(xué)性質(zhì)、與PKC激動(dòng)劑組合提供的IRM或IRMs的物理和化學(xué)性質(zhì)、預(yù)期的劑量服法、患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)(例如抑制的、失能的、刺激的)、PKC激動(dòng)劑的給藥方法、是否有任何其它免疫調(diào)節(jié)藥劑正在結(jié)合PKC激動(dòng)劑給藥、以及所給藥的制劑種類。因此，指定PKC激動(dòng)劑所有可能的有效量通常是不切實(shí)際的。然而，本領(lǐng)域熟練的普通技術(shù)人員適當(dāng)考慮這些因素后可以很容易決定其合適用量。
在某些具體實(shí)例中，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞可以與(a)一種或多種IRMs接觸，以有效提高至少一個(gè)共同刺激分子的表達(dá)，(b)IL-2和(c)PKC激動(dòng)劑接觸。當(dāng)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與IRM、IL-2和PKC激動(dòng)劑的組合接觸時(shí)，可以以包含該成分的單個(gè)制劑提供該組合的每個(gè)成分?？蛇x則地，由兩種或多種制劑提供該組合，其每個(gè)可以單獨(dú)包含(或連同其它一個(gè)或其它兩個(gè))該組合的成分。如果用多種制劑提供該組合，該多種制劑可以為相似的或不同的組合物。此外，每個(gè)制劑可以為相似或不同的形式(例如氣霧劑、凝膠劑、霜?jiǎng)⑷芤旱?并可以經(jīng)由相似或不同的給藥途徑(例如注射、皮下、靜脈內(nèi))。同時(shí)，如果用多種制劑提供該組合的成分，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞可以以任何次序接觸該多種成分。
在一些具體實(shí)例中，提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面的至少一種共刺激分子的表達(dá)的結(jié)果可以包括提高增殖(即膨脹)CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性(下文“淋巴瘤細(xì)胞特異性”)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTLs)。用已經(jīng)提高共刺激分子的表面表達(dá)的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞接觸淋巴瘤細(xì)胞特異性CD8+T細(xì)胞得到淋巴瘤細(xì)胞特異性CTLs的增殖?？梢酝ㄟ^任何適合的方法(包括例如一種或多種以上描述的方法)提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面的共刺激分子的表達(dá)。
在一些具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞是CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性的，即，CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞對(duì)CD8+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞后代特異性抗原已經(jīng)預(yù)先存在。在其他具體實(shí)例中，CD8+T細(xì)胞是幼稚的，即，對(duì)CD8+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞后代沒有預(yù)先的抗原(CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特異性或相反的)。
與用CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(其不顯示提高一種或多種共刺激分子的表達(dá))接觸的活化淋巴瘤細(xì)胞特異性CTLs相比，用CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(已經(jīng)提高至少一種共刺激分子的表達(dá))接觸的活化淋巴瘤細(xì)胞特異性CTLs可以顯示例如更大的增殖。
另一方面，本發(fā)明還提供疫苗、制備疫苗的方法和通過疫苗給藥對(duì)患者進(jìn)行治療的方法。該疫苗包括分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞或其免疫活性部分，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)與可有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的至少一種細(xì)胞表面分子的表達(dá)的IRM接觸。分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞也可以和IL-2、PKC激動(dòng)劑或IL-2與PKC激動(dòng)劑的組合接觸。CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分可以包括但不局限于，來自分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)標(biāo)本和/或細(xì)胞膜制劑。因此，例如膜制劑可以包括來自CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和例如蛋白質(zhì)嵌入其中的細(xì)胞膜部分?？梢愿鶕?jù)制備基于細(xì)胞免疫的多種方法來制備疫苗。例如，可以使用類似于用于制備基于細(xì)胞疫苗抗黑素瘤(參考例如Wu等，J Interferon Cytokine Res.2001 Dec；21(12)1117-27)、腎癌細(xì)胞(參考例如Vieweg等，Urol.Clin.North Am.2003 Aug；30(3)633-43)或腦腫瘤(參考例如Fecci等，J.Neurooncol.2003 Aug-Sep；64(1-2)161-76)的方法。
IRMs包括具有有效的免疫調(diào)制活性(包括但不限于抗病毒和抗癌活性)的化合物。某些IRMs調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌。例如某些IRM化合物誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌，例如，I類干擾素、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、MIP-1和/或MCP-1。作為另一個(gè)實(shí)例，某些IRM化合物可以抑制某些TH2細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌，例如IL-4、IL-5。此外，據(jù)報(bào)道一些IRM化合物抑制IL-1和TNF(美國(guó)專利US6,518,265)。
