專利名稱：運用bcl-2反義寡聚體治療bcl-2疾病的方法
1.引言本發(fā)明涉及使用bcl-2反義寡聚體來治療和預(yù)防bcl-2的相關(guān)疾病。這些疾病包括癌癥(cancer)、腫瘤、癌(carcinoma)以及細(xì)胞增生性相關(guān)疾病。在本發(fā)明的一個實施方案中，以高劑量給予bcl-2反義寡聚體。本發(fā)明也涉及預(yù)防或治療bcl-2相關(guān)疾病的方法，尤其是預(yù)防或治療癌癥的方法；所述方法包括短期給予bcl-2反義寡聚體。此外，本發(fā)明涉及使用bcl-2反義寡聚體來增加受治療者對癌癥治療的敏感性。本發(fā)明也涉及包含一種或更多種bcl-2反義寡聚體的藥用組合物，所述藥用組合物可包含治療一種或更多種癌癥治療劑。
2.發(fā)明背景治療癌癥的傳統(tǒng)方法有缺乏特異性的缺點。已開發(fā)的大多數(shù)藥物是阻斷酶途徑、或隨機與DNA相互作用的天然產(chǎn)物或衍生物。并且，治療癌癥的大多數(shù)藥物由于低治療指數(shù)而伴隨有限制劑量的嚴(yán)重毒性。例如，如果給予患者抗癌藥物，則大多數(shù)抗癌藥物不僅殺死癌細(xì)胞，而且殺死正常的非癌細(xì)胞。因為這些有害作用，所以需要對癌細(xì)胞更特異性起作用的治療。
已發(fā)現(xiàn)一類基因即癌基因與細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)，且與癌癥狀態(tài)的保持有關(guān)。特別是，破壞這些基因的轉(zhuǎn)錄或者抑制其蛋白產(chǎn)物的作用，能得到良好的治療效果。已于Bishop，1987，“Cellular Oncogenes andRetroviruses(細(xì)胞的癌基因與反轉(zhuǎn)錄病毒)，”Science，235305-311中，綜述了癌基因在人類許多癌的病因?qū)W中的作用。在人類癌癥的許多類型中，一種稱為bcl-2(B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2)的基因過量表達；且這種過量表達可能與腫瘤發(fā)生能力有關(guān)(Tsujimoto等，1985，“Involvementof the bcl-2 gene in human follicular lymphoma(bcl-2基因與人濾泡性淋巴瘤有關(guān))”，Science 2281440-1443)。有人認(rèn)為bcl-2基因主要是通過延長細(xì)胞存活而非通過加速細(xì)胞分裂，促使癌癥發(fā)病以及對治療的抗性。
人bcl-2基因與某些白血病、淋巴樣瘤、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、以及鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌的病因?qū)W有關(guān)系(Croce等，1987，“Molecular Basis OfHuman B and T Cell Neoplasia(人B細(xì)胞瘤形成和T細(xì)胞瘤形成的分子基礎(chǔ))，”載于Advance in Viral Oncology，735-51，G.Klein(編輯)，New YorkRaven Press；Reed等，1991，“Differential expression of bcl-2 protooncogene in neuroblastoma and otherhuman tumor cell lines ofneural origin(bcl-2原癌基因在成神經(jīng)細(xì)胞瘤和其它來自神經(jīng)的人腫瘤細(xì)胞系中的差異表達)”，Cancer Res.516529-38；Yunis等，1989，“Bcl-2 and other genomic alterations in the prognosis oflarge-cell lymphomas(在大細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后方面的bcl-2和其它基因組的改變)”，N.Engl.J.Med.3201047-54；Campos等，1993，“Highexpression of bcl-2 protein in acute myeloid leukemia is associated withpoor response to chemotherapy(急性髓細(xì)胞性白血病中的bcl-2蛋白的高表達與對化療反應(yīng)差有關(guān))”，Blood 813091-6；McDonnell等，1992，“Expression of the protooncogene bcl-2 and its association withemergence of androgen-independent prostate cancer(原癌基因bcl-2的表達及其與不依靠雄激素的前列腺癌出現(xiàn)的關(guān)聯(lián))”，Cancer Res.526940-4；Lu等，1993，“Bcl-2 protooncogene expression in Epstein BarrVirus-Associated Nasopharyngeal Carcinoma(bcl-2原癌基因在與EB病毒有關(guān)的鼻咽癌中的表達)”，Int.J.Cancer 5329-35；Bonner等，1993，“bcl-2 protooncogene and the gastrointestinal mucosal epithelialtumor progression model as related to proposed morphologic and molecularsequences(與所提出的形態(tài)和分子序列相關(guān)的bcl-2原癌基因及胃腸粘膜上皮瘤的發(fā)展模型)”，Lab.Invest.6843A)。已發(fā)現(xiàn)在各種各樣的腫瘤中bcl-2過量表達，所述腫瘤包括非Hodgkin氏淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、腎癌以及急性白血病與慢性白血病(Reed，1995，“Regulation of apoptosis by bcl-2 family proteins and its role incancer and chemoresistance(bcl-2家族蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及其在癌癥和藥物抗性方面的作用)”，Curr.Opin.Oncol.7541-6)。
反義寡核苷酸構(gòu)成潛在的、用于特異性破壞癌基因功能的治療工具。這些合成的單鏈短DNA(通常少于30個堿基)具有互補于靶基因的前mRNA或mRNA區(qū)的序列，且通過氫鍵的堿基配對而形成雜種雙鏈體。這種雜交不但能破壞靶mRNA的表達，而且能破壞靶mRNA所編碼蛋白的表達；并因此能干擾下游的相互作用和信號傳輸。因為一種mRNA分子產(chǎn)生多個蛋白拷貝，所以，與在蛋白水平導(dǎo)致破壞例如通過抑制酶的活性位點相比，抑制mRNA能更有效和更具特異性。
已運用合成的、互補于c-myc癌基因之mRNA的寡脫氧核苷酸來特異性地抑制c-myc蛋白的產(chǎn)生，從而在體外抑制人白血病細(xì)胞的生長(Holt等，1988，Mol.Cell Biol.8963-73；Wickstrom等，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，851028-32)。也將寡脫氧核苷酸用作包括人免疫缺陷病毒在內(nèi)的反轉(zhuǎn)錄病毒的特異性抑制劑(Zamecnik和Stephenson，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75280-4；Zamecnik等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，834143-6)。
由于反義寡核苷酸靶向和抑制各個癌相關(guān)基因的能力，反義寡核苷酸的使用已在臨床前癌模型方面顯示出前景。這些反義的硫代磷酸寡聚體顯示出在體外抑制bcl-2表達以及在具有淋巴瘤異種移植物的小鼠模型中根除腫瘤的能力。已將某些癌對化療的抗性與bcl-2癌基因的表達聯(lián)系起來(Grover等，1996，“Bcl-2 expression in malignantmelanoma and its prognostic signiffcance”，Eur.J.Surg.Oncol.22(4)347-9)。給予bcl-2反義寡聚體能選擇性地降低實驗室小鼠體內(nèi)腫瘤異體移植物中的bcl-2蛋白水平(Jansen等，1998，“bcl-2 antisense therapychemosensitizes human melanoma in SCID mice”，Nat.Med.4(2)232-4)。此外，給予bcl-2反義寡聚體能使實驗室小鼠體內(nèi)的腫瘤異體移植物對化學(xué)治療劑更加敏感(Jansen等，1998，“bcl-2 antisense therapychemosensitizes human melanoma in SCID mice”，Nat.Med.4(2)232-4)。在小鼠中，用bcl-2反義寡聚體系統(tǒng)治療則減少bcl-2蛋白，并增加細(xì)胞的凋亡。單獨用bcl-2反義寡聚體治療則具有中等抗腫瘤活性，而當(dāng)將其與DTIC(也稱為達卡巴嗪)組合使用時，則觀測到增加的抗腫瘤活性。在與DTIC治療聯(lián)合給予bcl-2反義寡聚體后，在13只動物里的10只中，沒有檢測到惡性黑素瘤異體移植物。仍迫切需要擴展這些抗腫瘤治療而和人類癌癥作斗爭。
盡管生物學(xué)治療、藥物治療以及聯(lián)合治療的可用性增加，但對許多癌癥患者的預(yù)后還是差的。例如，雖然通常用DTIC來治療轉(zhuǎn)移性黑素瘤；但是，幾乎沒患者表現(xiàn)出長期的改善。事實上，當(dāng)DTIC與順鉑、卡莫司汀及他莫昔芬聯(lián)合使用時，一個大范圍的III期臨床試驗沒有顯示出任何更好的存活率(Chapman等，1999，“Phase III multicenterrandomized trial of the Dartmouth regimen versus dacarbazine in patientswith metastatic melanoma”，J.Clin.Oncol.17(9)2745-51)。這些在癌癥治療方面的重大缺點則突出了對新治療方法的需要。
3.發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物以及治療bcl-2相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明部分地基于本申請人的發(fā)現(xiàn)，即當(dāng)給予患者高劑量bcl-2反義寡聚體以治療bcl-2相關(guān)疾病、尤其治療癌癥時，bcl-2反義寡聚體導(dǎo)致顯著的治療反應(yīng)，包括低毒性、高耐受性及存活延長。本申請人還發(fā)現(xiàn)如果短時期即少于14天地以高劑量給予患者bcl-2反義寡聚體，則bcl-2反義寡聚體在治療癌癥患者方面也導(dǎo)致顯著的治療反應(yīng)。這些治療方案進一步包括與一種或更多種癌癥治療劑聯(lián)合短時期以高劑量給予bcl-2反義寡聚體。意想不到的是，當(dāng)聯(lián)合短期給予bcl-2反義寡聚體給予癌癥治療劑時，減小劑量的一種或更多種癌癥治療劑在治療癌癥患者方面也顯示出顯著的治療反應(yīng)。因此，本發(fā)明的治療方案提供一種治療癌癥的有效治療方法，所述方法的持續(xù)時間減少和毒性降低，且該方法因此導(dǎo)致改善的耐受性。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療bcl-2相關(guān)疾病的方法以及一種單位劑型的藥用組合物；所述藥用組合物包含劑量特別高的bcl-2反義寡聚體，使得所述藥用組合物中的bcl-2反義寡聚體的有效量為有效達到大約10-50mg/kg/天之劑量的劑量。按照本發(fā)明的這個實施方案，所述藥用組合物的bcl-2反義寡聚體的有效量是一種有效達到最低30nM(毫微摩爾濃度)的bcl-2反義寡聚體循環(huán)水平的劑量。在一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體的循環(huán)水平為1-10μM(微摩爾濃度)。在另一個實施方案中，在給予bcl-2反義寡聚體大約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10小時后，達到至少30nM的bcl-2反義寡聚體的所需循環(huán)水平。在另一個實施方案中，在大約36至48小時內(nèi)，優(yōu)選在24至35小時，更優(yōu)選在12至24小時內(nèi)，最優(yōu)選在不到12小時之內(nèi)，達到至少30nM的bcl-2反義寡聚體的循環(huán)水平。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療bcl-2相關(guān)疾病的方法以及一種藥用組合物；所述藥用組合物包含供短時期(即少于14天)給予的一定劑量的bcl-2反義寡聚體，使得在這短的治療循環(huán)期間給予的bcl-2反義寡聚體的有效量在大約0.01mg/kg/天與50mg/kg/天之間變化。在另一個實施方案中，在這短期治療循環(huán)期間給予的bcl-2反義寡聚體的有效量是有效達到最低30nM(毫微摩爾濃度)的bcl-2反義寡聚體循環(huán)水平的劑量。在另外一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體循環(huán)水平為1-10μM(微爾濃度)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療bcl-2相關(guān)疾病的方法以及一種藥用組合物；所述藥用組合物包含與一種或更多種癌癥治療劑聯(lián)合的、供短時期(即少于14天)給予的一定劑量的bcl-2反義寡聚體，所述癌癥治療劑在給予bcl-2反義寡聚體之前或隨后給予，或者與bcl-2反義寡聚體同時給予。在這短的治療方案期間給予的bcl-2反義寡聚體的有效量在大約0.01mg/kg/天與50mg/kg/天之間變化。與bcl-2反義寡聚體聯(lián)合給予的、有效量的癌癥治療劑可以按癌癥治療劑的標(biāo)準(zhǔn)劑量，或者可以按減少的劑量給予。按照本發(fā)明的這個實施方案，所述藥用組合物的bcl-2反義寡聚體的有效量是有效達到至少30nM的bcl-2反義寡聚體循環(huán)水平的劑量。在一個特定的實施方案中，在大約36至48小時內(nèi)，優(yōu)選大約在24至35小時內(nèi)，最優(yōu)選在24小時之內(nèi)，達到bcl-2反義寡聚體的所述循環(huán)水平。
按照本發(fā)明，bcl-2相關(guān)疾病包括腫瘤、惡性腫瘤、癌以及細(xì)胞增生性疾病。
按照本發(fā)明，短時期包括給予bcl-2反義寡聚體少于14天的一段時期，所述時期在2與13天之間變化，最好在3與9天之間、4與7天之間、或5與6天之間變化。
