專利名稱：一種藥物組合物及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的藥物組合物，還涉及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅花黃色素是從紅花中提取的有效成分，具有擴(kuò)張冠狀動脈、降壓、抗血栓、耐缺氧、免疫抑制等多種藥理學(xué)功效，見紅花黃色素的現(xiàn)代研究概述，王會玲，中國中醫(yī)藥科技，1998年第5卷第5期。
總丹參酚酸是丹參的水溶性成分，其具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改善微循環(huán)及抗氧化損傷作用和多途徑發(fā)揮心肌保護(hù)作用，見丹參制劑的研究現(xiàn)狀及對開發(fā)的幾點(diǎn)思考，張軍等，中草藥，2001年第32卷第10期。
本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，提供了一種由紅花黃色素、總丹參酚酸組成的藥物組合物及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，該藥物組合物在用于心腦血管疾病時具有協(xié)同作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種由紅花黃色素、總丹參酚酸組成的藥物組合物，其中紅花黃色素和總丹參酚酸的重量比為1∶19～19∶1，優(yōu)選為1∶4～4∶1，更優(yōu)選為1∶3；紅花黃色素中含羥基紅花黃色素A≥50％、＜100％，總丹參酚酸中含丹參酚酸B≥50％、＜100％，丹參酚酸B還可以以金屬鹽的形式存在，優(yōu)選為鎂鹽。
本發(fā)明提供了含羥基紅花黃色素A≥50％的紅花黃色素和含丹參酚酸B≥50％的總丹參酚酸的制備方法。
本發(fā)明提供了由紅花黃色素、總丹參酚酸組成的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以根據(jù)制劑需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、霜劑、軟膏、噴霧劑、口嚼劑或貼劑形式存在，優(yōu)選為凍干粉針。本發(fā)明提供的各種劑型均可以采用藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明提供的藥物組合物在用于心腦血管疾病時，其使用劑量范圍是35mg-1000mg，優(yōu)選為50mg-400mg。
本發(fā)明提供的藥物組合物，以制劑形式存在時，其有效成分的含量為35-400mg。
本發(fā)明所述的紅花黃色素是從紅花中提取分離獲得，優(yōu)選采用水提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法和聚酰胺吸附法組合，獲得紅花黃色素。本發(fā)明所述的總丹參酚酸是從丹參中提取分離獲得，優(yōu)選采用水提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法精致，獲得總丹參酚酸。
本發(fā)明人進(jìn)行了下列試驗(yàn)來證實(shí)由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的作用，具有協(xié)同作用。
具體實(shí)施例方式制備例1紅花黃色素、總丹參酚酸的制備取紅花藥材5kg，30倍量水滲漉，過濾，用大孔吸附樹脂吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫2個柱體積，然后繼續(xù)用去離子水洗脫5個柱體積，收集洗脫液，再用聚酰胺吸附，先用去離子水洗至無色，然后用偏堿性的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮除去乙醇，冷凍干燥得到紅花黃色素，其中含羥基紅花黃色素A 75.8％。
取丹參藥材5kg，粉碎，30倍量酸水滲漉提取，過濾，用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫3-5柱體積，再用30％的乙醇溶液洗脫5個柱體積，收集洗脫液，調(diào)節(jié)pH值為2-5，濃縮乙醇，凍干，得總丹參酚酸，其中含丹參酚酸B 80.4％。
制備例2紅花黃色素、總丹參酚酸的制備取紅花藥材5kg，30倍量水滲漉，過濾，用大孔吸附樹脂吸附(提取液與樹脂的體積比3∶1)，用去離子水洗脫2個柱體積，然后繼續(xù)用去離子水洗脫5個柱體積，收集洗脫液，濃縮后以葡聚糖凝膠為固定相，以去離子水洗脫進(jìn)行分離，收集羥基紅花黃色素A成分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，冷凍干燥得到紅花黃色素，其中含羥基紅花黃色素A 77.5％。
取丹參藥材粉碎，15倍量60％丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，濃縮，至無丙酮味，用水進(jìn)行稀釋后，進(jìn)行大孔吸附樹脂吸附(藥材量與樹脂量1∶1)，用去離子水洗脫3-5柱體積，再用30％的乙醇溶液洗脫5個柱體積，收集洗脫液，濃縮乙醇，凍干，得總丹參酚酸，其中含丹參酚酸B鎂鹽72.8％。
制備例3制備由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素190g、總丹參酚酸10g，溶于1000ml注射用水，加入100g甘露醇，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素190mg、總丹參酚酸10mg的凍干粉針。
制備例4制備由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素10g、總丹參酚酸190g，溶于1000ml注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素10mg、總丹參酚酸190mg的凍干粉針。
制備例5制備由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素20g、總丹參酚酸80g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素20mg、總丹參酚酸80mg的凍干粉針。
制備例6制備由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素80g、總丹參酚酸20g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素80mg、總丹參酚酸20mg的凍干粉針。
