專利名稱：葡萄柚種子提取物在制備抗sars病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體地是葡萄柚種子提取物(GSE)在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自正式確定非典型肺炎的病原體為SARS冠狀病毒以來(lái)，對(duì)于非典型肺炎及其病原體的防治和研究取得了極大進(jìn)展，抗SARS冠狀病毒藥物和疫苗研制工作也在全力進(jìn)行。SARS病毒是一種新型的冠狀病毒，具有較強(qiáng)的傳染性和變異性。目前SARS還缺乏特效的治療，目前的治療包括抗病毒治療如利巴韋林，血清療法等，用激素降低免疫系統(tǒng)對(duì)肺的損傷，用抗生素治療潛在的細(xì)菌感染，辨證的中西醫(yī)結(jié)合治療；呼吸機(jī)的應(yīng)用以及應(yīng)激和ARDS的對(duì)癥支持治療等?？筍ARS藥物研制目前尚處于初期階段。
葡萄柚種子提取物(Grapefruit Seed Extract，簡(jiǎn)稱GSE)是一種高效無(wú)毒的廣譜抗菌劑。二十世紀(jì)50年代，Jacob Harich發(fā)現(xiàn)了GSE。通過(guò)半個(gè)世紀(jì)的研究，人們發(fā)現(xiàn)GSE具有神奇的功效，(如1991年下半年，Allan Sachs博士聽(tīng)說(shuō)葡萄柚種子提取物(GSE)是一種新開(kāi)發(fā)的抗微生物制劑，后來(lái)他長(zhǎng)期堅(jiān)持研究GSE的臨床應(yīng)用，創(chuàng)建了至少25種含有GSE的藥物處方，至今仍然在被全世界的臨床醫(yī)生們使用。1997年，他編寫(xiě)出版了一本GSE專著《葡萄柚種子提取物權(quán)威指南》。在這本書(shū)中，他用自己創(chuàng)立的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)GSE進(jìn)行分析論證，明確支持GSE是一種十分理想的極具優(yōu)良的抗微生物制劑，全面符合十項(xiàng)專門(mén)指標(biāo)。
1.廣譜抗菌對(duì)40余種革蘭氏陰性菌，30余種革蘭氏陽(yáng)性菌，以及真菌與酵母菌，病毒(包括甲型單純性皰疹病毒、A2型流感病毒、艾滋病病毒等)，寄生蟲(chóng)(包括溶組織阿米巴和腸賈第蟲(chóng)等)。Allan Sachs博士稱GSE是力克各種病原體的“瑞士軍刀”。
2.強(qiáng)力高效 對(duì)上述各種病原體的最低抑菌濃度僅在2ppm～200ppm，與同類其他抗菌化合物比較，GSE的抗菌效力約高10至100倍。
3.安全無(wú)毒 1995年7月，美國(guó)加州貝克利Northview Pacific實(shí)驗(yàn)室發(fā)表了一份關(guān)于GSE急性毒性毒理學(xué)的研究報(bào)告，認(rèn)為每公斤體重?cái)z入量超過(guò)5000mg是安全的。也就是說(shuō)，一個(gè)體重60公斤的人每日服下300,000mgGSE，在理論上說(shuō)是安全的，而這是一個(gè)異常巨大的劑量。這項(xiàng)急性毒性試驗(yàn)后來(lái)被許多實(shí)驗(yàn)室重復(fù)做過(guò)，而每次重復(fù)的結(jié)果都是相同的，即GSE的半致死劑量(LD50)均大于5000mg/Kg(體重)。
而慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)(對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物持續(xù)喂食，然后對(duì)其后代進(jìn)行24個(gè)月的觀察研究)結(jié)果表明，GSE的LD50為2500mg/Kg(田鼠和豚鼠)。根據(jù)化學(xué)物質(zhì)毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，GSE屬實(shí)際無(wú)毒類)。
4.對(duì)有益微生物無(wú)副作用。
5.已被深入研究過(guò)。
6.來(lái)源于自然資源。
7.無(wú)刺激或過(guò)敏反應(yīng)。
8.具有可生物降解性能。
9.與其他天然藥物可兼容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葡萄柚種子提取物在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明制備的抗SARS病毒藥物含有中藥活性成分葡萄柚種子提取物，其藥物毒性小，穩(wěn)定性好，耐藥性強(qiáng)。
本發(fā)明用葡萄柚種子提取物制備的抗SARS病毒藥物可采用常規(guī)的制備工藝，制備成不同的藥物劑型供患者使用，如制成口服液、膠囊、粉劑、針劑等。
本發(fā)明用葡萄柚種子提取物制備的抗SARS病毒藥物的抗病毒作用分述如下1、藥物對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用以不同濃度藥物加到長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板中，培養(yǎng)2h后棄藥液，接種100TCID50的SARS-CoV病毒液，37℃吸附5％CO2培養(yǎng)48h，觀察藥物處理后的細(xì)胞對(duì)SARS-CoV感染的影響。同時(shí)做單用病毒感染時(shí)的病毒對(duì)照、正常細(xì)胞對(duì)照。用MTS/PMS法測(cè)定RD-09對(duì)Vero-E6的細(xì)胞毒性，結(jié)果如表1結(jié)果顯示在100ug/ml的濃度范圍內(nèi)RD-09對(duì)Vero-E6細(xì)胞沒(méi)有毒性。
表1MTS/PMS法測(cè)定RD-09對(duì)Vero-E6的細(xì)胞毒性