按照本發(fā)明，短時期給予的bcl-2反義寡聚體的劑量在0.01mg/kg/天與50mg/kg/天之間變化；優(yōu)選按4-9mg/kg/天的劑量，且更優(yōu)選按5-7mg/kg/天的劑量。
本發(fā)明也包括包含將按照本發(fā)明方法給予的、有效量的一種或更多種bcl-2反義寡聚體的藥用組合物。所述藥用組合物包含與藥學(xué)上可接受的一種載體聯(lián)合在一起的、在0.01mg/kg/天與50mg/kg/天之間變化的bcl-2反義寡聚體的劑量，優(yōu)選按4-9mg/kg/天的劑量，且更優(yōu)選按5-7mg/kg/天的劑量。在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥用組合物也包括另外一種或更多種的癌癥治療劑。配制所述藥用組合物以便以連續(xù)輸注形式給予，或是按一次或更多次的大劑量給予，或是在治療方案期間按一次或更多次給予。
按照本發(fā)明，可以分別給予包含bcl-2反義寡聚體的本發(fā)明藥用組合物和包含癌癥治療劑的藥用組合物。
通過參考下面的附圖和詳細(xì)描述，將更好地理解這些方面以及本發(fā)明的其它方面。
3.1.定義當(dāng)用于本文時，短語“bcl-2相關(guān)疾病”是指涉及bcl-2基因調(diào)節(jié)的疾病，包括但不限于與表達bcl-2基因的細(xì)胞有關(guān)系的疾病。這樣的疾病包括與表達bcl-2基因或bcl-2相關(guān)基因的細(xì)胞或組織有關(guān)系的疾病，或者與不再表達bcl-2基因、但通常表達bcl-2基因的細(xì)胞或組織有關(guān)的疾病。bcl-2相關(guān)疾病包括但不限于細(xì)胞增生性疾病以及受表達bcl-2基因或bcl-2相關(guān)基因的細(xì)胞影響的細(xì)胞或組織的病理學(xué)。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“癌癥”描述一類疾病狀態(tài)，其中一種或更多種致癌因子導(dǎo)致健康的細(xì)胞轉(zhuǎn)化成異常細(xì)胞，然后這些異常細(xì)胞侵襲鄰近的組織，接下來可能是這些異常細(xì)胞靠淋巴或血液而擴散到局部淋巴結(jié)和/或遠的位置，即轉(zhuǎn)移。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“腫瘤”或“生長物”意思是由于細(xì)胞分裂較快和/或細(xì)胞死亡率較低的結(jié)果而包含較大數(shù)量的細(xì)胞的增大的組織塊。腫瘤可以是惡性癌癥，或是非惡性癌癥。
當(dāng)用于本文時，短語“治療癌癥”或“癌癥的治療”意思是抑制癌細(xì)胞的復(fù)制、抑制癌擴散、減小腫瘤的體積、縮小或減少體內(nèi)的癌細(xì)胞數(shù)、或者改善或減輕由癌癥引起的疾病的癥狀。只要在死亡率和/或發(fā)病率方面有所下降，或者，只要由于體內(nèi)惡性細(xì)胞數(shù)減少而在疾病負(fù)載顯示方面有所下降，則認(rèn)為所述治療是治療性的。
當(dāng)用于本文時，短語“預(yù)防癌癥”或“癌癥的預(yù)防”意思是預(yù)防癌癥病態(tài)的發(fā)生或復(fù)發(fā)。因此，阻止或抑制或干擾轉(zhuǎn)移、腫瘤生長或癌增生的治療具有預(yù)防功效。
當(dāng)用于本文時，短語“反義寡聚體”意思是反義寡核苷酸或其類似物或衍生物，涉及通過與靶序列的核苷酸堿基的Watson和Crick氫鍵相互作用而識別多核苷酸的靶序列的一系列化學(xué)物質(zhì)。所述靶序列可以是RNA或DNA，且可以為單鏈或雙鏈。靶分子包括但不限于前mRNA、mRNA和DNA。
當(dāng)用于本文時，短語“bcl-2基因表達”是指產(chǎn)生bcl-2前mRNA、bcl-2mRNA和/或bcl-2蛋白的bcl2基因的轉(zhuǎn)錄。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“衍生物”是指對應(yīng)于本發(fā)明藥用組合物的任何藥學(xué)上可接受的同系物、類似物或片段。
當(dāng)用于本文時，短語“治療劑(therapeutics)”或“治療劑(therapeuticagent)”是指有助于治療疾病的任何分子、化合物或治療。因此，癌癥治療劑是幫助治療腫瘤或癌癥的分子、化合物或治療方案。所述治療方案包括但不限于放射治療、食療、理療及心理治療。
當(dāng)用于本文時，短語“化療劑(chemoagent)”或“抗癌劑”或“抗腫瘤劑”或“癌癥治療劑”是指有助于治療腫瘤或癌癥的任何分子、化合物或治療。
當(dāng)用于本文時，短語“低劑量”或“減少的劑量”是指低于正常給予之范圍的劑量，即低于由第54版Physicians′Desk Reference(2000)或類似參考文獻建議的標(biāo)準(zhǔn)劑量。這樣的劑量可足以抑制細(xì)胞增生，或在人體中顯示出改善的效果，或與癌癥的標(biāo)準(zhǔn)治療相比顯示出具有較少副作用的功效。在第54版Physicians′Desk Reference(2000)中或在CancerPrinciples & Practice of Oncology(DeVita，Jr.，Hellman和Rosenberg(編輯)，第2版，Philadelphia，PAJ.B.Lippincott Co.，1985)中，能找到特定治療劑所使用的正常劑量范圍和用于具體疾病的癌癥標(biāo)準(zhǔn)療法。
當(dāng)用于本文時，短語“減小的毒性”是指當(dāng)與其它治療方案和劑量配方相比時，由于在較短的期間內(nèi)且/或以較低的劑量給予了反義寡聚體和癌癥治療劑，而觀測到的減小了的副作用和毒性；所述其它治療方案和劑量配方如在第54版Physicians′Desk Reference(2000)中或在CancerPrinciples & Practice of Oncology(DeVita，Jr.，Hellman和Rosenberg(編輯)，第2版，Philadelphia，PAJ.B.Lippincott Co.，1985)中描述的標(biāo)準(zhǔn)治療方案和劑量配方。
當(dāng)用于本文時，短語“治療周期”或“周期”是指給予一種治療劑或一系列治療劑的時期。在一個包括高劑量bcl-2反義寡聚體和標(biāo)準(zhǔn)劑量的癌癥治療劑聯(lián)用的實施方案中，對于一個治療周期，優(yōu)選的時期的時間長度是少于14天。本發(fā)明考慮了至少一個治療周期，通常優(yōu)選多于一個周期。在某些情況下，一個治療周期可能是所希望的，例如于一個治療周期后在獲得顯著治療效果的情況下。
當(dāng)用于本文時，短語“藥學(xué)上可接受的載體”是指不干擾活性成分的生物活性效果的載體介質(zhì)。所述載體介質(zhì)基本上是化學(xué)惰性的和無毒性的。
當(dāng)用于本文時，短語“藥學(xué)上可接受的”意思是由聯(lián)邦政府或州政府的管理機構(gòu)批準(zhǔn)的、或在《美國藥典》或其它普遍公認(rèn)的藥典中列舉的可供動物之用的，更特別地是供人之用的。
當(dāng)用于本文時，術(shù)語“載體”是指與治療劑一起給予的稀釋劑、佐劑、賦形劑、或溶媒。這樣的載體可以是無菌液體，例如，鹽水溶液或油，所述油包括來源于石油、動物、植物或合成的那些油，例如花生油、豆油、礦物油、芝麻油等等。當(dāng)靜脈內(nèi)給予所述藥用組合物時，鹽水溶液是一種優(yōu)選的載體。也可以將鹽溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液用作各種液體載體，尤其是對于注射液而言。合適的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、甘油一硬脂酸酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。如果需要，也可以使所述載體包含少量的濕潤劑或乳化劑、或者pH緩沖劑。這些組合物可以取溶液劑、混懸劑、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、散劑、緩釋制劑等等的形式?？梢杂脗鹘y(tǒng)的粘合劑和載體例如甘油三酯，將所述組合物配制成栓劑。在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences中，描述了合適的藥用載體的實例。合適的藥用載體的實例為各種各樣的陽離子脂類，包括但不限于N-(1(2，3-二油氧基(dioleyloxy))丙基)-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。脂質(zhì)體同樣是適合于本發(fā)明反義寡聚體的合適載體。這樣的組合物應(yīng)該包含治療有效量的所述化合物以及適量的載體，以便提供適合于給予患者的形式。所述制劑應(yīng)該適合給藥方式。
當(dāng)用于本文時，短語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指由藥學(xué)上可接受的基本無毒的酸和堿制備的鹽；所述酸和堿包括無機酸和堿與有機酸和堿。藥學(xué)上可接受的鹽包括與游離氨基形成的那些鹽，例如由鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等等衍生的那些鹽；以及與游離羧基形成的那些鹽，例如由氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等等衍生的那些鹽。
4.附圖簡述

圖1在用Bcl-2反義寡聚體治療5天后，在12號患者黑素瘤活組織檢查樣品中的Bcl-2的減量調(diào)節(jié)。
圖2在治療前(a)、在Bcl-2反義寡聚體治療后(b)以及在Bcl-2反義寡聚體加DTIC治療后，12號患者(右腿)的腫瘤活組織檢查樣品的TUNEL染色。
圖3在用Bcl-2反義寡聚體加DTIC以6.5mg/kg/天治療三個周期之前與之后，12號患者的皮膚轉(zhuǎn)移瘤(a)和骨盆區(qū)的CT掃描(b)。
5.發(fā)明詳述本發(fā)明提供可供應(yīng)用bcl-2反義寡聚體預(yù)防或治療bcl-2相關(guān)疾病、尤其是癌癥的組合物和方法。本發(fā)明也提供包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物以及供其用于預(yù)防性和治療性治療的方法，所述方法包括給藥方案和治療方案。
本發(fā)明部分地基于下述的發(fā)現(xiàn)，即單獨用bcl-2反義寡聚體的短周期治療以及用bcl-2反義寡聚體聯(lián)合其它治療劑的短周期治療，在患有疾病的患者中有著意想不到的有效改善效果。這種短期治療方案顯示了對受治療病人的其它好處，例如方便、精神創(chuàng)傷減少以及較好的依從治療方案的可能。其它的發(fā)現(xiàn)包括(1)當(dāng)與bcl-2反義寡聚體聯(lián)用時，治療周期短且減少治療劑的劑量，(2)包含至少一種bcl-2反義寡聚體、且有或沒有其它治療劑的藥用組合物的給藥方式簡化了，以及(3)臨床上對許多類型癌癥顯著的治療方案。因此，申請人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)短治療周期內(nèi)給予bcl-2反義寡聚體時，bcl-2反義寡聚體能在患有bcl-2相關(guān)疾病的患者中顯示顯著的治療反應(yīng)；這一發(fā)現(xiàn)提供改進而有用的藥用組合物、治療方法以及給藥方式。
本發(fā)明也部分地基于下述的發(fā)現(xiàn)，即單獨的高劑量的bcl-2反義寡聚體、以及聯(lián)合其它治療劑的高劑量的bcl-2反義寡聚體，在患有疾病的患者中，有著減小的毒性，并具有改善效應(yīng)；所述減少了的毒性包括在與癌癥的大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)治療相比時，意想不到的很小的副作用。一種包括高劑量bcl-2反義寡聚體的治療方案顯現(xiàn)出另外的對受制療病人的好處，例如較短的治療周期、較少的治療、或改善的功效。
在一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚體給予人達短的治療周期，以預(yù)防或治療bcl-2相關(guān)疾病。在另一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚體以高劑量給予人，以預(yù)防或治療bcl-2相關(guān)疾病。除了影響患病的組織外，bcl-2反義寡聚體能保護或治療正常組織；所述正常組織包括包含正常表達bcl-2基因之細(xì)胞的組織。另外，bcl-2反義寡聚體能保護或治療被患病組織危及的正常組織；盡管所述正常組織不表達bcl-2基因。
在一個特定的實施方案中，本發(fā)明進一步包括使用聯(lián)合療法來預(yù)防或治療bcl-2相關(guān)疾病。這樣的療法包括使用一種或更多種幫助預(yù)防或治療疾病的分子、化合物或治療。預(yù)期的治療劑的實例包括生物制劑、化學(xué)藥品、以及治療處理(例如放射治療)。
在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明供給與一種或更多種癌癥治療劑聯(lián)合給予人以預(yù)防或治療癌癥的bcl-2反義寡聚體。這樣的癌癥治療劑包括具有抗癌活性的一種或更多種分子、化合物或治療。預(yù)期的癌癥治療劑的實例包括生物制劑、化學(xué)藥品、以及治療處理(例如放射治療)。
在再一個特定的實施方案中，本發(fā)明供給與一種或更多種減少了劑量的癌癥治療劑聯(lián)合給予人以預(yù)防或治療癌癥的bcl-2反義寡聚體。這樣的治療可涉及高劑量、標(biāo)準(zhǔn)劑量或低劑量的一種或更多種bcl-2反義寡聚體，治療周期可以為長周期或短周期。在一個特定的實施方案中，本發(fā)明供給與一種或更多種大大減少了劑量的癌癥治療劑于縮短的治療周期內(nèi)聯(lián)合給予人以預(yù)防或治療癌癥的特別高劑量的bcl-2反義寡聚體。
5.1 bcl-2反義寡聚體本發(fā)明考慮了一種或更多種bcl-2反義寡聚體，或其衍生物、類似物、片段、雜種、模擬物(mimetics)以及其同類物的應(yīng)用。當(dāng)用于本文時，術(shù)語“衍生物”是指對應(yīng)于本發(fā)明藥用組合物的任何藥學(xué)上可接受的同系物、類似物或片段。適用于本發(fā)明的反義寡聚體包括按大小在長度5至10個堿基、10至20個堿基、20至50個堿基、50至75個堿基、或75個至100個堿基范圍內(nèi)變化的核苷酸寡聚體，優(yōu)選長度為10至40個堿基，更優(yōu)選長度為15至25個堿基，最優(yōu)選長度為18個堿基。所述靶序列可以是RNA或DNA，且可以為單鏈或雙鏈。靶分子包括但不限于前mRNA、mRNA和DNA。在一個實施方案中，靶分子是mRNA。在一個優(yōu)選的實施方案中，靶分子是bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA。在一個特定的實施方案中，反義寡聚體與bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA任何地方的一部分雜交。所述反義寡聚體最好是選自與bcl-2前mRNA或bcl-2 mRNA的翻譯起始位點、供體剪接位點、受體間接位點、轉(zhuǎn)運位點或降解位點雜交的那些寡聚體。