制備例7制備由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的凍干粉針在潔凈條件下，取紅花黃色素25g、總丹參酚酸75g，溶于1000ml注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍干粉針工藝凍干，制成含紅花黃色素25mg、總丹參酚酸75mg的凍干粉針。
試驗(yàn)例1不同劑量紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物按制備例1制備。
紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實(shí)驗(yàn)動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，尼莫地平組(Nim，1.0mg/kg)，紅花黃色素小劑量組(1.5mg/kg)，紅花黃色素中劑量組(3.5mg/kg)，紅花黃色素大劑量組(45mg/kg)，總丹參酚酸小劑量組(2mg/kg)，總丹參酚酸中劑量組(3.5mg/kg)，總丹參酚酸大劑量組(60mg/kg)，組合物小劑量紅花黃色素(1.5mg/kg)+總丹參酚酸(2mg/kg)，組合物大劑量紅花黃色素(45mg/kg)+總丹參酚酸(60mg/kg)每組10只。禁食12小時后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側(cè)大腦中動脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。術(shù)后各組動物靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評價溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學(xué)學(xué)報，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內(nèi)旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計為0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2和3分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計為1，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用x±SD表示，以組間F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表1所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右。
1.5mg/kg紅花黃色素與2mg/kg總丹參酚酸組未能改善大鼠行為障礙、減少缺血面積；3.5mg/kg紅花黃色素與3.5mg/kg總丹參酚酸組均在一定程度上改善了大鼠行為障礙、減少缺血面積。
組合物小劑量組紅花黃色素(1.5mg/kg)+總丹參酚酸(2mg/kg)非常顯著地改善大鼠行為障礙、減少缺血面積，與模型組比較p＜0.01，而且與3.5mg/kg紅花黃色素、3.5mg/kg總丹參酚酸比較亦有顯著性差異(P＜0.05)。提示組合物中紅花黃色素和總丹參酚酸具有協(xié)同作用。組合物大劑量紅花黃色素(45mg/kg)+總丹參酚酸(60mg/kg)極其顯著地改善大鼠行為障礙、減少缺血面積，與模型組比較P＜0.001。
表1 紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響組別 行為障礙缺血面積(％)假手術(shù)組 0 0模型對照組11.50±1.31 25.41±4.22Nim組 7.15±2.66**17.33±5.68**紅花黃色素小劑量組10.22±3.16 22.38±8.95紅花黃色素中劑量組8.80±1.07*19.23±2.45*紅花黃色素大劑量組6.86±3.17**12.91±4.32**總丹參酚酸小劑量組10.03±3.58 23.14±6.27總丹參酚酸中劑量組8.79±2.42*19.56±3.75*總丹參酚酸大劑量組6.58±1.96**12.37±4.48**組合物小劑量組6.67±2.35**#Δ13.34±7.56**#Δ組合物大劑量組5.03±1.55***10.22±2.56***與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
與紅花黃色素中劑量組比較#P＜0.05與總丹參酚酸中劑量組比較ΔP＜0.05試驗(yàn)例2不同配比藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物按制備例2制備。
紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實(shí)驗(yàn)動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，組合物A紅花黃色素(10mg/kg)+總丹參酚酸(0mg/kg)，組合物B紅花黃色素(9.5mg/kg)+總丹參酚酸(0.5mg/kg)，組合物C紅花黃色素(8mg/kg)+總丹參酚酸(2mg/kg)，組合物D紅花黃色素(5mg/kg)+總丹參酚酸(5mg/kg)，組合物E紅花黃色素(2mg/kg)+總丹參酚酸(8mg/kg)，組合物F紅花黃色素(0.5mg/kg)+總丹參酚酸(9.5mg/kg)，組合物G紅花黃色素(0mg/kg)+總丹參酚酸(10mg/kg)每組10只。按實(shí)驗(yàn)例1所示方法制作大鼠局部腦缺血模型并進(jìn)行神經(jīng)行為評分、腦片染色。數(shù)據(jù)用x±SD表示，以組間F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表2所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右。不同配比的藥物組合物(10mg/kg)對大鼠腦缺血均具有顯著的保護(hù)作用(P＜0.05或P＜0.01)。
表2 不同配比藥物組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響組別 行為障礙 缺血面積(％)假手術(shù)組 0 0模型對照組 10.6±1.1 25.6±4.5組合物A9.1±1.2*22.9±2.1*組合物B8.4±1.1**22.5±2.1*組合物C7.0±0.8**#Δ18.2±1.8**#Δ組合物D7.2±0.7**#Δ20.1±1.4**#Δ組合物E7.1±0.9**#Δ21.2±1.3**#Δ組合物F8.5±0.8*22.3±1.6*組合物G8.9±0.7*22.6±1.1*與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