某些IRMs為小的有機(jī)分子(相對(duì)于大的生物分子例如蛋白質(zhì)、肽等的例如分子量小于約1000道爾頓，優(yōu)選小于約500道爾頓)例如公布于美國(guó)專利US 4,689,338；4,929,624；4,988,815；5,037,986；5,175,296；5,238,944；5,266,575；5,268,376；5,346,905；5,352,784；5,367,076；5,389,640；5,395,937；5,446,153；5,482,936；5,693,811；5,741,908；5,756,747；5,939,090；6,039,969；6,083,505；6,110,929；6,194,425；6,245,776；6,331,539；6,376,669；6,451,810；6,525,064；6,541,485；6,545,016；6,545,017；6,558,951；6,573,273；6,656,938；6,660,735；6,660,747；6,664,260；6,664,264；6,664,265；6,667,312；6,670,372；6,677,347；6,677,348；6,677,349；6,683,088；6,756,382；歐洲專利EP 0 394 026；美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本US 2002/0016332；2002/0055517；2002/0110840；2003/0133913；2003/0199538和2004/0014779；和國(guó)際專利公開文本W(wǎng)O 01/74343；WO 02/46749；WO02/102377；WO 03/020889；WO 03/043572；WO 03/045391；WO03/103584和WO 04/058759。
小分子IRMs的其他的實(shí)例包括某些嘌呤衍生物(例如美國(guó)專利6,376,501和6,028,076中描述的)、某些咪唑并喹啉酰胺衍生物(例如美國(guó)專利6,069,149中描述的)、某些咪唑并并吡啶衍生物(例如美國(guó)專利6,518,265中描述的)、某些苯并咪唑并衍生物(例如美國(guó)專利6,387,938中描述的)、某些4-胺基嘧啶稠合五元含氮雜環(huán)的衍生物(例如在美國(guó)專利6,376,501；6,028,076和6,329,381和國(guó)際專利公開文本W(wǎng)O 02/08905中描述的腺嘌呤衍生物)和某些3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶衍生物(例如美國(guó)公開2003/0199461中描述的)。
其它IRMs包括大的生物分子，例如低聚核苷酸序列。例如在美國(guó)專利6,194,388；6,207,646；6,239,116；6,339,068和6,406,705中描述的一些IRM低聚核苷酸序列包括胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸(CpG)。例如美國(guó)專利6,426,334和6,476,000中描述的一些含低聚核苷酸的CpG可以包括合成的免疫調(diào)節(jié)劑構(gòu)造圖式。例如國(guó)際專利公開文本W(wǎng)O00/75304中描述的其它缺乏CpG的IRM核苷酸序列序列。
例如美國(guó)專利6,113,918；6,303,347；6,525,028和6,649,172中描述的其它IRMs包括生物分子，例如氨烷基氨基葡糖苷磷酸(AGPs)。
可以用任何合適的IRM化合物實(shí)施本發(fā)明。除非另有說明，所涉及的化合物可以包括該化合物任何藥物可接受的形式，包括任何異構(gòu)體(例如非對(duì)映體或?qū)τ丑w)、鹽、溶劑化物、多晶型物等。特別是，如果化合物是旋光性的，該化合物所涉及的可以包括每個(gè)該化合物的對(duì)映體以及該對(duì)映體的外消旋混合物。
在一些具體實(shí)例中，適合的IRM化合物可以是，例如上述之一的小分子IRM化合物。適合的小分子IRM化合物包括含有2-胺基吡啶稠合到五元含氮雜環(huán)的化合物，例如咪唑并喹啉胺包括但不限于酰胺取代的咪唑并喹啉胺、磺酰胺取代的咪唑并喹啉胺、脲取代的咪唑并喹啉胺、芳基醚取代的咪唑并喹啉胺、雜環(huán)基醚取代的咪唑并喹啉胺、酰胺基醚取代的咪唑并喹啉胺、砜酰胺基醚取代的咪唑并喹啉胺、脲取代咪唑并喹啉醚、硫醚取代咪唑并喹啉胺和6-、7-、8-、或9-芳基或雜芳基取代的咪唑并喹啉胺；四氫咪唑并喹啉胺包括但不限于酰胺取代的四氫咪唑并喹啉胺、磺酰胺取代的四氫咪唑并喹啉胺、脲取代的四氫咪唑并喹啉胺、芳基醚取代的四氫咪唑并喹啉胺、雜環(huán)基醚取代的四氫咪唑并喹啉胺、胺基醚取代的四氫咪唑并喹啉胺、氨磺酰基醚取代的四氫咪唑并喹啉胺、脲取代的四氫咪唑并喹啉醚和硫醚的取代四氫咪唑并喹啉胺；咪唑并并吡啶胺包括但不限于酰胺取代的咪唑并并吡啶胺、氨磺?；〈倪溥虿⒉⑦拎ぐ贰㈦迦〈倪溥虿⒉⑦拎ぐ?、芳基醚取代的咪唑并并吡啶胺、雜環(huán)基醚取代的咪唑并并吡啶胺、酰胺基醚取代的咪唑并并吡啶胺、氨磺?；讶〈倪溥虿⒉⑦拎ぐ贰㈦迦〈倪溥虿⒉⑦拎っ押土蛎讶〈倪溥虿⒉⑦拎ぐ?；1，2-橋接咪唑并喹啉胺；6，7-稠合環(huán)烷基咪唑并吡啶胺；咪唑并萘啶吡啶胺；四氫咪唑并萘啶吡啶胺；噁唑喹啉胺；噻唑喹啉胺；噁唑吡啶胺；噻唑吡啶胺；噁唑萘啶吡啶胺；噻唑萘啶吡啶胺；和1H-咪唑并并二聚體稠合吡啶胺、喹啉胺、四氫喹啉胺、萘啶胺或四氫萘啶胺。
在某些具體實(shí)例中，IRM化合物可以是四氫咪唑并喹啉胺，例如4-胺基-2-(乙氧基甲基)-α，α-二甲基-6，7，8，9-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇。在另外的具體實(shí)例中，IRM化合物可以是咪唑并喹啉胺。在某些特定具體實(shí)例中，IRM可以是1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺基。在另外的具體實(shí)例中，IRM化合物可以是氨磺酰取代的咪唑并喹啉胺，例如N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]甲烷磺酰胺。如果需要可以使用多種IRMs的組合。
IRM化合物或組合(例如IRM與IL-2和/或PKC激動(dòng)劑)的每個(gè)成分可以以任何適合的制劑對(duì)患者給藥。適合的制劑種類描述在，例如美國(guó)專利US 5,736,553；美國(guó)專利5,238,944；美國(guó)專利5,939,090；美國(guó)專利6,365,166；美國(guó)專利6,245,776；美國(guó)專利6,486,186；歐洲專利EP號(hào)EP 0394026和美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本2003/0199538。該化合物(IRM化合物、IL-2或PKC激動(dòng)劑)可以是任何適合的形態(tài)包括但不限于溶液、懸浮液、乳劑或任何混合物形態(tài)。該化合物可以與任何藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或媒介物為制劑給藥。例如該化合物可以是適用于局部給藥的制劑。某些局部給藥的IRM化合物制劑的合適的種類表述，例如在國(guó)際專利公開文本W(wǎng)O 03/045391。該制劑可以以任何常規(guī)的劑型(包括但不限于霜?jiǎng)?、膏劑、氣霧劑、非氣溶膠噴射、凝膠、洗液、片劑、錠劑、酏劑等)給藥。該制劑還可以包括一種或多種添加劑，包括但不限于輔助劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、著色劑、香料、濕潤(rùn)劑、增稠劑等。
用于實(shí)施本發(fā)明的制劑組合物可以根據(jù)該領(lǐng)域已知的因素來改變，包括但不限于IRM化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)、載體性質(zhì)、預(yù)期的劑量服法、患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)(例如抑制的、失能的、刺激的)、IRM化合物的給藥方法、是否有一種或多種其它藥劑正在結(jié)合IRM化合物給藥、和給藥的物種。因此，對(duì)所有可能的應(yīng)用和本發(fā)明所有可能具體實(shí)例指定組合物的有效制劑通常是不切實(shí)際的。然而，本領(lǐng)域熟練的普通技術(shù)人員適當(dāng)考慮這些因素后可以很容易決定其合適制劑。