先前已評定了幾種bcl-2反義寡聚體，得到不同的結(jié)果(參見例如在第5,831,066號美國專利中的SEQ.ID.NO.1-17)。在序號08/217,082的美國專利申請即現(xiàn)在的第5,734,033號美國專利；序號08/465,485的美國專利申請即現(xiàn)在的第5,831,066號美國專利；以及序號09/080,285的美國專利申請即現(xiàn)在的第6,040,181號美國專利中，詳細(xì)描述了可按照本發(fā)明使用的bcl-2反義寡聚體的實例；通過引用，將所述文獻中的每個全部結(jié)合到本文中。
在一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體與bcl-2前mRNA或bcl-2mRNA的一部分大體上互補，或者與同bcl-2相關(guān)的前mRNA或mRNA的一部分大體上互補。在一個優(yōu)選的實施方案中，bcl-2反義寡聚體與前mRNA編碼鏈的翻譯起始位點的一部分雜交。在更優(yōu)選的一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體與人bcl-2基因的前mRNA編碼鏈上包含翻譯起始位點的一部分雜交。更優(yōu)選的是，bcl-2反義寡聚體包含一段互補于bcl-2前mRNA或RNA的AUG起始序列的TAC序列。
在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體與人bcl-2基因的前mRNA編碼鏈的剪接供體位點的一部分雜交。更優(yōu)選的是，這種核苷酸包含一段CA序列，該序列與bcl-2基因的剪接供體序列GT是互補的；且優(yōu)選該核苷酸序列另外包括5至50個堿基的側(cè)翼部分，更優(yōu)選大約10至20個堿基的側(cè)翼部分；所述側(cè)翼部分與bcl-2基因編碼鏈的鄰接所述剪接供體位點的部分雜交。
在再一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體與人bcl-2基因的前mRNA編碼鏈的剪接受體位點的一部分雜交。優(yōu)選的是，這種核苷酸包含一段TC序列，該序列與bcl-2基因的剪接受體序列AG是互補的；且優(yōu)選該核苷酸序列另外包括5至50個堿基的側(cè)翼部分，更優(yōu)選大約10至20個堿基的側(cè)翼部分；所述側(cè)翼部分與bcl-2基因編碼鏈的鄰接所述剪接受體位點的部分雜交。在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體與前mRNA或mRNA中與剪接、轉(zhuǎn)運或降解有關(guān)的部分雜交。
本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員能認(rèn)識到適用于本發(fā)明的反義寡聚體也可以大體上互補于bcl-2前mRNA或mRNA的其它位點，且能形成雜合體。技術(shù)人員也將意識到優(yōu)選與bcl-2前mRNA或mRNA中在來自不相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄物中通常不存在的一部分雜交，以便保持治療的特異性。
不管所設(shè)計的bcl-2反義寡聚體序列與bcl-2基因、bcl-2前mRNA、bcl-2 mRNA或bcl-2相關(guān)核苷酸序列的序列同源性程度或雜交程度有多高，通過經(jīng)驗性測試和評估臨床效力，也可以確定bcl-2反義寡聚體序列的設(shè)計。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會意識到與優(yōu)選實施方案的那些反義寡聚體相比，具有例如較低的序列同源性、較多或較少的修飾核苷酸、或者較長或較短的長度、但在臨床治療方面仍然顯示出反應(yīng)的bcl-2反義寡聚體，則同樣在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
反義寡聚體可以是RNA或DNA，或是其衍生物。反義寡聚體的特定形式可能影響寡聚體的藥代動力學(xué)參數(shù)例如生物利用度、代謝、半衰期等等。因此，本發(fā)明考慮了具有改善細(xì)胞吸收、增強對核酸酶的抗性、改善與靶序列的結(jié)合、或增加靶序列的切割或降解之特性的反義寡聚體衍生物。所述反義寡聚體可含有包括例如硫代磷酸酯或甲基膦酸酯的堿基。而所述反義寡聚體可以是尤其包含磷酸二酯核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸和/或甲基膦酸酯核苷酸之組合的混合寡聚體。這樣的寡聚體可具有各種修飾，所述修飾包括但不限于糖的2-O′-烷基或2-O′-鹵代修飾、主鏈修飾(例如甲基膦酸酯、二硫代磷酸酯衍生物、二硫代亞磷酸酯(phosphordithioate)衍生物)、formacetal衍生物、3′-thioformacetal衍生物、砜衍生物、氨基磺酸酯衍生物、硝基氧主鏈衍生物、嗎啉基衍生物以及肽核酸(PNA)衍生物)、或其中堿基部分已被修飾的衍生物(Egholm等，1992，Peptide Nucleic Acids(PNA)-Oligonucleotide Analogues With An Achiral Peptide Backbone)。在另一個實施方案中，反義寡聚體包括寡核苷酸的綴合物及其衍生物(Goodchild，1990，“Conjugates of oligonucleotides and modifiedotigonucleotidesa review of their synthesis and properties”，Bioconjug.Chem.1(3)165-87)。
至于體內(nèi)治療應(yīng)用，優(yōu)選bcl-2反義寡聚體的硫代磷酸酯衍生物，至少部分是因為對降解的抗性較大。在一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體是一種含有硫代磷酸酯堿基的雜種寡聚體。在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體包含至少一個硫代磷酸酯鍵。在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體包含至少三個硫代磷酸酯鍵。在再一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體包含至少三個連續(xù)的硫代磷酸酯鍵。在又一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體完全由硫代磷酸酯鍵組成。制備寡核苷酸衍生物的方法是本技術(shù)領(lǐng)域已知的。參見例如，Stein等，1988，Nucl.Acids Res.，163209-21(硫代磷酸酯)；Blake等，1985，Biochemistry 246132-38(甲基膦酸酯)；Morvan等，1986，Nucl.Acids Res.145019-32(α-脫氧核苷酸)；Monia等，1993，“Evaluation of 2′-modifiedoligonucleotides containing 2′deoxy gaps as antisense inhibitors of geneexpression”，J.Biol.Chem.26814514-22(2′-O-甲基-核糖核苷酸)；Asseline等，1984，Proc.Natl Acad.Sci.USA 813297-3301(吖啶)；Knorre等，1985，Biochemie 67783-9；Vlassov等，1986，Nucl.Acids Res.144065-76(N-2-chlorocethylamine)和吩嗪)；Webb等，1986，Nucl.AcidsRes.147661-74(5-甲基-N4-N4-橋亞乙基胞嘧啶)；Boutorin等，1984，F(xiàn)EBS Letters 17243-6(乙二胺四乙酸(EDTA)鐵及類似物)；Chi-Hong等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 837147-51(5-甘氨酰氨基(glycylamido)-1，10-o-菲咯啉)；以及Chu等，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82963-7(二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)的衍生物)。
在治療周期期間給予的bcl-2反義寡聚體的有效劑量，大約從0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天、0.1mg/kg/天至1mg/kg/天、或1mg/kg/天至10mg/kg/天。給予的bcl-2反義寡聚體的劑量可視給藥的方式而定。例如，與由含有包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物之局部植入物產(chǎn)生的全身劑量相比，靜脈內(nèi)給予bcl-2反義寡聚體多半會產(chǎn)生顯著更高的全身劑量。在一個實施方案中，以0.01-10mg/kg/天的劑量，更優(yōu)選以4-9mg/kg/天的劑量，最優(yōu)選以5-7mg/kg/天的劑量，皮下給予bcl-2反義寡聚體。在另一個實施方案中，以0.01-10mg/kg/天的劑量，更優(yōu)選以4-9mg/kg/天的劑量，最優(yōu)選以5-7mg/kg/天的劑量，靜脈內(nèi)給予bcl-2反義寡聚體。在再一個實施方案中，以0.01mg/kg/天至10mg/kg/天的劑量，更優(yōu)選以0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天的劑量，最優(yōu)選以1mg/kg/天至5mg/kg/天的劑量，局部給予bcl-2反義寡聚體。局部給藥能產(chǎn)生較低的全身劑量，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。例如，局部給藥方式例如腫瘤內(nèi)給予、眼內(nèi)注射或植入，能產(chǎn)生bcl-2反義寡聚體的局部高濃度；而相對于總體重，則是一種相對低的劑量。因此，在這樣的情況下，考慮了局部給予bcl-2反義寡聚體而產(chǎn)生大約0.01-5mg/kg/天的全身劑量。
在另一個實施方案中，在治療周期期間，給予特別高劑量的bcl-2反義寡聚體；所述劑量大約從10mg/kg/天至20mg/kg/天、20mg/kg/天至30mg/kg/天、或30mg/kg/天至50mg/kg/天。
此外，特定bcl-2反義寡聚體的有效劑量可隨其它因素而定，所述其它因素既包括癌的類型、疾病的狀態(tài)或病期、所述寡聚體的毒性、寡聚體被癌細(xì)胞吸收的吸收率，又包括打算給予反義寡聚體的個體的體重、年齡和健康狀況。因為體內(nèi)存在許多可干擾bcl-2反義寡聚體之作用或生物活性的因素，所以本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能認(rèn)識到bcl-2反義寡聚體的有效量可由于每個個體而變化。
在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體的劑量為導(dǎo)致至少30nM(毫微摩爾濃度)的bcl-2反義寡聚體血漿循環(huán)濃度的劑量。根據(jù)給藥方式，可能優(yōu)選更低或更高的bcl-2反義寡聚體的血漿濃度；對于技術(shù)人員，這一點將是顯而易見的。例如，列舉幾個，在靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、控制釋放以及口服給藥方式方面，至少30nM的bcl-2反義寡聚體血漿濃度能是合適的。在另一個實例中，相對低的bcl-2反義寡聚體血漿循環(huán)水平可能是理想的；但是當(dāng)采用局部給藥方式例如腫瘤內(nèi)給予、眼內(nèi)給予或植入時，它們?nèi)匀荒墚a(chǎn)生臨床有效的、局部高的bcl-2反義寡聚體濃度。
在再一個實施方案中，在給予bcl-2反義寡聚體大約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10小時后，達到至少30nM(毫微摩爾濃度)的bcl-2反義寡聚體的血漿循環(huán)濃度。在又一個實施方案中，在大約36至48小時內(nèi)，優(yōu)選在24至35小時，更優(yōu)選在12至24小時內(nèi)，最優(yōu)選在12小時之內(nèi)，達到至少30nM的bcl-2反義寡聚體的血漿循環(huán)濃度。
在一個特定的實施方案中，bcl-2反義寡聚體的劑量為高劑量。在一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體的血漿循環(huán)濃度為至少30nM。在另一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體的循環(huán)水平為1μM至10μM。在又一個實施方案中，bcl-2反義寡聚體的循環(huán)水平是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM。而在另外一個實施方案中，在大約36至48小時內(nèi)，優(yōu)選在24至35小時，更優(yōu)選在12至24小時內(nèi)，最優(yōu)選在12小時之內(nèi)，達到1μM至10μM的bcl-2反義寡聚體的循環(huán)水平。
通過每個周期的幾次給藥，可達到高劑量。另一方面，可以以單次的大劑量輸注(bolus)給藥方式，給予高劑量。單次給予高劑量可導(dǎo)致短暫的、比30nM高得多的bcl-2反義寡聚體血漿循環(huán)水平。并且，單次給予特別高劑量的bcl-2反義寡聚體可在大大少于12小時內(nèi)、甚至在少于1小時內(nèi)導(dǎo)致1μM至10μM的bcl-2反義寡聚體血漿循環(huán)濃度。
另外，bcl-2反義寡聚體的劑量可根據(jù)所用的特定bcl-2反義寡聚體而變化。所用的劑量很可能反映所考慮事項的平衡，特定bcl-2反義寡聚體的穩(wěn)定性、定位、細(xì)胞吸收以及毒性，則屬所考慮事項之列。例如，特定的化學(xué)修飾的bcl-2反義寡聚體可能顯示出較大的對降解的抗性，或可能顯示出對靶核酸的較高親和性，或可能顯示出被細(xì)胞或細(xì)胞核的吸收增加；上述所有情況都可允許使用低劑量。而在另一個實例中，特定的化學(xué)修飾的bcl-2反義寡聚體可顯示出比其它反義寡聚體毒性低的毒性，且因此能以高劑量使用它。因此，對于給定的一種bcl-2反義寡聚體，合適的給予劑量可以是相對高或相對低的。技術(shù)人員會知道合適的劑量，且本發(fā)明考慮了特定種類的bcl-2反義寡聚體的最適治療方案的連續(xù)評估?？稍谝粋€或更多個治療中給予所述日劑量。