組合物A組比較#P＜0.05組合物G組比較ΔP＜0.05試驗(yàn)例3紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響(1)材料紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物按制備例2制備。
心血丹(復(fù)方丹參)注射液貴州神奇制藥有限公司。
氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組(生理鹽水)，模型對照組(生理鹽水)，復(fù)方丹參注射液組(DS，10mg/kg)，紅花黃色素小劑量組(1.5mg/kg)，紅花黃色素中劑量組(3.5mg/kg)，紅花黃色素大劑量組(45mg/kg)，總丹參酚酸小劑量組(2mg/kg)，總丹參酚酸中劑量組(3.5mg/kg)，總丹參酚酸大劑量組(60mg/kg)，組合物小劑量紅花黃色素(1.5mg/kg)+總丹參酚酸(2mg/kg)，組合物大劑量紅花黃色素(45mg/kg)+總丹參酚酸(60mg/kg)每組10只。禁食12小時后，ip烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。術(shù)后各組動物靜脈注射相應(yīng)藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.5％NBT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。
結(jié)果如表3所示，心肌缺血6小時后，模型組大鼠心肌出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到25％左右。1.5mg/kg紅花黃色素與2mg/kg總丹參酚酸組未能改善大鼠心電、減少缺血面積；3.5mg/kg紅花黃色素與3.5mg/kg總丹參酚酸組均在一定程度上降低由心肌缺血造成的肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積；組合物小劑量組紅花黃色素(1.5mg/kg)+總丹參酚酸(2mg/kg)非常顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積，與模型組比較P＜0.01，而且與3.5mg/kg紅花黃色素、3.5mg/kg總丹參酚酸比較亦有顯著性差異(P＜0.05)；組合物大劑量紅花黃色素(45mg/kg)總丹參酚酸(60mg/kg)極其顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積，與模型組比較P＜0.001。
表3 紅花黃色素、總丹參酚酸、組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響J點(diǎn)升高(10×mv)分組 梗死面積(％)正常1.5h 3h模型對照組25.6±4.3 0.8±0.66.7±2.3 6.1±1.4丹參注射液組 17.8±6.2*0.8±0.66.0±1.5*5.1±1.3*紅花黃色素小劑量組22.5±8.5 0.7±0.66.5±1.3 5.8±1.9紅花黃色素中劑量組19.4±3.5*0.7±0.55.8±1.4*5.2±1.8*紅花黃色素大劑量組12.8±4.5**0.7±0.75.0±1.6**4.3±2.0**總丹參酚酸小劑量組23.3±6.4 0.8±0.76.4±1.5 5.7±2.1總丹參酚酸中劑量組19.7±3.5*0.7±0.65.7±1.8*5.1±1.7*總丹參酚酸大劑量組12.6±4.5**0.8±0.64.9±2.1**4.1±1.8**組合物小劑量組13.6±7.8**#Δ0.8±0.54.7±1.6**#Δ4.0±1.6**#Δ組合物大劑量組10.5±2.7***0.7±0.64.3±1.7***3.7±1.9***與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
與紅花黃色素中劑量組比較#P＜0.05與總丹參酚酸中劑量組比較ΔP＜0.0權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，由紅花黃色素和總丹參酚酸組成，其重量比為1∶19～19∶1；其中紅花黃色素中含羥基紅花黃色素A≥50％、＜100％，總丹參酚酸中含丹參酚酸B≥50％、＜100％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，丹參酚酸B還可以以金屬鹽的形式存在。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，丹參酚酸B鹽優(yōu)選為鎂鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，紅花黃色素和丹參總酚酸的重量比優(yōu)選為1∶4～4∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，紅花黃色素和丹參總酚酸的更優(yōu)選比為1∶3。
6.根據(jù)權(quán)利利要求1-5任一所述的組合物，紅花黃色素是從紅花中提取分離獲得，優(yōu)選采用水提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法和聚酰胺吸附法組合，獲得紅花黃色素。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的組合物，總丹參酚酸是從丹參中提取分離獲得，優(yōu)選采用水提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法精致，獲得總丹參酚酸。
8.權(quán)利要求1-7任一所述的組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，該組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，該組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了由紅花黃色素和總丹參酚酸組成的藥物組合物，其中紅花黃色素含有≥50％、＜100％的羥基紅花黃色素A，總丹參酚酸含有≥50％、＜100％的丹參酚酸B或其鹽。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病中的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/10GK1626075SQ20041006433
公開日2005年6月15日 申請日期2004年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月28日
發(fā)明者李桂生, 田京偉, 傅風(fēng)華, 曲桂武, 馬成俊, 劉珂 申請人:北京賢達(dá)通科技有限公司