在一些具體實(shí)例中，本發(fā)明的方法包括以IRM化合物制劑對(duì)患者給藥，例如約0.0001％～約10％(除非另有說明，所有在此提到的百分?jǐn)?shù)是重量/總制劑的重量)對(duì)患者給藥，盡管在一些具體實(shí)例中，可以使用IRM化合物制劑(提供該范圍以外濃度的IRM化合物)對(duì)患者給藥。在某些具體實(shí)例中，該方法包括以約0.01％～約5％IRM的化合物制劑對(duì)患者給藥，例如，一種包括約5％IRM化合物的制劑。
用于實(shí)施本發(fā)明的IRM化合物的有效量可根據(jù)該領(lǐng)域已知的因素來改變，包括但不限于IRM化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)、載體性質(zhì)、預(yù)期的劑量服法、患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)(例如抑制的、失能的、刺激的)、IRM化合物的給藥方法、是否有一種或多種其它藥劑正在結(jié)合IRM化合物給藥、和正在給藥的制劑種類。因此，對(duì)所有可能的應(yīng)用和本發(fā)明所有可能具體實(shí)例制定IRM化合物的有效量通常是不切實(shí)際的。然而，本領(lǐng)域熟練的普通技術(shù)人員適當(dāng)考慮這些因素后可以很容易決定其合適用量。
在一些具體實(shí)例中，本發(fā)明的方法包括以足夠的IRM化合物劑量對(duì)患者給藥，例如約100ng/kg～約50mg/kg對(duì)患者給藥，盡管在一些具體實(shí)例中，該方法可以使用該范圍以外劑量的IRM化合物對(duì)患者給藥。在一些該具體實(shí)例中，該方法包括以約10μg/kg～約5mg/kg足夠劑量的IRM化合物對(duì)患者給藥，例如約100μg/kg～約1mg/kg的劑量。
該劑量服法至少可能依賴該領(lǐng)域已知的許多部分因素，包括但不限于IRM化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)、載體性質(zhì)、IRM的給藥量、患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)(例如抑制的、失能的、刺激的)、IRM化合物的給藥方法、是否有一種或多種其它藥劑結(jié)合IRM化合物給藥、和給藥的物種。因此，對(duì)所有可能的應(yīng)用和本發(fā)明所有可能具體實(shí)例制定有效的劑量服法通常是不切實(shí)際的。然而，本領(lǐng)域熟練的普通技術(shù)人員適當(dāng)考慮這些因素后可以很容易決定其合適的劑量服法。
在本發(fā)明的一些具體實(shí)例中，IRM化合物可以例如每天從單一劑量到多劑量給藥。在某些具體實(shí)例中，IRM化合物可以從大約每周三次到大約每天一次給藥。在特殊實(shí)例中，IRM化合物每天一次給藥。
實(shí)施例下列選取的實(shí)施例僅進(jìn)一步說明本發(fā)明的特征、優(yōu)點(diǎn)和其它細(xì)節(jié)。然而，當(dāng)實(shí)施例是該目的時(shí)很清楚的知道其特殊材料和用量以及其它條件和細(xì)節(jié)不能理解為非正常限制本發(fā)明范圍的理由。
用于實(shí)施例的化合物列在表格1中。
表1

材料和方法血液標(biāo)本收集同意的CLL患者的肝素化血液(30-40mL)(通過CD19+CD5+IgMIO囊依賴性淋巴細(xì)胞繼續(xù)升高來診斷(Rozman和Montserrat，New Engl.J Med.1995；3331052-1057))。在分析時(shí)所有的患者之前不曾治療。方案由有關(guān)制度審查委員會(huì)(Institutional ReviwBoard)批準(zhǔn)。
表2

抗體藻紅蛋白或FITC標(biāo)記的CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD54(ICAM-1)、CD83、4-1BB配體(4-1BBL)、CD5和CD19抗體，其可以從BD Pharmingen購買(San Francisco，CA)。藻紅蛋白標(biāo)記的ICOS-L和PDL-1(B7-H1)抗體，其可以從eBioscience(San Diego，CA)購得。
材料的制備和方法在DMSO中制備PDB(5mg/mL)儲(chǔ)液。在DMSO中制備SB203580(25mg/mL)儲(chǔ)液，選擇性的應(yīng)力-活化蛋白激酶抑制劑(SAPK)(p38)(Lee等，Pharmacol Ther.1999；82389-397)。由3M藥劑(St.Paul，MN)提供IRM1和負(fù)對(duì)照(Neg.)化合物。該化合物溶入1.3mg/mL的AIM-V培養(yǎng)基(GibcoBRL，GrandIsaland，NY)(用33％DMSO)并于4℃存儲(chǔ)。同樣由3M藥劑提供5％的IRM2乳膏(在市場(chǎng)上購買ALDARA)。
細(xì)胞純化如Gitelson等(Gitelson等Clin.CancerRes.2003；991656-1665)所述，通過負(fù)選擇(RosetteSep，StemCell Technologies，Vancouver，BC)從新鮮血液中分離CLL和T細(xì)胞。
CLL細(xì)胞的活化純化的CLL細(xì)胞(1.5×106細(xì)胞/mL)在6或24孔平皿(Becton-Dickinson Labware，F(xiàn)ranklin Lake，NJ)中在無血清AIM-V培養(yǎng)基加2-巰基乙醇(2-ME，5×10-5M)(Sigma Chemical Co.)里在37℃5％CO2中培養(yǎng)3-4天。通過加入負(fù)對(duì)照化合物(1μg/mL)、IRM1(1μg/mL)、IL-2(5000U/mL)、PDB(100ng/mL)或bryostatin(20nmol)酌情活化CLL細(xì)胞。該負(fù)對(duì)照組化合物對(duì)CLL細(xì)胞不具備可測(cè)量的影響，因此單獨(dú)使用AIM-V培養(yǎng)基作為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組。
混合淋巴細(xì)胞應(yīng)答(MLRs)從CLL患者分離出T細(xì)胞并在AIM-V培養(yǎng)基中調(diào)整至5×105細(xì)胞/mL?；罨腃LL細(xì)胞洗滌至少4次以除去剩余的免疫調(diào)節(jié)劑，照射(2500cGy)并以5×105細(xì)胞/mL(或更低濃度)懸浮于AIM-V培養(yǎng)基中。應(yīng)答劑和刺激物以1∶1(體積比)混合且無需另外的細(xì)胞因子或血清在96孔圓底平皿(Becton DickinsonLabware，F(xiàn)ranklin Lake，NJ)中培養(yǎng)。4～6天后用比色定量(Gitelson等，Clin CancerRes.2003；991656-1665；和Ahmed等，J.Immunol.Methods.1994；170211-224)測(cè)量增殖。
流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法按照如Gitelson(Gitelson等，Clin.Cancer Res.2003；991656-1665)等所述的方法進(jìn)行細(xì)胞的染色。