在確定bcl-2反義寡聚體有效劑量方面的待考慮的其它因素包括是否將與其它治療劑聯(lián)合給予所述寡聚體。在這樣的情況下，所述其它治療劑的相對毒生可表明以低劑量使用bcl-2反義寡聚體。另一方面，用高劑量的bcl-2反義寡聚體的治療能導(dǎo)致與減少了劑量的治療劑的聯(lián)合治療。在一個特定的實施方案中，用特別高劑量的bcl-2反義寡聚體的治療能導(dǎo)致與大大減少了劑量的癌癥治療劑的聯(lián)合治療。例如，用10、20、30、40或50mg/kg/天的bcl-2反義寡聚體治療患者，能另外增加受治療者對癌癥治療劑的敏感性。在這樣的情況下，將特別高劑量的bcl-2反義寡聚體與例如一種大大縮短時間的放射治療方案聯(lián)合。在另一個實例中，特別高劑量的bcl-2反義寡聚體導(dǎo)致癌癥治療劑效力的顯著增加。
另外，特別高劑量的bcl-2反義寡聚體可進一步縮短給予治療有效量的bcl-2反義寡聚體和/或癌癥治療劑的周期，以致于治療周期的長度比14天少得多。
在一個實施方案中，給予一種18個堿基的、序列5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′的硫代磷酸酯bcl-2反義寡聚體達一個限定為少于兩周的短治療周期；該序列互補于bcl-2 mRNA的前6密碼子，且與靶RNA的相應(yīng)堿基雜交。
在一個實施方案中，按0.01mg/kg/天至10mg/kg/天的劑量給予G3139達2至13天。在一個特定的實施方案中，按0.01-1、1-2、3-4、5-6、6-7、7-8、或9-10mg/kg/天的劑量，更優(yōu)選按4-9mg/kg/天的劑量，且最優(yōu)選按5-7mg/kg/天的劑量，給予G3139達2至3天、4至5天、6至7天、8至9天、10至11天或12至13天。在另一個實施方案中，按所述的劑量給予G3139達3至9天。在再一個實施方案中，按所述的劑量給予G3139達4至7天。在一個優(yōu)選的實施方案中，按所述的劑量給予G3139達5至6天。在一個最優(yōu)選的實施方案中，按5-7mg/kg/天的劑量給予G3139達5至6天。本發(fā)明根據(jù)所用的特定bcl-2反義寡聚體、或根據(jù)特定給藥方式、或根據(jù)是否將bcl-2反義寡聚體作為聯(lián)合治療(例如與一種癌癥治療劑聯(lián)合)的一部分給予，考慮了其它優(yōu)選治療方案?？稍谝粋€或更多個治療中給予所述日劑量。
在另一個實施方案中，以大約10-50mg/kg/天的特別高的劑量，給予G3139。在一個特定的實施方案中，以大約10-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天的特別高的劑量，給予G3139。在另外一個實施方案中，以所述的劑量給予G3139達1至10天。在再一個實施方案中，按所述的劑量給予G3139達2至7天。在又一個實施方案中，以所述的劑量給予G3139達3至4天。在一個優(yōu)選的實施方案中，以26-30、3l-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天的劑量，給予G3139達最少1天。本發(fā)明根據(jù)所用的特定bcl-2反義寡聚體、或根據(jù)特定給藥方式、或根據(jù)是否將bcl-2反義寡聚體作為聯(lián)合治療(例如與一種癌癥治療劑聯(lián)合)的一部分給予，考慮了其它優(yōu)選治療方案?？稍谝粋€或更多個治療中給予所述日劑量。
5.2癌癥治療劑本文描述的本發(fā)明包括一種預(yù)防或治療癌癥的方法，所述方法包括將治療有效量的bcl-2反義寡聚體給需要這樣的治療的人，所述治療有效量的bcl-2反義寡聚體包括但不限于高劑量的寡聚體。本發(fā)明還包括短期給予一種bcl-2反義寡聚體的使用法。正常的非癌細(xì)胞以一種特定細(xì)胞類型特有的頻率分裂。如果細(xì)胞已被轉(zhuǎn)化成癌的狀態(tài)，則產(chǎn)生不受控制的細(xì)胞增生和減少了的細(xì)胞死亡；且因此，雜亂的細(xì)胞分裂或細(xì)胞生長成為癌細(xì)胞類型的一個標(biāo)志。癌的種類的實例包括但不限于非霍奇金(Hodgkin′s)淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病(例如諸如急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞白血病之類的急性白血病，慢性髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病，多發(fā)性骨髓瘤)、結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、宮頸癌、睪丸癌、肺癌、膀胱癌、黑素瘤、頭頸癌、腦癌、不知原發(fā)位點之癌、瘤、周圍神經(jīng)系統(tǒng)之癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)之癌、腫瘤(例如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因(Ewing′s)瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯(Wilms′)瘤、小細(xì)胞肺癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽覺神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、以及成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤)、重鏈病、轉(zhuǎn)移瘤、或特征在于不受控制的或異常的細(xì)胞生長的任何疾病或紊亂。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明進一步包括運用聯(lián)合治療來預(yù)防或治療癌癥。例如，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合紫杉醇、docetaxel、米托蒽醌和/或雄激素受體拮抗劑(例如氟他胺)，來治療前列腺癌。作為另一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合docetaxel、紫杉醇、順鉑、5-氟尿嘧啶、多柔比星和/或VP-16(依托泊苷)，來治療乳腺癌。作為又一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合氟達拉濱、阿糖胞苷、吉姆單抗(MYLOTARG)、柔紅霉素、甲氨蝶呤、長春新堿、6-巰基嘌呤、伊達比星、米托蒽醌、依托泊苷、天冬酰胺酶、潑尼松和/或環(huán)磷酰胺，來治療白血病。作為另一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合地塞米松，來治療骨髓瘤。作為又一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合達卡巴嗪來治療黑素瘤。作為另一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合伊立替康，來治療結(jié)腸直腸癌。作為又一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合紫杉酚、docetaxel、依托泊苷和/或順鉑，來治療肺癌。作為另一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合環(huán)磷酰胺、CHOP、依托泊苷、博萊霉素、米托蒽醌和/或順鉑，來治療非霍奇金淋巴瘤。作為又一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合順鉑，來治療胃癌。作為另一個實例，可以用包含bcl-2反義寡聚體的藥用組合物聯(lián)合吉西他濱，來治療胰腺癌。也可以用這些聯(lián)合療法來預(yù)防癌癥或癌癥的復(fù)發(fā)。
聯(lián)合治療也包括除了給予bcl-2反義寡聚體外，使用一種或更多種有助于預(yù)防或治療癌癥的分子、化合物或治療；所述分子、化合物或治療包括但不限于化療劑、免疫治療劑、癌疫苗、抗生成血管劑、細(xì)胞因子、激素治療、基因治療及放射治療。
在一個實施方案中，除了bcl-2反義寡聚體外，給予一種或更多種化療劑來治療癌癥患者。本發(fā)明所考慮的化療劑的實例包括但不限于阿糖胞苷、taxoids(例如紫杉醇、docetaxel)、抗微管蛋白劑(例如紫杉醇、docetaxel、Epothilone B、或其類似物)、順鉑、卡鉑、多柔比星、替尼泊苷(tenoposide)、米托蒽醌、2-氯脫氧腺苷、烷基化劑(例如環(huán)磷酰胺、氮芥、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安、二溴甘露醇、鏈佐星、絲裂霉素C以及順式二氯二胺鉑(II)(DDP)-順鉑、硫替派)、抗生素(例如放線菌素D(從前的放線菌素)、博萊霉素、普卡霉素、安曲霉素)、抗代謝物(例如甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟達拉濱、吉西他濱、達卡巴嗪、替莫唑胺)、天冬酰胺酶、卡介菌、白喉毒素、六甲蜜胺、羥基脲、LYSODREN、核苷酸類似物、植物生物堿(例如商品紫杉醇制劑、紫杉醇、喜樹堿、托泊替康、伊立替康(CAMPTOSAR、CPT-11)、長春新堿、長春花生物堿例如長春堿)、鬼臼毒素(包括衍生物例如表鬼臼毒素、VP-16(依托泊苷)、VM-26(替尼泊苷))、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、依米丁、絲裂霉素、丙卡巴肼、氮芥、蒽環(huán)霉素(anthracyclines)(例如柔紅霉素(以前的道諾霉素)、多柔比星、多柔比星脂質(zhì)體)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌、普卡霉素、放線菌素D、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤霉素、抗有絲分裂劑、相思豆毒素、蓖麻毒蛋白A、假單胞菌外毒素、神經(jīng)生長因子、血小板衍生生長因子、組織纖溶酶原激活物、阿地白介素、allutamine、阿那曲唑、比卡魯胺、biaomycin、白消安、卡培他濱、卡鉑、苯丁酸氮芥(chlorabusil)、克拉屈濱、阿糖胞苷(cylarabine)、放線菌素D(daclinomycin)、雌莫司汀、氟尿苷(floxuridhe)、吉西他濱、gosereine、伊達比星、異環(huán)磷酰胺(itosfamide)、醋酸亮丙立德(lauprolide acetate)、左旋咪唑、洛莫司汀(lomusline)、氮芥、magestrol、乙酸鹽、巰基嘌呤、巰乙磺酸鈉、二溴衛(wèi)矛醇(mitolanc)、培門冬酶、噴司他丁(pentoslatin)、普卡霉素(picamycin)、利妥昔單抗(riuxlmab)、campath-l、鏈佐星(straplozocin)、 硫代鳥嘌呤、維A酸、長春瑞濱，或者其任何片段、家族成員或衍生物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明也考慮了包含一種或更多種化療劑(例如FLAG、CHOP)的組合物。FLAG包括氟達拉濱、阿糖胞苷(Ara-C)和G-CSF。CHOP包括環(huán)磷酰胺、長春新堿、多柔比星和潑尼松。
在一個實施方案中，所述化療劑為按200-4000mg/m2/周期之劑量的達卡巴嗪。在一個優(yōu)選實施方案中，所述劑量從700mg/m2/周期至1000mg/m2/周期。在另一個實施方案中，所述化療劑為按25-50mg/m2/周期之劑量的氟達拉濱。在再一個實施方案中，所述化療劑為按200-2000mg/m2/周期之劑量的阿糖胞苷(Ara-C)。在另一個實施方案中，所述化療劑為按1.5-7.5mg/kg/周期之劑量的多西他賽。在另一個實施方案中，所述化療劑為按5-15mg/kg/周期之劑量的紫杉醇。在再一個實施方案中，所述化療劑為按5-20mg/kg/周期之劑量的順鉑。在又一個實施方案中，所述化療劑為按5-20mg/kg/周期之劑量的5-氟尿嘧啶。而在另一實施方案中，所述化療劑為按2-8mg/kg/周期之劑量的多柔比星。在又一個實施方案中，所述化療劑為按40-160mg/kg/周期之劑量的表鬼臼毒素。還在另一個實施方案中，所述化療劑為按50-200mg/kg/周期之劑量的環(huán)磷酰胺。在再一個實施方案中，所述化療劑為按50-75mg/kg/周期、75-100mg/kg/周期、100-125mg/kg/周期或125-150mg/m2/周期之劑量的伊立替康。在又一個實施方案中，所述化療劑為按3.7-5.4mg/m2/周期、5.5-7.4mg/m2/周期、7.5-11mg/m2/周期或11-18.5mg/m2/周期之劑量的長春堿。在又一個實施方案中，所述化療劑為按0.7-1.4mg/m2/周期或1.5-2mg/m2/周期之劑量的長春新堿。而在另一實施方案中，所述化療劑為按3.3-5mg/m2/周期、5-10mg/m2/周期、10-100mg/m2/周期或100-1000mg/m2/周期之劑量的甲氨蝶呤。
在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明則進一步包括使用作為bcl-2反義寡聚體治療方案的一部分給予的低劑量的化療劑。例如，用bcl-2反義寡聚體的初期治療增加了腫瘤對后來的用一種劑量化療劑攻擊的敏感性；所述劑量接近或低于當(dāng)不用bcl-2反義寡聚體時所給予的化療劑劑量范圍的下限。在一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚物體和低劑量(例如6-60mg/m2天、或更少)的多西他賽給予癌癥患者。在另一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚體和低劑量(例如10-135mg/m2/天或更少)的紫杉醇給予癌癥患者。在再一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚體和低劑量(例如2.5-25mg/m2/天或更少)的氟達拉濱給予癌癥患者。在又一個實施方案中，將bcl-2反義寡聚體和低劑量(例如0.5-1.5g/m2/天或更少)的阿糖胞苷(Ara-C)給予癌癥患者。
因此，本發(fā)明考慮了使用一種或更多種bcl-2反義寡聚體以及低劑量的化療劑來預(yù)防或治療癌癥，在給予低劑量化療劑之前、之后或同時，給予bcl-2反義寡聚體。
在一個實施方案中，所述化療劑為順鉑，例如PLATINOL或PLATINOL-AQ(Bristol Myers)，按5-10mg/m2/周期、10-20mg/m2/周期、20-40mg/m2/周期或40-75mg/m2/周期的劑量。在另一個實施方案中，將7.5-75mg/m2/周期之劑量的順鉑給予患有卵巢癌的患者。在再一個實施方案中，將5-50mg/m2/周期之劑量的順鉑給予患有膀胱癌的患者。