2、藥物對(duì)SARS-CoV增殖的影響接種100TCID50的SARS-CoV于長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板上，37℃吸附2h，換上含相應(yīng)濃度藥物的維持液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察藥物對(duì)SARS-CoV增殖的影響。結(jié)果顯示RD-09對(duì)SARS-CoV的半抑制劑量為2～4ug/ml。
3、藥物對(duì)SARS-CoV的直接殺傷作用含不同濃度藥物的維持液與等量病毒液后，置37℃作用2h后，將孵育液加入長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板中，0.1ml/孔，37℃吸附1h，換上含相應(yīng)濃度藥物的維持液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察藥物對(duì)SARS-CoV的直接殺傷作用。結(jié)果顯示不同濃度藥物與病毒等量混合2h后，在4μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞感染SARS-CoV皆有全抑制作用。
4、藥物對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用藥物和病毒等量混合后直接加到長(zhǎng)滿單層Vero-E6細(xì)胞的96孔板上37℃吸附2h，棄混合液加維持液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察藥物對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用。結(jié)果顯示RD-09對(duì)SARS-CoV感染細(xì)胞的綜合作用效果為4ug/ml時(shí)，對(duì)SARS-CoV病毒有100％的抑制效果。
5、藥物對(duì)病毒感染細(xì)胞的預(yù)防作用不同濃度藥物預(yù)先與細(xì)胞作用2h后，接種病毒，RD-09在4μg/mL時(shí)可以100％抑制SARS病毒感染的Vero-E6細(xì)胞病變。
6、藥物對(duì)病毒感染細(xì)胞的治療作用藥物對(duì)細(xì)胞感染SARS-CoV有全部抑制作用，表2是藥物9不同方式作用SARS-CoV感染的Vero-E6細(xì)胞情況。表2

SARS-CoV對(duì)照組++++ 細(xì)胞對(duì)照組----注“+”為CPE等級(jí)，0～25％為+、25％～50％為++、50％～75％為+++、75％～100％為++++本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、在安全劑量范圍內(nèi)，對(duì)SARS病毒的抑制率高。
2、有較強(qiáng)的預(yù)防SARS病毒感染的作用。
3、愈后快，可以減輕感染病人的綜合癥狀。


圖1是Vero-E6正常細(xì)胞2是Vero-E6細(xì)胞被SARS-CoV感染后病變3是RD-09藥物對(duì)被SARS-CoV感染的Vero-E6細(xì)胞的保護(hù)效果圖具體實(shí)施方式
如圖1所示，正常Vero-E6細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，具有貼壁細(xì)胞的一般特性，細(xì)胞之間空隙小。
如圖2所示，Vero-E6細(xì)胞被SARS-CoV感染后，細(xì)胞從壁上脫落，細(xì)胞碎裂。
如圖3所示，被SARS-CoV感染Vero-E6細(xì)胞加入藥物處理后，僅有部分細(xì)胞從壁上脫落，大部分細(xì)胞的形態(tài)與正常細(xì)胞相同，可見(jiàn)藥物作用后SARS-CoV感染Vero-E6細(xì)胞病變減輕。
實(shí)施例1對(duì)人進(jìn)行的臨床試驗(yàn)，試驗(yàn)組用本發(fā)明制備的藥物注射液，藥物注射液的用法與用量一次50mg，一日一次，緩緩靜脈滴注。對(duì)照組注射生理鹽水，其病情狀況如表3所示，治愈時(shí)間如表4所示
表3病情狀況

該表結(jié)果顯示試驗(yàn)組(即使用RD-09治療組)的病人比對(duì)照組的病人在病情上有較大的減輕。
表4治愈時(shí)間

注()號(hào)內(nèi)的數(shù)字為死亡人數(shù)。該表結(jié)果顯示試驗(yàn)組(即使用RD-09治療組)的病人在治療時(shí)間比對(duì)照組有較大的縮短。
權(quán)利要求
1.一種葡萄柚種子提取物在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用，是以葡萄柚種子提取物為有效成分制備抗SARS病毒藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄柚種子提取物在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用，制備的藥物劑型是口服液、膠囊、粉劑、或針劑。
全文摘要
一種葡萄柚種子提取物在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用，是以葡萄柚種子提取物為有效成分制備抗SARS病毒藥物，在安全劑量范圍內(nèi)，對(duì)SARS病毒的抑制率高；強(qiáng)的預(yù)防SARS病毒感染的作用；愈后快，可以減輕感染病人的綜合癥狀；藥物毒性小，穩(wěn)定性好，耐藥性強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1452978SQ03126919
公開(kāi)日2003年11月5日 申請(qǐng)日期2003年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月19日
發(fā)明者王一飛, 陶光復(fù), 張美英 申請(qǐng)人:廣州暨南生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地有限公司