細(xì)胞因子測(cè)量通過多重分析熒光珠測(cè)定系統(tǒng)(可從Luminex公司、Atin、TX以商品名LUMINEX-100系統(tǒng)購得)得出在上層清液(來自48小時(shí)后活化的CLL細(xì)胞)中培養(yǎng)的細(xì)胞因子水平。根據(jù)制造商的指導(dǎo)(R & D系統(tǒng)，Minneapolis，MN)使用測(cè)量IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的5-plex人類細(xì)胞因子的工具。利用軟件(購自BioRad、Mississauga、Ontario以商品名BIO-PLEX 2.0)從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各種細(xì)胞因子濃度。
統(tǒng)計(jì)分析Student t檢驗(yàn)用于測(cè)定樣本平均值之間差額的p值。通過最小二乘回歸法得到最佳擬合曲線。
實(shí)施例1IRM1對(duì)于由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子上的效果。
將來自標(biāo)值患者的CLL細(xì)胞在IRM1(1μg/mL)中培養(yǎng)3～4天，然后用于測(cè)定在圖1的x軸上所標(biāo)記的共刺激分子的表達(dá)的測(cè)試(強(qiáng)度大于第一個(gè)對(duì)數(shù)熒光的十倍)。通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定表達(dá)各個(gè)共刺激分子的細(xì)胞百分比與表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MFI)。然后由該這些測(cè)定的比率到百分比以及未使用活化劑培養(yǎng)的對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)計(jì)算得出“成倍提高”。共刺激分子表達(dá)的相對(duì)提高的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差如圖1A所示。
在IRM1提高CD54、CD80和CD86在CLL細(xì)胞(來自所有研究患者n＝31)的表達(dá)中，IRM1對(duì)于CD80、CD86和CD54表達(dá)具有特別強(qiáng)的影響。對(duì)于CD80的影響大于CD86(比較圖1和2)。IRM1還提高CD83、4-1BBL和PDL-1的表達(dá)，但對(duì)于ICOS-L的表達(dá)幾乎沒有影響(圖1A)。
來自標(biāo)值患者的CLL細(xì)胞在IRM1、LPS(100μg/mL)、聚(I:C)(100μg/mL)和IFN-γ2B(500U/mL)中培養(yǎng)48小時(shí)。如圖1A所述計(jì)算得出CD80和CD86表達(dá)的相對(duì)提高，并在圖1B中顯示。
通過其它TLR激動(dòng)劑以同樣的方式，對(duì)CLL細(xì)胞沒有影響。TLR2和TLR4由細(xì)菌LPSs活化，而TLR3通過病毒雙鏈RNA和聚(I:C)活化(Gordon，Cell.2002；111927-930)。然而LPS或聚(I:C)很少影響由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子(圖1B)。雖然IRM1是IRMs類之一(已知其促進(jìn)DCs或單核細(xì)胞分泌IFN-α(Gibson等，CellImmunol.2002；21874-86))，但是既然用IFN-γ2B直接刺激后，由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子沒有重要的變化，IRM1的效果不可能由該細(xì)胞因子間接地介導(dǎo)(圖1B)。
實(shí)施例2IL-2和IRM1在由CLL細(xì)胞表達(dá)的共刺激分子上的效果。
分離CLL細(xì)胞并單獨(dú)或與IL-2(5000U/mL)、IRM1(1μg/mL)或IL-2與IRM1共同的培養(yǎng)3～4天。然后通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定CD80、CD86、CD54和CD83的表達(dá)。圖2A顯示了一個(gè)特征實(shí)例。在上下行的點(diǎn)圖中的數(shù)字是分別是CD80+和CD86+CLL細(xì)胞的百分比。圖2B是表達(dá)圖中所示數(shù)量患者的不同的共刺激分子(通過使用染色強(qiáng)度高于上述第一個(gè)十個(gè)對(duì)數(shù)熒光的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)測(cè)定的)的CLL細(xì)胞百分比的圖解表示。圖中顯示了每次測(cè)量的平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差。雙箭頭的數(shù)字表示樣本平均值之間差額的p值。圖2C是表達(dá)圖中所示數(shù)量患者的不同的共刺激分子(用于CLL細(xì)胞測(cè)定)的平均熒光指數(shù)(MFI)的圖解表示。圖中顯示了每次測(cè)量的平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差。因?yàn)榛旧纤械腃LL細(xì)胞表達(dá)該分子，(所以)僅僅顯示了CD54表達(dá)(除以10)的MFI。雙箭頭的數(shù)字表示樣本平均值之間差額的p值。
IL-2和IRM1都能夠提高CLL細(xì)胞(其表達(dá)CD80和CD86)的百分比，同時(shí)能夠提高這些分子表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MFI)(圖2)。作為單一藥劑，IRM1似乎比IL-2在這方面更有效。IL-2和IRM1在添加劑表達(dá)的共刺激分子上的效果(圖2A、右邊點(diǎn)圖和圖2B、C)，這表明其通過不同的機(jī)制介導(dǎo)。圖2C中顯示的共刺激分子CD80、CD86、CD54和CD83的MFI表明IRM1提高所有這四種共刺激分子在CLL細(xì)胞的表達(dá)。IRM1結(jié)合IL-2尤其提高了CD80表達(dá)的數(shù)量。
IL-2和IRM1稍微提高了4-1BBL和PDL-1的表達(dá)，但不如CD80、CD86和CD54多(圖1A)。ICOS-L基于許多CLL細(xì)胞但其表達(dá)似乎相對(duì)獨(dú)立于IL-2和介導(dǎo)的IRM1信號(hào)。
實(shí)施例3PKC在對(duì)IL-2和IRM1活化的CLL細(xì)胞的共同刺激顯型上和T細(xì)胞刺激能力的活化效果。
從個(gè)體患者提純的CLL細(xì)胞并單獨(dú)或與IL-2、IRM1、IL-2和IRM1、PDB、PDB和IL-2、PDB和IRM1、或者PDB和IL-2和IRM1培養(yǎng)。3～4天后獲得這些細(xì)胞，完全洗滌，照射(2500cGy)并用于刺激CLL患者5～6天培養(yǎng)后的異源的或自體同源的T細(xì)胞(在CLL細(xì)胞的同時(shí)獲得并放置培養(yǎng)直到加入到混合淋巴細(xì)胞應(yīng)答(MLR)試驗(yàn))，加入Alamar Blue并在波長(zhǎng)540(對(duì)比態(tài))和595(氧化態(tài))的光密度比色微板讀數(shù)器中測(cè)量增殖。該讀數(shù)之間的差異用于測(cè)量培養(yǎng)的活細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果如圖3A所示。從各個(gè)個(gè)體試驗(yàn)顯示出最大刺激(在減去未活化的CLL細(xì)胞刺激物引起的增殖之后)的T細(xì)胞所得到的結(jié)果被用來產(chǎn)生平均增殖且來自患者數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)誤差顯示在X軸上。