在另一個實施方案中，所述化療劑為卡鉑，例如PARAPLATIN(Bristol Myers)，按2-4mg/m2/周期、4-8mg/m2/周期、8-16mg/m2/周期、16-35mg/m2/周期或35-75mg/m2/周期的劑量。在再一個實施方案中，將7.5-75mg/m2/周期之劑量的卡鉑給予患有卵巢癌的患者。在另一個實施方案中，將5-50mg/m2/周期之劑量的卡鉑給予患有膀胱癌的患者。在另一個實施方案中，將2-20mg/m2/周期之劑量的卡鉑給予患有睪丸癌的患者。
在另一個實施方案中，所述化療劑為環(huán)磷酰胺，例如CYTOXAN(Bristol Myers Squibb)，按0.25-0.5mg/kg/周期、0.5-1mg/kg/周期、1-2mg/kg/周期、2-5mg/kg/周期、5-10mg/kg/周期、10-20mg/kg/周期、20-40mg/kg/周期的劑量。在另一個實施方案中，將劑量4-40mg/kg/周期的環(huán)磷酰胺給予患有惡性癌癥的患者。在另一個實施方案中，將劑量0.25-2.5mg/kg/周期的環(huán)磷酰胺給予患有非惡性癌的患者。
在一個實施方案中，所述化療劑為阿糖孢苷，例如CYTOSAR-U(Pharmacia & Upjohn)，按0.5-1、1-4、4-10、10-25、25-50或50-100mg/m2/周期的劑量。在另一個實施方案中，將劑量10-100mg/m2/周期的阿糖孢苷給予患有急性白血病的患者。在另一個實施方案中，將劑量0.5-5mg/m2/周期的阿糖孢苷給予患有腦膜白血病的患者。在另一個實施方案中，將劑量5-50mg/m2/周期的阿糖孢苷脂質(zhì)體例如DEPOCYT(Chiron Corp.)，給予患有癌癥的患者。
在另一個實施方案中，所述化療劑為達卡巴嗪，例如DTIC或DTIC-DOME(Bayer Corp.)，按15-250mg/m2/周期或0.2-2mg/m2/周期的劑量。在另一個實施方案中，將劑量15-150mg/m2/周期的達卡巴嗪給予患有霍奇金氏病的患者。在另一個實施方案中，將劑量0.2-2mg/m2/周期的達卡巴嗪給予患有惡性黑素瘤的患者。
在另一個實施方案中，所述化療劑為托泊替康，例如HYCAMTIN(SmithKline Beecham)，按0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8或0.8-1.5mg/m2/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為伊立替康，例如CAMPTOSAR(Pharmacia & Upjohn)，按5-10、10-25或25-50mg/m2/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為氟達拉濱，例如FLUDARA(Berlex Laboratories)，按2.5-5、5-10、10-15或15-25mg/m2/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為按200-2000mg/m2/周期之劑量的阿糖胞苷(Ara-C)。
在另一個實施方案中，所述化療劑為多西他賽，例如TAXOTERE(Rhone Poulenc Rorer)，按6-10、10-30或30-60mg/m2/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為紫杉醇，例如TAXOL(BristolMyers Squibb)，按10-20、20-40、40-70或70-135mg/kg/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為按0.5-5mg/kg/周期之劑量的5-氟尿嘧啶。
在另一個實施方案中，所述化療劑為多柔比星，例如ADRIAMYCIN(Pharmacia & Upjohn)、DOXIL(Adza)、RUBEX(BristolMyers Squibb)，按2-4、4-8、8-15、15-30或30-60mg/kg/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為依托泊苷，例如VEPESID(Pharmacia & Upjohn)，按3.5-7、7-15、15-25或25-50mg/m2/周期的劑量。在另一個實施方案中，將劑量5-50mg/m2/周期的依托泊苷給予患有睪丸癌的患者。在另一個實施方案中，將劑量3.5-35mg/m2/周期的依托泊苷給予患有小細(xì)胞肺癌的患者。
在另一個實施方案中，所述化療劑為長春堿，例如VELBAN(EliLilly)，按0.3-0.5、0.5-1、1-2、2-3或3-3.7mg/m2/周期的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為長春新堿，例如ONCOVIN(Eli Lilly)，按0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.7mg/m2/周期范圍內(nèi)而變動的劑量。
在另一個實施方案中，所述化療劑為甲氨蝶呤，按0.2-0.9、1-5、5-10、10-20的劑量。
在另一個實施方案中，聯(lián)合一種或更多種免疫治療劑給予bcl-2反義寡聚體，所述免疫治療劑例如抗體和免疫調(diào)節(jié)劑，它們包括但不限于rituxan、利妥昔單抗、campath-l、吉姆單抗或曲妥單抗。
在另一個實施方案中，聯(lián)合一種或更多種抗血管生成劑給予bcl-2反義寡聚體，所述抗血管生成劑包括但不限于血管生長抑素、沙利度胺、kringle 5、內(nèi)皮生長抑素、Serpin(絲氨酸蛋白酶抑制劑)抗凝血酶、纖連蛋白之29kDa N-末端蛋白水解片段和40kDa的C-末端蛋白水解片段、催乳激素的16kDa的蛋白水解片段、血小板因子-4的7.8kDa的蛋白水解片段、對應(yīng)于血小板因子-4片段的13個氨基酸之肽(Maione等，1990，Cancer Res.512077-2083)、對應(yīng)于膠原I片段的14個氨基酸之肽(Tolma等，1993，J.Cell Biol.122497-511)、對應(yīng)于血小板致敏蛋白I片段的19個氨基酸之肽(Tolsma等，1993，J.Cell Biol.122497-511)、對應(yīng)于SPARC片段的20個氨基酸之肽(Sage等，1995，J.Cell.Biochem.571329-1334)，或者其任何片段、家族成員或衍生物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
此外已經(jīng)描述了抑制血管生成并且對應(yīng)于層粘連蛋白、纖連蛋白、原膠原和EGF之片段的其它肽(參見Cao的綜述1998，Prog.Mol.Subcell.Biol.20161-176)。已證明阻滯與RGD蛋白(即具有肽基序Arg-Gly-Asp)結(jié)合的某些整聯(lián)蛋白的單克隆抗體和環(huán)五肽，具有抗血管形成的活性(Brooks等，1994，Science 264569-571；Hammes等，1996，Nature Medicine 2529-533)。此外，用受體拮抗劑抑制尿激酶纖溶酶原激活物的受體而抑制血管生成、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移(Min等，1996，CancerRes.562428-33；Crowley等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 905021-25)。本發(fā)明也考慮了這樣的抗血管生成劑的使用。
在另一個實施方案中，聯(lián)合放射方案給予bcl-2反義寡聚體。
在另一個實施方案中，聯(lián)合一種或更多種細(xì)胞因子給予bcl-2反義寡聚物體，所述細(xì)胞因子包括但不限于淋巴因子、腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子樣細(xì)胞因子、淋巴毒素-α、淋巴毒素-β，干擾素-α、干擾素-β，巨噬細(xì)胞炎性蛋白、粒細(xì)胞單核細(xì)胞集落刺激因子、白細(xì)胞介素(包括但不限于白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-12、白細(xì)胞介素-15、白細(xì)胞介素-18)、OX40，CD27、CD30、CD40或CD137配體，F(xiàn)as-Fas配體、4-1BBL、內(nèi)皮單核細(xì)胞活化蛋白；或者其任何片段、家族成員或衍生物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
還在另一實施方案中，聯(lián)合癌疫苗給予bcl-2反義寡聚體。癌疫苗的實例包括但不限于自體的細(xì)胞或組織、非自體的細(xì)胞或組織、癌胚抗原、甲胎蛋白、人絨毛膜促性腺激素、BCG活疫苗、黑素細(xì)胞譜系蛋白(例如gap100、MART-1/MelanA、TRP-1(gp75)、酪氨酸酶、廣泛分享的腫瘤特異性抗原(例如BAGE、GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-3、N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶-V、p15)、突變的腫瘤特異性抗原(β-連環(huán)蛋白、MUM-1、CDK4)、非黑素瘤的抗原(例如HER-2/neu(乳腺癌和卵巢癌)、人乳頭瘤病毒-E6、人乳頭瘤病毒-E7(宮頸癌)、MUC-1(乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌))。至于由T細(xì)胞識別的人腫瘤抗原，通常參見Robbins和Kawakami，1996，Curr.Opin.Immunol.8628-36。癌疫苗可以是純化的制劑，或者可以不是純化的制劑。
而在另一個實施方案中，與激素治療結(jié)合使用bcl-2反義寡聚體。激素治療性治療包括激素激動劑、激素拮抗劑(例如氟他胺、他莫昔芬、醋酸亮丙立德(LUPRON))以及類固醇(例如地塞米松、類視色素、倍他米松、皮質(zhì)醇、可的松、潑尼松、去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素、雌激素、睪酮、孕酮)。
又在另一個實施方案中，與治療癌癥的基因治療方案結(jié)合使用bcl-2反義寡聚體。
在一個實施方案中，于一個短治療周期中，將bcl-2反義寡聚體與至少一種癌治療劑聯(lián)合給予癌癥患者，以治療癌癥。在一個實施方案中，所述治療周期從2天到13天。在另一個實施方案中，所述治療周期從3天到9天。在再一個實施方案中，所述治療周期從4天到7天。在再一個實施方案中，所述治療周期從5天到6天。用癌治療劑治療的周期可根據(jù)所用的特定癌治療劑而變化。本發(fā)明也考慮了不連續(xù)給藥或分成幾個部分給予的一日量。技術(shù)人員會知道特定的癌治療劑的合適治療時間，且本發(fā)明考慮了對于每種癌癥治療劑的最佳治療方案的連續(xù)評估。
本發(fā)明設(shè)想在至少一個周期期間，優(yōu)選在多于一個周期期間，給予單一的治療劑或一系列治療劑。在一個優(yōu)選實施方案中，該周期少于14天。在一個實施方案中，一個周期長10-13天。在一個優(yōu)選實施方案中，一個周期長7-9天。在最優(yōu)選的一個實施方案中，一個周期長5-6天。技術(shù)人員會知道一個周期的合適時間，同樣會知道總的周期數(shù)和周期之間的間隔。本發(fā)明考慮了連續(xù)評估每種bcl-2反義寡聚體與癌治療劑的最佳治療方案。
5.3藥用組合物本發(fā)明另外供給包含bcl-2反義寡聚體及藥學(xué)上可接受載體的藥用組合物。合適的藥學(xué)上可接受的載體包括基本上化學(xué)惰性的且無毒的、不干擾藥用組合物生物活性之效力的組分。合適的藥用載體的實例包括但不限于鹽水溶液、甘油溶液、乙醇、N-(1(2，3-二油氧)丙基)-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)、二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)以及脂質(zhì)體。這樣的組合物應(yīng)該含有治療有效量的所述化合物以及適量的載體，以便提供可供適當(dāng)給予患者的形式。該制劑應(yīng)該適合給藥的方式。例如，口服給藥需要腸溶衣來保護反義寡聚體，從而在胃腸道內(nèi)免遭降解。在另一個實例中，可以以脂質(zhì)體制劑的形式給予所述反義寡聚體，從而使反義寡聚體與降解酶隔離，促進循環(huán)系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)運，以及實現(xiàn)越過細(xì)胞膜而送遞到細(xì)胞內(nèi)位點。
在另一個實施方案中，藥用組合物包括bcl-2反義寡聚體和一種或更多種治療劑以及藥學(xué)上可接受的載體。在一個特定的實施方案中，藥用組合物包括bcl-2反義寡聚體和一種或更多種的癌治療劑以及藥學(xué)上可接受的載體。
在一個實施方案中，有或沒有其它治療劑、包含bcl-2反義寡聚體以及藥學(xué)上可接受載體的藥用組合物，是按有效劑量的。
在一個實施方案中，所述藥用組合物包括bcl-2反義寡聚體及藥學(xué)上可接受的一種載體；該bcl-2反義寡聚體按大約0.01-0.1、0.1-1、1-5或6-10mg/g/天的劑量，優(yōu)選按4-9mg/kg/天的劑量，更優(yōu)選按5-7mg/Kg/天的劑量。所給予的任何特定反義寡聚體的實際量可隨幾個因素而定，例如癌的類型、反義寡聚體對機體正常細(xì)胞的毒性、反義寡聚體被腫瘤細(xì)胞吸收的吸收率以及給予反義寡聚體之個體的體重和年齡。因為體內(nèi)存在許多可干擾反義寡聚體作用或生物活性的因素，所以，反義寡聚體的有效量可以因各個個體而變化。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥用組合物包含特別高劑量的bcl-2反義寡聚物體，所述高劑量大約從10mg/Kg/天到50mg/kg/天。在一個具體的實施方案中，于一個治療周期期間，給予特別高劑量的bcl-2反義寡聚物體，所述高劑量即11-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45或46-50mg/kg/天。
優(yōu)選有效劑量的選擇可以由技術(shù)人員基于幾種本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會知道的因素的考慮來確定(例如通過臨床試驗)。這樣的因素包括反義寡聚體的特定形式，所述寡聚體的藥代動力學(xué)參數(shù)例如生物利用率、代謝、半衰期等等；所述反義寡聚體的特定形式是在一般采用的開發(fā)過程期間、為了獲得藥用化合物的管理批準(zhǔn)而確定的。在考慮劑量方面的另外因素包括所要治療的疾病、患者體內(nèi)要獲得的益處、患者的體重、患者的免疫狀況、給藥的途徑、反義寡聚體或聯(lián)合治療劑的給予是急性的還是慢性的、相伴的藥物治療、以及有技術(shù)人員已知的影響所給予藥劑效力的其它因素。
可以將本發(fā)明的組合物配制成中性形式或鹽形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括與游離氨基形成的那些鹽，例如由鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等等衍生的那些鹽；以及與游離羧基形成的那些鹽，例如由氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等等衍生的那些鹽。
在一個優(yōu)選實施方案中，按照常規(guī)步驟將組合物配制作為一種適合于皮下注射或靜脈內(nèi)給予人的藥用組合物。用于皮下注射或靜脈內(nèi)給予的組合物一般是含水的無菌等滲緩沖溶液。必要時，所述組合物也可以包含增溶劑和局部麻醉藥例如利多卡因，以減輕注射位點的疼痛。所述成分通常以單位劑型或者分開地、或者混合供應(yīng)，例如以一種在熔封容器如安瓿或小藥囊(sachette)中的、指出了活性劑量的凍干粉或無水濃縮物形式供應(yīng)。在打算通過輸注給予所述組合物的情況下，可以用含有藥品級無菌水、無菌鹽水或其它可接受無菌稀釋劑的輸液瓶、袋或其它可接受容器，來配制所述組合物。在通過注射給予所述組合物的情況下，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，以便在給藥之前可混合所述成分。
5.4給藥方式本發(fā)明藥用組合物的給予包括但不限于口服、靜脈內(nèi)輸注、皮下注射、肌內(nèi)給予、局部給予、貯存(depo)注射、植入、定時釋放方式、腔內(nèi)給予、鼻內(nèi)給予、吸入、腫瘤內(nèi)給予、眼內(nèi)給予、以及控釋。也可以非腸道地、經(jīng)粘膜(例如經(jīng)口)、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸、陰道內(nèi)、舌下、粘膜下或透皮引入本發(fā)明的藥用組合物。給藥最好是非腸道的，即不通過消化道而是通過其它某些途徑，例如通過靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼眶內(nèi)、囊內(nèi)、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)、動脈內(nèi)或真皮內(nèi)給藥。技術(shù)人員能意識到在選擇給藥方式方面將考慮的具體優(yōu)點與缺點。本發(fā)明包括多種給藥方式。例如，通過皮下注射給予bcl-2反義寡聚體，而通過靜脈內(nèi)輸注給予一種聯(lián)合治療劑。此外，一種或多種bcl-2反義寡聚體與其它治療劑或在沒有其它治療劑的情況下的給予可以同時進行(即共同時給予)或順序進行。例如，首先給予bcl-2反義寡聚體，來增加腫瘤對隨后給予的癌治療劑或放射治療的敏感性。在另一個實施方案中，給予一種或更多種bcl-2反義寡聚體以及給予或不給予其它治療劑的給藥時期可以重疊。例如，給予bcl-2反義寡聚體達7天，且在bcl-2反義寡聚體治療的第五天開始加入第二種治療劑；而用所述第二種治療劑的治療延續(xù)至7天的bcl-2反義寡聚體治療之后。
可提供適合于口服給藥的藥用組合物，例如，以膠囊或片劑形式，以散劑或顆粒劑形式，以溶液、糖漿或混懸劑形式(用含水或非水液體)，以可食用的泡沫劑(foam)或氣泡體(whips)形式，或者以乳劑形式來提供。片劑或硬明膠膠囊可包含例如乳糖、淀粉或其衍生物、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂、硬脂酸或其鹽。軟明膠膠囊可包含例如植物油、蠟、脂肪、半固體或液態(tài)多元醇等等。溶液和糖漿可包含例如水、多元醇和糖。
可以用一種在胃腸道中延遲活性劑分解或影響活性劑吸收的材料(例如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯)來給準(zhǔn)備用作口服給予的活性劑包衣，或者將準(zhǔn)備用作口服給予的活性劑與該種材料混合。因此，例如可實現(xiàn)一種活性劑在許多小時內(nèi)持續(xù)釋放；且必要時，可保護該活性劑，使其在胃腸道內(nèi)免于被降解?？衫醚刂改c道的不同pH和酶的條件，配制用于口服給予的藥用組合物，而便于活性劑在特定的胃腸位置釋放。
適合于非腸道給予的藥用組合物包括但不限于含水或非水的無菌注射溶液或混懸劑，所述溶液或混懸劑可包含抗氧化劑、緩沖劑、制菌劑以及使所述組合物變得與預(yù)定接受者之血液大體上等滲的溶質(zhì)?？梢源嬖谟谶@樣組合物中的其它組份包括例如水、醇類、多元醇、甘油以及植物油?？梢栽趩挝粍┝咳萜骰蚨鄤┝咳萜鳎缑芊獾陌碴郴蚬苄纹恐?，提供適合于非腸道給予的組合物；且可以以凍干(冷凍干燥)狀態(tài)貯藏適合于非腸道給予的組合物，所述組合物在臨用之前需要添加液態(tài)的無菌載體，例如注射用的無菌鹽水溶液。可以由無菌的散劑、顆粒劑或片劑制備臨時的注射溶液和混懸劑。這樣的組合物應(yīng)該包含治療有效量的bcl-2反義寡聚體或其它治療劑以及適量的載體，以便提供適合于給予患者的形式。所述制劑應(yīng)該適合給藥的方式。
可以以分開的、計劃與表皮保持緊密接觸達延長的時期的貼劑形式，提供適合于經(jīng)皮給予的藥用組合物?？梢砸岳畿浉?、乳膏、混懸劑、洗劑、散劑、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油的形式，提供適合于局部給予的藥用組合物。最好將局部用軟膏或乳膏用于局部給予皮膚、口、眼睛或其它外部組織。如果以軟膏的形式配制，則可以或者與軟膏石蠟基質(zhì)、或者與水可混合的軟膏基質(zhì)一起使用該活性成分。另一方面，可以用具有一種水包油基質(zhì)或油包水基質(zhì)的乳膏，來配制該活性成分。
適合于局部給予眼的藥用組合物包括例如滴眼劑或注射用組合物。在這些組合物中，可以將活性成分溶解或懸浮于合適的載體中；所述載體包括例如一種有或沒有羧甲基纖維素的含水溶劑。適合于口中局部給予的藥用組合物包括例如錠劑、軟錠劑以及漱口劑。
適合于鼻給藥的藥用組合物可包括固體載體例如粉末(最好是具有在20至500微米范圍內(nèi)的粒徑)。可采用鼻吸藥的方式，即靠從拿近鼻的容器經(jīng)鼻快速吸入散劑，來給予散劑。另一方面，適合于鼻給藥的組合物可包括液體載體例如鼻噴霧劑或滴鼻劑。這些組合物可包括所述活性成分的水溶液或油溶液。由吸入而給予的組合物可在特別配合的裝置中供應(yīng)，所述裝置包括但不限于加壓的氣霧劑、噴霧器或吹入器；可以制造這樣的裝置，以便提供預(yù)定劑量的活性成分。
可以以栓劑或灌腸劑的形式，提供適合于直腸給予的藥用組合物?？梢岳缫躁幍浪ā⒚奕?、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑的形式，提供適合于陰道給予的藥用組合物。
在一個實施方案中，通過一個控釋系統(tǒng)來送遞本發(fā)明的藥用組合物。例如，可采用靜脈內(nèi)輸注、可植入的滲透泵、經(jīng)皮貼劑、脂質(zhì)體或其它給藥方式，來給予藥用組合物。在一個實施方案中，可使用一種泵(參見例如Langer，1990，Science 2491527-33；Sefton，1987，CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14201；Buchwald等，1980，Surgery 88507；Saudek等，1989，N.Engl.J.Med.321574)。在另一個實施方案中，可以用一種載體，特別是用一種脂質(zhì)體，來送遞該化合物(參見例如Langer，Science 2491527-33(1990)；Treat等，1989，載于Liposoms inthe Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein和Fidler(編輯)，Liss，New York，第353-65頁；Lopez-Berestein，出處同上，第317-27頁；WO 91/04014號國際專利公開說明書，第4,704,355號美國專利)。在另一個實施方案中，可使用聚合材料(參見例如MedicalApplications of Controlled Release，Langer和Wise(編輯)，CRC PressBoca Raton，F(xiàn)lorida，1974；Controlled Drug Bioavailability，Drug ProductDesign and Performance，Smolen和Ball(編輯)，WileyNew York(1984)；Ranger和Peppas，1953，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361；Levy等，1985，Science 228190；During等，1989，Ann.Nettrol.25351；Howard等，1989，J.Neurosurg.71105)。
在再一個實施方案中，可以將控釋系統(tǒng)置于靶的附近。例如，微量泵可直接送遞所控制的劑量到腦中，因此，僅需要全身劑量的一部分(參見例如Goodson，1984，載于Medical Applications of ControlledRelease，vol.2，第115-138頁)。
在一個實施方案中，可能理想的是將本發(fā)明的藥用組合物局部給予到需要治療的區(qū)域；例如但不限于在外科手術(shù)期間通過局部輸注、通過局部敷用(例如在外科手術(shù)后連同一種傷口敷料一起)、通過注射、用導(dǎo)管、用栓劑或通過植入，可實現(xiàn)這一步。植入物可以是一種多孔材料、非多孔材料或膠狀材料，包括例如硅橡膠(sialastic)膜的膜或纖維。
栓劑通常包含在0.5％至10％(重量)范圍內(nèi)的活性成分?？诜苿┳詈煤?0％至95％(重量)的活性成分。
可以在給予一種或更多種治療劑之前、期間、和/或之后，給予bcl-2反義寡聚體。在一個實施方案中，可以首先給予bcl-2反義寡聚體以減少bcl-2的表達；這增加腫瘤對隨后的用癌治療劑攻擊的敏感性。在另一個實施方案中，可以在給予癌治療劑之后給予bcl-2反義寡聚體，以減少腫瘤的bcl-2表達；這能阻止腫瘤的抗性，且因此防止復(fù)發(fā)或防止對癌治療劑的反應(yīng)最小化。在再一個實施方案中，在給予bcl-2反義寡聚體和給予一種或更多種治療劑之間，可以有一段重疊期。
本發(fā)明進一步提供包含聯(lián)合一種癌治療劑的有效量的bcl-2寡聚體的藥用試劑盒，來防止或治療bcl-2相關(guān)疾病。在一個實施方案中，可以將有效量的bcl-2寡聚體和藥學(xué)上可接受的載體包裝到單劑量的小瓶或其它容器中。在一個特定的實施方案中，所述bcl-2寡聚體包含G3139(SEQ.ID.NO.17)。所述試劑盒可包含填充有一種或更多種本發(fā)明藥用組合物成分的一個或更多個容器。這樣的容器可以任選地帶有由管理藥品或生物制品之制造、使用或銷售的政府機構(gòu)規(guī)定形式的簡介，所述簡介反映由制造、使用或銷售的管理機構(gòu)批準(zhǔn)給予人類。
通過參考下面非限制性的實施例，可更好地理解本發(fā)明；所述實施例僅僅作為本發(fā)明的示范而被提供。提供下面的實施例以更充分地闡明本發(fā)明優(yōu)選的實施方案。然而，決不應(yīng)該把它們認(rèn)作是限制范圍更廣的本發(fā)明。
6.實施例1BCL-2反義治療使惡性黑素瘤化學(xué)致敏本實施例表明將bcl-2反義寡聚體成功地應(yīng)用于治療患有晚期惡性黑素瘤的患者。在這項研究中，聯(lián)合一種化療劑，將所述寡聚體按5.3mg/kg/天或6.5mg/kg/天系統(tǒng)性地給予用bcl-2反義寡聚體治療的六位患者達7天。在這個實施例中報道的研究結(jié)果表明如果以高劑量給予bcl-2反義寡聚體達短的時期，則該治療顯示出按通常的毒性標(biāo)準(zhǔn)評價的低毒性，減少腫瘤內(nèi)的Bcl-2，促進細(xì)胞凋亡，且導(dǎo)致目標(biāo)瘤響應(yīng)以及患者的生存延長。在有反應(yīng)的患者之中，包括幾位患有“治療抗性癌”的患者，他們在用標(biāo)準(zhǔn)抗癌劑治療期間經(jīng)歷了進行性的疾??；在所述標(biāo)準(zhǔn)抗癌劑治療中，用標(biāo)準(zhǔn)藥劑例如單獨使用的達卡巴嗪，會得到極小的好處或得不到預(yù)期的益處。比較起來，用bcl-2反義寡聚體和達卡巴嗪的聯(lián)合治療導(dǎo)致意想不到的持久反應(yīng)和延長的生存。此外，在5位患者使用較高劑量達較短時期的一個隨訪研究中，當(dāng)按7mg/kg/天系統(tǒng)性地給予bcl-2反義寡聚體達5天時，則顯示了令人滿意的耐受性。因此，所述結(jié)果表明以高劑量給予bcl-2反義寡聚體達一個短的時期是一種安全而有效的治療黑素瘤的療法。在這項研究中概述的方法，則提供了一個可廣泛適用的治療其它類型癌癥的策略。
6.1.材料與方法對于這種I/II期的劑量逐步升級研究，患有IV期轉(zhuǎn)移性黑素瘤的十四位患者，如果他們有可測量的病，且如果皮膚轉(zhuǎn)移瘤便于活組織檢查以及根據(jù)蛋白質(zhì)印跡分析BCL-2表達最初是陽性的(表1)，則是合格的。要求患者有正常的腎功能、肝功能以及造血功能，且在進入這項研究之前的四周，沒有進行化學(xué)治療或免疫治療。
以連續(xù)靜脈輸注(CIV)的形式，靠一臺非臥床式輸注泵(Sims DeltecInc.，St.Paul，MN，USA)，通過中央靜脈導(dǎo)管，給予BCL-2反義寡聚體(序列5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′)達14天。在14天BCL-2反義寡聚體治療的第5天直至第9天，用一條單獨的外周靜脈導(dǎo)管，按用1小時輸注而給予的200mg/m2/天的劑量，給予DTIC達5天。每月一次重復(fù)治療周期。按0.6mg/kg/天，開始劑量的逐步升級；且以1.3、1.7、2.1、3.1、4.1、5.3和6.5mg/kg/天的BCL-2反義寡聚體(ASO)繼續(xù)。一旦在至少3位患者的人群中確定了在一種給定劑量水平的安全性，則使新的患者群按下一個更高的劑量水平進入研究(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)。重復(fù)28天的周期，并在兩周的觀察期之后，在穩(wěn)定的或有反應(yīng)的患者中，允許患者體內(nèi)劑量的逐步升級。
為了用可替換的途徑與方案獲得臨床經(jīng)驗，以5.3mg/kg/天或6.5mg/kg/天治療的人群中的六位患者，接受了其第一個通過靜脈內(nèi)輸注的周期；然后，使給藥方式轉(zhuǎn)變成后來周期中的皮下(SC)給予BCL-2反義寡聚體。這些通過SC途徑治療的患者在第1天一直到第7天接受了通過每日兩次SC注射給予的、同樣的總一日量；且在第5天，以一小時輸注形式聯(lián)合給予DTIC 800mg/m2。
在每個治療周期之后，用患有皮膚轉(zhuǎn)移瘤患者的卡尺測量結(jié)果和詳細(xì)的相片記錄，來評定抗腫瘤效應(yīng)；且確證內(nèi)臟轉(zhuǎn)移瘤，并繼之以計算機體層攝影術(shù)掃描。使用WHO的標(biāo)準(zhǔn)來進行腫瘤反應(yīng)的分類，且要求持續(xù)至少4周的一系列記錄。將完全反應(yīng)定義為可檢測轉(zhuǎn)移瘤的消失。將部分反應(yīng)定義為可測量轉(zhuǎn)移瘤的50％或更多的減小。在患者于一個器官中顯示出數(shù)目眾多的轉(zhuǎn)移瘤的情況下情況下，記錄基線時5個靶病灶的最大值，然后測量反應(yīng)?？蓽y量疾病超過25％的增強、或者新的轉(zhuǎn)移性病灶出現(xiàn)，被定義為進行性疾病。另外，靶病灶直徑消退不足50％但超過25％的情況稱為較小反應(yīng)。所有其它的情況定義為穩(wěn)定性疾病。從該方案首次治療時開始，評價存活情況。