圖3B是CD83表達(dá)與T細(xì)胞刺激素效率相關(guān)的圖解表示。CLL細(xì)胞用IL-2和IRM1處理4～5天。然后通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定表達(dá)CD83的細(xì)胞百分比和CD83表達(dá)的MFI。然后照射該活化的CLL細(xì)胞并在MLRs中用于刺激自體同源的或異源的T細(xì)胞。來自19個(gè)不同患者的CD83+CLL細(xì)胞的初始百分比(左邊圖形)和CD83表達(dá)的MFI(右邊圖形)在MLRs中與標(biāo)準(zhǔn)的增殖關(guān)聯(lián)起來。最佳直線截距為10.692且斜率為0.0598；其關(guān)聯(lián)的p值為0.0153。
圖4A顯示來自典型患者的CLL細(xì)胞單獨(dú)(左邊圖形)或與IRM1、IL-2和PDB(右邊圖形)培養(yǎng)3天。然后通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定CD80、CD83、CD54和CD86表達(dá)。在點(diǎn)圖中的百分比涉及CD80(上象限的左右之和)(上方圖片)和CD86(上下象限的右部之和)(下方圖片)。圖4B是表達(dá)CD80、CD83、CD54和CD86(和MFI的表達(dá))的CLL細(xì)胞(來自圖例中標(biāo)值患者，單獨(dú)或與PDB、PDB和IL-2、PDB和IRM1、或者PDB和IL-2和IRM1培養(yǎng)后)的流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的測(cè)定結(jié)果的摘要。并顯示其平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差。因?yàn)榛旧纤械腃LL細(xì)胞表達(dá)該分子，所以僅僅顯示了CD54表達(dá)的MFI。圖4C是ICOS-L、4-1BBL和PDL-1表達(dá)的類似流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的測(cè)定的摘要。雙箭頭的數(shù)字表示樣本平均值之間差額的p值。
單獨(dú)用佛波醇二磷酸鈉(PDB)治療，導(dǎo)致90％的CLL細(xì)胞表達(dá)CD83(圖4B，無色條)。PDB還提高CD80+和CD86+CLL細(xì)胞的數(shù)量(后者超過前者)，而且還提高4-1BBL和PDL-1的表達(dá)(圖4C，無色條)。通過PDB沒有對(duì)CD54和ICOS-L的表達(dá)產(chǎn)生明顯的影響(圖4B和圖4C)。
用PDB活化CLL細(xì)胞期間加入IL-2主要提高CD80+細(xì)胞數(shù)量和CD80的MFI和CD54表達(dá)(圖4B；水平條)。當(dāng)用PDB和IRM1一起活化CLL細(xì)胞時(shí)得到CD80+細(xì)胞稍微提高的百分比(圖4B；豎條)。向IRM1和PDB加入IL-2顯著提高CD80(尤其與CD86相比(圖4B))和CD54的表達(dá)，并引起基本上全部的CLL細(xì)胞帶來一種CD83hiCD80hiCD86hiCD54hi細(xì)胞表面顯型(圖4A和圖4B，斜紋條)。
圖4中的結(jié)果指出PDB和IRM1的組合引起CLL細(xì)胞對(duì)CD80、CD86和CD83幾乎100％的表達(dá)。加入IL-2主要影響CD80和CD54表達(dá)的數(shù)量。PDB(有或沒有IL-2)和/或IRM1提高4-1BBL和PDL-1的表達(dá)，但與CD80、CD86、CD54和CD83的程度不同。
通過CLL細(xì)胞活化(用PDB、IL-2和IRM1)的共刺激分子的強(qiáng)烈表達(dá)反應(yīng)了這些細(xì)胞對(duì)刺激T細(xì)胞增殖的效率(圖3A)。用PDB(沒有IL-2)刺激的CLL細(xì)胞是T細(xì)胞增殖的弱刺激物(圖3A)。
實(shí)施例4在IRM1的存在下通過自體同源的T細(xì)胞消除CLL細(xì)胞。
從CLL患者離析出CLL細(xì)胞和T細(xì)胞，懸浮于106細(xì)胞/mL的濃度并以1∶1比率混合。該細(xì)胞混合物單獨(dú)或在IL-2、IL-2和IRM1、bryostatin、bryostatin和IL-2、bryostatin和IRM1、或者bryostatin和IL-2和IRM1的存在下培養(yǎng)。在圖5A中，5天后，通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定CD5+CD19+腫瘤細(xì)胞(顯示在點(diǎn)圖中的右邊上象限的數(shù)字)和CD5+CD19-T細(xì)胞的百分比。在圖5B中，這些百分比和活細(xì)胞總數(shù)(在血球計(jì)中通過手工計(jì)數(shù)測(cè)定)用于計(jì)算培養(yǎng)的CLL細(xì)胞剩余的絕對(duì)數(shù)。
IRM1(單獨(dú)，或與IL-2和/或bryostatin結(jié)合)引起自體同源的T細(xì)胞在體外殺滅CLL細(xì)胞。IRM1、IL-2和bryostatin的組合使得自體同源的T細(xì)胞能夠在5天內(nèi)100％清除CLL細(xì)胞。
實(shí)施例5對(duì)慢性淋巴細(xì)胞性白血病有關(guān)的淋巴瘤皮膚沉淀以IRM化合物給藥的臨床效果一個(gè)71歲的白人男性，通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定其循環(huán)單克隆CD19+CD5+IgMIO淋巴細(xì)胞的量持續(xù)升高，據(jù)此診斷為Rai階段0CLL。通過45％循環(huán)CLL細(xì)胞表達(dá)CD38。在一開始和用IRM2治療結(jié)束后的白血球量分別是36×106細(xì)胞/mL和45×106細(xì)胞/mL。沒有預(yù)先使用其它全身性的化學(xué)療法、類固醇或輻射。
此外，患者報(bào)告其手和手臂上大約8年有反復(fù)發(fā)生的結(jié)節(jié)狀的紅斑損傷。通常用液氮治療消除該損傷。但是他被診斷為CLL，其上背和手臂上有幾個(gè)這樣的損傷(圖8A)。檢測(cè)到一個(gè)損傷并發(fā)現(xiàn)其包含擴(kuò)散非典型的含許多小而圓的淋巴細(xì)胞的淋巴表皮滲透，且沒有嗜表皮性。在石蠟免疫過氧化物酶染色上，淋巴濾液具有主要的CD20+顯型。在嵌入組織的石蠟的分子類型分析證明了單克隆的B細(xì)胞群與B細(xì)胞淋巴瘤一致。
在受影響區(qū)域使用IRM2的5％霜?jiǎng)┟恐苋?。八周后，治療損傷的尺寸沒有明顯的變化，但形成了色素沉著不足的面積，這使人想起一個(gè)暈輪痣環(huán)繞著退還的黑素瘤沉淀。
使用IRM2的5％霜?jiǎng)┨岣叩矫刻煲淮巍Ａ艿闹委熀笤摀p傷消失(圖6B)且停止治療3個(gè)月后沒有復(fù)發(fā)。該治療過程既沒有未治療的淋巴瘤損傷，也沒有循環(huán)白血球量的明顯變化。
在Gitelson等Clin.Can.Res.，91656-1665(2003)中描述了通過負(fù)選擇(RosetteSep，StemCell Technologies，Inc.，Vancouver，BC)從新鮮血液中分離CLL細(xì)胞。純化的CLL細(xì)胞(1.5×106細(xì)胞/mL)在自由血清AIM-V培養(yǎng)基(GibcoBRL)中培養(yǎng)3天。在最終濃度為1μg/mL時(shí)使用IRM1和負(fù)對(duì)照化合物。
細(xì)胞用之前用優(yōu)化量的CD80-PE和CD83-FITC或CD54-PE和CD86-FITC抗體培養(yǎng)20分鐘，洗滌，然后用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器分析。負(fù)對(duì)照與不相干的抗體同型匹配。通過開啟前向和側(cè)面的散射特性來對(duì)有核細(xì)胞染色。用FAC掃描流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器使用CELLQUEST軟件(BD Immunocytometry Systems，San Jose，CA)分析一萬個(gè)活菌計(jì)數(shù)。該流動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器用spheroparticles使之標(biāo)準(zhǔn)化(Spherotech，Inc.，Chicago，IL)。通過比較同型標(biāo)記對(duì)照細(xì)胞計(jì)算得出CD80+、CD86+和CD83+細(xì)胞的百分比。結(jié)果如圖7所示。
實(shí)施例6對(duì)CLL細(xì)胞標(biāo)記的共同刺激標(biāo)記物有影響的IRM3的劑量反應(yīng)。
來自8位不同患者的CLL細(xì)胞純化并與0.001μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL或1.0μg/mL的IRM3培養(yǎng)3天。通過如上所述的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定CD80和CD83的表達(dá)。通過從沒有加入IRM3的對(duì)照CLL培養(yǎng)中分別減去CD80和CD83的表達(dá)，得到CD80和CD83表達(dá)的提高。結(jié)果如圖8所示。
實(shí)施例7介導(dǎo)的IRM3在CLL細(xì)胞表面分子的改變。
從患者收集的CLL細(xì)胞用IRM3(1μg/mL)培養(yǎng)2～3天且沒有(對(duì)照)。通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定表達(dá)CD80、CD83、CD86和CD38的細(xì)胞的百分比。由于幾乎所有CLL細(xì)胞表達(dá)這些分子，測(cè)定CD54和CD25的表達(dá)的MFI。表達(dá)特殊細(xì)胞表面分子的細(xì)胞百分比的表達(dá)MFI的改變是通過用IRM3的細(xì)胞培養(yǎng)中得到的值減去對(duì)照組培養(yǎng)中得到的值而得到。結(jié)果如圖9所示。
實(shí)施例8IRM3介導(dǎo)的CLL細(xì)胞表達(dá)的CD20的提高純化CLL細(xì)胞或者沒有(對(duì)照)或者與IRM3(1μg/mL)和IL-2(5000U/mL)一起培養(yǎng)。48小時(shí)后，通過流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定CD20表達(dá)的MFI。結(jié)果如圖10所示。
此處所引用的專利、專利文獻(xiàn)和出版物中的全部公開內(nèi)容各自通過引用的方式全文包含在本申請(qǐng)中。在存在相互矛盾的情況下，以本申請(qǐng)的說明書(包括定義)為準(zhǔn)。在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，對(duì)本發(fā)明所進(jìn)行的各種修改和改變對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將是顯而易見的。說明性的具體實(shí)例和實(shí)施例僅作為實(shí)例提供，且不試圖限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的范圍僅由以下權(quán)利要求的限制。
權(quán)利要求
1.一種提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的方法，該方法包括用至少一種能夠有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的至少一種細(xì)胞表面分子表達(dá)的IRM化合物接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞選自慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)細(xì)胞、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)細(xì)胞、套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞、具有絨狀淋巴細(xì)胞的脾淋巴瘤或其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM是TLR7激動(dòng)劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM是TLR8激動(dòng)劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM是四氫咪唑并喹啉胺。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM是磺酰胺取代的咪唑并喹啉胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中細(xì)胞表面分子是一種共刺激分子。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中至少一種共刺激分子是CD25、CD38、CD40、CD54、CD80、CD83或CD86。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中細(xì)胞表面分子是CD20、CD22或CD23。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中使用IRM和CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞在體內(nèi)發(fā)生接觸。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM和CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的接觸發(fā)生在器官、組織或血液內(nèi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中IRM與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的接觸發(fā)生在患者體內(nèi)。
13.一種刺激CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以產(chǎn)生細(xì)胞因子的方法，該方法包括使IRM接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，其中該IRM能夠有效產(chǎn)生至少一種高于未接觸IRM的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞所產(chǎn)生水平的細(xì)胞因子，。其中至少一種細(xì)胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、GM-CSF或其組合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中在體外接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中在器官、組織或血液內(nèi)接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中在患者體內(nèi)接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