毒性以通常的毒性標(biāo)準(zhǔn)來評分，并且在給藥期間每日監(jiān)測，然后在各周期之間每周進行監(jiān)測。在治療周期之間的2周內(nèi)不能消除的任何治療相關(guān)的III級或IV級毒性被認(rèn)為是劑量限制性毒性。在治療之前0時，然后在第2、3、5、6、10和14天，在接受2周靜脈輸注BCL-2ASO的患者中收集血漿樣品，以測量BCL-2反義寡聚體的藥代動力學(xué)；在腹部通過皮下大劑量注射接受BCL-2反義寡聚體的患者中測量BCL-2反義寡聚體的12小時藥代動力學(xué)分布圖。由Pharmanalyt(Baden，Austria)，用HPLC(Chen等，1997，J.Chromatogr.B.Biomed.Sci.Appl.69243-51)分析BCL-2反義寡聚體的血漿水平。
分別采用蛋白質(zhì)印跡法和TUNEL法(Jansen等，1998，Nat.Med.4(2)232-4)，評價BCL-2的表達和黑素瘤轉(zhuǎn)移瘤的凋亡速率。由于有技術(shù)限制，與基線水平相比低于20％的BCL-2降低不被認(rèn)為是顯著性的。與測量反應(yīng)所用的靶病灶相似，根據(jù)大小、位置和臨床特征來選擇活檢的腫瘤。在基線時和在給予DTIC之前的每個BCL-2反義寡聚體劑量水平的第5天，進行皮膚黑素瘤轉(zhuǎn)移瘤的切除活組織檢查；獲得直到周期的第14天的另外的活檢樣品，以便提供關(guān)于聯(lián)合的BCL-2反義寡聚體和DTIC治療的效應(yīng)的資料。已經(jīng)調(diào)查了每個劑量水平的每位患者的總共2-4個腫瘤活檢樣品。根據(jù)常規(guī)組織病理學(xué)評估蛋白質(zhì)印跡和TUNEL分析所用的腫瘤活檢樣品的部分，以確保一致的腫瘤細(xì)胞含量以及限制活檢樣品中非腫瘤細(xì)胞的混淆不清的效應(yīng)。
6.2結(jié)果按照以上概述的兩種治療方案(I.V.或S.C.)，用BCL-2反義寡聚體(0.6-6.5mg/kg/天)與DTIC聯(lián)合治療了總共14位患者。
在連續(xù)靜脈輸注1天后，觀測到BCL-2反義寡聚體的穩(wěn)態(tài)血漿水平，并且該水平隨給予的劑量呈線性增加。BCL-2反義寡聚體劑量＞1.7mg/kg/天，導(dǎo)致一致的超過1μg/μl的穩(wěn)態(tài)血漿水平，這是用動物模型所確定的有生物活性的血漿水平(Raynaud等，1997，J.Pharmacol.Exp.Ther.281420-7)。按6.5mg/kg/天，24小時達到6.47μg/ml+/-SD＝2.51μg/ml的平均穩(wěn)態(tài)血漿水平。每日兩次SC大劑量注射給予的BCL-2反義寡聚體的血漿水平在12小時期間為鐘形。以12小時的間隔，給予的在SC注射3.25mg/kg劑量后3-4小時，觀測到8.6μg/ml+/-SD＝1.26μg/ml的峰濃度。在各次皮下注射之間的12小時期間中的90％以上的時間內(nèi)，血漿水平超過與生物活性相關(guān)的1mg/ml的目標(biāo)血漿水平。在接受多個治療周期的患者中，在藥代動力學(xué)特征方面沒有觀測到變化；同時進行的DTIC治療并不影響B(tài)CL-2反義寡聚體的穩(wěn)態(tài)血漿水平。
在所有經(jīng)篩選進行該項研究的14位患者中，通過蛋白質(zhì)印跡分析證實了在基線時皮膚黑素瘤轉(zhuǎn)移瘤的BCL-2蛋白質(zhì)表達(Selzer等，1998，8(3)197-203；Cerroni等，1995，Am.J.Dermatopathol.177-11)；配對病灶的系列活組織檢查證明在給予BCL-2反義寡聚體期間BCL-2蛋白水平降低(表1)。在10號患者中，系列腫瘤樣本由于在活檢組織中沒有黑素瘤細(xì)胞，而不能用蛋白質(zhì)印跡法評價。通過14天連續(xù)輸注BCL-2反義寡聚體治療的患者中，通常截至第5天觀察到BCL-2蛋白有最大降低，在第14天時并沒有進一步的降低。BCL-2反義寡聚體血漿濃度超過1μg/ml的可評價患者中有83％的患者(12位患者中的10位)表現(xiàn)出BCL-2表達的明顯降低(表1)。采用BCL-2反義寡聚體劑量＞1.7mg/kg/天的治療周期，顯示出截至第5天BCL-2蛋白平均減少40％。
通過TUNEL染色觀測到在用BCL-2反義寡聚體治療5天后在腫瘤樣本中凋亡細(xì)胞增加(從基線的0.85％，+/-SD＝047％；增加至3.17％，+/-SD＝1.16％)(圖2B)。然而，在加入凋亡刺激物(DTIC)后所取的活檢樣品中，可以觀察到凋亡性細(xì)胞死亡的額外的急劇增加(圖2C，19,4％+/-SD＝4,2％)。BCL-2反義寡聚體和DTIC的聯(lián)合治療直至6.5mg/kg/天(并包括該劑量)的BCL-2反義寡聚體被很好地耐受，并且無劑量限制性毒性(表2)。
血液學(xué)異常是輕度或中度的(I-III級，表2)，并且遵循單一藥物DTIC典型的在各治療周期之間最低值的模式。沒有一個患者經(jīng)歷了發(fā)熱性中性白細(xì)胞減少或者其它主要的臨床血液學(xué)毒性。在該項研究期間，在兩位患者中觀察到需要輸血的II-III級貧血，但在這兩位患者中在基線時就有貧血，可能是由先前的治療引起的。通常觀察到II-III級淋巴細(xì)胞減少，但沒有臨床后遺癥例如罕見的病毒或真菌感染、或者免疫抑制的其它臨床證據(jù)，盡管在某些患者中重復(fù)周期持續(xù)一年以上。在3位患者中觀察到一過性II-III級部分促凝血酶原激酶時間延長，但無臨床出血。
在表2的下部列出了非血液學(xué)副作用。超過4.1mg/kg/天的BCL-2反義寡聚體劑量與大多數(shù)患者中的一過性發(fā)熱相關(guān)。這種發(fā)熱通常在治療的第2-3天達到38℃，并且或者自發(fā)消退，或者通過給予對乙酰氨基酚和繼續(xù)給予反義寡聚體后消退。在范圍為4.1-6.5mg/kg/天的劑量水平下，在4位患者中觀察到一過性II-III級轉(zhuǎn)氨酶和/或膽紅素升高；然而，并沒有在所有患者中確立與BCL-2反義寡聚體有因果關(guān)系，因為2位患者分別患有肝炎和酒精中毒，在DTIC以后觀察到一過性肝功能異常，DTIC也可能引起這類實驗室變化。肝功能異常通常在治療周期之間的1周內(nèi)消除，且不認(rèn)為是臨床顯著性的或劑量限制性的。皮膚病學(xué)副作用包括一過性皮疹和蕁麻疹，除一位患者經(jīng)歷II級一過性蕁麻疹之外，都為I級；這些皮膚病學(xué)反應(yīng)是對抗組胺藥的反應(yīng)，并不妨礙后續(xù)的治療。沒有觀察到累積性毒性。某些患者治療多達10個治療周期，卻不需要修改計劃的治療方案。
雖然毒性是這種劑量逐步升級試驗的主要終點，但在14位IV期黑素瘤患者中的6位患者(43％，表1)中明顯有抗腫瘤活性，包括在系統(tǒng)性黑素瘤療法治療失敗后登記進入本項研究的12位患者中觀察到的反應(yīng)。觀察到持續(xù)1年以上延長的病情穩(wěn)定的1位完全反應(yīng)(CR)患者、2位部分反應(yīng)(PR)患者和2位較小反應(yīng)(MR)患者(表1)。在進入研究之前明顯發(fā)展的另外2位病情穩(wěn)定的患者中，觀察到臨床抗腫瘤活性。12號患者在骨盆淋巴結(jié)和先前的皮膚移植部位中有測量基線水平超過5cm的大轉(zhuǎn)移瘤疾病，該患者在2個周期后表現(xiàn)出快速的反應(yīng)，而在4個周期后表現(xiàn)出完全反應(yīng)(表1，圖3)。在4個治療周期后，先前為腫瘤陽性的皮膚區(qū)域的活檢樣品，僅顯示出纖維化，而無黑素瘤(病理學(xué)完全反應(yīng))。2號和3號患者表現(xiàn)出靶病灶的部分反應(yīng)，并且無發(fā)展，存活超過1年。在進入該項研究時，2號和3號患者有進行性轉(zhuǎn)移瘤，盡管先前用卡鉑加上干擾素治療(2號患者)以及用DTIC加上IL-2治療(3號患者)。5號和9號患者進入該項研究時都有進行性轉(zhuǎn)移性疾病，盡管用DTIC+干擾素或僅用干擾素進行過系統(tǒng)治療，在BCL-2反義物加上DTIC治療后產(chǎn)生較小反應(yīng)。估計的平均存活時間在所有患者中都超過至少1年。
6.3結(jié)論該報告證明了在癌癥患者中用反義藥物與化療聯(lián)合治療的安全性和可行性。BCL-2反義寡聚體治療被很好地耐受，所述治療降低了腫瘤內(nèi)的靶蛋白，促進了細(xì)胞凋亡并且在其它療法治療失敗后進入該項研究的患者中也導(dǎo)致客體腫瘤反應(yīng)以及延長存活時間(表1)。
本項研究的主要目的是確定與DTIC治療聯(lián)合的BCL-2反義寡聚體的毒性。關(guān)于非血液學(xué)副作用(表2)，直至3.1mg/kg/天(并且包括該劑量水平)的BCL-2反義寡聚體劑量水平，在這項研究中注意到?jīng)]有除單一藥物DTIC治療所報告的副作用之外的副作用。使用與DTIC聯(lián)合的4.1mg/kg/天和4.1mg/kg/天以上的BCL-2反義寡聚體劑量，觀察到一過性轉(zhuǎn)氨酶和/或膽紅素II-III級升高(表2)。在該項研究中，肝功能異常不是劑量限制性的，也與不良的臨床后遺癥無關(guān)。在5.3mg/kg的BCL-2反義寡聚體一日量和高于此劑量時，則注意到αPTT的非劑量限制性變化。
淋巴細(xì)胞減少也是在該項研究中觀察到的最為常見的血液學(xué)副作用。淋巴細(xì)胞減少沒有臨床顯著性，并且在用循環(huán)療法治療并且隨訪超過1年的患者中沒有罕見的感染。相反，用多種硫代磷酸酯反義藥物則觀察到一定水平的血小板減少，并且這種毒性在NHL患者的BCL-2反義寡聚體的研究中是劑量限制性的(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)。雖然該項研究將BCL-2反義寡聚體與化療聯(lián)合，導(dǎo)致在DTIC以后一過性骨髓抑制，并且穩(wěn)態(tài)血漿濃度平超過了在所述NHL研究中所報告的濃度，但我們也沒有觀察到劑量限制性血小板減少?？傊?，在這一患者群體中，在DTIC和BCL-2反義寡聚體之間既沒有觀察到重疊的劑量限制性毒性，也沒有觀察到累積的劑量限制性毒性。
我們的數(shù)據(jù)表明，用約2mg/kg/天的BCL-2反義寡聚體劑量可以容易地達到生物相關(guān)穩(wěn)態(tài)血漿水平(＞1μg/ml)，并且尚未達到與DTIC化療聯(lián)合的最大耐受劑量。
在最近對該項試驗所調(diào)查的治療方案的隨訪中，在每個21天的周期中，在給予1000mg/m2DTIC之前，給予擴大的人群(5位患者)通過輸注(7mg/kg/天)5天靜脈內(nèi)給予的BCL-2反義寡聚體，而表現(xiàn)出令人滿意的耐受性。
因此，所述結(jié)果表明，BCL-2反義寡聚體可以安全地與抗腫瘤藥聯(lián)合給予，以治療臨床環(huán)境中的癌癥。所述結(jié)果不同于先前公開的僅通過連續(xù)皮下輸注給予14天輸液而顯示出生物活性和臨床反應(yīng)的數(shù)據(jù)(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)，因為本文所述的結(jié)果表明，多種途徑(靜脈輸注、多次每日皮下注射)和5-7天的較短給藥方案也可以產(chǎn)生G3139的生物活性和臨床反應(yīng)。在有反應(yīng)的患者中，在2-3個周期內(nèi)很快觀察到初始抗腫瘤活性。大多數(shù)的患者在含DTIC方案治療失敗后或在轉(zhuǎn)移性黑素瘤的其它標(biāo)準(zhǔn)治療之后，進入該項研究并患有進行性轉(zhuǎn)移性疾病。然而，在14位患者中的6位患者(43％)中觀察到抗腫瘤反應(yīng)，并且在另外2位患者中觀察到病情穩(wěn)定。估計的所有患者的平均存活時間超過12個月。這些初步結(jié)果與在一線系統(tǒng)性療法治療失敗后在晚期黑素瘤患者中觀察到的可忽略的反應(yīng)率和約4-5個月的平均存活時間相比是有利的。
表1研究一覽表
CP＝卡鉑；CIS＝順鉑；FOT＝福莫司?。籋EP＝熱肢灌注(hyperthermic extremity perfusion)；IFN-α＝干擾素-α；NA＝不可應(yīng)用；RT＝放射治療。已經(jīng)給予了總共47個周期的BCL-2 ASO加上DTIC。*在最初靜脈內(nèi)治療周期后也接受皮下給予的5.3mg/kg/天和6.5mg/kg/天劑量的BCL-2 ASO的患者。+觀察期仍繼續(xù)。表2治療期間的副作用
列出了與BCL-2 ASO治療無因果關(guān)系的事項。
7.實施例2在激素難治性前列腺癌患者中的G3139(bcl-2反義寡核苷酸)和多西他賽的I期藥代動力學(xué)和生物學(xué)相關(guān)性研究。
本實施例證明了成功應(yīng)用bcl-2反義寡聚體來治療抗雄激素去除療法(androgen ablation therapy)和細(xì)胞毒性化療的激素難治性前列腺癌患者。聯(lián)合化療劑以5-7mg/kg/天系統(tǒng)性給予bcl-2反義寡聚體達5天。本項研究報告了用bcl-2反義寡聚體和化療劑治療的2位患者表現(xiàn)出對所述治療的反應(yīng)。在本實施例中報告的研究結(jié)果表明，當(dāng)以高劑量短時期給予bcl-2反義寡聚體時，所述治療表現(xiàn)出低毒性，同時表現(xiàn)出客體的臨床反應(yīng)。在本項研究中概述的方法為治療其它類型癌癥提供了廣泛適用的策略。
7.1. 材料和方法在本項研究中，每個周期在治療周期的第1-6天，以連續(xù)靜脈輸注給予5天G3139，然后在第6天靜脈內(nèi)給予多西他賽。每21天重復(fù)所述過程。11位激素難治性前列腺癌患者接受范圍為5mg/kg/天G3139與60mg/m2多西他賽至7mg/kg/天G3139繼之以75mg/m2多西他賽的三種劑量水平的治療。
7.2. 結(jié)果主要的毒性與單獨的多西他賽的毒性類似。1位嚴(yán)重的先前治療過的患者有延長的(＞5天)非并發(fā)性的4級中性白細(xì)胞減少。其它毒性包括3位患者的1級口炎和1位患者在第2個療程期間的發(fā)熱性中性白細(xì)胞減少。初步藥代動力學(xué)結(jié)果(HPLC)顯示出5mg/kg/天劑量水平下的3.09μg/mL的平均G3139穩(wěn)態(tài)血漿濃度。初步流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡分析表明，在多西他賽治療前，截至第6天在外周血單核細(xì)胞中Bcl-2蛋白的減量調(diào)節(jié)超過50％。在3位首次接觸taxane的可評估患者中的2位中，觀察到前列腺特異性抗原和癥狀反應(yīng)，包括前列腺特異性抗原降低至九分之一，這種降低可持續(xù)超過數(shù)個周期。