17.一種提高T細(xì)胞增殖的方法，該方法包使能夠有效提高在CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面上的至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，使T細(xì)胞接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，從而活化T細(xì)胞；其中與接觸沒有接觸過IRM的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的T細(xì)胞相比，活化的T細(xì)胞顯示出增加了的增殖。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，進(jìn)一步包括用至少一種其他的免疫調(diào)節(jié)劑接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中該其他的免疫調(diào)節(jié)劑包括IL-2。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中該其他的免疫調(diào)節(jié)劑包括一種蛋白激酶C激動(dòng)劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中T細(xì)胞與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞在體內(nèi)接觸。
22.一種通過CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞增強(qiáng)殺滅CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的方法，該方法包括將CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞與能夠有效提高在CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞表面上至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM接觸；將CD8+T細(xì)胞與CD5+B淋巴瘤的細(xì)胞接觸，從而活化CD8+T細(xì)胞；其中該活化的CD8+T細(xì)胞為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，且與和未經(jīng)IRM接觸的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞接觸的CD8+T細(xì)胞相比，顯示出提高了的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的殺滅。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，進(jìn)一步包括用至少一種其他的免疫調(diào)節(jié)劑接觸CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中該其他的免疫調(diào)節(jié)劑包括IL-2。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中該其他的免疫調(diào)節(jié)劑包括一種蛋白激酶C激動(dòng)劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中IRM與CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞在體內(nèi)接觸。
27.一種在患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者內(nèi)通過自體同源的T細(xì)胞提高殺滅CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的方法，該方法包括給患者給服為TLR7和/或TLR8的激動(dòng)劑的IRM。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，進(jìn)一步包括給服IL-2。
29.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，進(jìn)一步包括給服蛋白激酶C激動(dòng)劑。
30.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，進(jìn)一步包括給服IL-2及蛋白激酶C激動(dòng)劑。
31.一種治療患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者的方法，該方法包括對(duì)患者給服有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的至少一種細(xì)胞表面分子的表達(dá)的IRM，給服IRM的量有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的至少一種細(xì)胞表面分子的表達(dá)。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中IRM是一種TLR7和/或TLR8的激動(dòng)劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，進(jìn)一步包括給服IL-2。
34.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，進(jìn)一步包括給服種蛋白激酶C激動(dòng)劑。
35.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，進(jìn)一步包括給服IL-2及蛋白激酶C激動(dòng)劑。
36.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中至少一種表達(dá)提高的細(xì)胞表面分子是治療劑的靶點(diǎn)，且該方法進(jìn)一步包括給患者給服治療有效量的該治療劑。
37.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中細(xì)胞表面分子是CD20、CD22或CD23。
38.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中細(xì)胞表面分子是一種共刺激分子。
39.一種治療CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的方法，該方法包括給需要這種治療的患者給服能夠以有效改善CD5+B細(xì)胞淋巴瘤特征的至少一種癥狀或臨床征象的IRM。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中給服能夠有效顯示出減少至少50％末梢血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)病或脾腫大至少兩個(gè)月的量的IRM。
41.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中給服能夠有效防止進(jìn)行性疾病的發(fā)展的量的IRM，其中該進(jìn)行性疾病為淋巴細(xì)胞循環(huán)提高至少50％或發(fā)展到更嚴(yán)重的階段。
42.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中給服能夠有效緩解結(jié)節(jié)狀紅斑損傷的量的IRM。