7.3. 結(jié)論G3139可以安全地與多西他賽聯(lián)合給予，這些結(jié)果證實，所述組合在癌癥治療方面有顯著的治療效應(yīng)。所述結(jié)果不同于先前公開的僅通過連續(xù)皮下輸注給予14天輸液而顯示出生物活性和臨床反應(yīng)的數(shù)據(jù)(Waters等，2000，J.Clin.Oncol.18(9)1812-23)，因為本文所述的結(jié)果表明通過一種替代途徑(靜脈內(nèi))在給定的較短期的給藥方案(5天)，也可以產(chǎn)生G3139的生物活性和臨床反應(yīng)。G3139治療在給藥5天內(nèi)有生物活性，表現(xiàn)為外周血單核細(xì)胞中Bcl-2蛋白的有效減量調(diào)節(jié)，并且在激素難治性前列腺癌患者中有令人鼓舞的初步抗腫瘤活性。
8.實施例3bcl-2反義物GENASENSETM(G3139)在頑固性或復(fù)發(fā)性急性白血病中的I期試驗。
本實施例證明了成功應(yīng)用bcl-2反義寡聚體來治療急性白血病患者。聯(lián)合兩種化療劑以4mg/kg/天系統(tǒng)性地給予bcl-2反義寡聚體達10天。本項研究報告了用bcl-2反義寡聚體和一種化療劑治療的10位患者中的5位表現(xiàn)出對所述治療的反應(yīng)。此外，在給予了劑量低于治療白血病或其它癌癥常用標(biāo)準(zhǔn)劑量的氟達拉濱和阿糖胞苷的患者中，也觀察到反應(yīng)。在本實施例中所報告的研究結(jié)果表明，當(dāng)短時期給予bcl-2反義寡聚體時，可以獲得客體的臨床反應(yīng)。
8.1. 材料和方法在治療周期的第1-10天，給予患者(總共10位患者)G3139(4mg/kg/天)，而在治療周期的第6-10天給予氟達拉濱(以較低的劑量15mg/m2開始)、阿糖胞苷(Ara-C)(以降低的劑量1000mg/m2開始)和G-CSF(FLAG)，并且在接連的多個人群中使劑量逐步升級。正常的FLAG聯(lián)合方案包括劑量兩倍于本項研究中所用劑量的氟達拉濱和Ara-C。
1(m)，從CR起的月數(shù)；2高劑量Ara-C；3(d)，從G3139開始的天數(shù)；4NA，不適用；5CR，完全反應(yīng)；6PR，部分反應(yīng)；7NR，無反應(yīng)；8NED，無疾病跡象；REF，頑固性；REL，復(fù)發(fā)性。
8.2. 結(jié)果治療相關(guān)的發(fā)熱、惡心、嘔吐、血鈣過少、血磷酸鹽過少和體液潴留不是劑量限制性的。血液學(xué)毒性正如所預(yù)期的。在24小時后達到超過相關(guān)目標(biāo)濃度(1μg/ml)的穩(wěn)態(tài)G3139血漿濃度。3位患者達到完全反應(yīng)，并且接受第二個療程；2位患者第53天和第111天持續(xù)無疾病跡象。2位患者無疾病跡象，但在第53天和第111天持續(xù)中性白細(xì)胞減少/血小板減少；其中1位患者持續(xù)完全反應(yīng)，在第76天時無疾病跡象。5位有效者中有3位先前用高劑量Ara-C治療過，因此確證對本項研究中所述的另一個Ara-C聯(lián)合程序(尤其是用低于先前治療方案中所用劑量的劑量)有較大的反應(yīng)，這是出乎意料的。
8.3. 結(jié)論所述結(jié)果表明，G3139加入至急性白血病的多周期誘導(dǎo)方案中是可行的，這在本項研究中顯示出有效率為50％，包括患有頑固性急性白血病并且先前用高劑量Ara-C治療過的患者。采用低于正常的劑量水平的氟達拉濱和Ara-C，當(dāng)將其與bcl-2反義物方案聯(lián)合時，也觀察到較大的反應(yīng)。
本文所引證的所有參考文獻都通過引用具體結(jié)合到本文中，如同在本文中全面敘述一樣。
在上文公開了本發(fā)明的示例性實施方案，本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到，這種公開僅僅是示例性的，因此各種替代方案、改變和修改都在本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且本申請人考慮了這些替代方案、改變和修改。因此，本發(fā)明不限于上述的具體實施方案，而是由以下的權(quán)利要求書來限定。
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11<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 11ccttcctacc gcgtgcg 17<210> 12<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 12gacccttcct accgcgt 17<210> 13<211> 17<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 13ggagaccctt cctaccg 17<210> 14<211> 15<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 14gcggcggcag cgcgg 15<210> 15<211> 15<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 15cggcggggcg acgga 15<210> 16<211> 16<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 16cgggagcgcg gcgggc 16<210> 17<211> 18<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 17tctcccagcg tgcgccat18<210> 18<211> 18<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 18tgcactcacg ctcggcct 18<210> 19<211> 5086<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 19gcgcccgccc ctccgcgccg cctgcccgcc cgcccgccgc gctcccgccc gccgctctcc60gtggccccgc cgcgctgccg ccgccgccgc tgccagcgaa ggtgccgggg ctccgggccc120tccctgccgg cggccgtcag cgctcggagc gaactgcgcg acgggaggtc cgggaggcga180ccgtagtcgc gccgccgcgc aggaccagga ggaggagaaa gggtgcgcag cccggaggcg240gggtgcgccg gtggggtgca gcggaagagg gggtccaggg gggagaactt cgtagcagtc300atccttttta ggaaaagagg gaaaaaataa 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權(quán)利要求
1.一種在人類中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括在一個或更多個治療周期中，以0.01-50mg/kg/天的劑量，將bcl-2反義寡核苷酸給予需要這樣的治療或預(yù)防的所述之人達一段由2至13天構(gòu)成的時期。
2.權(quán)利要求1的方法，其中給予所述bcl-2反義寡核苷酸達一段由3至9天構(gòu)成的時期。
3.權(quán)利要求1的方法，其中給予所述bcl-2反義寡核苷酸達一段由4至7天構(gòu)成的時期。
4.權(quán)利要求1-3中的任一項的方法，所述方法包括給予4-9mg/kg/天的bcl-2反義寡核苷酸。
5.權(quán)利要求1-3中的任一項的方法，所述方法包括給予5-7mg/kg/天的bcl-2反義寡核苷酸。
6.權(quán)利要求1的方法，所述方法包括另外給予一種或更多種的癌癥治療劑。
7.權(quán)利要求6的方法，其中在給予bcl-2反義寡核苷酸之后給予所述癌癥治療劑。
8.權(quán)利要求6的方法，其中在給予bcl-2反義寡核苷酸之前給予癌癥治療劑。
9.權(quán)利要求6的方法，其中與所述bcl-2反義寡核苷酸同時給予所述癌癥治療劑。
10.權(quán)利要求6的方法，其中所述癌癥治療劑為一種化療劑、放射治療劑、免疫治療劑、癌疫苗、抗生成血管劑、細(xì)胞因子、基因治療劑或激素類藥。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述癌癥治療劑為一種化療劑；且其中所述化療劑為達卡巴嗪、多西他賽、紫杉醇、順鉑、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、環(huán)磷酰胺、氟達拉濱、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
12.權(quán)利要求6或權(quán)利要求10的方法，其中以減少的劑量給予所述的癌癥治療劑。
13.權(quán)利要求1-3或6的任一項的方法，其中所述給予是通過口服、靜脈內(nèi)輸注、皮下注射、肌內(nèi)注射、局部、貯存(depo)注射、植入、定時釋放方式、腔內(nèi)、鼻內(nèi)、吸入、腫瘤內(nèi)或眼內(nèi)的給予。
14.權(quán)利要求1-3或6的任一項的方法，其中所述癌癥是造血系統(tǒng)癌、皮膚癌、骨與軟組織癌、生殖系統(tǒng)癌、生殖泌尿系統(tǒng)癌、乳腺癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、腦癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、周圍神經(jīng)系統(tǒng)癌、腎癌、肺癌、呼吸系統(tǒng)癌、胸部癌癥、胃腸和消化道癌、淋巴結(jié)癌、胰腺癌、肝膽管系統(tǒng)癌或不知原發(fā)部位的癌。
15.權(quán)利要求1-3或6的任一項的方法，其中所述癌癥是非霍奇金(Hodgkin′s)淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、宮頸癌、睪丸癌、肺癌、膀胱癌、黑素瘤、頭頸癌或腦癌。
16.權(quán)利要求1-3或6的任一項的方法，其中所述反義寡核苷酸有10至35個堿基，且互補于編碼所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述反義寡核苷酸包含至少兩個硫代磷酸酯鍵。
18.權(quán)利要求17的方法，其中該反義寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
19.一種在人類中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括在一個或更多個治療周期中，將一種或更多種化療劑和劑量0.01-50mg/kg/天的bcl-2反義寡核苷酸給予需要這樣的治療或預(yù)防的所述之人，其中所述的化療劑為達卡巴嗪、多西他賽、紫杉醇、順鉑、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、環(huán)磷酰胺、氟達拉濱、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)，且其中以減少的劑量給予所述化療劑。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述癌癥治療劑為紫杉醇，且所述劑量是10-135mg/m2/周期。
21.權(quán)利要求19的方法，其中所述癌癥治療劑為多西他賽，且所述劑量是6-60mg/m2/周期。
22.權(quán)利要求19的方法，其中所述癌癥治療劑為氟達拉濱，且所述劑量是2.5-25mg/m2/周期。
23.權(quán)利要求19的方法，其中所述癌癥治療劑為伊立替康，且所述劑量是5-50mg/m2/周期。
24.一種藥用組合物，所述組合物包含0.01-50mg/kg/天之劑量的bcl-2反義寡核苷酸以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
25.一種藥用組合物，所述組合物包含10-50mg/kg/天之劑量的bcl-2反義寡核苷酸以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
26.權(quán)利要求24或權(quán)利要求25的藥用組合物，其中所述反義寡核苷酸有10至35個堿基，且互補于編碼所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
27.權(quán)利要求26的藥用組合物，其中所述反義寡核苷酸包含至少兩個硫代磷酸酯鍵。
28.權(quán)利要求27的藥用組合物，其中該反義寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
29.一種藥用組合物，所述組合物包括與減少了劑量的癌癥治療劑聯(lián)合的、0.01-50mg/kg/天之劑量的bcl-2反義寡核苷酸以及一種藥學(xué)上可接受的載體；其中所述癌癥治療劑是達卡巴嗪、多西他賽、紫杉醇、順鉑、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、環(huán)磷酰胺、氟達拉濱、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
30.一種藥用組合物，所述組合物包括與減少了劑量的癌癥治療劑聯(lián)合的、10-50mg/kg/天之劑量的bel-2反義寡核苷酸以及一種藥學(xué)上可接受的載體；其中所述治療劑是達卡巴嗪、多西他賽、紫杉醇、順鉑、5-氟尿嘧啶、多柔比星、依托泊苷、環(huán)磷酰胺、氟達拉濱、伊立替康或阿糖胞苷(Ara-C)。
31.權(quán)利要求29或權(quán)利要求30的藥用組合物，其中所述反義寡核苷酸有10至35個堿基，且互補于編碼所述bcl-2基因的前mRNA或mRNA。
32.權(quán)利要求31的藥用組合物，其中所述反義寡核苷酸包含至少兩個硫代磷酸酯鍵。
33.權(quán)利要求32的藥用組合物，其中該反義寡核苷酸包含序列TCTCCCAGCGTGCGCCAT(SEQ.ID.NO.17)。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用bcl－2反義寡聚體來治療和預(yù)防bcl－2相關(guān)疾病。這些疾病包括惡性腫瘤、腫瘤、癌以及細(xì)胞增生性疾病。在本發(fā)明的一個實施方案中，以高劑量給予bcl－2反義寡聚體。本發(fā)明也涉及預(yù)防或治療bcl－2相關(guān)疾病的方法，尤其是預(yù)防或治療癌癥的方法；所述方法包括短時期地給予bcl－2反義寡聚體。此外，本發(fā)明涉及使用bcl－2反義寡聚體來增加受治療者對癌癥治療劑的敏感性。本發(fā)明也涉及包含一種或更多種bcl－2反義寡聚體的藥用組合物，所述藥用組合物可包含一種或更多種的癌癥治療劑。
文檔編號A61K31/337GK1471408SQ01817710
公開日2004年1月28日 申請日期2001年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月25日
發(fā)明者R·P·小瓦雷爾, R·E·克勒姆, H·芬格爾特, R P 小瓦雷爾, 克勒姆, 穸 申請人:真塔公司