43.一種包括分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞或其免疫活性部分的疫苗，其中分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)與能夠有效提高在CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面上的至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM接觸。
44.一種根據(jù)權(quán)利要求43的疫苗，其中IRM是TLR7和/或TLR8的激動(dòng)劑。
45.一種根據(jù)權(quán)利要求43的疫苗，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)一步與IL-2接觸。
46.一種根據(jù)權(quán)利要求43的疫苗，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)一步與蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
47.一種根據(jù)權(quán)利要求43的疫苗，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)一步與IL-2及蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
48.一種疫苗的制備方法，其中該疫苗包括分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，所述分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞用能夠有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面的至少一種分子表達(dá)的IRM接觸。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，進(jìn)一步包括用IL-2接觸所述的分離的細(xì)胞。
50.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，進(jìn)一步包括用一種蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸所述的分離的細(xì)胞。
51.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，進(jìn)一步包括用IL-2及蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸所述的分離的細(xì)胞。
52.一種治療患有CD5+B淋巴瘤的患者的方法，該方法包括以分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分對(duì)患者給藥，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)與IRM接觸以有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面的至少一種共刺激分子的表達(dá)。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與IL-2接觸。
54.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與一種蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
55.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與IL-2和蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
56.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞來自于患有CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者。
57.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分包括整個(gè)細(xì)胞。
58.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分包括來自于分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜制劑或蛋白質(zhì)制劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中表達(dá)提高的至少一種細(xì)胞表面分子是治療劑的靶點(diǎn)，且該方法進(jìn)一步包括給患者給服治療有效量的該治療劑。
60.一種在被診斷為CD5+B細(xì)胞淋巴瘤的患者體內(nèi)，引發(fā)CD5+B細(xì)胞活性淋巴瘤T細(xì)胞應(yīng)答的方法，該方法包括給患者給服包含分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分的組合物，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞已經(jīng)與能夠有效提高CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表面的至少一種共刺激分子表達(dá)的IRM接觸。
61.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與IL-2接觸。
62.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與一種蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
63.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞還已經(jīng)與IL-2及蛋白激酶C激動(dòng)劑接觸。
64.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞來自于患有CD5+B淋巴瘤的患者。
65.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中該分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞來自于患有CLL或SLL的患者。
66.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分包括整個(gè)細(xì)胞。
67.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的免疫活性部分包括來自于分離的CD5+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜制劑或蛋白質(zhì)制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種通過將細(xì)胞與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑接觸來提高CD文檔編號(hào)A61K38/20GK1863531SQ200480029093
公開日2006年11月15日 申請(qǐng)日期2004年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月5日
發(fā)明者大衛(wèi)·E·斯潘內(nèi), 理查德·L·米勒 申請(qǐng)人:3M創(chuàng)新有限公司